磁性粒子以及检测试剂的制作方法

1.本发明涉及包含磁性体的磁性粒子。另外，本发明涉及使用了所述磁性粒子的检测试剂。


背景技术：

2.在医药品的研究开发以及临床检查等领域中，为了测定检体中的目标物质的浓度等而使用磁性粒子。例如，在化学发光免疫测定法(clia法)等免疫测定中，广泛地使用在表面上具有抗体或抗原等的磁性粒子。该磁性粒子，一般在与作为目标物质的抗原或抗体等结合后，通过磁石等而集磁。
3.在下述的专利文献1中，公开了一种磁性聚合物粒子，其是在聚合物粒子的外周凝聚有多数的磁性微粒，且其外周进一步形成有聚合物被膜的磁性聚合物粒子，该磁性聚合物粒子中的所述磁性微粒的质量比例为20～70质量％。该磁性聚合物粒子能够作为检测试剂使用。
4.在下述的专利文献2中，公开了一种具有常磁性的免疫测定用的含金属的树脂粒子，其在核粒子的表面上形成有金属和/或金属氧化物的微粒的凝聚层，在最外表面上形成有有机高分子的树脂层，所述树脂粒子的平均粒径为0.05～0.5μm，粒径的cv值为10％以下。
5.现有技术文献
6.专利文献
7.专利文献1：日本特开2003
‑
282310号公报
8.专利文献2：日本特开2005
‑
098974号公报


技术实现要素：

9.本发明所要解决的技术问题
10.以往，如专利文献1、2所述，一般使用具有使磁性体的微粒凝聚并且形成为层状的磁性层的磁性粒子。然而，在使磁性体的微粒凝聚并且形成为层状的磁性层中，该磁性层的表面积会变大，此外，由于氧容易到达磁性层的内部，因此磁性体容易氧化。如果磁性层中的磁性体氧化，集磁性就会降低。
11.如果使用集磁性低的磁性粒子，则在测定抗原、抗体等目标物质的浓度等时，测定精度及测定灵敏度可能会降低。
12.本发明的目的在于提供一种可以提高集磁性，并且能保持较高集磁性的磁性粒子。另外，本发明的限定性的目的是提供一种能长期保持较高集磁性的磁性粒子。另外，本发明的目的在于提供使用了所述磁性粒子的检测试剂。
13.解决技术问题的技术手段
14.根据本发明的广泛方案，提供一种磁性粒子，其是用于与目标物质进行特异性相互作用的磁性粒子，所述磁性粒子具备：树脂粒子、配置于所述树脂粒子的外表面上并且包
含与铁氧体不同的磁性体的磁性层、以及担载于所述磁性层的外表面侧并且与所述目标物质进行特异性相互作用的物质，所述磁性层为连续层。
15.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，所述磁性体为金属。
16.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，其具备配置于所述磁性层的外表面上的壳层，所述壳层的材料为无机氧化物、有机聚合物或非磁性的金属，所述壳层与所述物质发生了结合。
17.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，所述壳层具备配置于所述磁性层的外表面上的第1壳层和配置于所述第1壳层的外表面上的第2壳层，所述第1壳层的材料为无机氧化物或非磁性的金属，所述第2壳层的材料为无机氧化物或有机聚合物，所述第2壳层与所述物质发生了结合。
18.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，所述第1壳层的材料中的所述无机氧化物或所述非磁性的金属包含：铜、银、金、钯
‑
银合金、铂
‑
银合金、铟
‑
银合金、锡
‑
银合金、铋
‑
银合金、钨
‑
银合金、钼
‑
银合金、钌
‑
银合金、铑
‑
银合金、铱
‑
银合金、磷或硼。
19.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，所述第2壳层的材料为所述无机氧化物，所述无机氧化物为具有硅原子、锗原子、钛原子或锆原子的无机氧化物。
20.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，所述物质为抗原或抗体。
21.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，所述物质为亲和素或链霉亲和素。
22.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，磁性粒子100体积％中，所述磁性体的含量为2体积％以上60体积％以下。
23.本发明涉及的磁性粒子的一种特定方案中，所述磁性粒子作为检测试剂使用。
24.根据本发明的广泛方案，提供一种包含上述的磁性粒子的检测试剂。
25.发明的效果
26.本发明涉及的磁性粒子用于与目标物质进行特异性相互作用。本发明涉及的磁性粒子具备：树脂粒子、配置于所述粒子的外表面上并且包含与铁氧体不同的磁性体的磁性层、担载于所述磁性层的外表面侧并且与所述目标物质进行特异性相互作用的物质，所述磁性层为连续层。本发明涉及的磁性粒子由于具备所述的构成，因此能够提高集磁性，并且能够保持较高集磁性。
附图说明
27.[图1]图1是示意性地表示本发明的第1实施方式涉及的磁性粒子的截面图。
[0028]
[图2]图2是示意性地表示本发明的第2实施方式涉及的磁性粒子的截面图。
[0029]
本发明的具体实施方式
[0030]
以下，对本发明的详细内容进行说明。
[0031]
(磁性粒子)
[0032]
本发明涉及的磁性粒子用于与目标物质进行特异性相互作用。本发明涉及的磁性粒子是可与目标物质进行特异性相互作用的磁性粒子。本发明涉及的磁性粒子具备：树脂粒子、配置于所述粒子的外表面上并且包含与铁氧体不同的磁性体的磁性层、担载于所述磁性层的外表面侧并且与所述目标物质进行特异性相互作用的物质，所述磁性层为连续层。
[0033]
本发明涉及的磁性粒子由于具备所述的构成，因此能够提高集磁性，并且能够保持较高集磁性。本发明能够长期保持较高集磁性。本发明涉及的磁性粒子能够抑制集磁性随时间推移而降低。此外，本发明涉及的磁性粒子能够提高磁性粒子的分散性。此外，就本发明涉及的磁性粒子而言，在使用了该磁性粒子的目标物质的测定中，其能够提高与该目标物质的结合量，因此，能够提高测定精度以及测定灵敏度。
[0034]
在本发明中，作为与铁氧体不同的磁性体，可以使用饱和磁化高的磁性体，能够进一步提高集磁性。此外，通过使用饱和磁化高的磁性体，能够减少磁性体的含量，能够减少磁性粒子的比重。因此，能够进一步提高磁性粒子的分散性。
[0035]
所述磁性粒子的平均粒径优选为0.5μm以上，更优选为1μm以上，优选为10μm以下，更优选为7μm以下，进一步优选为5μm以下，特别优选为4.5μm以下，最优选为4μm以下。所述磁性粒子的平均粒径如果在所述下限以上，则能够进一步提高集磁性。所述磁性粒子的平均粒径如果在所述上限以下，则可提高单位重量的与所述目标物质进行特异性相互作用的物质的含量，可提高目标物质的结合量。
