免疫测定方法、精度管理方法、标准试样及免疫测定试剂与流程

本发明涉及免疫测定方法、精度管理方法、标准试样及免疫测定试剂。本申请主张针对2024年3月25日向日本提出申请的日本特愿2024-047613号的优先权，并将其内容援引于此。

背景技术：

1、对生物试样中的免疫测定对象成分进行定量时，需要使用校准用试样。校准用试样是在内部标准或浓度校准用基准(校准品)等用途中使用的包含测定对象成分的试样。为了得到测定对象成分的准确的定量值，要求对于时间经过、温度变化稳定的校准用试样。

2、这样的校准用试样包含从生物试样中纯化得到的测定对象的抗原本身、通过基因重组而表达的蛋白质。例如，专利文献1公开了作为包含肺表面活性物质蛋白的液态组合物的校准用试样溶液。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1：国际公开第2023/145916号

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、作为免疫测定中的校准用试样中包含的蛋白质，在从生物试样纯化抗原本身的情况下，纯化工序有时会变得繁琐。另外，在通过基因重组而表达蛋白质的情况下，根据抗原的种类不同，有时无法得到足够的表达量。

3、像这样地，就免疫测定中使用的标准试样而言，尚存在进一步改善的余地。

4、本发明的目的在于提供免疫测定方法、精度管理方法、以及用于这些方法的标准试样及免疫测定试剂。

5、解决问题的方法

6、本发明包含以下方式。

7、[1]一种免疫测定方法，其包括：检测与生物试样中包含的抗原的浓度或效价对应的信号的工序；和使用表示上述抗原的浓度或效价与上述信号的关系的校准曲线并根据上述信号计算出上述生物试样中的上述抗原的浓度或效价的工序，上述校准曲线是使用包含融合蛋白质的标准试样而制成的，上述融合蛋白质包含上述抗原的至少一部分的氨基酸序列和免疫球蛋白的恒定区的至少一部分的氨基酸序列。

8、[2]根据[1]所述的免疫测定方法，其中，上述免疫球蛋白的恒定区的至少一部分的氨基酸序列来源于兔抗体。

9、[3]根据[1]或[2]所述的免疫测定方法，其中，上述抗原为在生物体内以多聚体形式存在的蛋白质。

10、[4]根据[1]或[2]所述的免疫测定方法，其中，上述抗原为p1np、降钙素原、sp-d及tarc中的至少一种。

11、[5]根据[4]所述的免疫测定方法，其中，上述抗原为p1np。

12、[6]一种抗原的免疫测定的精度管理方法，其包括：对于包含预先设定的浓度或效价的融合蛋白质的标准试样，检测与上述融合蛋白质的浓度或效价对应的信号的工序；根据检测出的上述信号计算出上述融合蛋白质的浓度或效价的工序；以及对上述计算出的浓度或效价与上述预先设定的浓度或效价进行比较而评价上述免疫测定的精度的工序，其中，上述融合蛋白质包含上述抗原的至少一部分的氨基酸序列和免疫球蛋白的恒定区的至少一部分的氨基酸序列。

13、[7]根据[6]所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，上述免疫球蛋白的恒定区的至少一部分的氨基酸序列来源于兔抗体。

14、[8]根据[6]或[7]所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，上述抗原为在生物体内以多聚体形式存在的蛋白质。

15、[9]根据[6]或[7]所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，上述抗原为p1np、pct、sp-d及tarc中的一种。

16、[10]根据[9]所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，上述抗原为p1np。

17、[11]一种标准试样，其为用于[1]~[5]中任一项所述的免疫测定方法、或[6]~[10]中任一项所述的免疫测定的精度管理方法的标准试样，其中，上述标准试样以已知的浓度或已知的效价包含上述抗原的至少一部分的上述氨基酸序列与上述免疫球蛋白的上述恒定区的至少一部分的上述氨基酸序列的上述融合蛋白质。

18、[12]一种免疫测定方法，其包括：在溶液中使抗体与融合蛋白质的复合体形成，并检测由与上述融合蛋白质结合了的标记物质发出的信号的工序，其中，上述融合蛋白质为能够与上述抗体结合的抗原的至少一部分的氨基酸序列与免疫球蛋白的恒定区的至少一部分的氨基酸序列的融合蛋白质。

19、[13]一种免疫测定方法，其包括：得到使生物试样、抗体、及结合有标记物质的竞争物质共存的反应体系的工序，上述生物试样存在包含抗原的可能性，上述抗体能够与上述抗原结合，上述竞争物质能够与上述抗原竞争性地结合于上述抗体；和测定上述反应体系中包含的上述标记物质的信号的工序，其中，上述竞争物质为上述抗原的至少一部分的氨基酸序列与免疫球蛋白的恒定区的至少一部分的氨基酸序列的融合蛋白质。

20、[14]根据[13]所述的免疫测定方法，其中，在得到上述反应体系的工序与测定上述信号的工序之间，进一步包括得到测定体系的工序，在该工序中，通过在上述反应体系中保留上述抗体、并且将未与上述抗体结合的上述抗原及上述竞争物质通过清洗而除去，由此得到包含与上述抗体结合了的上述抗原及上述竞争物质的测定体系。

21、[15]根据[12]或[13]所述的免疫测定方法，其中，上述免疫球蛋白的恒定区的至少一部分的氨基酸序列来源于兔抗体。

22、[16]根据[12]~[15]中任一项所述的免疫测定方法，其中，上述抗原为在生物体内以多聚体形式存在的蛋白质。

23、[17]根据[12]~[15]中任一项所述的免疫测定方法，其中，上述抗原为p1np、pct、sp-d及tarc中的一种。

24、[18]根据[17]所述的免疫测定方法，其中，上述抗原为p1np。

25、[19]一种免疫测定试剂，其包含所述融合蛋白质，上述免疫测定试剂用于[12]及[14]~[18]中任一项所述的免疫测定方法。

26、[20]一种免疫测定试剂，其包含上述竞争物质，上述免疫测定试剂用于[13]~[18]中任一项所述的免疫测定方法。

27、发明的效果

28、根据上述方式，能够提供免疫测定方法、精度管理方法、以及用于这些方法的标准试样及免疫测定试剂。

1.一种免疫测定方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的免疫测定方法，其中，

3.根据权利要求1所述的免疫测定方法，其中，

4.根据权利要求1所述的免疫测定方法，其中，

5.根据权利要求4所述的免疫测定方法，其中，

6.一种抗原的免疫测定的精度管理方法，其包括：

7.根据权利要求6所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，

8.根据权利要求6所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，

9.根据权利要求6所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，

10.根据权利要求6所述的抗原的免疫测定的精度管理方法，其中，

11.一种标准试样，其为用于权利要求1~5中任一项所述的免疫测定方法、或权利要求6~10中任一项所述的免疫测定的精度管理方法的标准试样，

12.一种免疫测定方法，其包括：

13.一种免疫测定方法，其包括：

14.根据权利要求13所述的免疫测定方法，其中，

15.根据权利要求12或13所述的免疫测定方法，其中，

16.根据权利要求12或13所述的免疫测定方法，其中，

17.根据权利要求12或13所述的免疫测定方法，其中，

18.根据权利要求12或13所述的免疫测定方法，其中，

19.一种免疫测定试剂，其包含所述融合蛋白质，

20.一种免疫测定试剂，其包含所述竞争物质，