一株唾液乳杆菌Ls.0403及其来源制备物在制备改善痤疮相关皮肤状态产品中的应用

本发明涉及微生物，具体而言，涉及一株唾液乳杆菌ls.0403及其来源制备物在制备改善痤疮相关皮肤状态产品中的应用。

背景技术：

1、痤疮是一种常见的毛囊皮脂腺单位慢性炎症性皮肤病，主要表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节、皮肤红斑及炎症后色素改变。痤疮的发生和发展与皮脂分泌增加、毛囊角化异常、痤疮丙酸杆菌相关炎症反应、角质形成细胞异常激活以及皮肤微生物组成变化等因素密切相关。

2、痤疮丙酸杆菌（cutibacterium acnes）是人体皮肤毛囊皮脂腺单位中的常见微生物。该菌既是正常皮肤微生物群的组成部分，也可在特定条件下诱导角质形成细胞产生趋化因子和炎症介质，促进炎症细胞募集并加重局部皮损。因此，痤疮相关干预不宜仅以彻底清除痤疮丙酸杆菌为目标，还应兼顾异常炎症反应的控制和皮肤局部环境的稳定。

3、目前，痤疮常用的干预方式包括外用或系统性抗菌药物、维a酸类药物、过氧化苯甲酰、壬二酸及其他抗炎制剂。上述方法能够在一定程度上减少痤疮相关皮损，但长期或不规范使用抗菌药物可能增加细菌耐药风险，并可能影响皮肤常驻微生物群。部分制剂还可能引起皮肤干燥、刺激、脱屑或依从性下降等问题。现有部分痤疮护理产品主要关注对痤疮丙酸杆菌的直接抑制，但痤疮相关皮肤状态不仅涉及细菌生长，还涉及氧化应激、角质形成细胞炎症反应及表皮相关基因表达异常。仅根据单一抑菌结果选择活性原料，难以全面评价其对痤疮相关皮肤状态的作用。

4、近年来，乳酸菌、益生菌及其来源成分在痤疮护理、皮肤炎症调节和皮肤微生物相关产品开发中受到关注。经检索，公开号为cn118995466a的中国专利申请公开了一株唾液乳杆菌lsali-1（cctcc no：m2023348），该菌株来源于健康婴儿肠道，具有良好的安全性（无毒力因子、不溶血、对多种抗生素敏感），对人工胃液和肠液耐受性良好，并具有一定的抗氧化能力。该文献记载了lsali-1能够从抑制多种致病菌、缓解屏障功能障碍、抑制促炎因子表达等多方面改善抗肿瘤治疗相关性腹泻，属于口服益生菌在肠道健康领域的应用。然而，该文献并未涉及该菌株在皮肤外用领域的应用，也未涉及针对痤疮相关皮肤状态的改善。此外，该文献仅提供了活菌形式的菌株应用方案，未涉及热灭活菌体、菌体裂解物或培养上清等非活菌来源制备物的制备与应用。对于皮肤局部外用场景，尤其是痤疮相关皮肤状态常伴随皮肤屏障受损和局部炎症的情况，活菌在皮肤表面的存活、定植及潜在增殖风险仍需要进一步审慎评估。

5、现有的部分产品依赖活菌发挥作用，但活菌数量容易受到培养条件、温度、氧气、水分、储存时间及制剂基质的影响，不同批次产品之间可能存在活菌数量和生物活性差异。活菌在皮肤表面的存活和持续存在还会受到皮肤ph、皮脂、局部水分、外用产品以及原有皮肤微生物的影响。对于屏障受损或炎症明显的皮肤，活菌局部使用还需要进一步考虑其增殖和扩散风险。因此，将具有明确功能的乳酸菌制备为热灭活菌体、菌体裂解物或其他非活菌来源制备物，有利于减少对活菌存活和定植的依赖。

6、不同乳酸菌菌株之间的抑菌、抗氧化和宿主细胞调节能力存在明显差异，不能简单认为所有唾液乳杆菌或所有热灭活乳酸菌均具有相同作用。现有技术中，针对特定人源唾液乳杆菌菌株，同时评价其活菌体、培养上清、ph调节培养上清、菌体裂解物和热灭活菌体，并将其用于改善痤疮相关皮肤状态的技术方案仍相对不足。

7、为此，本技术提出了一株唾液乳杆菌ls.0403及其来源制备物在制备改善痤疮相关皮肤状态产品中的应用，以解决上述问题。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决现有技术中针对痤疮相关皮肤状态的活性原料功能单一、活菌制剂稳定性差及局部应用安全性不足的问题，提供了一株唾液乳杆菌ls.0403及其来源制备物在制备改善痤疮相关皮肤状态产品中的应用。

2、本发明的上述目的是这样实现的：

3、本发明的方案一方面提供了一株唾液乳杆菌ls.0403，所述唾液乳杆菌ls.0403的拉丁学名为（ligilactobacillus salivarius），保藏编号为cgmcc no. 38819，保藏日期为2026年5月21日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

