含脲结构的化合物及其应用

1.本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种含脲结构的化合物及其应用。


背景技术：

2.受体酪氨酸激酶ret(rearranged during transfection，转染期间重排)在肾脏和神经系统的发育中起着重要作用。ret可以通过基因融合、点突变、过表达等激活下游信号通路。当异常激活时，它可以作为多种恶性肿瘤的致癌基因。其中，保留激酶结构域的ret融合是甲状腺乳头状癌(ptc)、非小细胞肺癌(nsclc)等癌症的驱动因素；而激活ret突变与多发性内分泌肿瘤2型(men2)和散发型甲状腺髓样癌(mtc)的不同表型相关。因此，ret是一个对ret改变引起癌变的患者有着吸引力的治疗靶点。
3.早期具有ret抑制剂活性的多激酶抑制剂(mkis)，如卡博替尼和凡德他尼，已在临床中探索用于ret驱动的癌症。这类多激酶抑制剂，由于靶向性不高，容易产生非靶标副作用，如高血压和腹泻等，限制了患者可耐受的剂量。最近，由loxo oncology公司研发的高选择性ret激酶抑制剂selpercatinib，于2020年5月获fda批准上市；用于治疗晚期ret融合阳性nsclc、ret突变型/融合阳性mtc。另外一个由blueprint medicines公司开发的高选择性ret激酶抑制剂pralsetinib，于2020年9月获fda批准上市；其体外研究表明pralsetinib对ret的选择特异性明显优于其他多靶点抑制剂，且具有较好的耐受性，对vegfr-2仅有轻微的抑制作用，用于治疗ret融合阳性nsclc的成年患者。
4.尽管selpercatinib和pralsetinib对ret具有高活性和高选择性，针对ret基因融合、过表达或者关键位点突变如v804m突变等，发展具有新结构的选择性抑制剂，仍然具有重要的研究价值。此外，ret g810r、s和c溶剂前沿突变作为获得性耐药机制已在使用选择性ret抑制剂进展的ret异常患者中得到证实(solomon,benjamin j.et al.jthorac oncol.2020,15(4),541-549)，开发新的ret抑制剂来抑制这些突变非常必要，且具有重大研究意义。


技术实现要素：

5.针对上述问题，本发明提供了一类新的含脲结构的化合物，该类化合物对ret野生及突变型激酶具有很好的抑制活性。
6.具体技术方案如下：
7.具有式(i)所示结构的含脲结构的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体：
8.9.其中，
10.x1、x2、x3、x4和x5共同组成杂芳基，x1、x2、x3、x4和x5分别独立地选自：n、nr2、c、cr、或c＝o，并且，x1、x2、x3、x4和x5中有一个、两个或者三个分别独立地选自：n、或nr2，当x1、x2、x3、x4和x5中有两个或者三个均为n时，不形成n＝n结构；
11.a1、a2、b1、b2、d1、d2、e1和e2分别独立地选自：n、或cr5；
12.z选自：n、或cr’；
13.r1选自：
[0014][0015]
其中，m、n、n1、n2分别独立地选自：0～6之间的整数；
[0016]
各z1、z2分别独立地选自：nr
10
、o、s或cr
11r12
；
[0017]
各z3、z4、z5分别独立地选自：o或s；
[0018]
各z6分别独立地选自：n或cr9；
[0019]
各r2分别独立地选自：h、c1～c8烷基、c1～c8烷基酰基、c1～c8烷氧基羰基、c1～c8烷胺基羰基、c3～c6环烷基、c3～c6环烷氧基羰基、c3～c6环烷胺基羰基、3～6元杂环烷基、c5～c
10
芳基酰基、5～10元杂芳基酰基、c1～c8磺酰基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c6烷基、或5～18元杂芳基；当r2不为氢时，所述r2独立任选地被1个或多个r
13
取代；
[0020]
r3、r4分别独立地选自：h、c1～c8烷基、c1～c8烷基胺基、羟基取代的c1～c8烷基、c1～c8烷氧基取代的c1～c8烷基、c3～c8环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c8酰基、烯基酰基、c1～c8磺酰基、5～18元杂芳基，或者r3、r4和与其相连的碳原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的3～10元环烷基或者6～10元杂芳基；
[0021]
各r5分别独立地选自：h、卤素、c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基、5～18元杂芳基、或-sr
14
；当r5选自c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基或5～18元杂芳基时，所述r5独立任选地被1个或多个r
13
取代；
[0022]
各r6分别独立地选自：h、c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、c1～c8酰基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基、或5～18元杂芳基；当r6选自c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基或5～18元杂芳基时，所述r6独立任选地被1个或多个r
13
取代；
[0023]
各r7、r8分别独立地选自：h、c1～c8烷基、c1～c8烷基胺基、羟基取代的c1～c8烷基，
c1～c8烷氧基取代的c1～c8烷基、c1～c8烷胺基取代的c1～c8烷基、c3～c8环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c8酰基、烯基酰基、c1～c8磺酰基、5～18元杂芳基，或者r7、r8与和其相连的n原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的3～10元杂环基，或者r7、r8与和其相连的n原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的5～10元杂芳基；
[0024]
各r9分别独立地选自：h、c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、c1～c8酰基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基、或5～18元杂芳基；当r9选自c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基或5～18元杂芳基时，所述r9独立任选地被1个或多个r
13
取代；
[0025]
各r
10
分别独立地选自：h、c1～c8烷基、羟基取代的c1～c8烷基，c1～c8烷氧基取代的c1～c8烷基、c3～c8环烷基；
[0026]
各r
11
、r
12
分别独立地选自：h、c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、c1～c8酰基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基、或5～18元杂芳基；当r
11
、r
12
选自c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基或5～18元杂芳基时，所述r
11
、r
12
独立任选地被1个或多个r
13
取代；
[0027]
各r
13
分别独立地选自：h、羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、三氟甲基、c1～c6烷氧基、c1～c8烷基、c3～c8环烷基、3～10元杂环基、6-10元芳基；
[0028]
各r
14
分别独立地选自：h、c1～c8烷基、羟基取代的c1～c8烷基，c1～c8烷氧基取代的c1～c8烷基；
[0029]
各r分别独立地选自：h、卤素、c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基、或5～18元杂芳基；当r选自c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基或5～18元杂芳基时，所述r独立任选地被1个或多个r
13
取代；
[0030]
各r’分别独立地选自：h、卤素、c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基、或5～18元杂芳基；当r’选自c1～c
18
烷基、c3～c
18
环烷基、3～18元杂环烷基、c1～c
18
烷氧基、c1～c
18
烷胺基、c6～c
18
芳基、c6～c
18
芳基取代的c1～c
18
烷基或5～18元杂芳基时，所述r’独立任选地被1个或多个r
13
取代。
[0031]
在其中一些实施例中，所述含脲结构的化合物具有式(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)或(viii)所示结构：
[0032][0033]
其中，
[0034]
x1、x3、x4分别独立地选自：n、nr2、cr、或c＝o，并且，x1、x3、x4所在的五元环中不形成n＝n结构。
[0035]
在其中一些实施例中，所述含脲结构的化合物具有式(ix)、式(x)、式(xi)或者式(xii)所示结构：
[0036][0037]
本发明的化合物(ix)和化合物(x)中的r2为h时，化合物(ix)和化合物(x)互为互变异构体，代表同一个化合物。
[0038]
在其中一些实施例中，a1、a2、b1、b2、d1、d2、e1和e2均为cr5。
[0039]
在其中一些实施例中，所述含脲结构的化合物具有如下式(a)、式(b)或者式(c)所
示结构：
[0040][0041]
其中，各p分别独立选自：0～4之间的整数；z1为o或者s；x1为n或者cr。
[0042]
在其中一些实施例中，r6为h；m和n之和选自：0、1、2、3。
[0043]
在其中一些实施例中，m为0、1、2或3，n为0、1、2或3，n1为0、1、2或3，n2为0、1、2或3。
[0044]
在其中一些实施例中，各r6分别独立地选自：h、c1～c6烷基、c3～c8环烷基、3～8元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、c1～c3酰基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c3烷基、或5～10元杂芳基；当r6选自c1～c6烷基、c3～c8环烷基、3～8元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷胺基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c3烷基或5～10元杂芳基时，所述r6独立任选地被1个或多个r
13
取代。
[0045]
在其中一些实施例中，r6选自：h、c1～c3烷基。
[0046]
在其中一些实施例中，各r7、r8分别独立地选自：h、c1～c3烷基、c1～c3烷基胺基、羟基取代的c1～c3烷基，c1～c3烷氧基取代的c1～c3烷基、c1～c3烷胺基取代的c1～c3烷基、c3～c6环烷基、3～6元杂环烷基、c1～c3酰基、烯基酰基、c1～c3磺酰基、5～10元杂芳基，或者r7、r8与和其相连的n原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的3～8元杂环基，或者r7、r8与和其相连的n原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的5～10杂芳基。
[0047]
在其中一些实施例中，各r7，r8分别独立地选自：h、c1～c3烷基，或者r7、r8与和其相连的n原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的5～6元杂环基。
[0048]
