一种构建菌丝网络转导植物间免信号疫的方法与流程

1.本发明涉及植物栽培技术领域，具体为一种构建菌丝网络转导植物间免信号疫的方法。


背景技术：

2.在以往的研究中，关于菌丝网络介导植物间免疫信号的传导装置主要是植物与植物间通过尼龙网的隔绝，供体与受体种植于同一个基质盆中，会增加植物间根系的接触面积，难以控制植物间根系分泌物的流动，影响菌丝网络介导植物间免疫信号的准确性。而如何控制植物间的根系不接触，阻止根系分泌物的流动，成为确保结果准确性的关键。


技术实现要素：

3.针对以上问题，本发明提供了一种构建菌丝网络转导植物间免信号疫的方法。
4.根据本发明的目的，本发明提供如下技术方案：
5.一种构建菌丝网络转导植物间免信号疫的方法，包括如下步骤：
6.s1，扩繁基质配制
7.将有机肥与沙子按照1:3的比例装入基质盆中，混合均匀后灭菌处理；有机质调节至酸性土质；
8.s2，菌种扩繁
9.菌种扩繁的作物为玉米，将20g摩西球囊霉菌种平铺于1.5kg的灭菌基质上，种植4株消毒玉米，无菌水浇灌，待玉米长两个月后进行根系定殖观察；
10.将摩西球囊霉定殖的玉米根系剪碎，连同基质混匀，称取230g于盆栽烟草的培育植株根系附近，进行培育40天后处理；
11.s3，供体和受体作物种植
12.供体和受体作物种植土壤质地为沙壤土，烟草直接盆栽播种，每盆播种10粒烟草种子，在烟草出苗后对其进行间苗，每盆各留苗两株，在生长一段时间后对其再次间苗留单株，并保证留的烟草苗生物量一致；
13.s4，移栽
14.移栽培育植物，接种丛枝菌一个月后，移除培育植物地上部分，保留根系，移栽供体和受体植物；
15.将供体和受体移栽至灭菌基质土中，与已经去除地上部分的培育植株共培育40天，使得供体和受体植株随着根系生长与培育植株建立菌丝网络，通过中心的培育植株根系间的菌丝网络进行信号交流；
16.s5，田间管理
17.为防止根系分泌物流动，浇水为多次少量以较小试验误差，每周浇灌一次营养液。
18.进一步地，s1中，灭菌方法为有机肥与沙子的混合基质经121℃高压灭菌30min。
19.进一步地，s1中，配制得的扩繁基质测定ph为6
‑
6.5。
20.进一步地，s1中，有机肥的配制：将草木灰、蛭石、珍珠岩、腐殖土按体积比1:1:1:1均匀混合，配制好的有机肥与沙子按体积比为3:1混合均匀。
21.进一步地，在s2菌种扩繁前，用流动的自来水洗涤玉米种子，然后用无菌蒸馏水洗涤，在超净工作台中用75％的乙醇表面消毒1分钟，用5％次氯酸钠的表面消毒5分钟，再用75％的乙醇表面消毒30s，最后在无菌蒸馏水中洗涤10分钟，总共洗3次。
22.进一步地，供体为喷施茉莉酸甲酯(meja)的烟草植株；受体为接种烟草疫霉菌的烟草植株；将菌丝由中心通过尼龙网扩繁到周围的供体和受体植株，建立菌丝网络体系。
23.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
24.本发明一种构建菌丝网络转导植物间免信号疫的方法，通过供体与受体植株的不同基质盆种植，尽量控制植物间的根系接触，及控制每盆植株的浇水量，阻止根系分泌物的流动，进一步确定试验结果是通过地下菌丝网络的传导作用引起。
具体实施方式
25.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
26.实施例1
27.一种构建菌丝网络转导植物间免信号疫的方法，包括如下步骤：
28.s1，扩繁基质配制
29.将有机肥与沙子按照1:3的比例装入基质盆中，混合均匀后灭菌处理；有机质调节至酸性土质；
30.灭菌方法为有机肥与沙子的混合基质经121℃高压灭菌30min。制得的扩繁基质测定ph为6
