一种适配多工况的复杂污染生物样本基因组DNA提取试剂体系及提取方法与流程

本发明属于核酸提取，具体涉及一种适配多工况的法医基因组dna提取试剂体系及提取方法。

背景技术：

1、法医物证检验过程中，生物接触痕迹检材极易被尘土、色素、油脂、铁锈等物质污染或包埋，检材基质复杂，存在大量扩增抑制物。目前常用的核酸提取体系多采用胍盐作为核心组分，该类物质会影响体系原有ph环境，破坏缓冲体系稳定性。

2、目前，为维持酸碱平衡，通常选择提高缓冲盐添加量，但易造成最终核酸产物纯度下降；若调整裂解液与结合液的酸碱差值，会引发体系ph剧烈变化，不仅会造成dna链断裂损伤，还会加剧蛋白、多糖等杂质在固相载体表面的非特异性吸附，最终导致dna提取得率低、str分型结果不佳，难以满足复杂疑难检材的检测要求。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种适配多工况的法医基因组dna提取试剂体系及提取方法，构建稳定的缓冲调控环境，提升复杂污染检材的dna提取质量。整套试剂体系各组分协同作用，整体缓冲体系稳定，除杂效果优异，可兼容多种固相载体与不同类型提取设备，能够满足不同工况下法医疑难检材的批量提取需求。

2、为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一个方面，提供了一种适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，包括：裂解液、结合液、漂洗液和洗脱液；

4、其中，所述裂解液由如下原料组成：20～40 mmol/l tris-hcl、50～100 mmol/l四烷基季铵盐复配体系、15～30 mmol/l 月桂酰胺类表面活性剂、体积分数2%-3% 曲拉通x-100、10~15 mmol/l edta，ph值为7.4～7.8。

5、本发明的第二个方面，提供了一种适配多工况的法医基因组dna提取试剂体系的提取方法，包括：

6、将待测样品、裂解液和蛋白酶k混合均匀，进行裂解处理，裂解完成后离心，取上清液；

7、向所述上清液中加入结合液，混合均匀后，再加入固相载体，震荡使dna结合富集于固相载体表面，得到负载dna的固相载体；

8、对固相载体进行分级漂洗，洗脱，得到提取产物。

9、本发明的第三个方面，提供了上述的试剂体系在法医基因组dna提取中的应用，样品包括：尘土、色素、油脂、铁锈污染或包埋的接触痕迹检材样本、包埋检材样本中至少一种。

10、本发明的有益效果在于：

11、（1）本发明以四烷基季铵盐复配体系作为主盐体系，四烷基季铵盐化学性质稳定，不会消耗体系内缓冲组分。碱性裂解液与弱碱性结合液混合后，无需额外增加缓冲盐用量，也无需拉大酸碱差值，即可平缓转变为适宜核酸结合的环境，实现自释酸调控。结合液中复配peg8000，可进一步优化dna结合效果，提升核酸富集效率。

12、（2）本发明采用平缓的ph过渡方式，彻底避免了因酸碱剧烈波动引发的dna链断裂问题，有效保障长片段核酸的完整性。多级漂洗液分级作用，搭配特定浓度的peg、氯化钠、mops及乙醇，可依次去除蛋白、多糖、残留表面活性剂、盐分等不同类型杂质，从源头减少色素、油脂、铁锈等杂质在固相载体上的附着，显著提升dna产物的纯度与回收率。

13、（3）本发明整体体系无需依靠高浓度缓冲盐维持酸碱平衡，降低了后续漂洗除杂的难度，可搭配磁珠、硅珠等多种固相载体使用，同时能够灵活适配手工操作、半自动设备、全自动设备等不同作业模式，适用范围广，检测结果重复性好。

14、（4）本发明方法简单、操作方便、实用性强，易于推广。

1.一种适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，其特征在于，包括：裂解液、结合液、漂洗液和洗脱液；

2.如权利要求1所述适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，其特征在于，所述月桂酰胺类表面活性剂为月桂酰胺单乙醇胺。

3.如权利要求1所述适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，其特征在于，所述结合液由如下原料组成：0.5～1.0 mol/l 四烷基季铵盐复配体系、质量分数10%-15% peg8000、体积分数8%～15% 醇类、20～50 mmol/l 琥珀酸复配缓冲组分，ph值为7.2～7.3。

4.如权利要求3所述适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，其特征在于，所述醇类为乙醇或异丙醇。

5.如权利要求3所述适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，其特征在于，所述琥珀酸复配缓冲组分选自琥珀酸、琥珀酸一钠、琥珀酸二钠中的至少两种。

6.如权利要求1所述适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，其特征在于，所述漂洗液包括至少三种：

7.如权利要求1所述适配多工况的复杂污染生物样本基因组dna提取试剂体系，其特征在于，所述洗脱液ph值为9.0，为5～15 mmol/l tris-hcl。

8.一种适配多工况的法医基因组dna提取试剂体系的提取方法，其特征在于，包括：

9.如权利要求8所述的适配多工况的法医基因组dna提取试剂体系的提取方法，其特征在于，所述裂解液、蛋白酶k和结合液的体积比为：50：1～2：30-50；

10.权利要求1-7任一项所述的试剂体系在法医基因组dna提取中的应用，其特征在于，样品包括：陈旧骨骼、腐败组织、毛发、指甲中至少一种。