一种免疫组合物及其在制备疫苗中的应用的制作方法

本发明涉及疫苗，涉及一种免疫组合物及其在制备水痘-带状疱疹疫苗中的应用，以及由此制备得到的水痘-带状疱疹疫苗。

背景技术：

1、疫苗作为预防传染性疾病最经济有效的手段已获得大众广泛认可。发展至今，疫苗的递送方式和类型经历了多次升级演变。在递送技术方面，从传统注射逐步发展到非侵入性递送，近年来吸入式疫苗产品的成功市场化更引发了研究热潮。在疫苗类型方面，目前广泛应用的疫苗包括灭活疫苗、减毒疫苗、蛋白亚单位疫苗、核酸类疫苗等多种技术路线，各有优势与局限。

2、水痘-带状疱疹病毒（vzv）初次感染引起水痘后，会长期潜伏于人体感觉神经节中，当机体免疫力下降时病毒可被重新激活，引发带状疱疹及带状疱疹后神经痛（phn）等严重并发症。接种带状疱疹疫苗是预防该疾病最有效的手段，目前全球已获批上市的水痘带状疱疹疫苗主要包括减毒活疫苗和重组亚单位疫苗两大技术路线。代表性的产品有：葛兰素史克（gsk）的shingrix（重组亚单位疫苗）和百克生物的感维（减毒活疫苗）等。

3、尽管现有水痘-带状疱疹疫苗取得了显著进展，但仍面临多方面限制：目前占据主流地位的重组亚单位疫苗需要加入佐剂，如 shingrix中的as01b佐剂，专利cn113683704b中公开的重组水痘-带状疱疹疫苗也是由水痘-带状疱疹病毒r-ge融合蛋白与佐剂配伍而成，但是佐剂的加入会诱导强烈的不良反应，显著影响人们的接种意愿，且一些现有疫苗的佐剂系统本身存在技术瓶颈，申请号为200410033878.1的专利，采用氢氧化铝联合cpg作为佐剂形式，其中的氢氧化铝可以作为cpg的载体，两者联合作用激发免疫作用，但是所产生的细胞免疫较弱（参见专利cn113683704b的背景技术）。

4、本发明克服上述限制，创新的开发一种混合疫苗，其抗原含量低、无需添加佐剂，进一步结合优选的给药途径，达到显著的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫效果，为水痘-带状疱疹的防控提供创新解决方案。

技术实现思路

1、本发明提供一种免疫组合物及其在制备水痘-带状疱疹疫苗中的应用，以及由此制备得到的水痘-带状疱疹疫苗。本发明所述免疫组合物包括：（a）来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白；和，（b）编码来源于水痘-带状疱疹的抗原的重组腺病毒载体。本发明所述免疫组合物适于制备水痘-带状疱疹疫苗，可适于制备吸入、注射或微针疫苗制剂。

2、本发明提供一种免疫组合物以及由此制备的疫苗，具体地，可用于制备水痘-带状疱疹疫苗，所述水痘-带状疱疹疫苗抗原含量低、无佐剂，且可有效激起体液免疫，细胞免疫和黏膜免疫，可用于预防或改善水痘-带状疱疹病毒所致的传染疾病，预防效果更优，范围广泛。

3、本发明提供一种免疫组合物，所述免疫组合物包括：

4、（a）来源于水痘-带状疱疹的重组蛋白；和，

5、（b）编码来源于水痘-带状疱疹的抗原的重组腺病毒载体。

6、所述免疫组合物中包含的来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白适用剂量范围为0.1~2.0μg/μl；优选的，所述来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白的适用剂量范围为0.2~0.5μg/μl；进一步优选的，所述来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白的适用剂量为0.5μg/μl。

7、在一些具体实施方式中，免疫组合物中的来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白的适用含量为0.1, 0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0，1.1，1.2，1.3，1.4，1.5，1.6，1.7，1.8，1.9，2.0，单位ug/μl。

8、所述免疫组合物中包含的重组腺病毒载体的适用剂量范围为2×107~8×108vp/μl；优选的，所述重组腺病毒载体的适用剂量范围为1×108~4×108vp/μl；进一步优选的，所述重组腺病毒载体的适用剂量为2x108vp/μl。

