一种氟苯尼考残留的检测方法及系统与流程

本技术涉及兽药残留分析检测，特别是涉及一种氟苯尼考残留的检测方法及系统。

背景技术：

1、氟苯尼考作为一种广谱的酰胺醇类抗生素，因其吸收快、体内分布广、抗菌能力强等特点，被广泛应用于畜牧业和水产养殖中，用于治疗由敏感细菌引起的各类感染性疾病。在生猪养殖过程中，氟苯尼考常用于治疗猪的呼吸道感染、传染性胸膜肺炎等疾病。然而，氟苯尼考在猪体内代谢后会产生其主要代谢物——氟苯尼考胺。由于氟苯尼考及氟苯尼考胺在动物体内存在一定的残留期，若未严格遵守休药期规定，这些残留物将会富集在猪的可食性组织（如肌肉、肝脏、肾脏、皮脂等）中。

2、人类长期食用含有氟苯尼考及其代谢物残留的动物源性食品，可能会导致耐药菌株的产生，甚至引发再生障碍性贫血等严重的毒副作用，对人体健康构成潜在威胁。因此，我国及国际上多个农业与食品安全监管机构均对猪可食性组织中的氟苯尼考及其代谢物残留制定了严格的最高残留限量标准。为了保障食品安全并有效监控违规用药情况，开发一种高效、准确、高灵敏度的氟苯尼考及其代谢物残留检测方法具有重要的现实意义。

3、目前，针对动物源性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留的检测，传统方法主要包括高效液相色谱法（hplc）、气相色谱法（gc）以及液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms）。其中，hplc和gc方法往往存在灵敏度不足、抗干扰能力差、前处理复杂且容易产生假阳性结果等缺陷，难以满足当前痕量残留分析的要求。而液相色谱-串联质谱法（lc-ms/ms）因其高灵敏度、高特异性以及能够同时进行定性定量分析的优势，已成为兽药残留检测的主流技术。

4、然而，猪可食性组织基质极为复杂，含有大量的脂肪、蛋白质、磷脂、色素等干扰物质。在进行lc-ms/ms分析前，必须对样品进行充分的前处理净化，以去除基质干扰，减轻基质效应，保护质谱仪。传统的样品前处理方法多采用液液萃取（lle）或固相萃取（spe）。液液萃取法需要消耗大量有毒有害的有机溶剂，操作繁琐且极易产生乳化现象，净化效果有限；固相萃取法虽然净化效果较好，但需要昂贵的spe柱，且步骤繁琐、耗时较长，难以满足大批量样品的快速筛查需求。

5、近年来，quechers（quick, easy, cheap, effective, rugged, safe）方法作为一种快速样品前处理技术，在农兽药残留检测领域得到了广泛应用。然而，针对猪组织特别是高脂肪含量的皮脂和富含蛋白质的肝脏、肾脏组织，传统的quechers方法通常仅使用psa和c18吸附剂，往往难以彻底去除脂肪和复杂的极性杂质（如部分碱性有机物、色素等）。这导致提取液中仍残留大量脂质和干扰物，进入液相色谱-串联质谱仪后会产生严重的离子抑制或增强效应，不仅影响检测结果的准确度和精密度，还容易污染质谱离子源，增加仪器维护频率。

6、因此，亟需一种能够高效去除猪组织复杂基质干扰、降低基质效应、且高准确度的氟苯尼考及其代谢物残留的改进型液质联用检测方法。

技术实现思路

1、本技术主要提供一种氟苯尼考残留的检测方法及系统，以解决现有技术中猪可食性组织基质复杂、传统前处理净化不彻底导致基质效应严重、进而影响液质联用检测准确度的问题。

2、为解决上述技术问题，本技术采用的一个技术方案是：提供一种氟苯尼考残留的检测方法。该氟苯尼考残留的检测方法包括：

3、s1：取均质后的猪可食性组织样品，加入提取溶剂和提取盐进行涡旋振荡提取，离心后获取上清液；

4、s2：将所述上清液加入含有混合吸附剂的quechers净化管中进行净化处理，取净化上清液经浓缩至干后用复溶液复溶，过微孔滤膜得待测液；

5、s3：采用液相色谱-串联质谱联用仪对所述待测液进行检测，基于特定的液相色谱分离条件和质谱多反应监测条件，对氟苯尼考及其代谢物进行定性和定量分析；

6、其中，所述提取溶剂为含体积百分比为0.1%-1%乙酸的乙腈溶液；所述混合吸附剂由乙二胺-n-丙基封端硅胶、c18和混合型阳离子交换吸附剂组成。

7、在一些实施例中，所述步骤s1包括：

8、s11：将猪可食性组织样品进行匀浆均质处理，称取均质样品置于含有所述提取溶剂的离心管中；

9、s12：向所述离心管中加入所述提取盐，在涡旋振荡器上以第一转速进行第一时长的涡旋提取；

10、s13：将涡旋后的离心管在低温下进行第二时长的离心，收集上清液。

11、在一些实施例中，在步骤s12中，所述提取盐由无水硫酸镁、氯化钠和柠檬酸二钠倍半水合物组成；所述均质样品与所述提取溶剂的料液比为1g:(2-5)ml；所述第一转速为1500-2500 rpm，所述第一时长为1-3分钟；