[0036]
所述磁性粒子的平均粒径为数均粒径。所述磁性粒子的粒径，例如，可以通过以电子显微镜或光学显微镜观察任意50个磁性粒子，算出各磁性粒子的粒径的平均值而求出。优选制备使所述磁性粒子干燥而得到的样品，以电子显微镜或光学显微镜观察得到的样品。
[0037]
所述磁性粒子的平均粒径的变异系数(cv值)优选为10％以下，更优选为5％以下。所述磁性粒子的平均粒径的变异系数如果在所述上限以下，则可以在使用了磁性粒子的目标物质的测定中进一步提高测定精度。
[0038]
所述变异系数(cv值)可以如下测定。
[0039]
cv值(％)＝(ρ/dn)
×
100
[0040]
ρ：磁性粒子的粒径的标准偏差
[0041]
dn：磁性粒子的粒径的平均值
[0042]
以下，一边参照附图，一边对本发明进行具体的说明。
[0043]
图1是示意性地表示本发明的第1实施方式涉及的磁性粒子的截面图。
[0044]
图1所示的磁性粒子1用于与目标物质进行相互作用。磁性粒子1具备：树脂粒子2、磁性层3、第1壳层41、第2壳层42、与目标物质进行相互作用的物质5。物质5例如是亲和素、链霉亲和素、抗原以及抗体等生理活性物质等。
[0045]
磁性层3是包含与铁氧体不同的磁性体的磁性层。磁性层3是连续层。磁性层3例如是与使磁性体的微粒凝聚并且形成为层状的层不同的层。
[0046]
磁性层3配置于树脂粒子2的外表面上。第1壳层41配置于磁性层3的外表面上。第2壳层42配置于第1壳层41的外表面上。磁性层3的外表面侧担载有物质5。第2壳层42的外表面上担载有物质5。第2壳层42和物质5结合。物质5存在于磁性粒子1的表面上。
[0047]
磁性层3是单层的磁性层。磁性层3包覆树脂粒子2的整个外表面。在所述磁性粒子中，所述磁性层可以包覆所述树脂粒子的整个外表面，所述磁性层也可以包覆所述树脂粒子的表面的一部分。在所述磁性粒子中，所述磁性层可以是单层的磁性层，也可以是由2层以上的层所构成的多层磁性层。
[0048]
第1壳层41是单层的壳层。第1壳层41包覆磁性层3的整个外表面。在所述磁性粒子
中，所述第1壳层可以包覆所述磁性层的整个外表面，所述第1壳层也可以包覆所述磁性层的表面的一部分。
[0049]
第2壳层42是单层的壳层。第2壳层42包覆磁性层3的整个外表面。在所述磁性粒子中，所述第2壳层可以包覆所述第1壳层的整个外表面，所述第2壳层也可以包覆所述第1壳层的表面的一部分。
[0050]
图2是示意性地表示本发明的第2实施方式涉及的磁性粒子的截面图。
[0051]
图2所示的磁性粒子1a用于与目标物质进行相互作用。磁性粒子1a具备：树脂粒子2、磁性层3、壳层4、与目标物质进行相互作用的物质5。物质5例如是亲和素、链霉亲和素、抗原以及抗体等。
[0052]
磁性层3是包含与铁氧体不同的磁性体的磁性层。磁性层3是连续层。磁性层3例如是与使磁性体的微粒凝聚并且形成为层状的层不同的层。
[0053]
磁性层3配置于树脂粒子2的外表面上。壳层4配置于磁性层3的外表面上。在磁性层3的外表面侧，担载有物质5。在壳层4的外表面上，担载有物质5。壳层4与物质5结合。物质5存在于磁性粒子1的表面。
[0054]
磁性层3是单层的磁性层。磁性层3包覆树脂粒子2的整个外表面。在所述磁性粒子中，所述磁性层可以包覆所述树脂粒子的整个外表面，所述磁性层也可以包覆所述树脂粒子的表面的一部分。在所述磁性粒子中，所述磁性层可以是单层的磁性层，也可以是由2层以上的层构成的多层的磁性层。
[0055]
壳层4是单层的壳层。壳层4包覆磁性层3的整个外表面。在所述磁性粒子中，所述壳层可以包覆所述磁性层的整个外表面，所述壳层也可以包覆所述磁性层的表面的一部分。
[0056]
本发明涉及的磁性粒子可以是这样的磁性粒子：其具备包含与铁氧体不同的磁性体的所述磁性层作为第1磁性层，在该第1磁性层的外表面上具备非磁性层，且在该非磁性层的外表面上具备包含磁性体的第2磁性层。所述非磁性层是由非磁性的物质形成的层。所述非磁性层，例如可以举出：有机聚合物层、无机氧化物层以及非磁性的金属层等。此时，优选所述第1磁性层为连续层、所述第2磁性层为连续层。此时，即使所述第2磁性层受到一定程度的氧化，处于磁性粒子中第2磁性层内侧的第1磁性层也难以被进一步氧化，因此，能够进一步有效地抑制集磁性随时间推移而降低，能够保持较高集磁性。
[0057]
此外，本发明涉及的磁性粒子可以是这样的磁性粒子：其具备包含与铁氧体不同的磁性体的所述磁性层作为第1磁性层，该第1磁性层的外表面上配置有2层以上的非磁性层以及2层以上的磁性层，在该第1磁性层的外表面上，在从所述磁性粒子的中心向外表面的方向上，该非磁性层和该磁性层交互地配置。所述非磁性层是由非磁性的物质形成的层。所述非磁性层，例如，可以举出：有机聚合物层、无机氧化物层以及非磁性的金属层等。此时，优选所述第1磁性层是连续层、2层以上的所述磁性层分别是连续层。通过设置多层磁性层，能够减少氧化的磁性层的比例，能够进一步有效地抑制集磁性随时间推移而降低，能够保持较高集磁性。
[0058]
以下，将对磁性粒子的其他详细情况进行说明。
[0059]
(树脂粒子)
[0060]
作为所述树脂粒子的材料，可以举出：聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚偏
二氯乙烯、聚异丁烯、聚丁二烯等聚烯烃树脂；聚甲基丙烯酸甲酯以及聚丙烯酸甲酯等丙烯酸类树脂；聚碳酸酯、聚酰胺、苯酚甲醛树脂、三聚氰胺甲醛树脂、苯并胍胺甲醛树脂、尿素甲醛树脂、酚醛树脂、三聚氰胺树脂、苯并胍胺树脂、脲醛树脂、环氧树脂、不饱和聚酯树脂、饱和聚酯树脂、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚砜、聚苯醚、聚缩醛、聚酰亚胺、聚酰胺酰亚胺、聚醚醚酮、聚醚砜、二乙烯基苯聚合物及二乙烯基苯共聚物等。作为所述二乙烯基苯共聚物等，可以举出：二乙烯基苯
‑
苯乙烯共聚物及二乙烯基苯
‑
(甲基)丙烯酸酯共聚物等。所述树脂粒子的材料可以只使用一种，也可以组合使用2种以上。
[0061]
所述树脂粒子的平均粒径优选为0.5μm以上，更优选为1μm以上，优选为10μm以下，更优选为7μm以下，进一步优选为5μm以下，特别优选为4.5μm以下，最优选为4μm以下。所述树脂粒子的平均粒径如果在所述下限以上，则能够进一步提高集磁性。所述树脂粒子的平均粒径如果在所述上限以下，则能够有效地抑制磁性粒子的沉降，可进一步提高分散性，另外，可减小磁性粒子的粒径，因此可与目标物质有效地相互作用。