‑
6.5。
31.有机肥的配制：将草木灰、蛭石、珍珠岩、腐殖土按体积比1:1:1:1均匀混合，配制好的有机肥与沙子按体积比为3:1混合均匀。
32.s2，菌种扩繁
33.菌种扩繁的作物为玉米，将20g摩西球囊霉菌种平铺于1.5kg的灭菌基质上，种植4株消毒玉米，无菌水浇灌，待玉米长两个月后进行根系定殖观察；
34.将摩西球囊霉定殖的玉米根系剪碎，连同基质混匀，称取230g于盆栽烟草的培育植株根系附近，进行培育40天后处理；
35.在菌种扩繁前，用流动的自来水洗涤玉米种子，然后用无菌蒸馏水洗涤，在超净工作台中用75％的乙醇表面消毒1分钟，用5％次氯酸钠的表面消毒5分钟，再用75％的乙醇表面消毒30s，最后在无菌蒸馏水中洗涤10分钟，总共洗3次。
36.s3，供体和受体作物种植
37.供体和受体作物种植土壤质地为沙壤土，烟草直接盆栽播种，每盆播种10粒烟草种子，在烟草出苗后对其进行间苗，每盆各留苗两株，在生长一段时间后对其再次间苗留单株，并保证留的烟草苗生物量一致；
38.供体为喷施茉莉酸甲酯(meja)的烟草植株；受体为接种烟草疫霉菌的烟草植株；
s2中的烟草只起到再次扩繁菌种的作用，将菌丝由中心通过尼龙网扩繁到周围的供体和受体植株，建立菌丝网络体系。
39.s4，移栽
40.移栽培育植物，接种丛枝菌一个月后，移除培育植物地上部分，保留根系，移栽供体和受体植物，40天后进行试验处理；
41.由于s4中所需到菌种的接种量比较大，为进一步确保菌丝网络的构建，减少科研费用，所以将购买到的菌种在s1和s2中进一步扩繁。
42.保留培育植株根系是为了保护菌丝网络体系，不切割菌丝间的连接，且地上部分不能完全移除(保留茎杆，去除所有叶片，保证供体和受体生长)，以免地下根系腐烂或者干枯。
43.将供体和受体移栽至灭菌基质土中，与已经去除地上部分的培育植株共培育40天，使得供体和受体植株随着根系生长与培育植株建立菌丝网络，通过中心的培育植株根系间的菌丝网络进行信号交流。
44.为了证明受体的处理将通过菌丝网络传递了免疫信号，可以设置三个受体，受体1、受体2和受体3，供体的处理是为了引发植物免疫，在处理供体后需对受体1进行再次处理，是为了证明此时的受体1在有菌丝网络的情况下，供体已经通过菌丝网络传递了免疫信号给受体1、受体2和受体3；再次对受体2和受体3进行取样证明受体1的处理将通过菌丝网络传递了免疫信号。
45.供体和受体培育40天后，将供体植株进行茉莉酸甲酯(meja)喷施，喷施3天后对供体和受体1进行取样测定；将受体1植株进行烟草疫霉菌接种，接种24h后对受体1、受体2和受体3进行取样测定；
46.测定的植物指标主要为植物激素(sa、ja、aba等)、抗氧化酶活性(ppo、sod、h2o2等)、相关抗性基因表达(pr1、pr2、pr5、pdf1.2等)。测定方法为本领域的常用方法，不属于本发明的发明点，因此在此不再赘述。
47.s5，田间管理
48.为防止根系分泌物流动，浇水为多次少量以较小试验误差，每周浇灌一次营养液。
49.每次浇水的量为每株烟草浇灌200ml，分别于早上和下午进行浇灌。
50.霍格兰营养液配方：
51.52.a
‑
e是1升的母液；微量是500毫升的母液；浇灌时取a
‑
e各50毫升，微量取5毫升，加50升的蒸馏水。
53.本发明一种构建菌丝网络转导植物间免信号疫的方法，通过供体与受体植株的不同基质盆种植，尽量控制植物间的根系接触，及控制每盆植株的浇水量，阻止根系分泌物的流动，进一步确定试验结果是通过地下菌丝网络的传导作用引起。
54.最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。