一种低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法和美容护理组合物与流程

本发明涉及化妆品原料制备、金属肽络合物纯化和美容制剂，具体为一种低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法和可用于紧致、保湿和皮肤状态维护类美容护理产品的美容护理组合物。

背景技术：

1、铜三肽通常指甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸与二价铜形成的络合物，化妆品原料名称可表述为三肽-1铜。铜三肽原料的总含量不能单独反映未络合铜、游离三肽、短肽杂质和无机盐负荷；其中，游离铜比例和铜与三肽摩尔比会直接影响原料质量判定及后续水性配方的颜色和相容性。

2、现有铜三肽制备通常采用铜盐与三肽直接络合，并可配合树脂或膜分离进行纯化，海藻糖、甘露醇等保护剂以及铜三肽与多元醇、透明质酸类原料的水性配方也已有应用，若络合体系含有游离组氨酸等竞争性配体，铜形态分析可能同时受到铜三肽、铜-组氨酸络合物和无机铜离子的影响；若树脂官能团、负载量、流速和收集方式未限定，也难以判断降低未络合铜时是否造成目标络合物损失。

3、因此需要设计一种不引入含咪唑基竞争配体、以限定铜负载量的亚氨基二乙酸型螯合树脂和纳滤洗滤连续控制未络合铜及盐负荷的具体工艺，并以三肽-1铜含量、铜/三肽摩尔比、游离铜比例、目标物回收率和有关肽杂质峰面积界定标准化浓缩物。

技术实现思路

1、（一）解决的技术问题

2、本发明的目的在于提供一种低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法，通过限定铜盐种类、投料摩尔比、络合ph、螯合树脂参数、纳滤洗滤终点和保护剂比例，确保游离铜与目标铜三肽回收率同时具有可复核的控制边界。

3、本发明的另一目的在于提供一种具体水性美容护理组合物及其低温加入方法，使标准化浓缩物能够以确定投料量进入美容配方。

4、（二）技术方案

5、为实现上述确保游离铜与目标铜三肽回收率同时具有可复核的控制边界并设计具体水性美容护理组合物的目的，本发明提供如下技术方案：一种低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物的制备方法，包括以下步骤：

6、s1.将甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸溶于去氧纯化水，以干基含量校正后的甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸净量计，使其质量浓度为9.5~10.5mg/ml，采用盐酸或氢氧化钠调节ph至6.0~6.3；

7、s2.在氮气保护与20~24℃条件下，35~45min内均匀加入二水合氯化铜水溶液，使按含量校正后的铜与所述甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸的投料摩尔比为(0.94~0.96):1，加入过程中维持ph为6.0~6.3，加入结束后继续络合40~50min；

8、s3.使络合液通过亚氨基二乙酸型螯合树脂柱，所述树脂具有聚苯乙烯-二乙烯苯大孔骨架，粒径为0.30~1.20mm，湿树脂铜交换容量不低于0.80mmol/ml，络合液中的总铜负载量为0.12~0.15mmol/ml湿树脂，柱温为20~25℃，上样流速为0.8~1.2bv/h，收集上样流出液，并以0.4~0.6bv去氧纯化水冲洗树脂柱，合并冲洗液与上样流出液；

9、s4.采用截留分子量为200~300da的聚酰胺纳滤膜处理合并液，控制温度为20~25℃、跨膜压差为0.8~1.0mpa、膜面流速为0.6~1.0m/s，浓缩后以去氧纯化水进行3.0个膜体积的恒容洗滤，至末次透过液电导率不高于0.50ms/cm，并收集截留液；

10、s5.根据截留液中三肽-1铜的测定含量加入海藻糖、甘露醇和1,3-丙二醇，并以去氧纯化水调节，使所得浓缩物中三肽-1铜含量为0.39%~0.41%、海藻糖含量为2.80%~3.20%、甘露醇含量为0.80%~1.20%、1,3-丙二醇含量为14.50%~15.50%，调节ph至5.7~6.0后充氮避光灌装。

11、优选的，所述亚氨基二乙酸型螯合树脂使用前以1.0mol/l氯化钠溶液处理2bv使其转为钠型，再以去氧纯化水洗至柱后液电导率不高于50μs/cm；

12、所述铜与甘氨酰-l-组氨酰-l-赖氨酸的投料摩尔比为0.950:1，总铜负载量为0.137mmol/ml湿树脂，上样流速为1.0bv/h，冲洗量为0.50bv，所述聚酰胺纳滤膜的截留分子量为250da。

13、优选的，所得铜三肽标准化浓缩物的铜/三肽摩尔比为0.93~0.95，游离铜占总铜的比例不高于2.5%，除三肽-1主峰外的有关肽杂质峰面积之和不高于总肽峰面积的1.5%，树脂处理步骤的三肽-1铜回收率不低于85.0%，主产物总回收率不低于80.0%。

14、一种低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物，以浓缩物总质量计，包括三肽-1铜0.39%~0.41%、海藻糖2.80%~3.20%、甘露醇0.80%~1.20%、1,3-丙二醇14.50%~15.50%和余量的水；

15、所述浓缩物的ph为5.7~6.0，铜/三肽摩尔比为0.93~0.95，游离铜占总铜的比例不高于2.5%，除三肽-1主峰外的有关肽杂质峰面积之和不高于总肽峰面积的1.5%。

16、本发明要解决的另一技术问题是提供一种水性美容护理组合物，其特征在于，按组合物总质量计，包括权利要求4中所述铜三肽标准化浓缩物5.00%、甘油4.00%、另行加入的1,3-丙二醇4.25%、甜菜碱2.00%、泛醇0.50%、透明质酸钠0.10%、羟乙基纤维素0.25%、苯氧乙醇与乙基己基甘油质量比为9:1的复配物0.80%、柠檬酸与柠檬酸钠质量比为1:2的缓冲剂0.15%以及纯化水82.95%；所述组合物中由浓缩物带入和另行加入的1,3-丙二醇总含量为4.975%~5.025%，三肽-1铜含量为0.0195%~0.0205%；

17、还包括以下制备步骤：s1.将纯化水、甘油与另行加入的1,3-丙二醇、甜菜碱和泛醇混合，将羟乙基纤维素预分散后加入并水化25~35min，再加入透明质酸钠并水化20~30min；

18、s2.将体系降至不高于35℃，加入铜三肽标准化浓缩物、苯氧乙醇与乙基己基甘油复配物以及柠檬酸与柠檬酸钠缓冲剂，调节ph至5.7~6.0，在真空度为-0.06~-0.08mpa条件下脱泡5~10min并灌装。

19、（三）有益效果

20、与现有技术相比，本发明提供了一种低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法和美容护理组合物，具备以下有益效果：

21、1、该低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法和美容护理组合物，通过络合步骤不加入游离组氨酸或其他含咪唑基缓冲配体，降低竞争配位对铜形态分离和定量的干扰。

22、2、该低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法和美容护理组合物，对螯合树脂官能团、湿树脂负载量、上样流速和收集方式均被具体限定，并以同批树脂前后游离铜和铜三肽回收率进行验证。

23、3、该低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法和美容护理组合物，将纳滤膜截留范围、跨膜压差、膜面流速、恒容洗滤量和透过液电导率共同构成工艺终点，便于降低无机盐负荷并复现。

24、4、该低游离铜含量的铜三肽标准化浓缩物及其制备方法和美容护理组合物，对铜三肽、海藻糖、甘露醇和1,3-丙二醇的最终含量采用窄范围标准化，所得浓缩物适合按固定比例加入水性美容护理组合物。