一种提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物及其应用的制作方法

本发明属于外泌体保存，尤其涉及一种提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物及其应用。

背景技术：

1、外泌体是一种直径约为30-150nm的微小膜性囊泡，具有典型的杯盘形态，脂质双分子层结构，在多种蛋白的协同调控下，与细胞膜融合，释放到细胞外。间充质干细胞来源的外泌体（msc-exo）含有丰富的蛋白质、脂类、lncrna、mrna、mirna、dna，通过细胞间物质交换和信号转导在免疫反应、发育、增殖等生物学过程中发挥远程调控作用，具有治疗多种疾病的临床应用潜能。

2、然而，msc-exo在体外极不稳定，缺乏标准化的储存条件。目前多以磷酸盐缓冲液（pbs）为基础，保存在低温条件下，保存过程中msc-exo易冷冻损伤，发生膜破裂，导致msc-exo形态、含量、性质、标志物和功能的改变，而且不便于运输，这严重制约了msc-exo的临床转化进程。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供一种提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物及其应用，其目的在于解决背景技术中所提到的问题。

2、第一方面，本发明提供提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物，包括：0.5-1.5μm的β-环糊精、5-200μm色甘酸钠、20-50mm海藻糖、1-3%水溶性丝素蛋白和0.1-0.5%牛血清白蛋白。

3、进一步地，1μm的β-环糊精、100μm色甘酸钠、30mm海藻糖、2%水溶性丝素蛋白和0.3%牛血清白蛋白。

4、第二方面，本发明提供提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物的制备方法，包括：将0.5-1.5μm的β-环糊精加入磷酸盐缓冲液中，超声助溶至澄清；然后依次加入5-200μm色甘酸钠、20-50mm海藻糖、1-3%水溶性丝素蛋白和0.1-0.5%牛血清白蛋白，各组分充分溶解；再经过滤除菌，得到所述组合物。

5、进一步地，所述过滤除菌采用0.22μm过滤器。

6、进一步地，所述充分溶解温度为常温。

7、第三方面，本发明提供提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物在存储间充质干细胞外泌体中的应用。

8、进一步地，所述组合物提高所述间充质干细胞外泌体在-20℃下的稳定性。

9、进一步地，所述组合物提高所述间充质干细胞外泌体反复冻融后的稳定性。

10、进一步地，所述组合物的使用方法具体为：收集间充质干细胞的培养上清，通过超高速离心法获取间充质干细胞外泌体，用所述组合物进行重悬，-20℃下保存。

11、第四方面，本发明提供提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物联合间充质干细胞外泌体在制备特应性皮炎药物中的应用。

12、本发明具有如下有益效果：

13、提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物包括β-环糊精、磷酸盐缓冲液、色甘酸钠、海藻糖、水溶性丝素蛋白和牛血清白蛋白。色甘酸钠、丝素蛋白和β-环糊精作为核心组分通过协同增效提升间充质干细胞外泌体在低温条件下以及反复冻融后的稳定性，保持其完整性，这不仅有利于间充质干细胞外泌体存储，也为其在-20℃条件下的便捷运输和临床应用提供了有力保障。此外，该组合物可增强间充质干细胞外泌体在炎症和过敏性疾病（如特应性皮炎）中的作用。

1.提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物，其特征在于，包括：0.5-1.5μm的β-环糊精、5-200μm色甘酸钠、20-50mm海藻糖、1-3%水溶性丝素蛋白和0.1-0.5%牛血清白蛋白。

2.如权利要求1所述的提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物，其特征在于，1μm的β-环糊精、100μm色甘酸钠、30mm海藻糖、2%水溶性丝素蛋白和0.3%牛血清白蛋白。

3.如权利要求1所述的提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物的制备方法，其特征在于，包括：将0.5-1.5μm的β-环糊精加入磷酸盐缓冲液中，超声助溶至澄清；然后依次加入5-200μm色甘酸钠、20-50mm海藻糖、1-3%水溶性丝素蛋白和0.1-0.5%牛血清白蛋白，各组分充分溶解；再经过滤除菌，得到所述组合物。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述过滤除菌采用0.22μm过滤器。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述充分溶解温度为常温。

6.如权利要求1或2所述的提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物在存储间充质干细胞外泌体中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述组合物提高所述间充质干细胞外泌体在-20℃下的稳定性。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述组合物提高所述间充质干细胞外泌体反复冻融后的稳定性。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述组合物的使用方法具体为：收集间充质干细胞的培养上清，通过超高速离心法获取间充质干细胞外泌体，用所述组合物进行重悬，-20℃下保存。

10.如权利要求1或2所述的提高间充质干细胞外泌体稳定性的组合物联合间充质干细胞外泌体在制备特应性皮炎药物中的应用。