在其中一些实施例中，各r7、r8分别独立地选自：h、甲基、乙基、丙基，或者r7、r8与和其相连的n原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、或哌啶基。
[0049]
在其中一些实施例中，r1选自：选自：
[0050]
在其中一些实施例中，各r2分别独立地选自：h、c1～c3烷基、c1～c3烷基酰基、c1～c3烷氧基羰基、c1～c3烷胺基羰基、c3～c6环烷基、c3～c6环烷氧基羰基、c3～c6环烷胺基羰基、3～6元杂环烷基、c5～c
10
芳基酰基、5～10元杂芳基酰基、c1～c8磺酰基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c3烷基、或5～10元杂芳基；当r2不为氢时，所述r2独立任选地被1个或多个r
13
取代。
[0051]
在其中一些实施例中，r3、r4分别独立地选自：h、c1～c3烷基、c1～c3烷基胺基、羟基取代的c1～c3烷基、c1～c3烷氧基取代的c1～c3烷基、c3～c6环烷基、3～8元杂环烷基、c1～c3酰基、烯基酰基、c1～c3磺酰基、5～10元杂芳基，或者r3、r4和与其相连的碳原子一起形成1个或多个r
13
取代或者未取代的3～6元环烷基。
[0052]
在其中一些实施例中，各r5分别独立地选自：h、卤素、c1～c3烷基、c3～c8环烷基、3～8元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷硫基、c1～c3烷胺基、氨基、羟基、巯基、氰基、硝基、酯基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c6烷基、5～10元杂芳基；当r5选自c1～c3烷基、c3～c8环烷基、3～8元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷胺基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c6烷基或5～10元杂芳基时，所述r5独立任选地被1个或多个r
13
取代。
[0053]
在其中一些实施例中，所述含脲结构的化合物具有如下式(d)、式(e)或者式(f)所示结构：
[0054][0055]
其中，各p分别独立选自：0、1或2；
[0056]
x1为n或者ch；
[0057]
各r5分别独立地选自：h、氟、溴、氯、c1～c3烷基、c1～c3烷氧基；
[0058]
各r
’5分别独立地选自：h、氟、c1～c3烷氧基。
[0059]
在其中一些实施例中，各r分别独立地选自：h、卤素、c1～c3烷基、c3～c6环烷基、3～6元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c3烷基、或5～10元杂芳基；当r选自c1～c3烷基、c3～c6环烷基、3～6元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷胺基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c3烷基或5～10元杂芳基时，所述r独立任选地被1个或多个r
13
取代。
[0060]
在其中一些实施例中，各r’分别独立地选自：h、卤素、c1～c3烷基、c3～c6环烷基、3～6元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷胺基、氨基、羟基、氰基、硝基、酯基、酰胺基、磺酰基、磺酰氨基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c3烷基、或5～10元杂芳基；当r’选自c1～c3烷基、c3～c6环烷基、3～6元杂环烷基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷胺基、c6～c
10
芳基、c6～c
10
芳基取代的c1～c3烷基或5～10元杂芳基时，所述r’独立任选地被1个或多个r
13
取代。
[0061]
在其中一些实施例中，各r
13
分别独立地选自：h、羟基、氨基、氰基、硝基、卤素、三氟甲基、c1～c3烷氧基、c1～c3烷基、c3～c6环烷基、3～6元杂环基、6-10元芳基。
[0062]
本发明还提供了上述化合物的应用。
[0063]
上述的含脲结构的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体在制备ret激酶抑制剂中的应用。
[0064]
在其中一些实施例中，所述ret激酶为野生型ret激酶、携带v804m突变的ret激酶、携带g810c突变的ret激酶和/或携带g810r突变的ret激酶。
[0065]
上述的含脲结构的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体在制备预防和/或治疗与ret激酶表达异常相关的疾病的药物中的应用。
[0066]
在其中一些实施例中，所述ret激酶为野生型ret激酶、携带v804m突变的ret激酶、携带g810c突变的ret激酶和/或携带g810r突变的ret激酶。
[0067]
在其中一些实施例中，所述与ret激酶表达异常相关的疾病为肿瘤。
[0068]
在其中一些实施例中，所述肿瘤为：白血病、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌。
[0069]
本发明还提供了一种预防和/或治疗肿瘤的药用组合物。
[0070]
具体技术方案如下：
[0071]
一种预防和/或治疗肿瘤的药用组合物，由活性成分和药学上可接受的辅料制备得到，所述活性成分包括上述的含脲结构的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体。
[0072]
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
[0073]
本发明提供的含脲结构的化合物及其药学上可接受的盐、异构体可以有效地抑制激酶的活性，尤其是ret激酶，包括野生和各种突变的ret激酶，进而可以调节下游的多条通路的激活，可以用于制备防治ret激酶表达异常相关的多种疾病的药物，比如白血病、肿瘤。
具体实施方式
[0074]
本发明所述化合物中，当任何变量(例如r2等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。如果环系统为多环，其意味着这种键仅连接到邻近环的任何适当的碳原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。短语“任选被一个或多个取代基取代”被认为与短语“任选被至少一个取代基取代”相当且在此情况下优选的实施方案将具有0-3个取代基。
[0075]
本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“c
1-c6烷基”中“c
1-c
6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。例如，“c
1-c6烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基。术语“环烷基”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。术语“烷氧基”指具有-o-烷基结构的基团，如-och3、-och2ch3、-och2ch2ch3、-o-ch2ch(ch3)2、-och2ch2ch2ch3、-o-ch(ch3)2等。术语“杂环烷基”为饱和或部分不饱和的单环或多环环状取代基，其中一个或多个环原子选自n、o或s(o)m(其中m是0-2的整数)的杂原子，其余环原子为碳，例如：吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、二氢咪唑基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基等，及其n-氧化物，
杂环取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。术语“杂芳基”指含有1个或多个选自o、n或s的杂原子的芳香环，本发明范围内的杂芳基包括但不限于：喹啉基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、哒嗪基；“杂芳基”也理解为包括任何含有氮的杂芳基的n-氧化物衍生物。杂环取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。
[0076]
正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”(“halo”)或“卤”意指氯、氟、溴和碘。
[0077]
除非另有定义，烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基取代基可为未被取代的或取代的。例如，c
1-c6烷基可被一个、两个或三个选自oh、卤素、烷氧基、二烷基氨基或杂环基例如吗啉基、哌啶基等的取代基取代。
[0078]
本发明包括式(i)-(xii)化合物、式(a)-(f)化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。本文中一些特定的示例性化合物为胺类化合物的质子化了的盐。术语“游离形式”指以非盐形式的胺类化合物。包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式(i)-(xii)化合物、式(a)-(f)化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如naoh稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。
[0079]
可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。
[0080]
因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。
[0081]
如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐.得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n,n'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
[0082]
berg等，“pharmaceutical salts，”j.pharm.sci.’1977：66：1－19更详细描述了
上文所述药学上可接受的盐及其它典型的药学上可接受的盐的制备。
[0083]
由于在生理条件下化合物中脱质子化的酸性部分例如竣基可为阴离子的，而这种带有的电荷然后可被内部带有阳离子的质子化了的或烷基化的碱性部分例如四价氮原子平衡抵消，所以应注意本发明化合物是潜在的内盐或两性离子。
[0084]
在一个实施方案中，本发明提供了一种利用具有式(i)-(xii)、式(a)-(f)的化合物及其药学可接受的盐治疗人或其它哺乳动物肿瘤等过渡增殖性疾病或症状。
[0085]
在一个实施方案中，本发明的化合物及其药学可接受的盐可以用于治疗或控制非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌等过渡增殖性疾病。
[0086]
联合用药
[0087]
式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式&剂量保持不变，而同时或随后服用式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物。当式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物与其它一种或几种药物同时服用时，优选使用同时含有一种或几种已知药物和式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物的药用组合物。药物联用也包括在重叠的时间段服用式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物与其它一种或几种已知药物。当式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。