[0062]
所述树脂粒子的平均粒径为数均粒径。所述树脂粒子的平均粒径是以电子显微镜或光学显微镜观察50个任意的树脂粒子，算出各树脂粒子的粒径的平均值而求出。优选制备使所述磁性粒子或所述树脂粒子干燥而得到的样品，以电子显微镜或光学显微镜观察得到的样品。
[0063]
所述树脂粒子，可以具有多孔质结构，也可以不具有多孔质结构。所述树脂粒子可以是，该树脂粒子的表层部具有多孔质结构，中心部不具有多孔质结构的树脂粒子。可通过使树脂粒子的表层部具有多孔质结构，而使所述磁性层达到树脂粒子的内部。
[0064]
(磁性层)
[0065]
本发明涉及的磁性粒子具备包含与铁氧体不同的磁性体的磁性层。所述包含磁性体的磁性层配置于所述树脂粒子的外表面上。
[0066]
所述磁性层是连续层。所述磁性层可以包覆树脂粒子的整个外表面，也可以包覆一部分。此外，所述连续层，可以包覆树脂粒子的整个外表面，也可以包覆一部分。所述磁性层，例如是与使磁性体的微粒凝聚并且形成为层状的层(凝聚层)不同的层。所述连续层，例如是指，与如微粒的凝聚体这样的在磁性层上存在无数的接缝(例如平均1个磁性粒子有1000个以上)的形状不同的、具有接缝少或无接缝的结构的层。所述磁性层优选为镀层。所述磁性层也可以具有海岛结构。
[0067]
所述磁性体是与铁氧体不同的磁性体。作为所述铁氧体，可以举出磁赤铁矿(γfe2o3)以及以mfe2o4表示的化合物(mfe2o4中，m为co、ni、mn、zn、mg、cu、fe、li
0.5
fe
0.5
等)等。所述磁性体优选为金属，更优选为强磁性体。
[0068]
作为所述磁性体，可以举出：钴、镍、铁、钬、镝、以及铽等。所述磁性体可以是合金。作为所述合金，可以举出：镍
‑
钴合金、钴
‑
钨合金、铁
‑
铂合金、铁
‑
钴合金、钐
‑
钴合金、铝
‑
镍
‑
钴合金、以及钕
‑
铁
‑
硼合金等。此外，所述金属可以是金属离子。所述磁性体可以只使用一种，也可以组合使用2种以上。
[0069]
所述磁性体也可以是不含铁原子的磁性体。
[0070]
从进一步提高集磁性，进一步有效地抑制集磁性随时间推移而降低，并且进一步长期保持较高集磁性观点出发，所述磁性体优选为镍
‑
钴合金、钴或镍，更优选为镍
‑
钴合金。
[0071]
所述磁性粒子100体积％中，所述磁性体的含量优选为1体积％以上，更优选为2体积％以上，优选为70体积％以下，更优选为60体积％以下。所述磁性体的含量在所述下限以上时，能够进一步提高集磁性。所述磁性体的含量在所述上限以下时，能够进一步提高分散性。
[0072]
所述树脂粒子的外表面的总表面积100％中，被所述磁性层所包覆的表面积优选为90％以上，更优选为95％以上，进一步优选为99％以上，最优选为100％。所述表面积在所述下限以上时，能够进一步提高集磁性，能够进一步有效地抑制集磁性随时间推移而降低，并且能够进一步长期保持较高集磁性。
[0073]
所述磁性层的厚度优选为50nm以上，更优选为100nm以上，优选为500nm以下，更优选为300nm以下。所述磁性层的厚度，在磁性层为多层时是磁性层整体的厚度。所述磁性层的厚度如果在所述下限以上，则能够进一步提高集磁性，能够进一步有效地抑制集磁性随时间推移而降低，并且能够进一步长期保持较高集磁性。所述磁性层的厚度如果在所述上限以下，则能够有效地抑制磁性粒子的沉降，能够进一步提高分散性，并且由于可减小磁性粒子的粒径，因此能够提高磁性粒子的单位重量的目标物质的结合量。
[0074]
所述磁性层的厚度，例如可以通过使用透射型电子显微镜(tem)，观察磁性粒子的截面来测定。关于所述磁性层的厚度，优选将任意5处磁性层的厚度的平均值作为1个磁性粒子的磁性层的厚度而算出，更优选将磁性层整体的厚度的平均值作为1个磁性粒子的磁性层的厚度而算出。所述磁性层的厚度，优选通过对于任意的10个磁性粒子，计算各磁性粒子的磁性层的厚度的平均值而求出。
[0075]
作为在所述树脂粒子的外表面上形成磁性层的方法，可以举出：使用通过还原而变为磁性体的金属离子，对所述树脂粒子的表面进行镀敷的方法等。
[0076]
(壳层)
[0077]
本发明涉及的磁性粒子优选具备壳层。所述壳层的材料包含：无机氧化物、有机聚合物或非磁性的金属。所述壳层是包含所述无机氧化物作为该壳层的材料的无机氧化物壳层，或是包含所述有机聚合物作为该壳层的材料的有机聚合物壳层，或是包含所述非磁性的金属作为该壳层的材料的金属层。所述壳层的材料优选为无机氧化物、有机聚合物或非磁性的金属。所述壳层优选配置于所述磁性层的外表面上。所述磁性粒子通过具备所述壳层，能够使与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质良好地配置在磁性粒子的表面上，并且还能够提高磁性粒子的分散性。
[0078]
所述壳层可以包含磁性体，也可以不包含磁性体。所述壳层更优选为不包含磁性体。
[0079]
所述壳层优选具备：配置于所述磁性层的外表面上的第1壳层、配置于该第1壳层的外表面上的第2壳层。此时，优选所述第1壳层的材料为无机氧化物或非磁性的金属，所述第2壳层的材料为无机氧化物或有机聚合物，优选所述第2壳层和与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质结合。
[0080]
所述第1壳层中的无机氧化物优选与所述第2壳层中的无机氧化物不同。
[0081]
从进一步提高磁性粒子的分散性的观点出发，所述壳层的材料或第2壳层的材料优选为所述无机氧化物，优选为无机氧化物壳层。
[0082]
<第1壳层>
[0083]
所述第1壳层是配置于所述磁性层的外表面上的层。磁性粒子不具备第2壳层时，所述第1壳层就是所述壳层。磁性粒子不具备第2壳层时，优选所述第1壳层和所述物质结合。
[0084]
所述第1壳层的材料优选为无机氧化物或非磁性的金属。所述无机氧化物是指，至少具有金属元素或半金属元素和氧原子的化合物。所述第1壳层的材料可以只使用1种，也可以组合使用2种以上。
[0085]
所述第1壳层的材料中的所述无机氧化物或所述非磁性的金属优选包含：铜、银、金、钯
‑
银合金、铂
‑
银合金、铟
‑
银合金、锡
‑
银合金、铋
‑
银合金、钨
‑
银合金、钼
‑
银合金、钌
‑
银合金、铑
‑
银合金、铱
‑
银合金、磷、或硼。此时，能够有效地抑制磁性层的氧化、进一步长期保持较高集磁性。
[0086]
所述第1壳层可以是镀层。
[0087]
<第2壳层>
[0088]