9、在一些具体实施方式中，所述免疫组合物中包含的重组腺病毒载体的适用含量为2x107，2.5x107, 3x107, 3.5x107, 4x107, 4.5x106,5x107, 5.5x107, 6x107，6.5x107，7x107, 7.5x107, 8x107, 8.5x107, 9x107, 9.5x107, 1x108，1.5x108，2x108，2.5x108,3x108, 3.5x108, 4x108, 4.5x108, 5x108, 5.5x108, 6x108, 6.5x108, 7 x108, 7.5x108,8x108,单位vp/μl。

10、所述重组腺病毒载体无复制能力，并且在腺病毒早期区域1(e1区域)和早期区域3(e3区域)中的至少一个中具有缺失。

11、本发明所述腺病毒为人腺病毒或猿猴腺病毒a、b、c、d、e、f、g七个亚群中的任意一种。猿猴类腺病毒的a、b、c、d、e、f、g七个亚群中的任意一种，如sad1，sad10，sad11，sad12，sad13，sad14，sad15，sad16，sad18，sad19，sad2，sad20，sad23，sad25，sad26，sad27，sad28，sad29，sad3，sad30，sad31，sad32，sad33，sad34，sad35，sad37，sad38，sad39，sad4，sad40，sad43，sad44，sad45，sad46，sad47，sad48，sad49，sad6，sad9，ady25，adc8, adc22, adc30,adc37, adc11, adc3, adc17, adc19, adc31, adc20, adc24, adc16, adc26, adc82,adc5, adc7, adc44, adc38, adc43, adc63, adc147, adc73, adc6, adc55, adc83,adc143, adc144, adc145, adc10, adc28, adc9, adc6

12、rhesus adenovirus的a、b、c、d、e、f、g七个亚群中的任意一种，如rhad51，rhad52，rhad53，rhad54，rhad55，rhad56，rhad57，rhad58，rhad59，rhad60，rhad61，rhad62，rhad63，rhad64，rhad65，rhad66，rhad67，cyad1

13、gorilla adenovirus的a、b、c、d、e、f、g七个亚群中的任意一种，如goad b20，goadb22，goad b21，goad b10，goad b11，goad b12，goad b13，goad b14，goad b19，goad e1，goad c10，goad c11，goad c12，goad c13，goad c14，goad c15，goad c16，goad c17，goadc18，goad1，goad 2；

14、baboon adenovirus的a、b、c、d、e、f、g七个亚群中的任意一种，如baad 3；

15、人腺病毒包括的a、b、c、d、e、f、g七个亚群中的任意一种，如：ad1、ad10、ad11、ad12、ad14、ad15，ad17、ad18、ad19、ad2、ad20、ad21、ad22、ad23、ad25、ad26、ad27、ad28、ad29、ad3、ad30、ad31、ad32、ad33、ad34、ad35、ad36、ad38、ad39、ad4、ad40、ad41、ad42、ad43、ad44、ad45、ad46、ad47、ad48、ad49、ad5、ad50、ad51、ad52、ad53、ad54、ad55、ad56、ad57、ad6、ad60、ad61、ad62、ad63、ad64、ad65、ad66、ad68、ad7、ad89、ad81、ad86、ad8e、add8add9、add37、add10、add13、add110、add109中的任意一种。

16、优选地，所述人腺病毒载体为adhu5型或adhu26型。

17、优选的，所述猿猴类腺病毒载体为chadox1型。

18、在一些具体实施方式中，所述来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白和来源于水痘带状疱疹病毒的抗原是水痘带状疱疹病毒糖蛋白（ge）。

19、在一些具体实施方式中，所述水痘带状疱疹病毒糖蛋白（ge）的序列是seq id no:1或seq id no:2。

20、在一些具体的实施方式中，所述免疫组合物的给药方式包括吸入、微针或肌肉注射方式。

21、优选的，所述吸入方式包括但不限于干粉吸入或雾化吸入等。

22、本发明还提供由上述任一所述免疫组合物制备得到的水痘-带状疱疹疫苗，所述水痘-带状疱疹疫苗不包含佐剂。

23、在一些具体的实施方式中，所述水痘-带状疱疹疫苗的剂型包括吸入制剂、注射剂或微针制剂。

24、在一些具体的实施方式中，所述吸入制剂包括鼻吸入或口吸入。

25、优选地，所述吸入给药制剂包括液体吸入制剂或干粉吸入制剂。

26、在一些具体实施方式中，本发明疫苗制剂中所包含的来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白的适用剂量范围为0.1~2.0μg/μl；优选的，所述来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白的适用剂量范围为0.2~0.5μg/μl；进一步优选的，所述来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白的适用剂量为0.5μg/μl。