[0088]
可以与式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：
[0089]
雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、视网膜样受体调节剂、细胞毒素/细胞抑制剂、抗增殖剂、蛋白转移酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、hiv蛋白激酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、血管生成抑制剂、细胞增殖及生存信号抑制剂、干扰细胞周期关卡的药物和细胞凋亡诱导剂，细胞毒类药物、酪氨酸蛋白抑制剂、egfr抑制剂、vegfr抑制剂、丝氨酸/苏氨酸蛋白抑制剂、bcr-abl抑制剂，c-kit抑制剂,met抑制剂,raf抑制剂,mek抑制剂,mmp抑制剂,拓扑异构酶抑制剂、组氨酸去乙酰化酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、cdk抑制剂，bcl-2家族蛋白抑制剂，mdm2家族蛋白抑制剂、iap家族蛋白抑制剂、stat家族蛋白抑制剂、pi3k抑制剂、akt抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、cox-2抑制剂、p53、p53激活剂、vegf抗体、egf抗体等。
[0090]
在一个实施方案中，可以与式(i)-(xii)、式(a)-(f)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限为：阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿曲诺英、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼盐酸盐、六甲蜜胺、氨基格鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安丫啶、阿纳托唑、多拉司琼、aranesp、arglabin、三氧化二砷、阿诺新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗或tice卡介苗、贝他定、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠制剂、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿甘、bortezomib、白消安、降钙素、阿来佐单抗注射剂、卡培他滨、卡铂、康士得、cefesone、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、克拉屈滨、氯屈磷酸、环磷酰胺、阿糖胞昔、达卡巴嗪、放线菌素d、柔红霉素脂质体、地塞米松、磷酸地塞米松、戊酸雌二醇、地尼白介素2、狄波美、地洛瑞林、地拉佐生、己烯雌酚、大扶康、多西他奇、去氧氟尿苷、阿霉素、屈大麻酚、钦-166-壳聚糖复合物、eligard、拉布立酶、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦、表阿霉素、阿法依伯汀、红细胞生成素、依铂、左旋咪唑片、雌二醇制剂、17-β-雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、氨磷汀、羟
磷酸、凡毕复、依托泊甙、法倔唑、他莫昔芬制剂、非格司亭、非那司提、非雷司替、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸盐、5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、福麦斯坦、1-β-d-阿糖呋喃糖胞噻啶-5
’‑
硬脂酰磷酸酯、福莫司汀、氟维司群、丙种球蛋白、吉西他滨、吉妥单抗、甲磺酸伊马替尼、卡氮芥糯米纸胶囊剂、戈舍瑞林、盐酸格拉尼西隆、组氨瑞林、和美新、氢化可的松、赤型-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替坦异贝莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素α、干扰素-α2、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-nl、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-la、白细胞介素-2、内含子a、易瑞沙、依立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、亮丙瑞林醋酸盐、左旋四咪唑、左旋亚叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠制剂、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、甲羟孕酮醋酸酯、醋酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素、6-琉基嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯、米替福新、美满霉素、丝裂霉素c、米托坦、米托葱醌、曲洛司坦、柠檬酸阿霉素脂质体、奈达铂、聚乙二醇化非格司亭、奥普瑞白介素、neupogen、尼鲁米特、三苯氧胺、nsc-631570、重组人白细胞介素1-β、奥曲肽、盐酸奥丹西隆、去氢氢化可的松口服溶液剂、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶链菌制剂、盐酸匹鲁卡品、毗柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、司替泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴脐、重组人类红细胞生成素、雷替曲塞、利比、依替膦酸铼-186、美罗华、力度伸-a、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片剂、奥曲肽、沙莫司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、唬钠甲强龙、帕福斯酸、干细胞治疗、链佐星、氯化锶-89、左旋甲状腺素钠、他莫昔芬、坦舒洛辛、他索那明、tastolactone、泰索帝、替西硫津、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮、硫鸟嘌呤、噻替哌、促甲状腺激素、替鲁膦酸、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维a酸、甲氨喋呤片剂、三甲基密胺、三甲曲沙、乙酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福定、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春酰胺、长春瑞滨、维鲁利秦、右旋丙亚胺、净司他丁斯酯、枢复宁、紫杉醇蛋白质稳定制剂、acolbifene、干扰素r-lb、affinitak、氨基喋呤、阿佐昔芬、asoprisnil、阿他美坦、阿曲生坦、bay43-9006、阿瓦斯丁、cci-779、cdc-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、环丙孕酮醋酸酯、地西他滨、dn-101、阿霉素-mtc、dslim、度他雄胺、edotecarin、依氟鸟氨酸、依喜替康、芬维a胺、组胺二盐酸盐、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166dotmp、伊班膦酸、干扰素γ、内含子-peg、ixabepilone、匙孔形血蓝蛋白、l-651582、兰乐肽、拉索昔芬、libra、lonafamib、米泼昔芬、米诺屈酸酯、ms-209、脂质体mtp-pe、mx-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲特、奥利默森、onco-tcs、osidem、紫杉醇聚谷氨酸酯、帛米酸钠、pn-401、qs-21、夸西洋、r-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺维a酸、沙铂、西奥骨化醇、t-138067、tarceva、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素αl、嘎唑呋林、tipifarnib、替拉扎明、tlk-286、托瑞米芬、反式mid-lo7r、伐司朴达、伐普肽、vatalanib、维替泊芬、长春氟宁、z-100和唑来麟酸或它们的组合。
[0091]
下列实施例中所用试剂均可购买得到。
[0092]
以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。
[0093]
实施例1：化合物cq-1232的制备
[0094][0095]
化合物3的制备(a-b)：
[0096]
将化合物1(50g,308.6mmol)溶于250ml异丙醇中，室温搅拌3小时后，旋干，再溶于300ml二氯甲烷中，0℃下，滴入19ml肼(50％水溶液)，再转室温反应过夜，反应完毕后，水洗，有机相旋干，得24g粗产物3，无需进一步纯化，可直接用于下一步。
[0097]
化合物10的制备(c-g)：
[0098]
(c):将化合物4(9.5g,69.8mmol)，碳酸钾(19.3g，140mmol)溶于100ml丙酮，再加入溴化苄(9.1ml,77mmol)，置于60℃反应过夜，反应完毕后，抽滤，旋干，得14g粗产物5，无需进一步纯化，可直接用于下一步。
[0099]
(d):将化合物5(10.6g，47mmol)，化合物3(22.2g，188mmol)，溶于80ml甲醇中，再加入冰醋酸(0.54ml，9.4mmol)，80℃回流反应8小时后，冷却至室温，抽滤，得14g化合物6，收率91％。
[0100]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.68
–
7.82(m,3h),7.29-7.49(m,5h),6.96(d,j＝8.8hz,2h),5.04
–
5.17(m,3h),2.16(s,3h),1.33(d,j＝6.0hz,6h).
[0101]
(e):将化合物6(4g，12.27mmol)溶于25ml干燥四氢呋喃，氩气保护，0℃下滴入
20ml二异丙基氨基锂(2m四氢呋喃溶液)，搅拌1小时后，转至-78℃，再滴入化合物7(3.3g，18.4mmol)的四氢呋喃溶液25ml，滴完后缓慢升至室温反应，待反应完毕后用饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样，过柱得2g粗产物8。
[0102]
(f):将化合物8(2g，4.47mmol)溶于30ml四氢呋喃中，加入10ml甲磺酸(3n水溶液)，80℃回流4小时后，乙酸乙酯萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤三遍，有机相加硅胶拌样过柱得650mg化合物9，收率34％。
[0103]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.29(d,j＝8.8hz,2h),7.86(d,j＝8.4hz,2h),7.61(d,j＝8.8hz,2h),7.26
–
7.49(m,5h),7.05(d,j＝8.8hz,2h),6.72(s,1h),5.07
–
5.18(m,3h),1.29(d,j＝6.4hz,6h).