所述第2壳层是配置于所述第1壳层的外表面上的层。磁性粒子不具备第1壳层时，所述第2壳层就是所述壳层。磁性粒子不具备第1壳层时，优选所述第2壳层和所述物质结合。
[0089]
所述第2壳层的材料优选为无机氧化物或有机聚合物。所述无机氧化物是指，至少具有金属元素或半金属元素和氧原子的化合物。所述第1壳层的材料可以只使用1种，也可以组合使用2种以上。
[0090]
所述无机氧化物是指，至少具有金属元素或半金属元素和氧原子的化合物。作为所述无机氧化物，没有特别限定。所述无机氧化物可以单独使用1种，也可以使用2种以上。
[0091]
所述无机氧化物优选为具有硅原子、锗原子、钛原子或锆原子的无机氧化物。另外，所述无机氧化物优选具有可与所述磁性层的外表面反应的官能团。
[0092]
作为所述无机氧化物，具体而言，可以举出：以原硅酸四乙酯等烷氧基硅烷及其水解产物为代表的硅烷化合物、以四乙氧基锗等烷氧基锗及其水解产物为代表的锗化合物、以四乙氧基钛等烷氧基钛及其水解产物为代表的钛化合物、以四丁氧基锆等烷氧基锆及其水解产物为代表的锆化合物等。
[0093]
从保持磁性粒子的高分散性的观点出发，所述无机氧化物优选为比重较小的化合物，所述的示例中，最优选为所述硅烷化合物。
[0094]
作为所述硅烷化合物，例如，可以举出：原硅酸四乙酯；乙烯基三甲氧基硅烷、乙烯基三乙氧基硅烷、7
‑
辛烯基三甲氧基硅烷等含乙烯基的硅烷化合物；2
‑
(3,4
‑
环氧环己基)乙基三甲氧基硅烷、3
‑
环氧丙氧基丙基甲基二甲氧基硅烷、3
‑
环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷、3
‑
环氧丙氧基丙基甲基二乙氧基硅烷、3
‑
环氧丙氧基丙基三乙氧基硅烷、8
‑
环氧丙氧基辛基三甲氧基硅烷等含环氧基的硅烷化合物；对苯乙烯基三甲氧基硅烷等含苯乙烯基的硅烷化合物；3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基甲基二甲氧基硅烷、3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷、3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基甲基二乙氧基硅烷、3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷、8
‑
甲基丙烯酰氧基辛基三甲氧基硅烷等含甲基丙烯酰基的硅烷化合物；3
‑
丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷等含丙烯酰基的硅烷化合物；n
‑2‑
(氨基乙基)
‑3‑
氨基丙基甲基二甲氧基硅烷、n
‑2‑
(氨基乙基)
‑3‑
氨基丙基三甲氧基硅烷、3
‑
氨基丙基三甲氧基硅烷、3
‑
氨基丙基三乙氧基硅烷、3
‑
三乙氧基甲硅烷基
‑
n
‑
(1,3
‑
二甲基
‑
丁叉基)丙胺、n
‑
苯基
‑3‑
氨基丙基三甲氧基硅
烷、n
‑
(乙烯基苄基)
‑2‑
氨基乙基
‑3‑
氨基丙基三甲氧基硅烷盐酸盐、n
‑2‑
(氨基乙基)
‑8‑
氨基辛基三甲氧基硅烷等含氨基的硅烷化合物；三
‑
(三甲氧基甲硅烷基丙基)异氰脲酸酯等含异氰脲酸酯基的硅烷化合物；3
‑
脲基丙基三烷氧基硅烷等含脲基的硅烷化合物；3
‑
巯基丙基甲基二甲氧基硅烷、3
‑
巯基丙基三甲氧基硅烷等含巯基的硅烷化合物；3
‑
异氰酸酯丙基三乙氧基硅烷等含异氰酸酯基的硅烷化合物；3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基琥珀酸酐等含羧酸酐的硅烷化合物；3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基琥珀酸酐的水解产物等含羧酸的硅烷化合物等。
[0095]
例如，通过以具有各种官能团的硅烷偶联剂处理磁性层的表面，可在所述磁性层的外表面上形成具有硅原子的无机氧化物壳层。此外，同样地，可在第1壳层的外表面上形成具有硅原子的无机氧化物壳层。
[0096]
所述无机氧化物壳层100重量％中，所述无机氧化物的含量优选为70重量％以上，更优选为80重量％以上。
[0097]
所述有机聚合物，没有特别限定，优选为乙烯基类聚合物。
[0098]
作为所述用作乙烯基类聚合物的材料的乙烯基类单体，可以举出：苯乙烯、α
‑
甲基苯乙烯、氯苯乙烯、二乙烯基苯等苯乙烯单体；甲基乙烯基醚、乙基乙烯基醚、丙基乙烯基醚等乙烯基醚化合物；乙酸乙烯基酯、丁酸乙烯基酯、月桂酸乙烯基酯、硬脂酸乙烯基酯等酸乙烯基酯化合物；氯化乙烯、氟化乙烯等含卤素单体；(甲基)丙烯酸；(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丙酯、(甲基)丙烯酸丁酯、(甲基)丙烯酸2
‑
乙基己酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸十六烷基酯、(甲基)丙烯酸硬脂酯、(甲基)丙烯酸环己酯、(甲基)丙烯酸异冰片酯、(甲基)丙烯酸乙二醇酯等烷基(甲基)丙烯酸酯化合物；(甲基)丙烯酸2
‑
羟乙酯、甘油(甲基)丙烯酸酯、聚氧乙烯(甲基)丙烯酸酯、(甲基)丙烯酸缩水甘油酯等含氧原子的(甲基)丙烯酸酯化合物；三氟甲基(甲基)丙烯酸酯、五氟乙基(甲基)丙烯酸酯等含卤素的(甲基)丙烯酸酯化合物；乙烯基三甲氧基硅烷、乙烯基三乙氧基硅烷、二甲氧基甲基乙烯基硅烷、二甲氧基乙基乙烯基硅烷、二乙氧基甲基乙烯基硅烷、二乙氧基乙基乙烯基硅烷、乙基甲基二乙烯基硅烷、甲基乙烯基二甲氧基硅烷、乙基乙烯基二甲氧基硅烷、甲基乙烯基二乙氧基硅烷、乙基乙烯基二乙氧基硅烷、对苯乙烯三甲氧基硅烷、3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基甲基二甲氧基硅烷、3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷、3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基甲基二乙氧基硅烷、3
‑
甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷、3
‑
丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷等含聚合性双键的烷氧基硅烷等。
[0099]
所述乙烯基类聚合物可以是1种乙烯基类单体聚合的均聚合物，也可以是2种以上的乙烯基类单体聚合的共聚物。
[0100]
