枸杞亚精胺总苷元富集部位、枸杞亚精胺甲素富集部位及其制备和用途

本发明涉及药物领域，具体而言，本发明涉及一种枸杞亚精胺总苷元富集部位、枸杞亚精胺甲素富集部位及其制备和用途。

背景技术：

1、天然产物是创新药物开发的重要源泉，超过半数的已获批药物直接或间接来源天然产物。亚精胺是一种天然存在的多胺，参与生物体内许多生理生化过程，如：细胞凋亡、细胞分裂、细胞增殖、dna和蛋白质合成、基因表达、体内稳态、信号传导等。研究表明，亚精胺可促进自噬并增强线粒体功能，发挥心脏保护和神经保护作用。此外，亚精胺在酒精或脂多糖诱导的肝损伤、代谢功能障碍相关脂肪性肝炎、肝缺血再灌注等多种模型中均表现显著的肝保护作用。亚精胺具有显著的神经保护作用，可减缓与年龄相关的机体功能退化。同时，亚精胺也能提高多巴胺神经元功能，改善pd动物运动协调能力。

2、枸杞子是茄科枸杞属宁夏枸杞的干燥成熟果实，具有滋肝补肾、益精明目的功效，作为传统药食两用的大宗品种，枸杞子近年来已在多个国家和地区广泛使用。申请人先前从枸杞子中分离鉴定了一系列主含、特征的亚精胺衍生物，称为枸杞亚精胺，并阐明了其化学多样性的酶学基础(zhou,z.q.et al.lycibarbarspermidines a-o,newdicaffeoylspermidine derivatives from wolfberry,with activities againstalzheimer’s disease and oxidation.j.agric.food chem.64,2223-2237(2016)；zhou,z.q.et al.four new dicaffeoylspermidine derivatives from lyciumbarbarum.worldj.tradit.chin.med.2,1-5(2016)；li,s.y.et al.functional and structuraldissection ofglycosyltransferases underlying the glycoldiversity ofwolfberry-derived bioactive ingredients lycibarbarspermidines.nat.commun.15,4588(2024))。中国专利cn202110153751.7公开了香豆酰亚精胺衍生物在解酒、保肝、护肝的药物或保健食品中的应用，其试验结果表明了香豆酰亚精胺衍生物中唯一起到解酒护肝作用的化合物是tcs，即n1,n5,n10-tri-p-trans-coumaroyl-spermidine。中国专利cn202310754363.3公开了从枸杞子中获得的枸杞亚精胺富集部位，其具有神经细胞保护作用。

3、申请人发现，从枸杞子中提取、制备、分离得到枸杞亚精胺总苷元富集部位和枸杞亚精胺甲素富集部位具有良好的肝脏和神经保护作用，进而提出了本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术的不足，实现采用现代药物研究方法对枸杞子提取物进行开发利用，结合大量药效学实验筛选，提供一种枸杞亚精胺总苷元富集部位、枸杞亚精胺甲素富集部位及其制备和用途。

2、在一个方面，本发明提供了一种枸杞亚精胺总苷元富集部位，其包含质量分数为50％以上的枸杞亚精胺总苷元。

3、优选的，所述枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％的枸杞亚精胺总苷元；更优选的，所述枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为85-95％的枸杞亚精胺总苷元。

4、优选的，所述枸杞亚精胺总苷元包括枸杞亚精胺甲素和枸杞亚精胺乙素。

5、所述枸杞亚精胺甲素和枸杞亚精胺乙素的结构如下：

6、

7、优选的，枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为35％以上的枸杞亚精胺甲素。更优选的，枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为35％、40％、42％、44％、46％、48％、50％、52％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％的枸杞亚精胺甲素；还优选的，枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为55-65％的枸杞亚精胺甲素。

8、优选的，枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为15％以上的枸杞亚精胺乙素。更优选的，枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为15％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％的枸杞亚精胺乙素；还优选的，枸杞亚精胺总苷元富集部位中包含质量分数为25-35％的枸杞亚精胺乙素。