[0104]
(g)：将化合物9(650mg，1.42mmol)溶于20ml乙酸乙酯，加入65mg钯碳，再用氢气换气三次，室温反应6小时，抽滤，旋干得480mg化合物10，收率99％。
[0105]1h nmr(400mhz,dmso)δ9.73(s,1h),7.74(d,j＝8.8hz,2h),7.15(d,j＝8.4hz,2h),6.86(d,j＝8.8hz,2h),6.80(s,1h),6.62(d,j＝8.4hz,2h),5.37(s,2h),4.94
–
5.07(m,1h),1.21(d,j＝6.4hz,6h).
[0106]
化合物13的制备((h-i))：
[0107]
(h):将乙腈(2.3ml，44.1mmol)溶于50ml干燥四氢呋喃，-78℃搅拌15分钟后，加入28ml正丁基锂(1.6m己烷溶液)，再移至-30℃搅拌30分钟，再滴入化合物11(5g，29.4mmol)，反应过夜，饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相旋干，得5.1g粗产物12，直接用于下一步。
[0108]
(i):将盐酸羟胺(3.94g，56.6mmol)溶于50ml水中，0℃下加入碳酸氢钠(4.8g，56.6mmol)，调ph～8，再加入30ml化合物12的甲醇溶液，移至65℃回流6小时后，冷却至室温，用浓盐酸调ph～1，再置于70℃回流3小时，反应完毕后，用4n氢氧化钠溶液调ph～8，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样过柱得化合物1.3g化合物13，收率23％。
[0109]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.77(s,1h),4.20(s,2h),1.47(s,6h).
[0110]
化合物14的制备：
[0111]
(j)将化合物13(1.3g，6.7mmol)，碳酸钾(1.38g，10mmol)溶于20ml四氢呋喃，再加入氯甲酸苯酯(1ml，8mmol)，室温反应4小时后，加水，乙酸乙酯萃取，旋干，再加入20ml正己烷，搅拌1小时，抽滤，滤饼干燥，得1.78g化合物14，收率85％。
[0112]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.07(s,1h),7.37-7.45(m,2h),7.24
–
7.31(m,1h),7.16-7.22(m,2h),6.85(s,1h),1.57(s,6h).
[0113]
化合物cq-1232的制备：
[0114]
(k):将化合物10(200mg，0.59mmol)，化合物14(280mg，0.89mmol)，4-二甲氨基吡啶(7mg，0.06mmol)溶于3mln，n-二甲基甲酰胺，再加入三乙胺(0.25ml，1.77mmol)，室温反应过夜，反应完毕后，加水，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样，过柱分离得200mg化合物15，收率61％。
[0115]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.10(s,1h),8.98(s,1h),7.68(d,j＝8.4hz,2h),7.52(d,j＝8.4hz,2h),7.36(d,j＝8.4hz,2h),6.82(d,j＝8.4hz,2h),6.48-6.57(m,2h),5.04
–
5.14(m,1h),1.60(s,6h),1.21(d,j＝6.0hz,6h).
[0116]
(l):将化合物15(100mg，0.18mmol)，化合物16(44ul，0.36mmol)，三苯基膦(94mg，
0.36mmol)溶于1ml干燥四氢呋喃中，氩气保护，0℃下，滴入偶氮二甲酸二异丙酯(71ul，0.36mmol)，再转到室温反应过夜，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相拌样，过柱分离得48mg化合物cq-1232，收率40％。
[0117]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.16(s,1h),8.48(s,1h),7.83(d,j＝8.8hz,2h),7.57(d,j＝8.4hz,2h),7.39(d,j＝8.8hz,2h),6.95(d,j＝8.8hz,2h),6.61(s,1h),6.34(s,1h),5.05
–
5.16(m,1h),4.17(t,j＝5.6hz,2h),3.76(t,j＝4.4hz,4h),2.85(t,j＝5.6hz,2h),2.63(t,j＝5.6hz,4h),1.59(s,6h),1.24(d,j＝6.0hz,6h).
[0118]
实施例2：化合物cq-1231的制备
[0119][0120]
化合物19的制备：
[0121]
(a):将化合物17(4.6g，32.7mmol)，化合物18(5g，32.7mmol)，氢氧化钾(5.5g，98.1mol)溶于100ml无水乙醇，80℃回流过夜，反应完毕后，旋去溶剂，加水，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样，过柱分离得5.4g化合物19，收率60％。
[0122]1h nmr(400mhz,dmso)δ10.44(brs,1h),7.94(t,j＝8.8hz,1h),7.75-7.82(m,2h),7.69-7.74(m,2h),6.83(t,j＝8.4hz,1h),6.61
–
6.75(m,2h),6.20(s,2h).
[0123]
化合物20的制备：
[0124]
(b):将化合物19(5g，18.2mmol)，对甲苯磺酰肼(5.1g，27.3mmol)溶于100ml无水乙醇，再加入碘(455mg，1.8mmol)，110℃回流20分钟后，加入碳酸钾(7.5g，54.6mmol)，反应过夜，反应完毕后，旋干溶剂，加水，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样，过柱分离得2.5g化合物20，收率48％。
[0125]1h nmr(400mhz,dmso)δ12.98(s,1h),10.08(s,1h),7.62
–
7.78(m,1h),7.40-7.49(m,1h),7.29-7.38(m,1h),6.58
–
6.87(m,4h),5.31(s,2h).
[0126]
化合物21的制备：
[0127]
(c):将化合物20(400mg，1.39mmol)，化合物14(656g，2.09mmol)，4-二甲氨基吡啶(17mg，0.14mmol)溶于5ml n，n-二甲基甲酰胺，再加入三乙胺(0.58ml，4.17mmol)，室温反应过夜，反应完毕后，加水，乙酸乙酯萃取，有机相旋干，再加入10ml dcm/meoh(40:1)，搅拌
1小时，抽滤，滤饼干燥得400mg化合物21，收率57％。
[0128]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.15(s,1h),9.85-10.36(m,2h),8.86(s,1h),8.17(t,j＝8.8hz,1h),7.57-7.77(m,3h),6.89
–
6.98(m,2h),6.64-6.76(m,2h),1.57(s,6h).
[0129]
化合物cq-1231的制备：
[0130]
(d):将化合物20(100mg，0.2mmol)，化合物16(48ul，0.4mmol)，三苯基膦(105mg，0.4mmol)溶于1ml干燥四氢呋喃，氩气保护，0℃下，滴入偶氮二甲酸二异丙酯(79ul，0.4mmol)，再转至室温反应过夜，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样，过柱得15mg化合物cq-1231，收率12％。
[0131]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.26(s,1h),10.05(s,1h),8.88(s,1h),8.10-8.23(m,1h),7.58-7.87(m,3h),6.80
–
7.10(m,4h),4.08-4.23(m,2h),3.54-3.67(m,4h),2.61-2.77(m,2h),2.42-2.48(m,4h),1.56(s,6h).
[0132]
实施例3：化合物cq-1223的制备
[0133][0134]
合成路线类似于实施例2。
[0135]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.07(s,1h),9.71(s,1h),8.93(s,1h),7.69
–
7.81(m,4h),7.53(d,j＝8.4hz,2h),6.98-7.06(m,3h),6.92(s,1h),4.13(t,j＝5.6hz,2h),3.59(t,j＝4.8hz,4h),2.71(t,j＝5.6hz,2h),2.46-2.50(m,4h),1.57(s,6h).
[0136]
实施例4：化合物cq-1227的制备
[0137]
将化合物cq-1223(150mg，0.26mmol)溶于5ml甲醇，再加入甲磺酸(83ul，1.28mmol)，置于70℃回流过夜，反应完毕后，旋干溶剂，加入2ml乙醇，冷却析出固体，抽滤，5ml乙醇洗涤，滤饼干燥得88mg化合物cq-1227，收率44％。
[0138][0139]1h nmr(400mhz,dmso)δ9.91(s,1h),9.76(s,1h),9.02(s,1h),7.73-7.84(m,4h),7.55(d,j＝8.8hz,2h),7.11(d,j＝8.8hz,2h),7.05(s,1h),6.91(s,1h),4.38-4.45(m,2h),3.96-4.05(m,2h),3.73(t,j＝11.6hz,2h),3.51-3.65(m,4h),3.17-3.30(m,2h),2.37(s,6h),1.57(s,6h).
