一种盐酸莫西沙星有关物质的检测方法与流程

1.本发明涉及药物分析检测技术领域，尤其涉及一种盐酸莫西沙星有关物质的检测方法。


背景技术：

2.盐酸莫西沙星，化学名为1
‑
环丙基
‑7‑
{(s,s)
‑
2,8
‑
重氮
‑
二环[4.3.0]壬
‑8‑
基}
‑6‑
氟
‑8‑
甲氧
‑
1,4
‑
二氢
‑4‑
氧
‑3‑
喹啉羧酸盐酸盐，化合物结构式为：
[0003][0004]
盐酸莫西沙星原研为拜耳(bayer)，其盐酸莫西沙星片和盐酸莫西沙星氯化钠注射液已进口国内，片剂规格为400mg，商品名为射液已进口国内，片剂规格为400mg，商品名为注射液规格为250ml：莫西沙星0.4g与氯化钠2.0g，商品名为250ml：莫西沙星0.4g与氯化钠2.0g，商品名为
[0005]
莫西沙星是具有广谱作用和抗菌活性的8
‑
甲氧基氟喹诺酮类抗菌药。莫西沙星在体外对革兰阳性细菌、革兰阴性细菌、厌氧菌、抗酸菌和非典型微生物(如支原体，衣原体和军团菌)有广谱抗菌活性。抗菌作用机制为干扰ⅱ、ⅳ拓扑异构酶，拓扑异构酶是控制dna拓扑和在dna复制、修复和转录中关键的酶。其杀菌曲线表明，莫西沙星具有浓度依赖性的杀菌活性，最低杀菌浓度和最低抑菌浓度基本一致；莫西沙星对β
‑
内酰胺类抗生素和大环内酯类耐药的细菌亦有效。通过感染的实验动物模型证实，莫西沙星体内活性高，作为新一代氟喹诺酮类药，其具有广谱、高效、抗耐药性强、副作用较小等优势，必将得到广泛的临床应用，具有很好的发展前景。
[0006]
有关物质是药品安全性的重要质控点之一，盐酸莫西沙星在usp43(美国药典)、ep10.5(欧洲药典)和bp2021(英国药典)中均有收载，其中就一般杂质而言，通过对各国药典分析方法进行重现，发现bp2021盐酸莫西沙星原料药有关物质检测方法中杂质l、杂质m未出峰；对usp43盐酸莫西沙星片有关物质检测方法进行重现，结果显示，杂质c和杂质v峰重合，杂质b、杂质c、杂质v、杂质d、杂质e分离度较差。


技术实现要素：

[0007]
有鉴于此，本发明提供了一种盐酸莫西沙星有关物质的检测方法。本本发明提供的检测方法能够实现主成分与各种杂质之间的有效分离，灵敏度、准确、重现性较好。
[0008]
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0009]
一种盐酸莫西沙星有关物质的检测方法，包括以下步骤：
[0010]
将待测样品进行高效液相色谱检测，得到盐酸莫西沙星有关物质的含量；所述高
效液相色谱检测的条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；uv检测器波长为291nm～319nm；柱温为25℃～40℃；流动相流速为0.8～1.3ml/min；进样体积为10～50μl；流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇混合溶液；流动相b为磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇混合溶液；洗脱方式为梯度洗脱；稀释剂为磷酸盐缓冲液
‑
硫酸盐混合溶液。
[0011]
优选的，所述盐酸莫西沙星有关物质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质h、杂质j、杂质k、杂质l、杂质m、杂质p、杂质v和杂质r中的一种或几种。
[0012]
优选的，所述色谱柱的型号为ymc
‑
pack ods
‑
aq，尺寸为4.6mm
×
250mm，3μm或5μm或ymc triart c18，尺寸为4.6mm
×
250mm，3μm或5μm。
[0013]
优选的，所述高效液相色谱检测的检测波长为293nm和317nm。
[0014]
优选的，所述流动相a和流动相b中使用的磷酸盐缓冲液中含有磷酸二氢根离子、磷酸根离子、氨基离子和碱金属离子。
[0015]
优选的，所述流动相a和流动相b中使用的磷酸盐缓冲液的溶质包括磷酸氢二钠、磷酸和三乙胺。
[0016]
优选的，所述流动相a和流动相b中使用的磷酸盐缓冲液中，磷酸氢二钠的浓度为0.14～70.98g/l，磷酸的浓度为0.098～49g/l，三乙胺的浓度以调节所述磷酸盐缓冲液的ph值为5.6～5.8为准。
[0017]