9、所述枸杞亚精胺总苷元中，枸杞亚精胺甲素和枸杞亚精胺乙素的质量比为1-5:1，优选为1:1、1.5:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2.0:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.5:1、3.0:1、3.5:1、4.0:1、5.0:1；更优选的，所述枸杞亚精胺总苷元中，枸杞亚精胺甲素和枸杞亚精胺乙素的质量比1.5-2.5:1。

10、优选的，所述枸杞亚精胺总苷元富集部位从枸杞子中提取并制备、分离得到。

11、优选的，所述枸杞亚精胺总苷元富集部位的制备方法如下：

12、(1)枸杞子提取物制备：将枸杞子用水提取，水提液加入乙醇析出沉淀，过滤，滤液旋干，得到枸杞子提取物；

13、(2)枸杞子提取物酸水解或酶水解：将枸杞子提取物进行酸水解或者酶水解，得到枸杞子提取物酸水解产物或者酶水解产物；

14、(3)枸杞亚精胺总苷元富集部位制备：将枸杞子提取物酸水解产物或酶水解产物用大孔树脂柱层析，采用乙醇-水梯度洗脱，收集体积比20:80至30:70乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺总苷元富集部位。

15、在一个实施方案中，所述步骤(1)包括：将枸杞子用水在90-100℃下提取1-3次，过滤，浓缩，在低温下加入浓度在85％以上的乙醇，使体系中乙醇终浓度为65-80％，然后将体系置于0-8℃下静置以析出沉淀，再次抽滤，滤液旋干得到枸杞子提取物。

16、优选的，水的用量为5-20ml/g枸杞子，更优选地，为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20ml/g枸杞子；最优选的，为8-12ml/g枸杞子。

17、优选的，在95-100℃下提取，更优选的，在回流下提取。

18、优选的，提取的次数为2-3次。

19、优选的，在0-10℃下加入乙醇；更优选的，在1-5℃下加入乙醇。

20、优选的，所加入的乙醇的浓度为90％以上，更优选为95％以上。

21、优选的，体系中乙醇终浓度为65％、68％、70％、72％、75％、78％、80％；更优选地，为70-75％。

22、优选的，在1-5℃下静置以析出沉淀，静置的时间为6-60h，更优选地，为12-48h，最优选地，为20-40h。

23、在一个实施方案中，步骤(2)中的酸水解包括：将枸杞子提取物加入至稀酸中，在加热条件下反应，反应结束后，以碱调节ph至中性，然后减压浓缩旋干，得到枸杞子提取物酸水解产物。

24、优选的，所述稀酸为稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸中的至少一种；所述稀酸的浓度为0.1-1mol/l，优选为0.3-0.6mol/l。

25、优选的，所述稀酸的用量为枸杞子提取物质量的5-50倍，优选为10-30倍。

26、优选的，加热至85-100℃进行反应。

27、优选的，反应时间为0.5-4h。

28、优选的，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的至少一种。

29、在一个实施方案中，步骤(2)中的酶水解包括：枸杞子提取物和酶在水中反应，反应结束后，减压浓缩旋干得到枸杞子提取物酶水解产物。

30、优选的，所述酶选自蜗牛酶、β-葡萄糖苷酶、β-葡聚糖酶中的至少一种。

31、优选的，所述酶的用量为枸杞子提取物质量的0.01-2倍，更优选为0.02、0.05、0.08、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2倍，最优选地，为0.05-0.5倍。

32、优选的，水的用量为枸杞子提取物质量的5-50倍，优选为10-30倍。

33、优选的，反应温度为30-60℃，更优选为35-45℃。

34、优选的，反应时间为3-24h，更优选为6-18h。

35、在一个实施方案中，步骤(3)中，所述大孔树脂选自hp-20、hp-50、hpd-100、xad-2、xad-4、sp-825、sp-700、ab-8中的至少一种。