例如，通过在母粒子的存在下，添加作为主原料的乙烯基类单体等共聚单体和根据需要作为副原料的聚合引发剂、乳化剂、分散剂、表面活性剂、电解质、交联剂、分子量调节剂等，在液体中进行聚合，从而能够在所述磁性层的外表面上形成有机聚合物壳层。
[0101]
所述有机聚合物壳层100重量％中，所述有机聚合物的含量优选为70重量％以上，更优选为80重量％以上。
[0102]
所述壳层在和与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质发生结合前，优选具有羧基、羟基、环氧基、氨基、甲苯磺酰基、硫醇基、三乙基铵基、二甲氨基及磺酸基等官能团。所述壳层具有所述官能团时，可使与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质良
好地担载在所述壳层的外表面上，可将该物质良好地配置在磁性粒子的表面上。
[0103]
所述壳层可以在外表面上具有连接部。通过使所述壳层具有所述连接部，可将作为与所述物质结合的结合点的所述官能团配置于更远离所述壳层的最表面的位置，可使所述官能团在立体阻碍更小的位置与所述物质接触，所述物质是与所述目标物质进行特异性相互作用的物质。因此，所述物质更容易结合，可将所述物质良好地配置于磁性粒子的表面。
[0104]
所述连接部在和与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质发生结合前，优选在其末端具有羧基、羟基、环氧基、氨基、甲苯磺酰基、硫醇基等能与目标物质形成共价键的官能团。通过使所述官能团和与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质的官能团进行反应，可使所述壳层和该物质进行化学结合。所述环氧基可以是来源于含缩水甘油基的单体的环氧基。所述羟基可以是由所述环氧基的开环而产生的羟基。
[0105]
所述连接部的材料优选为在末端具有多个环氧基的环氧化合物。作为所述在末端具有多个环氧基的环氧化合物，优选为：聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚或三羟甲基丙烷聚缩水甘油醚。所述在末端具有多个环氧基的环氧化合物更优选为聚乙二醇二缩水甘油醚。
[0106]
所述磁性层的外表面的总表面积100％中，被所述壳层所包覆的表面积优选为95％以上，更优选为99％以上，最优选为100％。所述表面积如果在所述下限以上，可提高与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质的含量，其结果，在使用了磁性粒子的目标物质的测定中，可提高测定精度以及测定灵敏度。
[0107]
所述壳层的厚度(第1壳层的厚度和第2壳层的厚度的合计)优选为20nm以上，更优选为40nm以上，优选为500nm以下，更优选为300nm以下。所述壳层的厚度为所述下限以上以及所述上限以下时，能够有效地抑制磁性粒子的沉降，能够进一步提高分散性，并且可减小磁性粒子的粒径，因此可有效地结合目标物质。并且，所述壳层的厚度在所述下限以上时，能够防止磁性层的氧化、进一步抑制集磁性随时间推移而降低。
[0108]
所述壳层的厚度，例如可以通过使用透射型电子显微镜(tem)，观察磁性粒子的截面来测定。关于所述壳层的厚度，优选将任意5处壳层的厚度的平均值作为1个磁性粒子的壳层的厚度而算出，更优选将壳层整体的厚度的平均值作为1个磁性粒子的壳层的厚度而算出。所述壳层的厚度，优选通过对于任意10个磁性粒子，算出各磁性粒子的壳层的厚度的平均值而求出。
[0109]
(与目标物质进行特异性相互作用的物质)
[0110]
本发明涉及的磁性粒子的表面上，存在与目标物质进行特异性相互作用的物质。作为所述物质，可以举出：糖链、肽链、蛋白质、抗原及核苷酸链等。所述物质可以根据该目标物质的种类而适宜变更。所述物质可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。
[0111]
作为所述物质和所述目标物质的相互作用，例如，可以举出抗原抗体反应及酶与基质的相互作用等。所述物质和所述目标物质的相互作用可以是所述物质和所述目标物质的非共价键性的相互作用，也可以是所述物质和所述目标物质的共价键合。作为所述非共价键性的相互作用，可以举出：疏水性相互作用、静电性相互作用、范德华力、氢键键合、配位键合及离子键合等。
[0112]
与所述目标物质进行特异性相互作用的物质优选为可与所述目标物质进行非共
价键性的相互作用的物质。
[0113]
作为与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质和该目标物质的组合，可以举出抗体和抗原的组合、糖链和凝集素等蛋白质的组合、酶等蛋白质和抑制剂的组合、肽和蛋白质的组合、核苷酸链和核苷酸链的组合、核苷酸链和蛋白质的组合等。
[0114]
与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质优选为蛋白质，更优选为亲和素或链霉亲和素。另外，与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质优选为抗原或抗体。
[0115]
所述抗体可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体。所述抗体可以经过木瓜蛋白酶及胃蛋白酶等蛋白质分解酶的处理，也可以是fab以及f(ab’)2片段等。
[0116]
与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质的配置方法，没有特别限定。例如，可通过混合所述物质和担载该物质前的磁性粒子，而将该物质配置于该磁性粒子的表面。
[0117]
(目标物质)
[0118]
所述目标物质是指，与上述的物质进行特异性相互作用的物质。
[0119]
作为所述目标物质，可以举出：蛋白质、核酸、激素、癌标记物、呼吸器关联标记物、心脏病标记物及药物等。
[0120]
作为所述蛋白质，可以举出：高比重脂蛋白(hdl)、低比重脂蛋白(ldl)、极低比重脂蛋白等脂质蛋白质；碱性磷酸酶、淀粉酶、酸性磷酸酶、γ
‑
谷氨酰转移酶(γ
‑
gtp)、脂肪酶、肌酸激酶(ck)、乳酸脱氢酶(ldh)、草酰乙酸转氨酶谷氨酸(got)、丙酮酸转氨酶谷氨酸(gpt)、肾素、蛋白激酶(pk)、酪氨酸激酶等酶；igg、igm、iga、igd、ige等免疫球蛋白(或这些的fc部、fab部及f(ab)2部等片段)；例如纤维蛋白原、纤维蛋白分解产物(fdp)、凝血酶原、凝血酶等血液凝固关联因子；抗链球菌溶血素o抗体、抗人b型肝炎病毒表面抗原抗体(hbs抗原)、抗人c型肝炎病毒抗体、抗类风湿因子等抗体；白蛋白、血红蛋白、肌红蛋白、转铁蛋白、蛋白质a、c反应性蛋白质(crp)等。