优选的，所述梯度洗脱过程中，以在流动相a和流动相b中的总体积计，磷酸盐缓冲液、乙腈、甲醇三相的体积分数如表1所示：
[0018]
表1梯度洗脱过程中磷酸盐缓冲液、乙腈和甲醇的体积分数
[0019][0020]
优选的，所述流动相a中磷酸盐缓冲液、甲醇和乙腈的体积比为75:12:13，流动相b中磷酸盐缓冲液、甲醇和乙腈的体积比为40:27:33；所述梯度洗脱的程序如表2所示：
[0021]
表2梯度洗脱程序
[0022][0023]
优选的，所述磷酸盐缓冲液
‑
硫酸盐混合溶液中的硫酸盐为亚硫酸钠，磷酸盐缓冲
液的溶质为无水磷酸氢二钠和磷酸。
[0024]
本发明提供了一种盐酸莫西沙星有关物质的检测方法，采用高效液相色谱进行检测，检测条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；uv检测器波长为291nm～319nm；柱温为25℃～40℃；流动相流速为0.8～1.3ml/min；进样体积为10～50μl；流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇混合溶液；流动相b为磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇混合溶液；洗脱方式为梯度洗脱；稀释剂为磷酸盐缓冲液
‑
硫酸盐混合溶液。本发明提供的方法能够实现主成分与已知杂质、以及多个未知杂质之间的有效分离，专属性、灵敏度等方法学验证结果表明，本发明提供的方法灵敏度高、准确性好、重现性较好，能够对盐酸莫西沙星原料中的多种杂质进行定性和定量，为更好地控制盐酸莫西沙星制剂产品的质量提供了可靠保障。
附图说明
[0025]
图1为实施例1中bp2020盐酸莫西沙星有关物质检测方法的重现结果
[0026]
图2为实施例2中usp43盐酸莫西沙星片有关物质检测方法的重现结果；
[0027]
图3为实施例3中盐酸莫西沙星有关物质检测方法的检测结果；
[0028]
图4为实施例4中盐酸莫西沙星有关物质检测方法的检测结果；
[0029]
图5为实施例5中盐酸莫西沙星有关物质检测方法的检测结果。
具体实施方式
[0030]
本发明提供了一种盐酸莫西沙星有关物质的检测方法，包括以下步骤：
[0031]
将待测样品进行高效液相色谱检测，得到盐酸莫西沙星有关物质的含量。
[0032]
在本发明中，所述盐酸莫西沙星有关物质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质h、杂质j、杂质k、杂质l、杂质m、杂质p、杂质v和杂质r中的一种或几种；上述有关物质在药典中的名称、结构式以及杂质来源见表3。
[0033]
表3盐酸莫西沙星有关物质的名称、结构式以及杂质来源
[0034]
[0035]
[0036][0037]
本发明对所述待测样品没有特殊要求，需要进行盐酸莫西沙星有关物质检测的样品均可以使用本发明的方法进行检测，在本发明的具体实施例中，所述待测样品可以由盐酸莫西沙星原料药、盐酸莫西沙星片或盐酸莫西沙星注射液配制得到。
[0038]
具体的，当采用盐酸莫西沙星原料药配制待测样品时，优选通过以下方法配制：取供试品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0039]
当采用盐酸莫西沙星片配制待测样品时，优选通过以下方法配制：取盐酸莫西沙星片20片，研细，取细粉适量(相当于盐酸莫西沙星10mg)，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液。
[0040]
当采用盐酸莫西沙星注射液配制待测样品时，优选通过以下方法配制：精密量取盐酸莫西沙星注射液适量(相当于盐酸莫西沙星10mg)，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶
解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0041]
其中，溶解供试品和稀释用的溶剂均为上述色谱条件中所述的稀释剂。
[0042]
在本发明中，所述待测样品中盐酸莫西沙星的浓度优选为0.1～5mg/ml，更优选为1mg/ml。
[0043]
得到待测样品后，本发明将所述待测样品进行高效液相色谱检测，得到盐酸莫西沙星有关物质的含量。在本发明中，所述高效液相色谱检测的条件包括：