36、优选的，所述“采用乙醇-水梯度洗脱”，包括采用体积比0:100至30:70的乙醇-水梯度洗脱。另外，在采用体积比30:70的乙醇-水梯度洗脱后，可以继续采用更高乙醇浓度的乙醇-水进行洗脱。更优选的，采用体积比0:100至28:72的乙醇-水乙醇-水进行洗脱，收集体积比22:78至28:72乙醇-水洗脱馏分，并且可以继续采用更高乙醇浓度的乙醇-水进行洗脱；或者采用体积比0:100至25:75的乙醇-水进行洗脱，收集体积比25:75的乙醇-水洗脱馏分，并且可以继续采用更高乙醇浓度的乙醇-水进行洗脱。

37、优选的，所述“采用乙醇-水梯度洗脱”，包括采用体积比0:100至95:5的乙醇-水梯度洗脱，收集体积比20:80至30:70乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺总苷元富集部位。

38、优选的，采用体积比0:100、8:92-15:85、20:80-30:70的乙醇-水梯度洗脱，收集体积比20:80至30:70乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺总苷元富集部位；然后，可以继续采用90:10-95:5的乙醇-水进行洗脱。更优选的，采用体积比0:100、10:90-13:87、22:78-28:72的乙醇-水梯度洗脱，收集体积比22:78至28:72乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺总苷元富集部位；然后，可以继续采用90:10-95:5的乙醇-水进行洗脱进行洗脱。还优选的，采用体积比0:100、12:88、25:75和95:5的乙醇-水梯度洗脱，收集体积比25:75的乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺总苷元富集部位；然后，可以继续采用90:10-95:5的乙醇-水进行洗脱进行洗脱。。

39、在第二个方面，本发明提供了一种枸杞亚精胺总苷元富集部位的制备方法，包括：

40、(1)枸杞子提取物制备：将枸杞子用水提取，水提液加入乙醇析出沉淀，过滤，滤液旋干，得到枸杞子提取物；

41、(2)枸杞子提取物酸水解或酶水解：将枸杞子提取物进行酸水解或者酶水解，得到枸杞子提取物酸水解产物或者酶水解产物；

42、(3)枸杞亚精胺总苷元富集部位制备：将枸杞子提取物酸水解产物或酶水解产物用大孔树脂柱层析，采用乙醇-水梯度洗脱，收集体积比20:80至30:70乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺总苷元富集部位。

43、所述方法的优选方案如上文所述。

44、在第三个方面，本发明提供了一种枸杞亚精胺甲素富集部位，其包含质量分数为75％以上的枸杞亚精胺甲素。

45、优选的，所述枸杞亚精胺甲素富集部位中包含质量分数为75％、80％、82％、84％、86％、88％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的枸杞亚精胺甲素；更优选的，所述枸杞亚精胺甲素富集部位中包含质量分数为90-98％的枸杞亚精胺甲素。

46、优选的，所述枸杞亚精胺甲素富集部位从枸杞中提取并分离得到。

47、优选的，所述枸杞亚精胺甲素富集部位的制备方法如下：

48、将枸杞亚精胺总苷元富集部位用大孔树脂柱层析，采用体积比20:80至50:50的乙醇-水梯度洗脱，收集体积比30:70至50:50乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺甲素富集部位。

49、优选的，所述大孔树脂选自小粒径大孔树脂，更优选为sp20ss、hp20ss、sp207ss中的至少一种。

50、优选的，依次用体积比20:80-25:75和40:60-50:50的乙醇-水洗脱，收集体积比40:60-50:50乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺甲素富集部位；更优选的，依次用体积比25:75和40:60的乙醇-水洗脱，收集体积比40:60乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺甲素富集部位。

51、在第四个方面，本发明提供了一种枸杞亚精胺甲素富集部位的制备方法，包括：

52、将枸杞亚精胺总苷元富集部位用大孔树脂柱层析，采用体积比20:80至50:50的乙醇-水梯度洗脱，收集体积比30:70至50:50乙醇-水洗脱馏分，得到枸杞亚精胺甲素富集部位。

53、所述方法的优选方案如上文所述。

54、在第五方面，本发明提供了所述枸杞亚精胺总苷元富集部位或者枸杞亚精胺甲素富集部位在制备药物中的应用，所述药物用于预防或治疗肝病、用于保护神经细胞、或者用于预防或治疗神经退行性疾病。