[0140]
实施例5：化合物cq-1226的制备
[0141][0142]
合成路线类似于实施例2。
[0143]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.11(s,1h),9.73(s,1h),8.95(s,1h),7.67-7.83(m,4h),7.46-7.59(m,2h),6.95-7.06(m,3h),6.92(s,1h),4.04(t,j＝6.4hz,2h),2.38(t,j＝7.2hz,2h),2.17(s,6h),1.82-1.9(m,2h),1.57(s,6h).
[0144]
实施例6：化合物cq-1230的制备
[0145][0146]
合成路线类似于实施例2。
[0147]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.15(s,1h),10.03(s,1h),8.87(s,1h),8.17(t,j＝8.4hz,1h),7.60-7.77(m,4h),7.09(s,1h),7.04(d,j＝8.4hz,2h),6.92(s,1h),4.14(t,j＝5.6hz,2h),3.59(t,j＝4.4hz,4h),2.71(t,j＝6.0hz,2h),2.45-2.50(m,4h),1.57(s,6h).
[0148]
实施例7：化合物cq-1235的制备
[0149][0150]
合成路线类似于实施例2。
[0151]1h nmr(400mhz,dmso)δ7.68-7.80(m,4h),7.55(d,j＝8.4hz,2h),6.88-7.05(m,4h),4.10(t,j＝5.6hz,2h),2.69(t,j＝5.6hz,2h),2.41-2.51(m,4h),2.22-2.40(m,4h),2.14(s,3h),1.56(s,6h).
[0152]
实施例8：化合物cq-1233的制备
[0153][0154]
合成路线类似于实施例2。
[0155]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.09(s,1h),9.73(s,1h),8.95(s,1h),7.69-7.84(m,4h),7.55(d,j＝8.8hz,2h),6.89-7.04(m,4h),4.03(t,j＝6.4hz,2h),3.57(t,j＝4.8hz,4h),2.42(t,j＝7.2hz,2h),2.31-2.40(m,4h),1.82-1.94(m,2h),1.56(s,6h).
[0156]
实施例9：化合物cq-1234的制备
[0157][0158]
化合物22的制备：合成路线类似于实施例2。
[0159]
化合物cq-1234的制备：
[0160]
将化合物22(100mg，0.16mmol)溶于2ml三氟乙酸，室温搅拌1小时后，旋干，用饱和碳酸氢钠溶液调ph～8，乙酸乙酯萃取，有机相旋干，加硅胶拌样，过柱分离得51mg化合物cq-1234，收率60％。
[0161]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.12(s,1h),9.15(s,1h),7.68-7.83(m,4h),7.54(d,j＝8.4hz,2h),6.89-7.07(m,4h),4.06(t,j＝5.6hz,2h),2.87(t,j＝5.2hz,2h),2.36(s,3h),1.56(s,6h).
[0162]
实施例10：化合物cq-1244的制备
[0163][0164]
合成路线类似于实施例2。
[0165]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.07(s,1h),9.76(s,1h),9.01(s,1h),7.77(d,j＝8.4hz,2h),7.54(d,j＝8.4hz,2h),7.39-7.45(m,1h),7.34(d,j＝8.0hz,1h),7.00-7.10(m,2h),6.93(s,1h),4.11(t,j＝6.0hz,2h),3.85(s,3h),3.59(t,j＝4.4hz,4h),2.71(t,j＝6.0hz,2h),2.43-2.50(m,4h),1.57(s,6h).
[0166]
实施例11：化合物cq-1246的制备
[0167][0168]
合成路线类似于实施例2。
[0169]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.21(s,1h),10.06(s,1h),8.88(s,1h),8.18(t,j＝8.4hz,1h),7.60-7.76(m,2h),7.41(m,1h),7.33(d,j＝8.4hz,1h),7.15(s,1h),7.07(d,j＝8.0hz,1h),6.92(s,1h),4.11(t,j＝6.0hz,2h),3.85(s,3h),3.59(t,j＝4.8hz,4h),2.71(t,j＝5.6hz,2h),2.45-2.55(m,4h),1.57(s,6h)
[0170]
实施例12：化合物cq-1255的制备
[0171][0172]
合成路线类似于实施例2。
[0173]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.24(s,1h),9.74(s,1h),8.96(s,1h),7.90(s,1h),7.65-7.85(m,3h),7.45-7.65(m,2h),7.17-7.30(m,1h),7.09(s,1h),6.93(s,1h),3.99-4.31(m,2h),3.35-3.69(m,4h),2.63-2.80(m,2h),2.40-2.60(m,4h),1.55(s,6h).
[0174]
实施例13：化合物cq-1256的制备
[0175][0176]
合成路线类似于实施例2。
[0177]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.20(s,1h),9.73(s,1h),8.95(s,1h),7.69-7.81(m,2h),7.66(d,j＝12.8hz,1h),7.49-7.61(m,3h),7.16-7.33(m,1h),7.08(s,1h),6.92(s,1h),4.11-4.30(m,2h),3.50-3.65(m,4h),2.67-2.79(m,2h),2.40-2.58(m,4h),1.56(s,6h).
[0178]
实施例14：化合物cq-1257的制备
[0179][0180]
合成路线类似于实施例2。
[0181]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.17&12.88(two s,1h),9.71(s,1h),8.93(s,1h),7.70-7.86(m,2h),7.54(d,j＝8.0hz,2h),7.43(s,1h),6.85-6.98(m,2h),6.85(d,j＝8.4hz,1h),6.79(s,1h),4.11(t,j＝5.2hz,2h),3.50-3.66(m,4h),2.70(t,j＝5.2hz,2h),2.33-2.48(m,4h),1.56(s,6h).
[0182]
实施例15：化合物cq-1258的制备
[0183][0184]
合成路线类似于实施例2。
[0185]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.35&13.08(two s,1h),9.73&9.70(two s,1h),8.98&8.91(two s,1h),7.38-7.93(m,5h),6.94-7.21(m,3h),6.92(s,1h),4.05-4.28(m,2h),3.59(t,j＝4.8hz,4h),2.70(t,j＝4.8hz,2h),2.46-2.52(m,4h),1.56(s,6h).
[0186]
实施例16：化合物cq-1259的制备
[0187][0188]
合成路线类似于实施例2。
[0189]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.32&13.14(two s,1h),9.71(s,1h),8.95(s,1h),7.66-7.92(m,3h),7.45-7.61(m,2h),6.82-7.04(m,4h),4.15(t,j＝5.6hz,2h),3.59(t,j＝4.4hz,4h),2.71(t,j＝5.6hz,2h),2.41-2.49(m,4h),1.56(s,6h).
[0190]
实施例17：化合物cq-1260的制备
[0191]
[0192]
合成路线类似于实施例2。
[0193]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.10(s,1h),10.07(s,1h),8.28(s,1h),7.86-8.03(m,1h),7.56-7.80(m,4h),6.98-7.07(m,3h),6.89(s,1h),4.13(t,j＝5.6hz,2h),3.56-3.64(m,4h),2.70(t,j＝5.6hz,2h),2.45-2.49(m,4h),2.30(s,3h),1.56(s,6h).
[0194]
实施例18：化合物cq-1269的制备
[0195][0196]
合成路线类似于实施例2。
[0197]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.30&13.14(two s,1h),9.78(s,1h),9.18(s,1h),7.67-8.02(m,3h),7.62(d,j＝13.6hz,1h),7.15-7.34(m,1h),6.95-7.08(m,2h),6.79-6.95(m,2h),4.07-4.19(m,2h),3.51-3.64(m,4h),2.64-2.77(m,2h),2.38-2.49(m,4h),1.56(s,6h).