27、在一些具体实施方式中，疫苗中的来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白适用含量为0.1, 0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0，1.1，1.2，1.3，1.4，1.5，1.6，1.7，1.8，1.9，2.0，单位ug/μl。

28、本发明所述的重组腺病毒载体的适用剂量范围为2x107~8x108vp/μl；优选的，所述重组腺病毒载体的适用剂量范围为1x108~4x108vp/μl；进一步优选的，所述重组腺病毒载体的适用剂量为2x108vp/μl。

29、在一些具体实施方式中，疫苗制剂中含有的重组腺病毒载体适用含量为2x107，2.5x107, 3x107, 3.5x107, 4x107, 4.5x106，5x107, 5.5x107, 6x107, 6.5x107, 7x107,7.5x107, 8x107, 8.5x107, 9x107, 9.5x107, 1x108，1.5x108， 2x108，2.5x108, 3x108,3.5x108, 4x108, 4.5x108, 5x108, 5.5x108, 6x108, 6.5x108, 7 x108, 7.5x108, 8x108,单位vp/μl。

30、在一些具体实施方式中，所述来源于水痘带状疱疹病的重组蛋白和来源于水痘带状疱疹病毒的抗原为来源于水痘带状疱疹病毒的糖蛋白（ge）。

31、本发明还提供上述任一所述免疫组合物、上述任一所述的疫苗在预防和/或治疗水痘带状疱疹中的用途。

32、应当理解,本发明不限于所描述的具体方法和实验条件,因为这些方法和条件可以变化。还应当理解,在本说明书中使用的术语仅用于描述具体实施例的目的,而不旨在限制。

33、尽管与本文所述的那些相似或等同的任何方法和材料都可以用于本发明的实践或测试,优选的方法和材料描述如下。本说明书中提及的所有出版物均通过引用整体并入。

34、本说明书中使用的术语具有本领域技术人员公认和已知的含义,然而,为了描述的方便和完整,下文和说明书全文给出了特定术语及其含义。

35、当在本说明书和所附权利要求中使用时,术语可进行狭义及广义角度的理解,除非上下文另有明确规定。因此,例如,术语“方法”包括一种或多种方法和/或步骤,例如本文所述的那些和/或阅读本说明书后本领域技术人员将变得显而易见的方法和/或步骤,等。

36、术语“包括”的意思包括“包含”以及“由...组成”，例如，“包含”x的组合物可以只由x组成，也可以包含其他物质，例如x+y。

37、术语“抗原”通常是指生物分子,通常是蛋白质、肽、多糖、脂质或缀合物,其包含至少一个表位,识别它的抗体可以选择性地结合到该表位;或者,在某些情况下,能够在动物体内刺激抗体产生或 t 细胞反应或两者的免疫原性物质,包括注射到动物体内或被动物摄入的组合物。可以在整个分子或分子的一个或多个不同部分(例如表位或半抗原)上诱导免疫反应。该术语可用于单个分子,或同质或异质的抗原分子群。抗原被抗体、t细胞受体或特定体液和/或细胞免疫的其他要素识别。术语“抗原”包括所有相关的抗原表位。可以使用本领域熟知的各种方法来鉴定特定抗原的表位。例如可以通过确定氨基酸的空间构象来鉴定构象表位,例如,通过 x 射线晶体学和 2d 核磁共振等方法。此外,为了本发明的目的,术语“抗原”也可以用于具有修饰如缺失、添加和取代(通常在性质上是保守的,但它们可能不是保守的)的蛋白质,在天然序列,前提是蛋白质保留引发免疫反应的能力。此类修饰可能是有意的,例如作为定点诱变的结果,或由于使用特定的合成方法或基因工程方法,或者可能是偶然的,例如由于产生抗原的宿主中的突变。此外,抗原可以从微生物如细菌中产生、获得或分离,或者可以是完整的微生物。同样,表达抗原的寡核苷酸或多核苷酸,例如在核酸免疫方案中,也包含在该定义中。还包括合成抗原,例如,多表位、侧翼表位和其他重组或合成抗原。