4、进一步的，所述唾液乳杆菌ls.0403来源于健康成人粪便样本。

5、本发明的方案还提供了由唾液乳杆菌ls.0403制备的活菌体。

6、本发明的方案还提供了由唾液乳杆菌ls.0403制备的无细胞培养上清。

7、本发明的方案还提供了由唾液乳杆菌ls.0403制备的ph调节培养上清。

8、本发明的方案还提供了由唾液乳杆菌ls.0403制备的菌体裂解物。

9、本发明的方案还提供了由唾液乳杆菌ls.0403制备的热灭活菌体。

10、本发明的方案还提供了一种用于改善痤疮相关皮肤状态的组合物，所述组合物包含权利要求3所述的活菌体、权利要求4所述的无细胞培养上清、权利要求5所述的ph调节培养上清、权利要求6所述的菌体裂解物和权利要求7所述的热灭活菌体中的至少一种，以及一种或多种皮肤可接受的载体或辅料。

11、进一步的，所述皮肤可接受的载体或辅料选自羧甲基纤维素钠、卡波姆、透明质酸、透明质酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇、泊洛沙姆、甘油、丙二醇、生理盐水、磷酸盐缓冲液、乳膏基质、水凝胶基质或医用敷料基质中的一种或多种。

12、本发明的方案还提供了唾液乳杆菌ls.0403、活菌体、无细胞培养上清、ph调节培养上清、菌体裂解物、热灭活菌体或上述的组合物在制备改善痤疮相关皮肤状态的产品中的应用。

13、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

14、1、本发明的菌株来源明确并具有可追溯性，所提供的ls.0403具有明确的菌株来源和保藏信息，保藏编号为cgmcc no. 38819，可通过保藏信息、16s rrna基因序列和全基因组数据进行鉴别和追溯，有利于后续菌株保存、生产管理及不同批次原料的质量控制。

15、2、本发明在候选唾液乳杆菌中具有较强的综合抑菌能力，在19株候选唾液乳杆菌初步筛选中，ls.0403对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的平均抑菌环宽度分别为8.80±0.99 mm和14.48±1.53 mm，两种指示菌的平均抑菌环宽度综合值为11.64 mm，在所筛选的19株候选菌中排名第一，证明其是经多株菌比较后筛选出的具有优异综合抑菌能力的特定菌株。

16、3、本发明对多种代表性细菌具有体外抑制作用，ls.0403对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和铜绿假单胞菌均形成明显抑菌圈，其体外抑菌对象不局限于单一细菌。

17、4、本发明的培养上清对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强抑制作用，当无细胞培养上清体积分数为25%时，对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的抑制率分别达到78.86±2.49%和81.62±5.84%；当体积分数提高至50%时，抑制率分别达到95.13±0.11%和91.25±1.00%，表明该菌株培养上清中含有能够抑制上述细菌生长的活性组分。

18、5、本发明的培养上清经ph调节后仍保留部分抑菌活性。将ls.0403无细胞培养上清的ph调节至6.5后，当其占培养体系最终总体积的75%时，对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的抑制率分别为66.53%±6.14%和44.27%±1.90%。上述结果表明，ls.0403培养上清的抑菌作用不能完全由酸性环境解释，并提示培养上清中可能还存在其他具有抑菌作用的组分。

19、6、本发明的菌体裂解物具有明显的抗痤疮丙酸杆菌和抗金黄色葡萄球菌作用。当ls.0403菌体裂解物占培养体系最终总体积的75%时，对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制率分别为74.53±4.54%和50.19±20.14%。证明ls.0403的活性成分也存在于菌体或菌体破碎后的可溶性组分中，可作为不依赖活菌生长的另一种原料形式。

20、7、本发明提供的ls.0403具有多种体外抗氧化活性，ls.0403完整菌体悬液对dpph自由基、abts自由基和羟自由基的清除率最高分别达到81.58%±2.55%、90.44%±2.79%和89.41%±3.30%；菌体裂解物的t-aoc测定值最高达到75.53%±0.28%，并在t-sod和gsh-px相关检测中表现出可检测的相应活性。上述结果表明，ls.0403完整菌体悬液和菌体裂解物在不同体外抗氧化检测体系中均表现出优异活性。

21、8、本发明提供的菌在热灭活后仍保留角质形成细胞调节活性，ls.0403经热灭活后，仍能显著降低痤疮丙酸杆菌诱导的角质形成细胞中cxcl2、ccl20、ereg和egr1等炎症或上皮激活相关基因的表达，其中cxcl2和ccl20较模型组分别下降约40.95%和30.68%；同时显著提高casp14和muc1等表皮相关基因的表达，其中casp14和muc1分别提高至模型组的约6.05倍和1.54倍。上述结果表明，ls.0403经热灭活后仍保留减轻角质形成细胞炎症相关反应并促进表皮相关修复反应的作用。

22、9、本发明同时具有抑菌、抗氧化和宿主细胞调节作用，本发明从细菌抑制、菌源活性组分、抗氧化作用到宿主角质形成细胞反应调节，形成了多层次的技术效果链，为痤疮相关皮肤产品提供了完整的实验依据。

23、10、本发明的热灭活制剂有利于原料标准化和质量控制，避免了活菌制剂在储存和使用过程中活菌数量衰减的问题，可通过cfu-equivalents进行标准化。

24、11、本发明可降低活菌局部应用的潜在风险，采用经培养验证无活菌生长的热灭活菌体，可减少活菌在皮肤炎症或屏障异常部位持续增殖和扩散的可能性。

25、12、本发明具有多种原料形式和产品开发路线，本发明中的ls.0403可分别制备为多种形式，可单独或组合使用，并可复配多种皮肤外用材料，开发为多种剂型，具有较好的制剂开发和产业转化空间。