[0198]
实施例19：化合物cq-1270的制备
[0199][0200]
合成路线类似于实施例2。
[0201]1h nmr(400mhz,dmso)δ13.17&12.87(two s,1h),9.71(s,1h),8.87(s,1h),7.66-7.86(m,2h),7.37-7.58(m,3h),6.95-7.09(m,2h),6.92(s,1h),6.79(s,1h),4.13(t,j＝5.6hz,2h),3.59(t,j＝4.8hz,4h),2.72(t,j＝5.2hz,2h),2.38-2.48(m,4h),1.56(s,6h).
[0202]
实施例20：化合物cq-1245的制备
[0203][0204]
化合物23的制备
[0205]
(a):将4-羟基苯甲腈(10g,84mmol)，k2co3(17.4g,126mmol)溶于100ml dmf，再加入bnbr(15.8g,92.4mmol)，50℃反应至原料耗尽，加水，乙酸乙酯萃取，旋干，得到16.5化合物23，收率94％。
[0206]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.58(d,j＝8.8hz,2h),7.46
–
7.33(m,5h),7.02(d,j＝8.8hz,2h),5.12(s,2h).
[0207]
化合物24的制备
[0208]
(b):将化合物23(8g,37.7mmol)溶于四氢呋喃中，氩气保护下加入到lihdms(41.5ml,41.5mmol)的四氢呋喃溶液中，室温反应，反应完毕后，加入5n的盐酸异丙醇溶液进行淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样过柱纯化，得7.2g化合物24，产率73％。
[0209]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.38(s,2h),9.17(s,2h),7.90(d,j＝9.2hz,2h),7.47
–
7.33(m,5h),7.21(d,j＝8.8hz,2h),5.23(s,2h).
[0210]
化合物26的制备
[0211]
(c):将化合物24(3.2g,12.16mmol)，khco3(3g，30.4mmol)溶于40ml thf/h2o(4：1)，加热至90℃，缓慢滴入化合物25(3.6g,14.6mmol)的thf溶液(30ml)，继续搅拌，至原料耗尽，旋干，加水，乙酸乙酯萃取，加硅胶拌样，过柱分离得到2.1g化合物26，收率47％。
[0212]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.80(s,1h),8.25(d,j＝8.8hz,2h),8.10(d,j＝8.8hz,2h),8.05(s,1h),7.96(d,j＝8.8hz,2h),7.49-7.31(m,5h),7.14(d,j＝8.8hz,2h),5.17(s,2h).
[0213]
化合物27的制备
[0214]
(d):将化合物26(845mg,2.48mmol)，钯/碳(200mg)溶于20ml甲醇，氢气抽换气，室温反应过夜，反应完毕后，抽滤，滤液旋干，得240mg化合物27，产率38.6％。
[0215]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.90(brs,1h),7.85(d,j＝8.8hz,2h),7.50(d,j＝8.4hz,2h),7.28(s,1h),6.87(d,j＝8.8hz,2h),6.61(d,j＝8.4hz,2h).
[0216]
化合物cq-1245的制备
[0217]
(e):将化合物27(170mg,0.67mmol)，化合物14(320mg,1.02mmol)，dmap(19mg0.07mmol)溶于3ml n，n-二甲基甲酰胺，加入三乙胺(0.2mg,2.01mmol)，室温反应过夜，反应完毕后，乙酸乙酯萃取，有机相旋干，得254mg粗产物28，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0218]
(f):将化合物28(150mg,0.32mmol)，化合物16(83.4mg,0.64mmol)，三苯基磷(166.8mg,0.64mmol)溶于1ml无水四氢呋喃，0℃下加入偶氮二羧酸二异丙酯(129.4mg,0.64mmol)的四氢呋喃溶液1ml，移至室温反应过夜，反应完毕后，加碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样过柱得，得52mg化合物，产率27.9％。
[0219]1h nmr(400mhz,dmso)δ12.42(s,1h),9.69(s,1h),8.90(s,1h),7.92(d,j＝8.4hz,2h),7.76(d,j＝8.0hz,2h),7.55(s,1h),7.47(d,j＝8.0hz,2h),7.04(d,j＝8.4hz,2h),6.91(s,1h),4.14(t,j＝5.2hz,2h),3.55-3.64(m,4h),2.68-2.78(m,2h),2.50-2.57(m,4h),1.56(s,6h).
[0220]
实施例21：化合物cq-1253的制备
[0221][0222]
化合物30的制备
[0223]
(a):将化合物24(4.1g，15.3mmol)，化合物29(1.5g，10.1mmol)，碳酸铯(9.95g，30mmol)，溴化亚铜(73mg，0.51mmol)溶于30ml二甲基亚砜，120℃反应过夜，冷却至室温，加乙酸乙酯和水萃取，有机相加硅胶拌样，过柱分离得1.8g化合物30，收率48％。
[0224]1h nmr(400mhz,dmso)δ14.64(s,1h),8.42-8.25(m,4h),8.02(d,j＝8.8hz,2h),7.52-7.30(m,5h),7.19(d,j＝8.0hz,2h),5.18(s,2h).
[0225]
化合物32的制备
[0226]
(b):将化合物30(1.5g，4.03mmol)，溶于50ml四氢呋喃，加入化合物31(2.21ml，
24.18mmol)和对甲苯磺酸(139mg，0.806mmol)，85℃回流反应过夜，旋去thf，加乙酸乙酯和水萃取，有机相加硅胶拌样，过柱分离得1.3g化合物32，收率70％。
[0227]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.37(d,j＝9.2hz,2h),8.29(d,j＝9.2hz,2h),7.77(d,j＝8.8hz,2h),7.49-7.33(m,5h),7.14(d,j＝8.8hz,2h),5.37(dd,j＝10.0,2.8hz,1h),5.16(s,2h),4.25
–
4.17(m,1h),3.76-3.67(m,1h),2.67
–
2.53(m,1h),2.21-2.19(m,1h),1.97-1.89(m,1h),1.86-1.78(m,1h),1.69-1.66(m,1h),1.56-1.48(m,1h).
[0228]
化合物33的制备
[0229]
(c):将化合物32(1.3g，2.85mmol)溶于40ml meoh，加入260mg钯碳(10％)，h2换气三次，室温反应至原料耗尽，抽滤，滤液加硅胶拌样，过柱分离得336mg化合物33，收率34％。
[0230]1h nmr(400mhz,dmso)δ10.03&9.70(two s,1h),7.88
–
7.68(m,2h),7.64-7.41(m,2h),6.99-6.81(m,2h),6.77
–
6.56(m,2h),5.67&5.38(two s,2h),5.35
–
5.26(m,1h),4.09-4.03(m,1h),3.70-3.60(m,1h),2.44-2.29(m,1h),1.98-1.95(m,1h),1.92-1.83(m,1h),1.71-1.50(m,3h).
[0231]
化合物cq-1253的制备
[0232]
(d):将化合物33(330mg，0.98mmol)，化合物14(461mg，1.47mmol)，4-二甲氨基吡啶(12mg，0.01mmol)溶于5ml n，n-二甲基甲酰胺，加入三乙胺(298mg，2.94mmol)，70℃反应过夜。反应完毕后加乙酸乙酯和水萃取，有机相旋干，直接用于下一步。
[0233]
(e):将上一步粗产物，化合物16(262mg，2mmol)，三苯基膦(524mg，2mmol)溶于无水四氢呋喃(5ml)，ar保护，0℃下滴加偶氮二羧酸二异丙酯(404mg，2mmol)，滴完移至室温反应过夜。反应完毕后旋干，溶于5ml甲醇，再加入5ml 2n hcl/meoh溶液，室温搅拌1h，加水，饱和碳酸氢钠溶液中和，乙酸乙酯萃取，有机相拌样，过柱分离得98mg化合物cq-1253，三步收率17％。
[0234]1h nmr(400mhz,dmso)δ14.23(s,1h),9.75(s,1h),9.01(s,1h),7.95-8.08(m,4h),7.50-7.67(m,2h),6.99-7.17(m,2h),6.93(s,1h),4.10-4.22(m,2h),3.54-3.66(m,4h),2.69-2.80(m,2h),2.44-2.49(m,4h),1.57(s,6h).
