一种乳腺癌化疗药物耐药相关的靶点及其应用

技术特征：
1.一种乳腺癌化疗药物耐药相关的靶点，其特征在于，所述靶点为人源rrs1蛋白，所述人源rrs1蛋白与乳腺癌细胞具有相关性的验证方法包括以下步骤：步骤1、乳腺癌细胞和乳腺癌顺铂耐药细胞中的rrs1、aeg-1、abcg2和 mdr1蛋白表达；步骤2、顺铂处理诱导rrs1蛋白表达：步骤2.1、使用1.501μg/ml顺铂处理mcf-7细胞12 h，使用western blot和rt-qpcr检测rrs1蛋白和mrna的表达；步骤2.2、使用乳腺癌细胞构建裸鼠皮下增殖瘤模型，待小鼠生长一个月后，脱颈处死小鼠，取出肿瘤，rt-qpcr和 western blot检测 rrs1的表达；步骤3、敲减rrs1来验证乳腺癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性：采用rna干扰技术敲减乳腺癌顺铂耐药细胞中rrs1基因的表达，采用western blot检测细胞中耐药蛋白abcg2和 mdr1蛋白的表达，采用cck8检测乳腺癌顺铂耐药细胞的ic
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；步骤4、验证敲降rrs1减低乳腺癌顺铂耐药细胞的增殖能力，诱导细胞周期阻滞和凋亡：采用流式细胞术检测敲降rrs1基因后，检测乳腺癌顺铂耐药细胞的周期分布，使用annexin v-apc/pi双染试剂盒检测细胞的凋亡能力，采用cck8连续5天检测细胞的增殖情况，再通过western blot检测增殖相关信号通路蛋白；步骤5、验证aeg-1参与 rrs1介导 乳腺癌细胞顺铂耐药：通过网络数据库筛选得到与rrs1相关的互作蛋白aeg-1，通过rt-qpcr检测敲降rrs1后aeg-1的mrna表达水平，并利用western blot检测aeg-1蛋白水平的表达；然后在乳腺癌顺铂耐药细胞中使用aeg-1抗体进行coip实验；步骤6、验证rrs1对aeg-1的含量的影响方式：步骤6.1、使用蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺对 aeg-1蛋白的稳定性进行检测；步骤6.2、在乳腺癌顺铂耐药细胞中过表达rrs1后再次使用环己酰亚胺处理细胞，发现aeg-1蛋白水平无明显变化，随后使用蛋白酶体抑制剂 mg132处理细胞，检测aeg-1的蛋白表达水平；步骤6.3、使用泛素化抗体对aeg-1的泛素化水平进行检测。2.根据权利要求1所述的乳腺癌化疗药物耐药相关的靶点，其特征在于，在所述步骤1中，采用western blot检测乳腺癌细胞和乳腺癌顺铂耐药细胞中rrs1、aeg-1、abcg2和 mdr1蛋白的表达。3.根据权利要求1所述的乳腺癌化疗药物耐药相关的靶点，其特征在于，在所述步骤2.2中，裸鼠皮下增殖瘤模型的构建步骤如下：将乳腺癌细胞接种至裸鼠腋下，并每日观察肿瘤生长状况，待肿瘤体积达到 100 mm3后进行分组给药，每六天给与顺铂处理一次，相应的对照组给与生理盐水处理，连续给药 5次。4.一种如权利要求1-3任一项所述的乳腺癌化疗药物耐药相关的靶点在制备抗乳腺癌药物中的应用。

技术总结
本发明适用于生物医药技术领域，提供了一种乳腺癌化疗药物耐药相关的靶点，所述靶点为人源RRS1蛋白。人源RRS1蛋白与乳腺癌细胞具有相关性的验证方法步骤如下：（1）乳腺癌细胞和乳腺癌顺铂耐药细胞中的RRS1、AEG-1、ABCG2和MDR1蛋白表达；（2）顺铂处理诱导RRS1蛋白表达；（3）敲减RRS1来验证乳腺癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性；（4）验证敲降RRS1减低乳腺癌顺铂耐药细胞的增殖能力；（5）验证AEG-1参与RRS1介导乳腺癌细胞顺铂耐药。通过解析RRS1在乳腺癌顺铂耐药中的机制有助于确定新的治疗靶点，对乳腺癌患者的治疗具有重要的意义。腺癌患者的治疗具有重要的意义。腺癌患者的治疗具有重要的意义。


技术研发人员：王润泽 侯琳 彭翠修 宋军莹
受保护的技术使用者：青岛大学
技术研发日：2022.12.07
技术公布日：2023/3/10