平末端双链接头元件、试剂盒及平末端建库方法与流程

技术特征：
1.一种平末端双链接头元件，其特征在于，所述双链接头元件包括：a序列、b序列和c序列，其中，所述a序列从5’端到3’端依次包括a1段和a2段，所述c序列从5’端到3’端依次包括c1段、c2段和c3段，所述b序列与所述c1段互补配对，所述a序列通过所述a2段与所述c2段互补配对，所述a1段与所述c3段形成非配对区域，所述双链接头元件为所述a序列、所述b序列和所述c序列退火形成的组合y型接头，所述b序列的3’端为ddn，所述c1段的5’端具有磷酸化修饰。2.根据权利要求1所述的双链接头元件，其特征在于，所述a1段和所述c3段的长度各自独立地为13-25bp；优选地，所述a2段和所述c2段的长度均为8-15bp，更优选为13-15bp；优选地，所述b序列和所述c1段的长度均为8-15bp，更优选为12-14bp；优选地，所述b序列包括分子标签序列，所述分子标签序列的长度为4-8bp，更优选为6-8bp。3.根据权利要求2所述的双链接头元件，其特征在于，所述分子标签序列中含有rna碱基，优选所述rna碱基为u碱基。4.根据权利要求3所述的双链接头元件，其特征在于，所述a序列和所述b序列共价连接形成一条链，并与所述c序列退火形成所述组合y型接头。5.根据权利要求1至4中任一项所述的双链接头元件，其特征在于，所述双链接头元件的序列选自如下任意一组：第1)组：所述a序列为seq id no:1：tcgtcggcagcgtcagatgtgtataag，所述b序列为：agacagn1ddn，所述c序列为seq id no:2：5
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p-n2ctgtctcttatacacatctccgagcccacgagac，其中，n1表示5-7个n碱基形成的序列，n2表示6-8个n碱基形成的序列，n选自a、c、t或g，ddn选自dda、ddc、ddt或ddg，p表示所述磷酸化修饰；第2)组：所述a序列为所述seq id no:1，所述c序列为所述seq id no:3，所述b序列为：agacagn3un4ddn，其中，n3表示2-3个n碱基形成的序列，n4表示2-3个n碱基形成的序列，n选自a、c、t或g，ddn选自dda、ddc、ddt或ddg，p表示所述磷酸化修饰；第3)组：所述双链接头元件用于illumina测序平台上，所述a序列和所述b序列共价连接于同一链，记为ab链，所述ab链的序列为：seq id no:3：acactctttccctacacgacgctcttccgatcun5ddn，所述c序列为seq id no:4：5
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p-n6agatcggaagagcacacgtctgaactccagtcac；其中，n5表示3-5个n碱基形成的序列，n6表示4-6个n碱基形成的序列，n选自a、c、t或g，ddn选自dda、ddc、ddt或ddg，p表示所述磷酸化修饰；第4)组：所述双链接头元件用于mgi测序平台上，所述a序列和所述b序列共价连接于同一链，记为ab链，所述ab链的序列为：
seq id no:5：ttgtcttcctaaggaacgacatggctacgatccgactu n7ddn，所述c序列为seq id no:6：5
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p-n8aagtcggaggccaagcggtcttaggaagacaac，其中，n7表示3-5个n碱基形成的序列，n8表示4-6个n碱基形成的序列，n选自a、c、t或g，ddn选自dda、ddc、ddt或ddg，p表示所述磷酸化修饰。6.根据权利要求1或2所述的双链接头元件，其特征在于，所述a序列和所述b序列共价连接于同一链上，且所述c1段的5’端磷酸化修饰被去除，所述b序列的3’端ddn修饰被去除；优选地，所述双链接头元件选自如下任意一组：第5)组：所述双链接头元件用于mgi测序平台上，所述a序列和所述b序列共价连接于同一链，记为ab链，所述ab链的序列为：seq id no:7：tcgtcggcagcgtcagatgtgtataagagacag，所述c序列为seq id no:8：ctgtctcttatacacatctccgagcccacgagac；第6)组：所述双链接头元件用于mgi测序平台上，所述a序列和所述b序列共价连接于同一链，记为ab链，所述ab链的序列为：seq id no:9：acactctttccctacacgacgctcttccgatct，所述c序列为seq id no:10：agatcggaagagcacacgtctgaactccagtcac。7.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至6中任一项所述的平末端双链接头元件。8.一种平末端建库方法，其特征在于，所述建库方法包括：采用权利要求1至6中任一项所述的双链接头元件与具有平末端的dna连接片段进行接头连接，得到带接头连接片段；对所述接头连接片段进行pcr扩增，得到平末端扩增文库。9.根据权利要求8所述的建库方法，其特征在于，所述双链接头元件为权利要求1或2所述的双链接头元件，或者为权利要求5中的第1)组双链接头元件，所述接头连接的步骤包括：采用t4 dna连接酶将所述双链接头元件与5’端非磷酸化的目的片段进行连接，得到带缺刻的连接片段；再采用dna聚合酶和t4 dna连接酶对所述带缺刻的连接片段进行缺刻平移及平移后的缺刻连接，得到所述带接头连接片段。10.根据权利要求8所述的建库方法，其特征在于，所述双链接头元件为权利要求3或4所述的双链接头元件，或者为权利要求5中的第2)组至第4)组中的任意一组双链接头元件，所述接头连接的步骤包括：先采用t4 dna连接酶将所述双链接头元件与5’端非磷酸化的目的片段进行连接，得到带缺刻的连接片段；采用dna聚合酶、user酶和t4 dna连接酶对所述带缺刻的连接片段进行缺刻平移及对
平移后的缺刻连接，得到所述带接头连接片段。11.根据权利要求8所述的建库方法，其特征在于，所述双链接头元件为权利要求6所述的双链接头元件，所述接头连接的步骤包括：采用t4 dna连接酶将所述双链接头元件与5’磷酸化的目的片段进行连接，得到带缺刻连接片段；采用dna聚合酶、单个核苷酸单体及t4 dna连接酶对所述带缺刻连接片段进行缺刻平移一个碱基，并对平移一个碱基后的缺刻进行连接，得到所述带接头连接片段。

技术总结
本发明提供了一种平末端双链接头元件、试剂盒及平末端建库方法。该双链接头元件包括：A序列、B序列和C序列，其中，A序列从5’端到3’端依次包括A1段和A2段，C序列从5’端到3’端依次包括C1段、C2段和C3段，B序列与C1段互补配对，A序列通过A2段与C2段互补配对，A1段与C3段形成非配对区域，双链接头元件为A序列、B序列和C序列退火形成的组合Y型接头，B序列的3’端为ddN，C1段的5’端具有磷酸化修饰。通过创新的复合接头的形式，实现了Y型接头的低成本、简单、高效平端连接建库，且能够与现有测序平台的建库、测序流程兼容，更具应用价值。更具应用价值。更具应用价值。


技术研发人员：胡玉刚 汪彪 曲燕 吴强
受保护的技术使用者：纳昂达（南京）生物科技有限公司
技术研发日：2022.12.15
技术公布日：2023/6/14