[0044]
色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；所述色谱柱的型号优选为ymc
‑
pack ods
‑
aq，尺寸优选为4.6mm(内径)
×
250mm(柱长)，3μm或5μm(粒径)或ymc triart c18，尺寸为4.6mm(内径)
×
250mm(柱长)，3μm或5μm(粒径)；
[0045]
uv检测器波长为291nm～319nm，优选为293nm和317nm，具体的，当所述盐酸莫西沙星有关物质为杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质h、杂质l、杂质m、杂质p、杂质r和杂质v中的一种或几种时，uv检测器波长优选为293nm，当所述盐酸莫西沙星有关物质为杂质j和/或杂质k时，uv检测器波长优选为317nm；
[0046]
柱温为25℃～40℃，优选为28℃～32℃，更优选为30℃；
[0047]
流动相流速为0.8～1.3ml/min，优选为0.9ml/min～1.2ml/min，更优选为1.1ml/min；
[0048]
进样体积为10～50μl，优选为20～30μl；
[0049]
流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇混合溶液，所述流动相a中磷酸盐缓冲液、乙腈和甲醇的体积比优选为75:12:13；所述流动相a中使用的磷酸盐缓冲液中优选含有磷酸二氢根离子、磷酸根离子、氨基离子和碱金属离子；所述碱金属离子优选为钠离子，具体的，所述磷酸盐缓冲液的溶质优选包括磷酸氢二钠、磷酸和三乙胺，所述磷酸氢二钠的浓度优选为0.14～70.98g/l，更优选为1～20g/l，进一步优选为3.6g/l，磷酸的浓度优选为0.098～49g/l，更优选为1～20g/l，进一步优选为3.28g/l，三乙胺的浓度以将所述磷酸盐缓冲液的ph值调节至5.6～5.8为准，优选调节至磷酸盐缓冲液的ph值为5.7；在本发明的具体实施例中，所述磷酸盐缓冲液中磷酸氢二钠的浓度为3.6g/l、磷酸的浓度为3.28g/l时，三乙胺的浓度为1ml/l；在本发明的具体实施例中，优选将适量的无水磷酸氢二钠和磷酸溶于水中并定容至1000ml，之后加入三乙胺，得到所述磷酸盐缓冲溶液。
[0050]
流动相b为磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇混合溶液，所述流动相b中磷酸盐缓冲液、乙腈和甲醇的体积比优选为40:27:33；所述流动相b中使用的磷酸盐缓冲液优选和流动相a中一致，在此不再赘述。
[0051]
洗脱方式为梯度洗脱，在本发明中，所述梯度洗脱过程中，以在流动相a和流动相b中的总体积计，磷酸盐缓冲液、乙腈、甲醇三相的体积分数优选如表1所示：
[0052]
表1梯度洗脱过程中磷酸盐缓冲液、乙腈和甲醇的体积分数
[0053][0054]
在本发明中，所述梯度洗脱程序优选如表2所示：
[0055]
表2梯度洗脱程序
[0056][0057]
稀释剂为磷酸盐缓冲液
‑
硫酸盐混合溶液；所述磷酸盐缓冲液
‑
硫酸盐混合溶液中的硫酸盐缓为亚硫酸钠，更优选为无水亚硫酸钠，磷酸盐缓冲液的溶质优选为无水磷酸氢二钠和磷酸；所述磷酸盐缓冲液
‑
硫酸盐混合溶液中无水亚硫酸钠的含量优选为20～100mg/l，无水磷酸氢二钠的浓度优选为0.14～70.98g/l，更优选为1～20g/l，进一步优选为3.6g/l，磷酸的浓度优选为0.098～49g/l，更优选为1～20g/l，进一步优选为3.28g/l；在本发明的具体实施例中，优选将适量的无亚硫酸钠、无水磷酸氢二钠和磷酸溶解后定容至1000ml，即得到所述磷酸盐缓冲液
‑
硫酸盐混合溶液。本发明采用上述稀释剂溶解样品，稀释剂的成分与流动相接近，可降低溶剂效应造成的峰形异常或基线波动。
[0058]
将待测样品按照上述条件进行高效液相色谱检测，得到高效液相色谱图，根据色谱图计算各个有关物质的含量，在本发明的具体实施例中，优选先配制各个有关物质的标准品溶液，然后按照上述检测条件进行高效液相色谱检测，根据标准品在高效液相色谱图中的保留时间和及待测样品在高效液相色谱图中的保留时间对分离的各个有关物质进行定性，根据标准品在高效液相色谱图中的峰面积、标准品浓度以及待测样品在高效液相色谱图中的峰面积进行计算，即可对待测样品中各个有关物质进行定量，本发明对具体的计算方法没有特殊要求，按照本领域技术人员熟知的方法进行计算即可。