55、优选的，所述肝病包括肝损伤、脂肪肝、肝炎以及由这些肝病引起的肝纤维化和肝硬化；优选的，所述肝损伤包括酒精性肝损伤、代谢性肝损伤、化学性肝损伤、药物性肝损伤、病毒性肝损伤；所述脂肪肝包括酒精性脂肪肝、代谢性脂肪肝；所述肝炎包括酒精性肝炎、代谢性肝炎、化学性肝炎、药物性肝炎、病毒性肝炎。还优选的，所述肝损伤包括急性肝损伤、慢性肝损伤，例如，包括急性酒精性肝损伤、慢性酒精性肝损伤。

56、优选的，所述神经退行性疾病包括帕金森氏病、阿尔茨海默病、路易体痴呆、额颞叶痴呆、肌萎缩性脊髓侧索硬化、亨廷顿病、朊病毒疾病、hiv-相关痴呆和与神经退行性相关的任何形式的认知障碍组成的组中的疾病，优选帕金森氏病。

57、本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述的枸杞亚精胺总苷元富集部位或者枸杞亚精胺甲素富集部位。

58、本发明中，所述药物或药物组合物还可以进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或其组合。

59、本发明药物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但不限于：口服、肠胃外和局部给药。

60、用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(d)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；和(f)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

61、除了这些惰性稀释剂外，制剂也可包含助剂，如乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

62、用于局部给药的本发明药物或药物组合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

63、可将本发明药物或药物组合物以单个每日剂量形式给药，或每日总剂量可分成每日两次、三次或四次剂量给药。此外，可以经鼻内的形式经由局部使用适宜的鼻内工具给予本发明药物或药物组合物，或经由本领域普通技术人员熟悉的透皮贴片给予本发明药物或药物组合物。为了以透皮传递系统的形式给药，在整个给药方案中给药剂量当然将是连续的而间歇性的。

64、对于本发明药物或药物组合物来说，活性成分的合适剂量水平通常为约0.001至100mg/kg患者体重每天，其可以单剂量或多剂量施用。优选地，剂量水平为约0.01至约25mg/kg每天；更优选地，约0.05至约10mg/kg每天。合适的剂量水平可以是约0.01至25mg/kg每天、约0.05至10mg/kg每天或约0.1至5mg/kg每天。在该范围内，剂量可以是0.005至0.05、0.05至0.5或0.5至5.0mg/kg每天。对于口服施用，制剂优选地以片剂形式提供，所述片剂包含1.0至1000mg活性成分，特别是1.0、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0mg活性成分，用于对待治疗患者的剂量的症状调整。化合物可以每天1至4次的治疗方案施用，优选地每天一次或每天两次。

65、给药的最佳剂量可由本领域专业人员易于确定并且将依具体使用的化合物、给药模式、制剂的强度、给药方式以及疾病状况的进展不同而异。另外，与具体被治疗的患者有关的因素，包括患者年龄、体重、饮食和给药次数，将会产生调整剂量的需求。

66、有益效果

67、本发明提供了一种枸杞亚精胺总苷元富集部位、枸杞亚精胺甲素富集部位及其制备和用途。枸杞亚精胺总苷元富集部位和枸杞亚精胺甲素富集部位从枸杞子中提取、制备、分离得到。所述枸杞亚精胺总苷元富集部位、枸杞亚精胺甲素富集部位对于酒精诱导的肝细胞损伤具有良好保护作用，可用于预防和治疗酒精性肝损伤、脂肪肝；同时，其对棕榈酸(pa)诱导的肝细胞损伤也具有良好保护作用，可用于预防和治疗代谢性肝损伤、脂肪肝。另外，所述枸杞亚精胺总苷元富集部位、枸杞亚精胺甲素富集部位还具有良好的神经细胞保护作用，其优于枸杞亚精胺富集部位以及枸杞亚精胺单体成分。所述枸杞亚精胺总苷元富集部位和枸杞亚精胺甲素富集部位提取工艺简单，适合在产业上应用。