12、在步骤s13中，所述离心的温度为0-4℃，离心转速为8000-12000 rpm，所述第二时长为5-10分钟。

13、在一些实施例中，所述步骤s2包括：

14、s21：移取所述步骤s1获取的上清液，转移至含有所述混合吸附剂的quechers净化管中；

15、s22：将所述quechers净化管密封后进行第三时长的涡旋净化，随后在低温下进行第四时长的离心，获取净化上清液；

16、s23：将所述净化上清液在特定温度下氮吹浓缩至干，加入复溶液进行超声复溶，过微孔滤膜得待测液。

17、在一些实施例中，在步骤s21中，所述混合吸附剂中psa、c18和混合型阳离子交换吸附剂的质量比为(2-4):(1-3):(0.5-1.5)；每1g所述上清液对应使用30-60mg所述混合吸附剂；

18、在步骤s22中，所述涡旋净化的转速为2000-3000 rpm，所述第三时长为1-2分钟；所述离心的温度为0-4℃，转速为8000-12000 rpm，所述第四时长为3-8分钟；

19、在步骤s23中，所述特定温度为35-40℃，所述复溶液为体积比为85:15的水和乙腈混合液，且所述复溶液作为后续液相色谱分离的初始流动相，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。

20、在一些实施例中，所述步骤s3中的液相色谱分离条件包括：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的c18反相色谱柱；柱温箱温度设定为30-40℃，自动进样器温度设定为4-8℃，进样量为5-10μl；流动相a为含0.05%-0.2%甲酸和1-5 mmol/l乙酸铵的水溶液，流动相b为含0.05%-0.2%甲酸的乙腈溶液，采用梯度洗脱程序进行洗脱。

21、在一些实施例中，所述步骤s3中的质谱多反应监测条件包括：离子源采用电喷雾离子源，在正负离子切换模式下进行监测；喷雾电压的绝对值设定为3.0至4.5 kv，离子源温度设定为100-150℃，脱溶剂气温度设定为350-500℃，脱溶剂气流速为800-1000 l/hr；设定氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的特征母离子及子离子进行多反应监测。

22、在一些实施例中，氟苯尼考的定性离子对为m/z 356.0→185.0，定量离子对为m/z356.0→336.0；氟苯尼考胺的定性离子对为m/z 248.0→130.0，定量离子对为m/z 248.0→230.0；

23、氟苯尼考的碎裂电压为80-120v，碰撞能量为10-20ev；氟苯尼考胺的碎裂电压为60-90v，碰撞能量为12-18ev。

24、在一些实施例中，还包括：以氘代氟苯尼考和氘代氟苯尼考胺为内标物，分别配制不同浓度梯度的氟苯尼考及氟苯尼考胺的标准工作液，加入等量的内标物，经液相色谱-串联质谱联用仪检测后，以目标物与内标物峰面积的比值为纵坐标，以目标物与内标物浓度的比值为横坐标，建立基质匹配标准曲线，并计算待测液中氟苯尼考及氟苯尼考胺的含量。

25、为解决上述技术问题，本技术采用的另一个技术方案是：提供一种氟苯尼考残留的检测系统。该氟苯尼考残留的检测系统应用如权利要求1至9任一项所述的氟苯尼考残留的检测方法，所述检测系统包括：

26、样品前处理模块，用于将猪可食性组织样品转化为待测液；

27、数据采集模块，用于通过液相色谱-串联质谱联用仪获取待测液中氟苯尼考及其代谢物的质谱多反应监测数据；

28、数据分析模块，用于接收所述数据采集模块输出的数据，并基于基质匹配标准曲线计算并输出猪可食性组织中氟苯尼考及其代谢物的残留量。

29、本技术的有益效果是：区别于现有技术的情况，本技术公开了一种氟苯尼考残留的检测方法及系统。本技术实施例通过对提取溶剂和quechers净化吸附剂的协同优化，解决了复杂基质干扰严重的问题；一方面，采用含体积百分比为0.1%-1%乙酸的乙腈溶液作为提取溶剂，有效沉淀蛋白质并促进了目标物的溶出；另一方面，引入了由乙二胺-n-丙基封端硅胶（psa）、c18和混合型阳离子交换吸附剂组成的混合吸附剂进行净化，其中psa去除极性杂质和有机酸，c18去除非极性脂肪，混合型阳离子交换吸附剂则针对性去除了基质中带正电荷的碱性干扰物，三种吸附剂协同作用，实现了对猪可食性组织中复杂基质的高效深度净化，显著降低了基质效应；该检测方法及系统具有前处理简便高效、净化彻底、检测准确度高的优势，为液相色谱-串联质谱联用仪的高准确度定量分析提供了高质量的样品基础。