[0121]
作为所述核酸，可以举出dna以及rna等。
[0122]
作为所述激素，可以举出：甲状腺刺激激素(tsh)、甲状腺激素(ft3、ft4、t3、t4)、甲状旁腺激素(pth)、以及人绒毛膜促性腺激素(hcg)雌二醇(e2)等。
[0123]
作为所述癌标记物，可以举出：甲胎蛋白(afp)、pivka
‑
ii、癌胚抗原(cea)、ca19
‑
9及前列腺特异抗原(psa)等。
[0124]
作为所述呼吸器关联标记物，可以举出kl
‑
6等。
[0125]
作为所述心脏病标记物，可以举出肌钙蛋白t(tnt)及n
‑
端人脑利钠肽前体n端片段(nt
‑
probnp)等。
[0126]
作为所述药物，可以举出：抗癫痫药、抗生物和茶碱等。
[0127]
(磁性粒子的其他详细情况)
[0128]
所述磁性粒子可以适宜地在放射免疫测定法(ria)、酶免疫测定法(eia)、荧光免疫测定法(fia)、电化学发光法(eclia)、化学发光免疫测定法(clia以及cleia)、吸光度测定及表面等离子共振等测定中使用。所述磁性粒子可以适宜地在三明治法以及竞争法的测定中使用。
[0129]
所述磁性粒子可以适宜地用于测定检体中的所述目标物质的浓度。
[0130]
所述磁性粒子可以适宜地作为检测试剂使用。所述磁性粒子优选为可作为检测试
剂使用的磁性粒子。
[0131]
使用了所述磁性粒子的目标物质的浓度测定，例如，可以如下进行。
[0132]
将包含所述磁性粒子的溶液(例如，后述的检测试剂)和包含目标物质的检体混合，得到混合液。对得到的混合液进行加热等，使磁性粒子中的与所述目标物质进行特异性相互作用的所述物质和检体中的目标物质结合，而得到反应液(第1反应步骤)。然后，通过磁石等，对反应液施加磁力，聚集磁性粒子(集磁步骤)。除去未反应的检体后，添加清洗液，进行混合(清洗步骤)。需要说明的是，集磁步骤以及清洗步骤可以重复多次。然后，除去清洗液后，使该目标物质和标记物质反应，测定目标物质的浓度(第2反应步骤)。
[0133]
作为所述标记物质，可以举出：例如在酶免疫测定法(eia)中适用的碱性磷酸酶、β
‑
半乳糖苷酶、过氧化物酶、微过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、6
‑
磷酸葡萄糖脱氢酶、苹果酸脱氢酶、荧光素酶、酪氨酸酶、酸性磷酸酶等酶；例如在放射免疫测定法(ria)中适用的99mtc、131i、125i、14c、3h、32p等放射性同位元素；例如在荧光免疫测定法(fia)中适用的荧光素、丹酰、荧光胺、香豆素、萘胺及它们的衍生物、绿色荧光蛋白质(gfp)等荧光性物质、例如发光质、异鲁米诺、鲁米诺、双(2,4,6
‑
三氟苯基)草酸盐等发光性物质、例如苯酚、萘酚、蒽以及它们的衍生物等对紫外部有吸收的物质、例如4
‑
氨基
‑
2,2,6,6
‑
四甲基哌啶
‑1‑
氧自由基、3
‑
氨基
‑
2,2,5,5
‑
四甲基吡咯烷
‑1‑
氧自由基、2,6
‑
二叔丁基
‑
α
‑
(3,5
‑
二叔丁基
‑4‑
氧代
‑
2,5
‑
环己二烯
‑1‑
亚基)
‑
对三氧自由基等具有氧基的化合物等具有作为自旋标记化剂的性质的化合物等。从提高测定灵敏度的观点出发，所述标记物质优选为酶或荧光性物质，更优选为碱性磷酸酶、过氧化物酶或葡萄糖氧化酶，更优选为过氧化物酶。
[0134]
(检测试剂)
[0135]
所述检测试剂包含上述的磁性粒子。
[0136]
所述检测试剂优选为包含缓冲液。
[0137]
所述缓冲液优选为在ph5.0以上9.0以下范围内具有缓冲能力的缓冲液。作为所述缓冲液，可以举出：磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、凡罗那缓冲液、tris缓冲液、硼酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、以及good's缓冲液等。
[0138]
所述检测试剂可以包含敏化剂、蛋白质等高分子化合物、氨基酸及表面活性剂等其他成分。
[0139]
所述检测试剂通过包含所述敏化剂，能够高效地进行目标物质和与该目标物质特异性相互作用的所述物质的反应，并且能够提高测定精度。作为所述敏化剂，可以举出：甲基纤维素及乙基纤维素等烷基化多糖化合物、普鲁兰多糖及聚乙烯基吡咯烷酮等。
[0140]
作为所述蛋白质，可以举出：白蛋白(牛血清白蛋白以及卵白蛋白等)、酪蛋白及明胶等。
[0141]
所述检测试剂100重量％中，所述磁性粒子的含量优选为0.5重量％以上，更优选为2重量％以上，优选为10重量％以下，更优选为5重量％以下。所述磁性粒子的含量为所述下限以上以及所述上限以下时，能够进一步提高目标物质的测定精度。
[0142]
以下，将举出实施例以及比较例，对本发明进行具体的说明。但是本发明不限于以下的实施例。
[0143]
(实施例1)
[0144]
作为树脂粒子，使用了积水化学工业株式会社制造“micropearl ex
‑
003”。
[0145]
磁性层的形成：
[0146]
向包含钯催化剂液5.0重量％的碱溶液100重量份中，加入平均粒径为2.98μm的micropearl ex
‑
003(积水化学工业株式会社制造)10重量份，用超声波分散器进行分散后，对得到的溶液进行过滤，由此取出了所述树脂粒子。
[0147]
接下来，将该树脂粒子添加至二甲胺硼烷1.0重量％溶液100重量份中，使该树脂粒子的表面活化。对表面被活化的所述树脂粒子进行充分的水洗之后，添加至蒸馏水500重量份中，进行分散，由此得到了悬浮液。
[0148]
将得到的悬浮液添加至包含硫酸镍80g/l、硝酸铊10ppm、硝酸铋5.0ppm、柠檬酸3钠2.0g/l、以及氨水10g/l的溶液中，得到了粒子混合液。
[0149]
此外，将硫酸钴30g/l、硝酸铊10ppm、硝酸铋5.0ppm、柠檬酸3钠2.0g/l、以及氨水10g/l溶解到蒸馏水中，准备了钴镀液。
[0150]
向调整至60℃的分散状态的粒子混合液中，以40ml/分钟的速度分10分钟滴加二甲胺硼烷1.0重量％溶液，然后开始以40ml/分钟的速度滴加钴镀液，对所述树脂粒子的表面进行了镍
‑
钴合金镀层。然后，通过过滤取出粒子，进行水洗。如此，得到了在树脂粒子的外表面上具有包含镍
‑
钴合金作为磁性体的磁性层(连续层)的树脂粒子。
[0151]