[0235]
实施例22：化合物cq-1254的制备
[0236][0237]
化合物39的制备：
[0238]
(a):将化合物35(4.7g，20.6mmol)，化合物36(2g，10.3mmol)，碳酸铯(10g，
30.9mmol)，四三苯基膦钯(596mg，0.52mmol)混于100ml反应瓶中，ar保护，加入18ml二氧六环/水(5：1)混合溶剂，100℃反应过夜，加乙酸乙酯和水萃取，有机相旋干，再用pe：ea(1：1)20ml搅拌1h，抽滤，滤饼干燥得1.6g粗产物化合物37；
[0239]
(b):将上一步得到的粗产物化合物37(910mg，3.64mmol)，化合物38(1.03g，7.28mmol)溶于12ml二甲基亚砜，再加入碳酸钾(1.51g，10.92mmol)，100℃反应过夜，有机相加乙酸乙酯和水萃取，有机相旋干拌样，过柱分离得1.9g化合物39，收率76％。
[0240]1h nmr(400mhz,dmso)δ8.54-8.58(m,1h),8.36-8.44(m,3h),8.03(d,j＝9.2hz,2h),7.81(d,j＝8.8hz,2h),7.31
–
7.50(m,5h),7.08(d,j＝8.8hz,2h),5.14(s,2h).
[0241]
化合物40的制备：
[0242]
(c):将化合物39(1mg，2.7mmol)溶于10ml三氟乙酸，50℃反应4h。反应完毕后，加水，再用饱和碳酸氢钠溶液中和，乙酸乙酯萃取，有机相旋干拌样，过柱分离得580mg化合物40，收率77％。
[0243]1h nmr(400mhz,dmso)δ9.49(s,1h),8.54(s,1h),8.39(d,j＝9.2hz,2h),8.29(s,1h),8.02(d,j＝9.2hz,2h),7.69(d,j＝8.4hz,2h),6.81(d,j＝8.4hz,2h).
[0244]
化合物42的制备：
[0245]
(d):将化合物40(200mg，0.71mmol)，化合物41(586mg，2.13mmol)溶于5ml乙腈中，加入碳酸铯(1.15g，3.55mmol)，80℃回流过夜。反应完毕后，加乙酸乙酯和水萃取，有机相拌样，过柱分离得220mg化合物42，收率78％。
[0246]1h nmr(400mhz,dmso)δ8.55(s,1h),8.40(d,j＝9.2hz,2h),8.38(s,1h),8.03(d,j＝8.8hz,2h),7.79(d,j＝8.4hz,2h),7.00(d,j＝8.8hz,2h),4.12(t,j＝5.6hz,2h),3.59(t,j＝4.4hz,4h),2.71(t,j＝5.6hz,2h),2.46-2.49(m,4h).
[0247]
化合物cq-1254的制备
[0248]
(e):将化合物42(200mg，0.508mmol)，溶于2ml乙醇/水(4：1)混合溶剂中，加入还原铁粉(142mg，2.54mmol)，氯化铵(217mg，4.06mmol)，80℃反应1h。反应完毕后，用硅藻土抽滤，滤液加乙酸乙酯和水，有机相旋干得150mg粗产物43，直接用于下一步。
[0249]
(f):将粗产物43(150mg，0.412mg)，化合物14(194mg，0.618mmol)和4-二甲氨基吡啶(5mg，0.04mmol)溶于2ml n，n-二甲基甲酰胺，加入三乙胺(125mg，1.24mmol)，70℃反应过夜。反应完毕后，加乙酸乙酯和水萃取，有机相拌样，过柱分离得110mg化合物cq-1254，收率46％。
[0250]1h nmr(400mhz,dmso)δ9.76(s,1h),9.00(s,1h),8.22(s,1h),8.10(s,1h),7.76(d,j＝8.0hz,2h),7.54-7.69(m,4h),6.98(d,j＝8.0hz,2h),6.92(s,1h),4.11(t,j＝5.6hz,2h),3.51-3.65(m,4h),2.64-2.76(m,2h),2.43-2.50(m,4h),1.56(s,6h).
[0251]
实施例23：化合物cq-1252的制备
[0252][0253]
化合物51的制备
[0254]
(a):将化合物44(5g，32.9mmol)，苄溴(6.8g，40mmol)，碳酸钾(6.8g，49mol)溶于50ml丙酮，60℃反应过夜，反应完毕后，冷却至室温，乙酸乙酯萃取，旋干得7.7g粗产物45，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0255]
(b):将化合物45(7.7g，31.84mmol)，50％水合肼(15.9g，318.2mmol)溶于100ml甲醇和50ml四氢呋喃中，70℃反应过夜，反应完毕后，旋干溶剂，二氯甲醇萃取，旋干得7.2g粗产物46，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0256]
(c):将化合物47(2.76g，16.53mmol)，hobt(3.12g，23.14mmol)溶于200mln，n-二甲基甲酰胺，0℃下加入edci(4.42g，23.14mmol)，室温反应1小时后加入化合物46(4g，16.53mmol)，室温反应3h后，加水，抽滤，乙醚洗涤得6.02g粗产物化合物48，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0257]
(d):将化合物48(6.02g,15.39mmol)溶于50ml二氯亚砜，氩气保护下90℃反应过夜，反应完毕后，旋去二氯亚砜，二氯甲烷打浆，抽滤得4.91g粗产物化合物49，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0258]
(e):将化合物49(1.5g,3.84mmol)，钯/碳(400mg)溶于50ml甲醇，氢气抽换气，室温反应过夜，反应完毕后，抽滤，滤饼加入丙酮溶解，加热，趁热抽滤，得847mg粗产物50，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0259]
(f):将化合物50(300mg,1.19mmol)，化合物14(562.1mg,1.79mmol)，dmap(14.7mg 0.12mmol)溶于6ml n，n-二甲基甲酰胺，加入三乙胺(361.2mg,3.57mmol)，70℃反应过夜，反应完毕后，乙酸乙酯萃取，旋干，用5ml pe：ea(1：1)打浆，抽滤得150mg化合物51，产率29％。
[0260]1h nmr(400mhz,dmso)δ10.34(s,1h),9.81(s,1h),9.22(s,1h),8.03(d,j＝8.0hz,2h),7.94(d,j＝8.0hz,2h),7.70(d,j＝8.8hz,2h),6.97(d,j＝8.8hz,2h),6.93(s,1h),1.56(s,6h).
[0261]
化合物cq-1252的制备
[0262]
(g):将化合物51(150mg,0.34mmol)，化合物16(89.2mg,0.68mmol)，三苯基磷(178.4mg 0.68mmol)溶于1ml四氢呋喃，0℃下加入diad(137.5mg,0.68mmol)的四氢呋喃溶液，室温反应过夜，反应完毕后，加碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样，过柱得57mg化合物cq-12152，产率29％。
[0263]1h nmr(600mhz,dmso)δ9.86(s,1h),9.27(s,1h),7.99-8.10(m,4h),7.70(d,j＝8.4hz,2h),7.17(d,j＝8.4hz,2h),6.94(s,1h),4.19(t,j＝5.4hz,2h),3.59(t,j＝3.2hz,4h),2.72(t,j＝5.4hz,2h),2.44-2.51(m,4h),1.57(s,6h).
[0264]
实施例24：化合物cq-1262的制备
[0265][0266]
化合物56的制备
[0267]
(a):将化合物52(2g,9.1mmol)，叠氮化钠(890.6mg,13.7mmol)，抗坏血酸钠(90.1mg,0.46mmol)，碘化亚铜(173.3mg,0.9mmol)，n,n'-二甲基乙二胺(123.4mg,1.4mmol)溶于无水乙醇/水(7：3)，60℃反应过夜，反应完毕后，乙酸乙酯萃取，旋干得1.09g粗产物53，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0268]
(b):将化合物53(1.09g,8.07mmol)，对硝基苯乙炔(1.19g,8.07mmol)，碘化亚铜(154.3mg,0.81mmol)溶于30mln，n-二甲基甲酰胺中，60℃反应，反应完毕后，乙酸乙酯萃取，旋干得2.2g粗产物54，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0269]
(c):将化合物54(1g,3.54mmol)，化合物55(989.5mg,5.32mmol)，碳酸铯(3.46g,10.62mmol)溶于20ml n，n-二甲基甲酰胺中，60℃反应，反应完毕后，乙酸乙酯萃取,有机相加硅胶拌样过柱得550mg化合物56，产率39.3％
[0270]1h nmr(400mhz,dmso)δ9.46(s,1h),8.37(d,j＝8.0hz,2h),8.20(d,j＝8.0hz,2h),7.85(d,j＝8.0hz,2h),7.20(d,j＝8.0hz,2h),4.19(t,j＝5.2hz,2h),3.53-3.63(m,4h),2.71(tj＝5.2hz,2h),2.37-2.49(m,4h).
