氨基酸脱氢酶突变体及其应用的制作方法

技术特征：
酯基、c
1-c5酰胺基。12.一种化学-酶法连续反应过程，以甲基酮类化合物为起始原料，一锅法反应制备手性氨基酸，其特征在于，将权利要求11所述化学氧化反应结束后静置得到的上清液，直接加入到酶催化体系中，以连续反应的方式制得手性氨基酸，所述的化学反应结束后的上清液与酶催化体系的体积比为1:10-1:200；所述的酶催化体系由含有氨基酸脱氢酶与葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌冻干细胞各20-200mg、1.35g/l-252g/l葡萄糖和0-0.5mmol nad

在ph 7-10、温度为25-50℃的nh4cl-nh3·
h2o缓冲液中构成。

技术总结
本发明属于化学催化与酶催化交叉领域，涉及氨基酸脱氢酶突变体及其应用，具体涉及有机合成、枯草芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶(leucine dehydrogenase from B.subtilis,BsLDH)的突变改造、底物α-酮酸及其衍生物的不对称还原氨化，以及手性非天然氨基酸的化学-酶法连续反应制备过程。本发明公开的突变体，能够催化多种α-酮酸类化合物的立体选择性还原氨化，合成结构多样的非天然氨基酸。该突变体基因经过重组、转化，在E.coli Rosseta(DE3)中表达，并将其与葡萄糖脱氢酶(GDH)组成辅酶循环体系用于催化α-酮酸及其衍生物得到手性非天然氨基酸。同时，本发明以甲基酮类化合物为起始原料，构建了立体选择性制备手性非天然氨基酸的化学酶法反应过程。化学酶法反应过程。


技术研发人员：贾娴 欧阳敬平 游松 韩冰洋 刘家岱 范多纳 张飞霆
受保护的技术使用者：沈阳药科大学
技术研发日：2020.04.30
技术公布日：2021/11/2