[0059]
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。
[0060]
实施例1
[0061]
对药典bp2021中盐酸莫西沙星原料有关物质检测方法进行重现，色谱条件见表4。
[0062]
表4 bp2021盐酸莫西沙星原料有关物质检测方法重现
[0063][0064]
采用盐酸莫西沙星、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质l和杂质m的标准品配制杂质混合液，溶剂为表4中所示的稀释剂，混合溶液中各个物质的浓度为：盐酸莫西沙星1mg/ml，杂质a～杂质m的浓度均为10μg/ml；
[0065]
采用杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质l和杂质m的标准品制定位溶液，溶剂为表4中所示的稀释剂；定位溶液的浓度均为0.1mg/ml；
[0066]
采用上述杂质混合溶液与各杂质定位溶液对bp2021中的方法进行重现，上述溶液的进样量均为10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图及色谱数据，结果如表5和图1所示：
[0067]
表5杂质混合溶液与杂质定位溶液检测结果
[0068][0069][0070]
根据表5和图1中的结果可以看出：杂质混合溶液杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e和杂质f被检出，各组分分离度良好，但杂质l、杂质m的峰未出峰，该方法专属性较差。
[0071]
实施例2
[0072]
对药典usp43中盐酸莫西沙星片有关物质的检测方法进行重现。
[0073]
色谱条件：采用bp2021中盐酸莫西沙星原料药有关物质检测方法的色谱柱、进样体积、流动相缓冲液中四丁基硫酸氢铵浓度(0.5g/l)以及供试品浓度，对usp43中莫西沙星
片有关物质检测方法的流动相比例与梯度进行重现，具体色谱条件见表6。
[0074]
表6 usp43中莫西沙星片有关物质检测方法重现
[0075][0076][0077]
采用盐酸莫西沙星、杂质p、杂质h、杂质f、杂质a、杂质b、杂质v、杂质c、杂质d、杂质e、杂质l、杂质m和杂质j配制杂质混合液，溶剂为表6中所示的稀释剂，混合溶液中各个物质的浓度为：盐酸莫西沙星1mg/ml，杂质p、杂质h、杂质f、杂质a、杂质b、杂质v、杂质c、杂质d、杂质e、杂质l、杂质m和杂质j的浓度均为10μg/ml；
[0078]
采用杂质p、杂质h、杂质f、杂质a、杂质b、杂质v、杂质c、杂质d、杂质e、杂质l、杂质m和杂质j配制定位溶液，溶剂为表6中所示的稀释剂；定位溶液的浓度为0.1mg/ml；
[0079]
取杂质混合溶液和杂质定位溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如表7和图2所示。
[0080]
表7 usp43中莫西沙星片有关物质检测方法重现结果
[0081][0082]
根据表7和图2中的结果可以看出：采用ups43中盐酸莫西沙星片有关物质检测方法的色谱条件时，杂质c和杂质v峰重合，杂质b、杂质c、杂质v、杂质d、杂质e分离度较差，但杂质分离能力要优于bp2021盐酸莫西沙星有关物质方法。
[0083]
实施例3
[0084]
将ups43中检测方法的流动相a、流动相b和梯度洗脱方式进行改变，将改变后的方案记为优化
‑
1，具体的检测条件见表8。
[0085]
表8盐酸莫西沙星有关物质检测方法色谱条件
[0086]
[0087]
采用表8中的稀释剂为溶剂，按照实施例2中的方法配制混合杂质溶液，取混合杂质溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图3。
[0088]
根据图3可以看出，在优化
‑
1的条件下，杂质c与杂质v分离度大于1.5，杂质e与前未知杂质分离度大于1.5，实验室工艺监控过程中发现，杂质b和杂质v无法达到基线分析，且该出峰位置还另检出一未知杂质，且通过精制无法去除，对杂质v的清除监测造成干扰，为更好监控各杂质，需继续优化方法。
