一种透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂及其制备与应用的制作方法

本发明涉及生物医药与纳米医学，具体为一种透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂及其制备与应用。

背景技术：

1、三阴性乳腺癌（tnbc）因缺乏雌激素受体、孕激素受体及her2表达，是乳腺癌中最具侵袭性和转移性的亚型，治疗选择极为有限，传统化疗疗效不佳且副作用显著。

2、cgas-sting通路是连接先天免疫与适应性免疫的关键桥梁，激活后可诱导i型干扰素（ifn）产生，促进树突状细胞（dcs）成熟，增强抗原交叉呈递，驱动cd8+t细胞浸润。多种sting激动剂已进入临床试验，如环二核苷酸类（mk-1454、adu-s100）、非cdn小分子（msa-2、diabzi）等。

3、然而，sting激动剂疗效受到肿瘤细胞内在抑制机制的严重限制。在乳腺癌中，过度激活的pi3k/akt信号通路是关键负调控因子，可直接磷酸化tbk1，破坏sting-tbk1复合物形成，从而抑制sting信号传导。超过70%的tnbc患者存在pi3k/akt通路基因突变，导致该通路的异常激活。现有sting激动剂单药或与akt抑制剂简单联用的方案，主要存在以下缺点：（1）递送不同步，协同性不够理想。akt抑制剂与sting激动剂是两种理化性质迥异的独立药物分子，药代动力学行为、组织分布和细胞摄取效率各不相同，缺乏能同时包载和递送两种不同性质药物的单一载体平台，难以保证同步到达同一肿瘤细胞并协同发挥作用。（2）缺乏肿瘤主动靶向能力。游离sting激动剂或akt抑制剂小分子缺乏对肿瘤组织的主动识别能力，主要依赖被动扩散，肿瘤部位蓄积效率低下，正常脏器非特异性暴露高，治疗窗口窄。（3）难以诱导icd，抗原释放不足。现有sting激动剂或akt抑制剂本身对肿瘤细胞的直接杀伤作用有限，现有方案仅聚焦于单一通路调控，未整合可高效杀伤肿瘤细胞并诱导icd的功能模块，割裂“抗原释放”与“免疫激活”的免疫循环链条，难以诱导强烈的icd效应，导致肿瘤抗原和damps释放不足，交叉呈递所需的“第一信号”（抗原肽-mhc-i复合物）产生受阻。这使得下游的sting激活所提供的“第二信号”因缺乏特异性抗原锚定而无法有效驱动cd8+ t细胞应答，免疫应答的强度和持久性均受限。目前，鲜有能同时靶向抑制pi3k/akt和激活sting通路的策略被报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种锰-酚纳米调节剂（mnpae@ha）及其制备，以解决现有技术存在的问题。

2、一种具有协同调控pi3k/akt与sting通路功能的锰-酚纳米调节剂（mnpae@ha），其由丹皮酚（pae）与mn2+通过金属-酚配位自组装构成纳米核心，并经透明质酸（ha）表面修饰，通过丹皮酚抑制pi3k/akt通路解除其对sting信号转导的抑制，同时mn2+激活sting通路，协同增强抗肿瘤免疫应答，并利用类pod活性诱导免疫原性细胞死亡（icd），三重机制协同增效，为tnbc免疫治疗提供了新策略。

3、本发明的锰-酚纳米调节剂（mnpae@ha）实现了以下协同增效：

4、（1）肿瘤主动靶向与特异性蓄积：ha可特异性识别肿瘤细胞表面高表达的cd44受体，介导主动靶向递送，增强肿瘤蓄积和内吞效率，降低对正常组织的非特异性分布。

5、（2）时空同步协同调控：通过纳米共递送系统确保pae和mn2+同步到达肿瘤细胞并释放，pae抑制pi3k/akt通路以解除其对sting信号转导的抑制，mn2+激活sting通路，最大化增强下游免疫应答。

6、（3）免疫原性细胞死亡诱导与免疫放大：mnpae@ha的类pod活性在肿瘤微环境中催化h2o2产生ros，直接杀伤肿瘤细胞并诱导icd（crt暴露、hmgb1释放、atp分泌），释放大量肿瘤抗原和damps，为树突状细胞成熟和t细胞激活提供必要条件，进一步放大免疫治疗效果。

7、上述透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂的制备方法，包括以下步骤：

8、（1）将mncl2溶解于含聚乙烯吡咯烷酮（pvp）的乙醇溶液中，其中pvp作为金属离子的稳定剂；

9、（2）将含丹皮酚的乙醇溶液滴加入步骤（1）所得溶液中，搅拌，随后在超声下滴加到caps溶液中，调节体系ph至碱性，室温搅拌反应形成mnpae纳米核心；

10、（2）随后加入透明质酸钠水溶液，使溶液终浓度为1mg/ml，室温搅拌，在mnpae表面包覆透明质酸。

11、优选的，mncl2与丹皮酚加入的质量比为2:1。

12、优选的，步骤（2）中调节ph值为10。

13、优选的，步骤（3）中透明质酸钠水溶液的mw 为3000。

14、上述透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂在制备抗肿瘤药物的应用。所述肿瘤包含三阴性乳腺癌。

15、一种三阴性乳腺癌治疗药物，包含上述透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂。

16、与现有技术相比，本发明通过将天然小分子丹皮酚（pae，pi3k/akt抑制剂）与锰离子（mn2+，sting激动剂）进行配位自组装，并用透明质酸（ha，靶向cd44受体）进行表面修饰，构建了新型纳米调节剂mnpae@ha。主要具有以下优势：

17、（1）本发明通过金属-酚配位自组装策略，将丹皮酚（pi3k/akt抑制剂）与mn2+（sting激动剂）整合于同一纳米平台，实现了“对sting通路和pi3k/akt通路的双向调控，免疫激活效果显著优于单一sting激动剂或单独的丹皮酚。

18、（2）本发明利用纳米结构赋予的类过氧化物酶（pod）活性在肿瘤微环境中原位产生ros，高效诱导免疫原性细胞死亡，释放大量肿瘤抗原，包括hmgb1、crt和atp，在通路调控的基础上增加了“抗原供应”维度，提供充足的第一信号（抗原库），同时结合双通路调控激活sting提供第二信号（佐剂）。实现免疫应答的深度放大。

19、（3）本发明通过透明质酸（ha）介导的cd44主动靶向实现肿瘤特异性富集。在tnbc荷瘤小鼠模型中，mnpae@ha的显著抑制了小鼠肿瘤的生长，与对照组相比肿瘤体积和重量分别降低3.5倍和4.5倍，显著增加了中央记忆t细胞比例和肿瘤内cd8+t细胞浸润，并利用金属锰的mri成像特性实现了诊疗一体化。实现了肿瘤靶向富集、通路协同调控与icd诱导的有机结合，为tnbc免疫治疗提供了新方案。

1.一种透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，mncl2与丹皮酚加入的质量比为2:1。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤（2）中调节ph值为10。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤（3）中透明质酸钠水溶液的mw 为3000。

5.根据权利要求1所述制备方法得到的透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂。

6.根据权利要求5所述透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂在制备抗肿瘤药物的应用。

7.一种三阴性乳腺癌治疗药物，其特征在于，包含权利要求5所述透明质酸靶向的锰-酚纳米调节剂。