利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法及收集装置

本发明属于水产养殖，具体涉及利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法及收集装置。

背景技术：

1、目前，评估鱼类高温耐受性能的传统方法主要包括急性温度胁迫实验（如测定半致死温度lt50）、生理生化指标检测（如肝酶活性、抗氧化指标等）及分子生物学方法（如热休克蛋白基因表达量检测）。然而，这些方法存在诸多局限性：急性温度胁迫实验往往导致实验鱼死亡或严重损伤，无法实现无损评估及优良个体的后续利用；生理生化指标检测需采集血液或组织样本，同样具有创伤性，且检测过程复杂、耗时较长；分子生物学方法成本高昂，操作技术要求严格，难以在养殖生产中大规模推广应用。

2、鱼类表皮粘液是由表皮细胞分泌的一种复杂分泌物，具有保护鱼体免受物理损伤、病原体侵袭及调节渗透压等多种生理功能。已有研究表明，环境胁迫会导致鱼类表皮粘液的分泌量及成分发生变化，大黄鱼表皮粘液十分丰富，但尚未有利用大黄鱼表皮粘液分泌量与高温耐受性能的关联性进行无损评估的相关报道，也缺乏专用的大黄鱼表皮粘液高效收集装置及标准化的评估方法。因此，开发一种无损、快速、准确的大黄鱼高温耐受性能评估技术，成为当前水产养殖领域的迫切需求。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的不足，本发明提供了利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法及收集装置，以解决现有大黄鱼耐高温检测创伤性、操作复杂、成本高及难以规模化应用技术问题。

2、为实现上述目的，本发明的具体技术方案如下：

3、第一方面，利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法，包括以下步骤：

4、步骤s1，实验鱼预处理，挑选规格一致、健康状况良好的待评估大黄鱼，放入设定参数的循环水养殖系统中进行饲养，并在暂养72h后停止投喂24h，以保证状态稳定。

5、步骤s2，温度胁迫处理，将暂养后的大黄鱼随机分为若干组，各组大黄鱼置于温控养殖桶中进行温度梯度胁迫处理。

6、步骤s3，表皮粘液收集，将步骤s2中各个温度梯度胁迫处理后的大黄鱼依次取出，并转移至粘液收集装置，通过洁净玻璃棒刮取大黄鱼表面的粘液，并进行收集，记录。

7、步骤s4，鱼体形态参数检测，测定各个温度梯度处理后的各大黄鱼的体长l、最大体高h及最大体宽w数据，并采用几何近似法计算体表面积s。

8、步骤s5，高温耐受性能评估，根据步骤s4中计算得到的各个大黄鱼体表面积s与步骤s3中收集得到的表皮粘液体积v，计算得到对应温度下单位体表面积表皮粘液分泌量m，绘制温度-m变化曲线，根据曲线趋势判定高温耐受性能。

9、进一步的，所述步骤s1中共选取30尾健康大黄鱼，置于容积为1000l的循环水养殖系统中，水温控制在25°c，溶氧量保持在6-7mg/l，盐度28‰，ph值8.0，每日投喂商业配合饲料，投喂量为鱼总体质量的2%，暂养72h后停止投喂24h。

10、进一步的，所述步骤s2中温控系统以0.1-1°c/h的速率升温，从25 °c开始，每升高1°c，保持水温稳定0.5 h - 12 h，直至水温升至34°c。

11、进一步的，所述步骤s3中大黄鱼表皮粘液收集具体过程如下;

12、步骤s3-1，在25°c、28°c、30°c、31°c、32°c、33°c、34°c各温度稳定阶段结束后，每个温度组取3尾大黄鱼，置于浓度为60mg/l的ms-222溶液中麻醉2min。

13、步骤s3-2，待鱼体完全失去活动能力后，转移至粘液收集装置中，用洁净玻璃棒沿鱼体背部至腹部方向刮取，收集粘液至刻度烧杯中。

14、步骤s3-3，记录粘液体积v，收集完成后将鱼体转移至25°c的养殖水体中复苏。

15、进一步的，所述步骤s4中采用基于深度学习的大黄鱼生长表型数据高通量检测系统对大黄鱼的鱼体形态进行测定，并通过卷积神经网络模型迭代训练与参数优化，构建具备高精度表型识别能力的检测模型。

16、进一步的，所述步骤s4中各条大黄鱼的体长l为吻端至尾鳍基部的距离，最大体高h为鱼体背部至腹部的最大垂直距离，最大体宽w为左右胸鳍之间的距离，体表面积s的计算公式如公式1所示，

17、 s =π×(h/2)×(w/2)×l×k 公式1

18、其中，k为形态修正系数，通过实测数据与三维扫描结果拟合得到，取值1.2-1.5。

19、第二方面，一种粘液收集装置，用于完成第一方面中大黄鱼的表皮粘液分泌量的收集记录，该装置包括刻度烧杯、支撑架体组件和收集过滤组件。所述支撑架体组件包括支架主体和水平支撑组件。水平支撑组件滑动连接在支架主体上，能够沿着竖直方向升降移动，以及沿着支架主体的轴线进行周向转动，并在调节至指定位置时锁止。

20、所述收集过滤组件安装在水平支撑组件的外端，用于承托待检测的大黄鱼，并对大黄鱼体表分泌出的粘液进行收集过滤。所述刻度烧杯放置在支架主体上，用于收集经收集过滤组件过滤后的大黄鱼粘液。