38、术语“免疫组合物”是指含有至少一种在动物中诱导免疫反应的抗原的组合物。

39、如本文所用,术语“预防”(包括其变体,例如“治疗”或“被治疗”)是指以下任何一项或多项:(i)预防感染或再感染,如在常规疫苗的情况下,(ii)减轻严重程度或消除症状;以及(iii)实质性或完全消除特定病原体或疾病。因此,可以预防性(感染前)或治疗性(感染后)进行治疗。根据本发明,可以使用预防性或治疗性治疗。根据本发明的一个具体实施方案,提供了治疗宿主动物抵抗由水痘带状疱疹病毒引起的感染的组合物和方法,包括通过预防性和/或治疗性免疫。本发明的方法可用于在患者中预防性和/或治疗性地诱导免疫力。出于生物医学研究的目的,本发明的方法也可以应用于患者。

40、术语“患者”是指哺乳动物、鸟类、鱼类、爬行动物或任何其他动物。“病人”一词也包括人。“患者”一词还包括宠物。宠物的非限制性实例包括:狗、猫、猪、兔、大鼠、小鼠、沙鼠、仓鼠、豚鼠、雪貂、鸟、蛇、蜥蜴、鱼、乌龟和青蛙。术语“患者”还包括宠物。家养动物的非限制性例子包括:羊驼、野牛、骆驼、牛、鹿、猪、马、美洲驼、骡子、驴、绵羊、山羊、兔子、驯鹿、牦牛、鸡、鹅和火鸡。

41、术语“适用剂量”是指人用剂量，由于按单位体重剂量（mg/kg）计算时，小鼠的免疫剂量约为人用剂量的12-13倍，这是基于体表面积换算的科学原理：小鼠km系数约3，人约37，换算系数约为12.3；但按总剂量和疫苗实验的实际设置而言，小鼠通常采用人用剂量的1/10-1/5作为免疫原性评价的起始梯度（参考文献：《人体耐受性试验中体重因素对人体等效剂量转换计算的影响》、《基于人体等效剂量的蟾酥量 -效关系探讨》）。

42、治疗可采用单剂量方案或多剂量方案。多剂量方案可用于初次免疫和/或加强免疫。在多剂量方案中，不同的剂量可通过相同的或不同的途径给药。

43、免疫原性或有效量的免疫原性组合物可以在剂量反应研究中确定,在该研究中,患者用递增量的免疫原性组合物免疫,并分析免疫反应以确定最佳剂量。研究中的初始剂量可以根据动物模型中的免疫数据来确定。剂量可能会因个人的具体情况而异。该量可以通过本领域技术人员已知的方法在常规试验中确定。

44、将免疫学有效量的免疫原性组合物以合适的剂量数施用于患者以启动免疫反应。剂量的多少可能会因个人的具体情况而异,例如年龄和体重。该量可以通过本领域技术人员已知的方法在常规试验中确定。

45、本发明具有以下有益效果：

46、1）本发明提供的一种用于预防和/或治疗水痘-带状疱疹疫苗的制备方法与应用，所述疫苗包括来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白和重组腺病毒载体组分，不包括佐剂，可避免佐剂所引起的副作用，安全性更高；

47、2）本发明提供的水痘-带状疱疹疫苗包括来源于水痘-带状疱疹病毒的重组蛋白为水痘带状疱疹糖蛋白（ge），重组腺病毒载体为ge基因序列与腺病毒载体通过基因工程重组而成，可大大降低抗原的含量，而且可以达到显著的体液免疫和细胞免疫效果；

48、3）本发明提供的免疫组合物可通过吸入给药、微针给药、注射给药进行免疫，不仅可有效激起体液免疫和细胞免疫，还可以产生黏膜免疫，可用于有效预防或改善水痘带状疱疹病毒引起的传染疾病。