嗜黏蛋白阿克曼氏菌及其代谢产物在抗猪德尔塔冠状病毒感染中的应用

本发明涉及生物医药，具体涉及嗜黏蛋白阿克曼氏菌及其代谢产物在抗猪德尔塔冠状病毒感染中的应用。

背景技术：

1、猪德尔塔冠状病毒（porcine deltacoronavirus, pdcov）是一种可引起仔猪消化道疾病的重要肠道病原体，临床主要表现为水样腹泻、呕吐、脱水甚至死亡，对全球养猪业构成重大威胁。由于该病毒属于一类冠状病毒，遗传变异频繁，其频繁变异的特性致使当前疫苗效果欠佳，且目前尚无报道相关的特效抗病毒药物，因此，探索非疫苗的抗病毒策略具有重要意义。研究表明，pdcov主要侵染小肠绒毛上皮细胞，其感染建立依赖于病毒突破肠道屏障并进入靶细胞。由于新生仔猪肠道微生态尚未成熟及黏膜免疫发育不足，其肠道屏障功能较为脆弱，可进一步加速病毒的感染进程。因此，维持肠道屏障稳态是防控pdcov感染的重要策略方向。

2、肠道微生态构成了机体抵御病原体感染的第一道肠道屏障。大量研究证实，肠道益生菌群是维持肠道屏障稳态和抵御病原体入侵的重要组成部分，其组成、定植状态及代谢活性可直接影响肠道疾病的发生和进程。嗜黏蛋白阿克曼氏菌（

akkermansia

muciniphila，akk）作为一种重要的肠道益生菌，已被证实其能够增强肠道屏障完整性、改善宿主代谢功能以及提高免疫应答等。但是，akk能否抑制pdcov感染以及是否改善病毒感染仔猪腹泻尚不清楚。

技术实现思路

1、在现有技术的基础上，本发明提供了嗜黏蛋白阿克曼氏菌在抑制猪德尔塔冠状病毒（pdcov）增殖以及改善感染仔猪腹泻中的应用。针对目前pdcov缺乏高效商品化疫苗以及特效抗病毒药物的临床难题，本发明通过体外细胞与体内动物模型评估了该菌株的抗病毒活性。体外实验表明，在最大无毒剂量范围内，akk菌悬液及其上清代谢产物能够显著下调pdcov在体外细胞中的增殖能力。体内小鼠急性毒性实验证实其代谢产物具有良好的安全性；仔猪攻毒保护实验进一步确证，口服akk代谢产物可有效显著减轻pdcov感染引起的肠道损伤，并显著抑制病毒在肠上皮细胞中的定植。

2、就此而言，本发明的实施方案包括但不限于以下：

3、在一个方面，本发明提供了嗜黏蛋白阿克曼氏菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物在制备用于预防或治疗猪德尔塔冠状病毒感染性疾病和/或降低机体中该病毒载量的药物/制剂中的用途，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atcc baa-835。

4、在一个方面，本发明还提供了包含嗜黏蛋白阿克曼氏菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物的组合物在制备用于预防或治疗猪德尔塔冠状病毒感染性疾病和/或降低机体中该病毒载量的药物/制剂中的用途，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atccbaa-835。

5、在一个方面，本发明所述猪德尔塔冠状病毒感染性疾病为由猪德尔塔冠状病毒引起的腹泻、肠道炎症和/或肠组织病理性损伤。

6、在一个方面，本发明所述肠组织病理性损伤表现为空肠和/或回肠的肠壁变薄、肠管扩张、绒毛萎缩、上皮细胞脱落和/或隐窝结构紊乱。

7、在一个方面，本发明所述猪德尔塔冠状病毒感染性疾病发生在猪的体内。

8、在一个方面，本发明所述药物/制剂是需经肠道的。

9、在一个方面，本发明所述药物/制剂用于降低肠道中的病毒载量。

10、在另一个方面，本发明提供了一种在体外抑制猪德尔塔冠状病毒增殖的方法，所述方法包括：使猪德尔塔冠状病毒或感染猪德尔塔冠状病毒的细胞与嗜黏蛋白阿克曼氏菌活菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物接触，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atcc baa-835。

11、在另一个方面，本发明提供了一种在体外抑制猪德尔塔冠状病毒核酸转录或者蛋白表达的方法，所述方法包括：使猪德尔塔冠状病毒或感染猪德尔塔冠状病毒的细胞与嗜黏蛋白阿克曼氏菌活菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物接触，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atcc baa-835。

12、在一些实施方案中，所述核酸转录为m基因和/或n基因的转录。

13、在一些实施方案中，所述蛋白表达为m蛋白或n蛋白的表达。

14、本发明所述在体外方法用于非诊断/治疗目的。

15、在一些实施方案中，本发明感染猪德尔塔冠状病毒的细胞为st细胞。

16、在一些实施方案中，本发明所述猪德尔塔冠状病毒为毒株zd2022，genbank登录号：or762053.2。

17、相对于现有技术，本发明的有益技术效果至少包括：

18、本申请首次通过体内和体外实验验证得出akk菌悬液及其上清代谢产物能够抑制pdcov的体外增殖，且能够在安全剂量内用于在仔猪体内缓解病毒所致的肠道（特别是，空肠、回肠）病理损伤，具体包括但不限于减轻肠管扩张、肠腔积液，并大幅改善空肠与回肠的绒毛萎缩及上皮细胞脱落等病理损伤。这些研究发现为开发防控pdcov等猪肠道冠状病毒的新型微生态制剂、抗病毒药物及生物饲料添加剂提供了科学依据与新的技术途径，具有广阔的兽医临床应用前景。

1. 嗜黏蛋白阿克曼氏菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物在制备用于预防或治疗猪德尔塔冠状病毒感染性疾病和/或降低机体中该病毒载量的药物/制剂中的用途，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atcc baa-835。

2. 包含嗜黏蛋白阿克曼氏菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物的组合物在制备用于预防或治疗猪德尔塔冠状病毒感染性疾病和/或降低机体中该病毒载量的药物/制剂中的用途，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atcc baa-835。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述猪德尔塔冠状病毒感染性疾病为由猪德尔塔冠状病毒引起的腹泻、肠道炎症和/或肠组织病理性损伤。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述肠组织病理性损伤表现为空肠和/或回肠的肠壁变薄、肠管扩张、绒毛萎缩、上皮细胞脱落和/或隐窝结构紊乱。

5.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述猪德尔塔冠状病毒感染性疾病发生在猪的体内。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述药物/制剂是需经肠道的。

7.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述药物/制剂用于降低肠道中的病毒载量。

8. 一种在体外抑制猪德尔塔冠状病毒增殖的方法，其特征在于，所述方法包括：使猪德尔塔冠状病毒或感染猪德尔塔冠状病毒的细胞与嗜黏蛋白阿克曼氏菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物接触，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atcc baa-835。

9. 一种在体外抑制猪德尔塔冠状病毒核酸转录或者蛋白表达的方法，其特征在于，所述方法包括：使猪德尔塔冠状病毒或感染猪德尔塔冠状病毒的细胞与嗜黏蛋白阿克曼氏菌、其培养上清液和/或其培养上清液提取物接触，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌的菌种编号为atcc baa-835。