与目标物质进行特异性相互作用的物质的配置：
[0152]
将具有磁性层的树脂粒子的水分散液0.5ml加入试验管，使用pbs溶液清洗3次。除去分散溶剂后，加入包含涎液化糖链抗原kl
‑
6(以下，简称为kl
‑
6)抗体的pbs溶液(0.75mg/ml)0.5ml，在25℃下搅拌过夜。然后，添加1.0重量％bsa溶液1.5ml，在25℃下搅拌4小时。接下来，重复3次使用1.0重量％bsa溶液1.5ml的分散和使用了磁石的向试验管壁面的集磁，调制了抗kl
‑
6抗体被敏化的磁性粒子分散液。
[0153]
(实施例2)
[0154]
壳层的形成：
[0155]
向实施例1中得到的具有磁性层的树脂粒子1重量份中，加入了乙醇400重量份以及28％氨水溶液(nacalai tesque株式会社制造)20重量份。接下来，加入原硅酸四乙酯5.0重量份以及8
‑
缩水甘油氧基辛基三甲氧基硅烷15重量份，进行1小时的搅拌。过滤得到的分散液后，以水进行了清洗。如此，得到了表面上具备具有官能团的无机氧化物壳层以及磁性层的树脂粒子。
[0156]
与目标物质进行特异性相互作用的物质的配置：
[0157]
以与实施例1同样的方式，得到了磁性粒子的表面上存在有抗kl
‑
6抗体的磁性粒子。
[0158]
(实施例3)
[0159]
第1壳层的形成：
[0160]
将实施例1中得到的具有磁性层的树脂粒子1.0重量份分散至蒸馏水300重量份中，得到了粒子混合液。作为无电解银镀液，将用氨水把硝酸银30g/l、琥珀酸酰亚胺100g/l、以及甲醛20g/l的混合液调整至ph8.0的银镀液向所述粒子混合液中缓缓滴加，进行了无电解银镀。然后，通过过滤取出粒子，进行水洗。如此，得到了具有非磁性的银层(第1壳层)以及磁性层的树脂粒子。
[0161]
第2壳层的形成：
[0162]
除了使用了具有非磁性的银层(第1壳层)以及磁性层的树脂粒子之外，以与实施例2同样的方式，在表面上形成了具有官能团的无机氧化物壳层(第2壳层)。
[0163]
与目标物质进行特异性相互作用的物质的配置：
[0164]
以与实施例1同样的方式，得到了磁性粒子的表面上存在有抗kl
‑
6抗体的磁性粒子。
[0165]
(实施例4～11)
[0166]
除了将磁性粒子的构成如表1、2所示地进行了变更之外，以与实施例2同样的方式得到了磁性粒子。
[0167]
(比较例1)
[0168]
树脂粒子的制作：
[0169]
使用了与实施例1同样的树脂粒子。
[0170]
磁性层的形成：
[0171]
将平均粒径为3.00μm的micropearl ex
‑
003(积水化学工业株式会社制造)1.0重量份、磁性流体(平均粒径约10nm的四氧化三铁纳米粒子的水分散液，ferrotec公司制造“emg707”)4.0重量份(其中，磁性体的含量为约17重量％)以250rpm搅拌10分钟。将得到的粒子分散液用水进行过滤及清洗，得到了在树脂粒子的外表面上具有包含四氧化三铁作为磁性体的磁性层(凝聚层)的树脂粒子。
[0172]
壳层的形成：
[0173]
以与实施例2同样的方式得到了具有壳层的磁性粒子。
[0174]
与目标物质进行特异性相互作用的物质的配置：
[0175]
以与实施例1同样的方式，得到了在磁性粒子的表面上存在有抗kl
‑
6抗体的磁性粒子。
[0176]
(比较例2)
[0177]
树脂粒子的制作：
[0178]
使用了与实施例1同样的树脂粒子。
[0179]
磁性层的形成：
[0180]
通过向油性磁性流体(平均粒径约10nm的四氧化三铁纳米粒子的有机溶剂分散液，ferrotec株式会社制造“exp系列”)中加入丙酮使粒子析出沉淀后，将其干燥，而得到了具有进行了疏水化处理的表面的铁氧体类的磁性体微粒(平均一次粒径：10nm)。
[0181]
然后，用混合器将所述树脂粒子1.0重量份和所述具有进行了疏水化的表面的铁氧体类的磁性体微粒1.0重量份充分混合。对得到的混合物，使用杂交系统nhs
‑
0型(奈良机械制作所公司制造)，在翼(搅拌翼)的周速度100m/秒钟(16200rpm)的条件下处理5分钟，在树脂粒子的外表面上，以第2磁性体形成了磁性层。
[0182]
壳层的形成：
[0183]
将得到的具有磁性层的粒子10重量份和作为分散剂的非离子性乳化剂(花王株式会社制造“emergen 150”)的0.5％水溶液300重量份加入至1l可分离烧瓶中，进行搅拌。向其中，添加作为单体的甲基丙烯酸环己酯24重量份以及2
‑
甲基丙烯酰氧基乙基琥珀酸单酯60重量份和作为引发剂的二(3,5,5
‑
三甲基己酰基)过氧化物(日油株式会社制造“peroyl 355”)1.0重量份，在80℃，200rpm的条件下搅拌8小时。如此，在该磁性层的外表面上，形成
了具有羧基的有机聚合物壳层。所述有机聚合物是甲基丙烯酸环己酯与2
‑
甲基丙烯酰氧基乙基琥珀酸单酯的共聚物。
[0184]
与目标物质进行特异性相互作用的物质的配置：
[0185]
使用得到的壳层和具有磁性层的树脂粒子，以与实施例1同样的方式，配置了抗kl
‑
6抗体。如此，得到了磁性粒子。
[0186]
(比较例3)
[0187]
将硫酸镍10重量份、十二烷基苯磺酸钠1重量份以及离子交换水200重量份均匀地搅拌，将搅拌物的温度调整至60℃。将二甲胺硼烷5重量％的溶液向所述搅拌物中以4重量份/分钟的速度分10分钟进行滴加，得到了平均粒径为约10nm的镍纳米粒子水分散液。接下来，向所述镍纳米粒子水分散液中添加丙酮使粒子沉淀后，进行过滤，用乙醇进行了清洗。将滤纸上的镍纳米粒子的沉淀物分散在十二烷基苯磺酸钠1重量份％的水溶液中，调制了固体成分为约17％的分散液。将该分散液4.0重量份和micropearl ex
‑
003(平均粒径2.99μm，积水化学工业株式会社制造)1.0重量份以250rpm搅拌10分钟，得到了粒子分散液。将得到的粒子分散液，用乙醇和水进行过滤和清洗，得到了在树脂粒子的外表面上具有包含镍作为磁性体的磁性层(凝聚层)的树脂粒子。进一步，在磁性层的外表面上，形成包含聚苯乙烯(pst)的壳层(有机聚合物壳层)以作为壳层，得到了磁性粒子。
[0188]
(比较例4)
[0189]
除了将硫酸镍10重量份变更为硫酸镍5重量份以及硫酸钴5重量份之外，以与比较例3同样的方式，得到了在树脂粒子的外表面上具有包含镍
‑
钴合金作为磁性体的磁性层(凝聚层)的树脂粒子。并且，以与比较例1同样的方式，得到了在壳层以及壳层的外表面上存在有抗kl
‑
6抗体的磁性粒子。
[0190]
(评价)
[0191]
(1)树脂粒子以及磁性粒子的平均粒径
[0192]