[0089]
实施例4
[0090]
改变实施例3中的色谱柱、流动相a、流动相b、梯度洗脱程序和稀释剂进行改变，将改变后的方法记为优化
‑
2，具体的色谱条件见表9。
[0091]
表9盐酸莫西沙星有关物质检测方法色谱条件
[0092][0093]
采用盐酸莫西沙星、杂质p、杂质h、杂质f、杂质a、杂质b、杂质v、杂质c、杂质d、杂质e、杂质l、杂质m、杂质j、杂质k和杂质r配制杂质混合液，溶剂为表9中所示的稀释剂，混合溶液中各个物质的浓度为：盐酸莫西沙星1mg/ml，杂质p、杂质h、杂质f、杂质a、杂质b、杂质v、杂质c、杂质d、杂质e、杂质l、杂质m、杂质j、杂质k和杂质r的浓度均为10μg/ml。
[0094]
取20μl混合杂质溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图4。
[0095]
根据图4中的结果可以看出，除杂质d和杂质v重合外，其余杂质均可有效分离。
[0096]
实施例5
[0097]
在实施例4中，流动相a中有机相占2％，有机相比例过少，保质期较短，易产生浑浊，对色谱柱造成不可逆的损伤，因此尝试在流动相a中增加有机相比例，以延迟流动相a的浑浊变质，根据原实施例4中的梯度比例计算，将梯度0～60min及95.01～120min时间段中流动相b中的有机相全部转化到流动相a中，重新调整梯度，保持与实施例4的方法梯度中每
个时间段水相与有机相比例一致。方法变更前后详细色谱参数见表10。
[0098]
表10实施例5与实施例4的检测方法对比
[0099][0100]
采用表10中的稀释剂为溶剂，按照实施例4方法配制混合杂质溶液，混合杂质溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图5。
[0101]
对比图4和图5可以看出，方法变更前后，各杂质分离不受影响，变更后的检测方法即为本发明提供的盐酸莫西沙星原料药有关物质检测方法。该方法能够实现各个杂质的有效分离，并且流动相的保质期长，不会色谱柱造成不可逆的损伤；此外，杂质d与杂质v均为工艺杂质，二者出峰位置一样，拟进行合并控制，由于杂质v校正因子较大，该位置色谱峰均按杂质v控制。
[0102]
实施例6专属性验证
[0103]
本实施例采用的色谱条件和实施例5一致。
[0104]
对空白溶剂(表10中的溶剂)进行检测，结果显示，空白溶剂在色谱图中不出峰，说明溶剂对不干扰系统适用性溶液中各组分的测定；系统适用性溶液(实施例5中配制的混合杂质溶液)中各组分间的分离度符合要求，专属性良好；此外，从实施例5所得的图5可以看出，各杂质间的分离度符合要求，说明本发明的方法专属性良好。
[0105]
实施例7检测限和定量限
[0106]
精密称取盐酸莫西沙星、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质h、杂质j、杂质k、杂质l、杂质m、杂质p、杂质v和杂质r置于瓶中，用溶剂(表10中所示的溶剂)溶解，制成储备液，逐步稀释储备液，分别进样进行液相色谱检测，检测条件和实施例5一致；以s/n≈3为检测限，以s/n≈10为定量限，测试定量限时，每个样品平行测试6次，峰面积的rsd值
不得超过10％。
[0107]
结果见表11。
[0108]
表11各个杂质的检测限和定量限测试结果
[0109][0110][0111]
实施例8线性关系
[0112]
各杂质浓度在定量限～相当于供试品浓度的1.0％的浓度范围内配制线性溶液，并进行液相色谱检测，检测条件和实施例5一致，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，所示结果如表12所示：
[0113]
表12线性关系测试结果
[0114][0115][0116]
根据表12中的数据可知，各杂质在loq～相当于样品浓度的1.0％浓度范围内，各杂质峰面积与浓度线性关系良好，相关系数r大于0.990。
[0117]
实施例9准确度测试
[0118]
准确度测试：在供试品溶液中分别加入50％限度浓度、100％限度浓度、150％限度浓度的杂质p、h、a、b、e、v、l、c、f、m、j、k，按照实施例5中的色谱条件进行检测，计算回收率；
[0119]
