一种采用非衍生化的HPLC法测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法与流程

技术特征：
1.一种采用非衍生化的hplc法测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其中，l-丙氨酸异丙酯盐酸盐记为laie，所述有关物质为l-丙氨酸、l-丙氨酸甲酯盐酸盐、l-丙氨酸乙酯盐酸盐、l-丙氨酸叔丁酯盐酸盐，分别记为laie-a、laie-b、laie-c、laie-e，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液取l-丙氨酸异丙酯盐酸盐，加流动相a溶解并定量稀释制成每1ml中含50
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1mg l-丙氨酸异丙酯盐酸盐的溶液；(2)制备贮备液laie贮备液：取laie对照品25mg，置10ml量瓶中，加流动相a溶解并稀释至刻度，摇匀；laie-a贮备液：取laie-a对照品500mg，置20ml量瓶中，加流动相a溶解并稀释至刻度，摇匀；laie-b贮备液：取laie-b对照品25mg，置10ml量瓶中，加流动相a溶解并稀释至刻度，摇匀；laie-c贮备液：取laie-c对照品25mg，置10ml量瓶中，加流动相a溶解并稀释至刻度，摇匀；laie-e贮备液：取laie-e对照品25mg，置10ml量瓶中，加流动相a溶解并稀释至刻度，摇匀；(3)制备系统适用性溶液取laie对照品、laie-a对照品、laie-b对照品、laie-c对照品、laie-e对照品，加流动相a溶解并稀释制成每1ml中含laie 50mg，含laie-a2.5mg，含laie-b、laie-c、laie-e各0.25mg的混合溶液，摇匀；(4)制备定位溶液laie定位溶液：量取laie贮备液1ml，置10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀；laie-a定位溶液：量取laie-a贮备液1ml，置10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀；laie-b定位溶液：量取laie-b贮备液200μl，置10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀；laie-c定位溶液：量取laie-b贮备液200μl，置10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀；laie-e定位溶液：量取laie-b贮备液200μl，置10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀；(5)高效液相色谱法试验：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以20mm六氟磷酸钾:乙腈＝95:5为流动相a，以乙腈为流动相b，柱温为30
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5℃，检测波长为210
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2nm，流速为0.4
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0.01ml/min，进样体积为5
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0.1μl，精密量取上述供试品溶液、系统适用性溶液、各定位溶液，注入液相，记录色谱图。2.根据权利要求1所述的一种采用非衍生化的hplc法测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于：高效液相色谱法试验中，梯度洗脱如下：
3.根据权利要求1所述的一种采用非衍生化的hplc法测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于：柱温为30℃，检测波长为210nm，流速为0.4ml/min，进样体积为5μl。4.根据权利要求1所述的一种采用非衍生化的hplc法测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于：所述20mm六氟磷酸钾的制备方法为：取六氟磷酸钾3.68g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节ph值至2.0
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0.05。5.根据权利要求1所述的一种采用非衍生化的hplc法测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于：供试品溶液色谱图中的杂质峰应满足以下条件：按峰面积归一化计算，laie-a不得超过5.0％，laie-b、laie-c、laie-e均不得超过0.1％，其他单个杂质不得超过0.5％，总杂不得超过5.0％，小于总峰面积0.02％的色谱峰忽略不计。

技术总结
本发明公开了采用非衍生化的HPLC法测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法。色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以20mM六氟磷酸钾:乙腈=95:5为流动相A，以乙腈为流动相B，柱温为30


技术研发人员：洪晓慧 张颖 唐仕阳
受保护的技术使用者：福建省福抗药业股份有限公司
技术研发日：2023.06.21
技术公布日：2023/8/29