对于得到的树脂粒子以及磁性粒子，使用扫描型电子显微镜(hitachihigh technologies公司制造“regulus8220”)，算出了树脂粒子以及磁性粒子的平均粒径。具体而言，通过制作了将得到的磁性粒子干燥而得到的样品，以扫描型电子显微镜观察得到的样品，测定任意的50个磁性粒子以及磁性粒子中的树脂粒子的粒径，算出平均值而求得。
[0193]
(2)磁性粒子100体积％中的磁性体的含量
[0194]
使用透射型电子显微镜(tem)，对磁性粒子的截面进行了观察。在观察的磁性粒子的截面中，将磁性层的厚度设为r1，将树脂粒子的半径设为r2，将磁性粒子的半径设为r3，通过以下的式子算出了磁性体的含量(体积％)。
[0195]
磁性体的含量(体积％)＝[{(r1 r2)3‑
(r2)3}/(r3)3]
×
100
[0196]
(3)磁性层以及壳层的厚度
[0197]
使用透射型电子显微镜(tem)，对磁性粒子的截面进行了观察。
[0198]
将磁性层任意5处的厚度的平均值作为1个磁性粒子的磁性层的厚度而算出，并且将磁性层整体的厚度的平均值作为1个磁性粒子的磁性层的厚度而算出。磁性层的厚度是通过对于任意的10个磁性粒子，算出各磁性粒子的磁性层的厚度的平均值而求出的。
[0199]
将壳层任意5处的厚度的平均值作为1个磁性粒子的壳层的厚度而算出，并且将壳层整体的厚度的平均值作为1个磁性粒子的壳层的厚度而算出。壳层的厚度是通过对于任
意的10个磁性粒子，算出各磁性粒子的壳层的厚度的平均值而求出的。
[0200]
(4)集磁率
[0201]
通过将磁性粒子分散在水中，而准备了将波长550nm处的吸光度调整至0.9～1.1的样品溶液。介由垫片(w10mm
×
d10mm
×
h8mm)抵着磁石(2800g，w10mm
×
d10mm
×
h1mm)的状态下，向分光光度计(日立制作所公司制造“u
‑
3900h”)中设置的石英池(cell)中，添加样品溶液1.6ml，测定了投入样品溶液5秒钟后～155秒钟后的波长550nm处的吸光度。通过以下的式子算出该150秒钟间的吸光度衰减率，以此作为集磁率。
[0202]
集磁率(％)＝[{(5秒后的吸光度)
‑
(155秒后的吸光度)}/(5秒后的吸光度)]
×
100
[0203]
[集磁率的判定基准]
[0204]
○○
：集磁率为90％以上
[0205]
○
：集磁率为60％以上且小于90％
[0206]
△
：集磁率为40％以上且小于60％
[0207]
×
：集磁率小于40％
[0208]
(5)集磁率(放置1个月后)
[0209]
将得到的磁性粒子在25℃下放置1个月。使用放置后的磁性粒子，以与(4)集磁率同样的方法求出了集磁率。
[0210]
[集磁率(放置1个月后)的判定基准]
[0211]
○○
：集磁率为90％以上
[0212]
○
：集磁率为60％以上且小于90％
[0213]
△
：集磁率为40％以上且小于60％
[0214]
×
：集磁率小于40％
[0215]
(6)分散率
[0216]
通过使磁性粒子分散至水中，而准备了将波长550nm处的吸光度调整至0.9～1.1的样品溶液。向分光光度计(日立制作所公司制造“u
‑
3900h”)中设置的石英池(cell)中，加入样品溶液1.3ml，测定了波长550nm处的吸光度。然后，使用磁石(28000g，w40mm
×
d40mm
×
h10mm)，集磁至上清的吸光度为0。然后，以涡旋震荡器，在2000rpm，5秒钟的条件下，分散磁性粒子，测定了波长550nm处的吸光度。根据集磁前的吸光度、集磁以及分散后的吸光度，以以下的式子，计算出了吸光度的变化率，以此作为分散率。
[0217]
分散率(％)＝{(集磁以及分散后的吸光度)/(集磁前的吸光度)}
×
100
[0218]
[分散率的判定基准]
[0219]
○○
：分散率为95％以上
[0220]
○
：分散率为90％以上且小于95％
[0221]
△
：分散率为85％以上且小于90％
[0222]
×
：分散率小于85％
[0223]
(7)免疫测定(磁性粒子的单位重量的发光量)
[0224]
准备了不含kl
‑
6的溶液(不含抗原的溶液)和包含5000u/ml的kl
‑
6的溶液(含抗原的溶液)。通过求出使用了不含抗原的溶液的免疫测定中的发光量和使用了含抗原溶液的免疫测定中的发光量的差，评价了磁性粒子和目标物质(kl
‑
6)的结合能力。具体而言，通过
以下的步骤进行了评价。
[0225]
钌配合物标记抗kl
‑
6抗体(二次抗体)的制作：
[0226]
向聚丙烯离心管中加入抗kl
‑
6抗体的pbs
‑
1溶液(抗kl
‑
6抗体浓度2.0mg/ml)0.5ml，然后加入ru
‑
nhs(10mg/ml)13μl。在25℃下振动搅拌后，使用sephadex g25柱进行纯化，得到了钌配合物标记抗kl
‑
6抗体。
[0227]
免疫测定：
[0228]
使用以电化学发光免疫测定法作为测定原理的eclia自动分析装置(sekisui medical公司制造“pikorumi iii”)，进行了如下的发光量的测定。向反应溶液(包含正常兔子血清的缓冲液)200μl中添加了包含5000u/ml的kl
‑
6的溶液(含抗原的溶液)20μl后，添加磁性粒子25μl。在30℃下反应9分钟后，加入了pikorumi bf清洗液(10mm tris缓冲液)350μl，在以磁石吸附磁性粒子的状态下清洗3次。然后，加入包含1.0μg/ml的钌配合物标记抗kl
‑
6抗体的钌标记抗体含有液200μl，在30℃下反应9分钟后，加入pikorumibf清洗液(10mm tris缓冲液)350μl，在以磁石吸附磁性粒子的状态下清洗3次。然后，加入包含0.1m三丙胺的pikorumi发光电解液300μl，输送至电极表面，测定了和磁性粒子结合的钌配合物的发光量。求出了使用了不含抗原的溶液的免疫测定中的发光量和使用了含抗原的溶液的免疫测定中的发光量的差x。
[0229]
[磁性粒子的单位重量的发光量的判定基准]
[0230]
○○
：差x为150000以上
[0231]
○
：差x为125000以上且小于150000
[0232]
△
：差x为100000以上且小于125000
[0233]
×
：差x小于100000
[0234]
磁性粒子的构成以及结果如下述表1、2所示。
[0235]
[表1]
[0236][0237]
[表2]
[0238][0239]
符号的说明
[0240]
1，1a
…
磁性粒子
[0241]2…
树脂粒子
[0242]3…
磁性层
[0243]4…
壳层
[0244]5…
物质
[0245]
41
…
第1壳层
[0246]
42
…
第2壳层