[0271]
化合物cq-1262的制备
[0272]
(d):将化合物56(550mg,1.39mmol)，氯化铵(594.8mg,11.12mmol)溶于无水乙醇/水(4：1)，搅拌下加入铁粉(389.2mg,6.95mmol)，80℃回流反应，反应完毕后，趁热抽滤，乙酸乙酯萃取，旋干得147mg粗产物化合物57，无需进一步纯化，直接用于下一步。
[0273]
(e):将化合物57(147mg,0.4mmol)，化合物14(188.4mg,0.6mmol)，dmap(4.9mg,0.04mmol)溶于3mln，n-二甲基甲酰胺，加入三乙胺(121.4mg,1.2mmol)，70℃下反应过夜，反应完毕后，乙酸乙酯萃取，有机相加硅胶拌样过柱得，得139mg化合物cq-1262，产率59％。
[0274]1h nmr(400mhz,dmso)δ9.74(s,1h),9.12(s,1h),8.97(s,1h),7.87(d,j＝8.8hz,2h),7.84(d,j＝9.2hz,2h),7.60(d,j＝8.8hz,2h),7.18(d,j＝8.8hz,2h),6.93(s,1h),4.18(t,j＝5.6hz,2h),3.59(t,j＝4.8hz,4h),2.73(t,j＝5.6hz,2h),2.45-2.49(m,4h),1.57(s,6h).
[0275]
实施例25化合物对携带ret不同突变背景baf3模型细胞的增殖抑制活性
[0276]
用cck-8法测试本发明化合物对携带ret不同突变背景baf3模型细胞的增殖抑制活性：
[0277]
所用于对照试验的化合物如下：
[0278]
selpercatinib是有效的选择性ret抑制剂，购买自selleck公司。
[0279]
步骤如下：
[0280]
1)细胞接种：处于细胞对数生长期的各种肿瘤细胞分别按同样密度接种在不同96孔板中(3000-10000个细胞/100μl/孔)。
[0281]
2)工作液配制：以细胞培养所需相应培养基作为稀释液(含或不含溶媒dmso)，稀释受试化合物和对照化合物储备液，获得所需浓度为终浓度3倍的系列浓度的工作液，各浓度组中的溶媒dmso含量与溶媒对照组相一致。
[0282]
3)共孵育：接种24hr后，向96孔板加入化合物系列浓度的母液100μl/孔，混匀后共培养72hr。所有组别至少3个复孔，每个化合物6个浓度。空白对照组：只加培养基，不加细胞和药物，排除培养基对比色的干扰。
[0283]
4)吸光度测定：从96孔板吸走培养基后，每孔加入10μlcck-8溶液，共培养4hr后，充分振荡使其均匀，在酶标仪上测定a450及a650处的吸光值。
[0284]
5)数据处理：得到的a450-a650原始数据，得到各处理孔的细胞存活率(计算方法如下)；然后将细胞存活率数据及其对应的化合物浓度输入graphpadprism 5demo软件，使用非线性回归模型计算化合物对不同细胞的ic
50
值。细胞存活率的计算：细胞存活率(％)＝[(as-ac)/(ab-ac)]
×
100％](as：实验孔；ab：溶媒对照孔；ac：空白孔)。结果如表1所示。
[0285]
表1化合物对携带ret不同突变背景baf3模型细胞的增殖抑制活性(半数抑制浓度)
[0286][0287]
注：“\”为未进行该项活性测试
[0288]
由表1结果可知：本发明的化合物对携带ret不同突变背景的baf3模型细胞的增殖具有较强的抑制活性。
[0289]
实施例26化合物cq-1227的药代动力学实验
[0290]
一、制备对照化合物a：
[0291]
(1)制备化合物wfk-001：
[0292][0293]
合成路线:
[0294][0295]
步骤a:化合物59的制备
[0296]
将化合物58(1.8g,7.53mmol)，水合肼(22.59mmol)，20ml冰醋酸混合后在80℃下回流反应至化合物58基本转化，向反应体系中加水，乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，过柱分离得到化合物59(495mg,收率26.2％)。esi-ms m/z 252.1(m h)

.
[0297]
步骤b:化合物61的制备
[0298]
将化合物59(495mg,1.97mmol)，苯基(5-叔丁基异噁唑-3-氨基)甲酸酯(化合物60)(768mg,3mmol)，dmap(13mg,0.12mmol)和三乙胺(598mg,5.91mmol)，在thf(15ml)中60℃下搅拌反应过夜。反应完成后，倒入水中，乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，过柱分离得化合物61(590mg,收率72％)。esi-ms m/z418.1(m h)

.
[0299]
步骤c:wkf-001的制备
[0300]
将化合物61(590mg,1.42mmol)，n-(2-氯乙基)，吗啉盐酸盐(化合物55)(396mg,2.13mmol),k2co3(588mg,4.26mmol)以及tbai(52mg,0.14mmol)溶解在15ml dmf中，60℃下加热反应至大部分原料转化即停止反应，向反应体系中加水，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后过柱分离得到化合物wkf-001(230mg,收率31％)。
[0301]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.12(s,1h),9.55(s,1h),8.92(s,1h),7.73-7.75(m,4h),7.53(d,j＝7.6hz,2h),7.00-7.02(m,3h),6.53(s,1h),4.11(t,j＝5.4hz,2h),3.58(t,j＝4.4hz,4h),2.69(t,j＝5.6hz,2h),2.47(t,j＝4.4hz,4h),1.30(s,9h).esi-ms m/z 531.2(m h)

.
[0302]
(2)制备对照化合物a：
[0303][0304]
合成方法同实施例4。
[0305]1h nmr(400mhz,dmso)δ9.97(s,1h),9.62(s,1h),9.05(s,1h),7.81(d,j＝8.8hz,2h),7.76(d,j＝8.8hz,2h),7.56(d,j＝8.4hz,2h),7.12(d,j＝8.8hz,2h),7.08(s,1h),6.52(s,1h),4.42(t,j＝4.4hz,2h),3.96-4.05(m,2h),3.74(t,j＝12.0hz,2h),3.50-3.66(m,4h),3.17-3.30(m,2h),2.42(s,6h),1.30(s,9h).
[0306]
二、药代动力学实验：单次静脉注射或灌胃口服给予sd大鼠化合物cq-1227或者化合物a后，于不同时间点采集血样，lc-ms/ms测定给予受试物后大鼠血浆中受试物的浓度并计算相关参数。
[0307]
静脉注射选用3只雄性大鼠，给药剂量为5mg/kg，药物浓度为1mg/ml,给药体积为5ml/kg。采血点时间为：0.083h,0.25h,0.5h,1h,2h,4h,8h,24h。
[0308]
口服给药选用3只雄性大鼠，给药剂量为25mg/kg，药物浓度为2.5mg/ml,给药体积为10ml/kg。采血点时间为：0.25h,0.5h,1h,2h,4h,6h,8h,24h。
[0309]
经颈静脉采血，每个样品采集约0.20ml，肝素钠抗凝，采集后放置冰上。并于1小时之内离心分离血浆(离心条件：6800g，6分钟，2-8℃)。血浆样本在分析前存放于-80℃冰箱内。
[0310]
通过不同时间点的血药浓度数据，运用phoenix winnonlin7.0计算药代动力学参数，提供auc0-t、auc0-∞、mrt0-∞、cmax、tmax和t1/2等参数及其平均值和标准差。结果如表2所示。
[0311]
表2化合物cq-1227的药代动力学实验结果
[0312][0313][0314]
由上表可见，化合物cq-1227与相应的对照化合物a相比(二者的差别为三氟甲基
换成了甲基)，化合物cq-1227在注射和口服时，具有更高的血药浓度和更长的半衰期。可见与对照化合物a相比，化合物cq-1227中三氟甲基的引入，对药代动力学性质具有更好的改善作用。
[0315]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以下实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0316]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。