一种微拟球藻ACE抑制肽、提取物及其制备方法和在制备治疗高血压药品中的应用

本发明属于生物活性肽，尤其涉及一种微拟球藻ace抑制肽、提取物及其制备方法和在制备治疗高血压药品中的应用。

背景技术：

1、高血压是一种高发性心血管疾病，影响着全球约10亿成年人的健康。长期高血压会增加心肌梗塞、肾衰竭和中风等疾病的致病风险。近年来，每年有900多万人死于高血压相关疾病。肾素-血管紧张素系统(renin–angiotensin system，ras)和激肽-一氧化氮系统(kinin–nitric oxide system，knos)对人体血压的调节至关重要。

2、血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ace）抑制肽又称ace抑制肽。它能同时作用于血管收缩的肾素-血管紧张素系统(renin–angiotensin system，ras)和血管舒张的激肽释放酶-激肽-系统(kallikrein–kinin system，kks)两个系统，常作为临床上治疗高血压的靶点。当前临床上使用的治疗高血压的药物多针对ace靶点开发。比如：卡托普利、依那普利和赖诺普利等治疗高血压的药物均是ace抑制剂，但这些ace抑制剂大多是合成类药物，服用时常会伴有许多毒副作用：如咳嗽、皮肤瘙痒、味觉紊乱或血压过低。

3、生物活性肽是由短的氨基酸序列组成，其结构简单、生物穿透性好、易于被细胞吸收，且不容易与其他药物分子结合而产生副作用。藻类因富含不饱和脂肪酸、功能性多糖和多肽等营养物质，在食品和医药中的应用历史久远。近年来藻类蛋白作为植物蛋白的一个新来源而备受欢迎。藻类蛋白可以直接食用，也可以通过水解制备功能性多肽。藻类蛋白生物多肽表现出抗氧化、抗高血压、抗癌等活性功效。

4、微拟球藻(nannochloropsis)，又称拟微球藻，是一种单细胞绿藻。微拟球藻中富含多不饱和脂肪酸、蛋白质、多糖等营养成分，在水产养殖、食品、医疗保健、化妆品等行业有着广泛的应用前景。拟微球藻的油脂含量可以达到细胞生物量的60%以上，其中二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，epa）含量可达30%。epa是一种ω-3长链多不饱和脂肪酸，具有降低胆固醇、降低血液粘稠度、增进血液循环的功能。由于生长速度快、生物量高，环境耐受性强，微拟球藻被认为是最具潜力实现大规模培养的产油微藻。近年来越来越多的研究发现藻类蛋白来源的多肽具有抗氧化、抗高血压、抗癌等生物活性。然而，有关拟微球藻中的蛋白质和多肽的应用研究比较有限。近年来对藻类来源的生物多肽的制备、分离纯化和功能筛选的研究越来越多，但鲜有从微拟球藻中分离得到ace抑制肽的报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种微拟球藻ace抑制肽、提取物及其制备方法和在制备治疗高血压药品中的应用。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种微拟球藻ace抑制肽，所述微拟球藻ace抑制肽序列为pro-gly-pro-ala-iie-phe，gly-pro-gly-pro-phe-thr-val-phe或trp-asp-pro-leu-gly-phe。

4、本发明还提供了一种微拟球藻ace抑制肽提取物，包括序列为pro-gly-pro-ala-iie-phe，gly-pro-gly-pro-phe-thr-val-phe和trp-asp-pro-leu-gly-phe的ace抑制肽。

5、本发明还提供了一种微拟球藻ace抑制肽提取物的制备方法，包括以下步骤：

6、1）将微拟球藻藻粉和水混合超声，静置，在0.1-0.3 mpa高压处理20-40min，调节ph值至5-7，加入纤维素酶酶解得到酶解液；

7、2）调节酶解液的ph值至10-14后超声水浴提取，离心，收集上清液和沉淀；

8、3）将离心后得到的沉淀与水混合按步骤2）重复提取1-3次，收集上清液；

9、4）将步骤2）和3）得到的上清液合并后除杂，第一次调节ph值至2-5，静置，离心，收集沉淀后加水并第二次调节ph值至8-12，在-60~-100℃下预冻，然后冷冻干燥得到微拟球藻粗蛋白粉末；

10、5）将微拟球藻粗蛋白粉末与水混合搅拌后调节ph值至7-9，加入胰蛋白酶酶解，酶解后离心，收集上清液，除杂，浓缩后冷冻干燥得到拟球藻粗多肽粉末；

11、6）将微拟球藻粗多肽粉末加水溶解得到微拟球藻粗多肽溶液，依次使用10 kda和3 kda的超滤膜包进行超滤分离，得到分子量＜3kda的微拟球藻ace抑制肽提取物。

12、优选的，所述微拟球藻藻粉和水的混合比例为（60-100）g：（600-1000）ml；

13、步骤1）中所述超声的功率为500 w-1000 w，所述超声的时间为10-30min；所述静置的时间为8-12h；所述高压处理的温度为100-150℃；

14、所述纤维素酶的酶活为30-70 u/mg，所述纤维素酶的用量为1.5-3g；

15、所述酶解的温度为30-50℃，所述酶解的时间为1.5-3h。

16、优选的，步骤2）中所述超声的时间为20-40min；所述水浴提取的温度为30-50℃，所述水浴提取的时间为4-8h；所述水浴提取过程中进行搅拌，所述搅拌的速度为100-300rpm。

17、优选的，步骤4）中所述静置的温度为2-6℃，所述静置的时间为20-30h；所述冷冻干燥的压力为10-30pa，所述冷冻干燥的时间为48 h-72h。

18、优选的步骤5）中所述微拟球藻粗蛋白粉末与水的混合比例为（15-25）g：（300-500）ml；所述胰蛋白酶的酶活为2000-3000 u/mg，所述胰蛋白酶的用量为0.1-0.3g；所述酶解的温度为40-60℃，所述酶解的时间为4-8h。

19、优选的，步骤5）中所述浓缩的压力为0.070-0.095mpa，所述浓缩的温度为50~70℃；所述冷冻干燥的压力为10-30pa，所述冷冻干燥的时间为48 h-72h。

20、优选的，步骤2）、4）和5）中所述离心的速度为6000-8000rpm，所述离心的时间为20-40min。

21、本发明还提供了一种微拟球藻ace抑制肽、微拟球藻ace抑制肽提取物或由微拟球藻ace抑制肽提取物的制备方法制备获得的微拟球藻ace抑制肽提取物在制备治疗高血压药品中的应用。

22、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

23、本发明制备的多肽能够有效抑制ace的活性，且该多肽均为小分子肽（氨基酸数小于10个），易于被吸收利用。本发明采用超声辅助、高压蒸汽、纤维素酶解三种方法对微藻进行预处理，提高了粗蛋白溶出率，对大分子蛋白进行初步水解，同时高压蒸汽处理还能消除内源酶对后续外源酶酶解带来的影响。本发明制备得到的多肽pgpaif、gpgpftvf、wdplgf具有很好的ace抑制活性，且其消化稳定性好，可用于制作降低高血压的辅助治疗或者应用于针对高血压患者的产品的开发。