在供试品溶液中分别加入50％，100％，500％，750％限度浓度的杂质d、r，按照实施例5中的色谱条件进行检测，计算回收率。
[0120]
所得结果如表13所示；
[0121]
表13准确度测试结果
[0122][0123]
根据表13中的结果可以看出，各个杂质的回收率均在90.0％～110.0％，且各浓度水平rsd均小于10.0％，说明本发明的方法准确度良好。
[0124]
此外，对各个杂质的校正因子进行检测，结果见表14。
[0125]
表14校正因子
[0126]
项目校正因子杂质p4.2杂质h1.0杂质a1.0杂质b1.7杂质v2.9杂质l1.5杂质c1.2杂质e3.5杂质f1.2杂质m1.0杂质j1.0杂质k1.0杂质d1.3
[0127]
实施例10精密度测试
[0128]
将杂质p、h、a、b、v、l、c、f、j、k、r、d对照品溶液(溶剂为表10所示的溶剂，浓度均为10μg/ml)连续进样6次，色谱条件和实施例5相同，结果显示，各杂质与莫西沙星保留时间与峰面积rsd％均小于2.0％，说明本发明的方法进样精密度良好。
[0129]
实施例11稳定性测试
[0130]
将杂质p、h、a、b、v、l、c、f、j、k对照品溶液(溶剂为表10所示的溶剂)在室温条件下
放置68h，杂质r、d对照品溶液在室温条件下放置70h，杂质e对照品溶液在室温条件下放置52.4h，杂质m对照品溶液在室温条件下放置10h，将放置前后的溶液按照实施例5中的色谱条件进行检测，结果显示，各杂质峰面积与放置前的峰面积比值均在98％～102％范围内，说明溶液稳定
[0131]
将供试品溶液(实施例5中配制的混合杂质溶液)在室温条件下放置28.5h，对放置前后的供试品溶液进行液相色谱检测，检测条件和实施例5一致，结果限制，各时间点与0h相比，杂质个数一致，各杂质与单杂含量极差在0.05％以内，总杂含量极差在0.10％以内，说明溶液稳定。
[0132]
实施例12耐用性测试
[0133]
精密称取盐酸莫西沙星、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质h、杂质j、杂质k、杂质l、杂质m、杂质p、杂质v和杂质r置于瓶中，用溶剂(表10中所示的溶剂)溶解，得到混合杂质溶液，控制混合杂质溶液中各个杂质的浓度均为10μg/ml。
[0134]
1、将实施例5中的色谱条件的柱温增加至32℃，减少流动相a中乙腈比例至12％(磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇(75:12:13))，对上述混合杂质溶液进行测试，结果显示，除杂质r和杂质c的分离度较差外，其余各杂质的分离度均不受影响，也不影响样品检测结果。
[0135]
2、将实施例5流动相a中乙腈比例至14％(磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇＝75:14:11)，对上述混合杂质溶液进行测试。结果显示，除杂质e和相邻未知杂质分离度较差外，其余各杂质的分离度均不受影响，也不影响样品检测结果，且杂质r和杂质c分离度更优。
[0136]
3、将实施例5中流动相的流速改为0.8ml/min和1.2ml/min，对上述混合杂质溶液进行测试，结果显示，除杂质r和杂质c的分离度较差外，其余各杂质的分离度均不受影响，也不影响样品检测结果。
[0137]
通过上述改变色谱条件进行检测，结果表明：色谱条件发生微小变化时，各条件下系统适用性溶液中相邻杂质峰分离度均符合要求，各组分相对保留时间没有明显差异；供试品溶液中有关物质含量与正常条件相比，各杂质与单杂极差在0.03％范围内，总杂极差在0.10％范围内，表明该方法的耐用性良好。
[0138]
由以上实施例可以看出，本发明提供的检测方法实现了利用一个方法对盐酸莫西沙星的已知和未知杂质进行检测，各个杂质的分离效果优于药典usp43和bp2021中的方法，能实现杂质与杂质间、杂质与主峰间的有效分离，且更容易获得良好的峰形及分离。且经过分析方法验证，本发明提供的方法专属性良好，各杂质的检测限与定量限满足测定要求且各杂质线性良好；通过杂质加标试验，本方法准确度及精密度均符合要求；通过微调色谱条件，证明本方法耐用性较好，更适用于盐酸莫西沙星原料药的质量控制。
[0139]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。