21、进一步的，所述支架主体包括防滑底座和可调式支柱。其中，可调式支柱呈竖直状固定在防滑底座上。可调式支柱的底部设置有定位环。定位环的内圈形成与刻度烧杯相配合的定位槽。

22、进一步的，所述水平支撑组件包括调节旋钮、升降旋转支架和水平悬臂。所述升降旋转支架滑动套接在可调式支柱外侧，能够绕可调式支柱转动并沿其轴向升降滑动。调节旋钮螺纹连接在升降旋转支架侧面，其内端可抵紧可调式支柱外壁实现锁止。水平悬臂水平固定在升降旋转支架的外侧，收集过滤组件连接在水平悬臂远离升降旋转支架的外端。

23、进一步的，所述收集过滤组件包括圆环座、重钢环卡扣和纱绢。其中，圆环座固定在水平悬臂的外端。圆环座表面开设有与重钢环卡扣相配合的固定凹槽。重钢环卡扣可拆卸地内嵌在圆环座的固定凹槽处。纱绢铺设在圆环座的上端面，边缘被夹持固定在圆环座和重钢环卡扣之间。纱绢的中部呈下垂的漏斗形结构。

24、与现有技术相比，本发明有以下优点：

25、1.实现无损评估：本发明通过刮取麻醉状态下大黄鱼的表皮粘液进行检测，无需采集血液或组织样本，不会对鱼体造成损伤，评估完成后的大黄鱼可继续用于养殖或育种，解决了传统方法的创伤性问题。

26、2.装置专用高效：本发明设计的粘液收集装置采用40-100目的纱绢作为过滤收集组件，既能有效收集粘液，又能避免鳞片等杂质混入，同时配合带刻度的刻度烧杯实现粘液体积的直接读取，结构简单、操作方便，收集效率较传统的棉签擦拭法提高3-5倍。

27、3、可规模化应用：本发明结合高通量形态检测仪器及标准化的评估流程，可实现多条大黄鱼的同步检测，单位面积粘液分泌量的计算方法简单易行，适合在养殖生产中大规模推广应用，为大黄鱼耐高温品系的筛选及养殖环境调控提供技术支撑。

1.利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法，其特征在于：所述步骤s1中共选取30尾健康大黄鱼，置于容积为1000l的循环水养殖系统中，水温控制在25°c，溶氧量保持在6-7mg/l，盐度28‰，ph值8.0，每日投喂商业配合饲料，投喂量为鱼总体质量的2%，暂养72h后停止投喂24h。

3. 根据权利要求1所述的利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法，其特征在于：所述步骤s2中温控系统以0.1-1°c/h的速率升温，从25 °c开始，每升高1°c，保持水温稳定0.5 h - 12 h，直至水温升至34°c。

4.根据权利要求1所述的利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法，其特征在于：所述步骤s3中大黄鱼表皮粘液收集具体过程如下：

5.根据权利要求1所述的利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法，其特征在于：所述步骤s4中采用基于深度学习的大黄鱼生长表型数据高通量检测系统对大黄鱼的鱼体形态进行测定，并通过卷积神经网络模型迭代训练与参数优化，构建具备高精度表型识别能力的检测模型。

6. 根据权利要求1所述的利用表皮粘液分泌量评估大黄鱼高温耐受性能的方法，其特征在于：所述步骤s4中各条大黄鱼的体长l为吻端至尾鳍基部的距离，最大体高h为鱼体背部至腹部的最大垂直距离，最大体宽w为左右胸鳍之间的距离，体表面积s的计算公式如公式1所示，

7.一种粘液收集装置，用于完成如权利要求1中所述大黄鱼的表皮粘液分泌量的收集记录，其特征在于：包括刻度烧杯、支撑架体组件和收集过滤组件；所述支撑架体组件包括支架主体和水平支撑组件；水平支撑组件滑动连接在支架主体上，能够沿着竖直方向升降移动，以及沿着支架主体的轴线进行周向转动，并在调节至指定位置时锁止；

8.根据权利要求7所述的一种粘液收集装置，其特征在于：所述支架主体包括防滑底座和可调式支柱；所述可调式支柱呈竖直状固定在防滑底座上；可调式支柱的底部设置有定位环；定位环的内圈形成与刻度烧杯相配合的定位槽。

9.根据权利要求8所述的一种粘液收集装置，其特征在于：所述水平支撑组件包括调节旋钮、升降旋转支架和水平悬臂；所述升降旋转支架滑动套接在可调式支柱外侧，能够绕可调式支柱转动并沿其轴向升降滑动；调节旋钮螺纹连接在升降旋转支架侧面，其内端可抵紧可调式支柱外壁实现锁止；水平悬臂水平固定在升降旋转支架的外侧，收集过滤组件连接在水平悬臂远离升降旋转支架的外端。

10.根据权利要求9所述的一种粘液收集装置，其特征在于：所述收集过滤组件包括圆环座、重钢环卡扣和纱绢；所述圆环座固定在水平悬臂的外端；圆环座表面开设有与重钢环卡扣相配合的固定凹槽；重钢环卡扣可拆卸的内嵌在圆环座的固定凹槽处；纱绢铺设在圆环座的上端面，边缘被夹持固定在圆环座和重钢环卡扣之间；纱绢的中部呈下垂的漏斗形结构。