双特异性抗体及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种抗体，其特征在于，包括：第一抗原结合区，所述第一抗原结合区具有4-1bb结合活性；第二抗原结合区，所述第二抗原结合区具有nectin-4结合活性。2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述第一抗原结合区包括第一重链可变区和第一轻链可变区，所述第一重链可变区的c端和所述第一轻链可变区的n端相连或所述第一重链可变区的n端和所述第一轻链可变区的c端相连；任选地，所述第一抗原结合区进一步包括第一连接肽，所述第一重链可变区的c端和所述第一连接肽的n端相连，所述第一连接肽的c端与所述第一轻链可变区的n端相连，或所述第一轻链可变区的c端与所述第一连接肽的n端相连，所述第一连接肽的c端与所述第一重链可变区的n端相连；任选地，所述第一重链可变区包括seq id no：1～3任一项所示的cdr序列；或所述第一轻链可变区包括seq id no：4～6任一项所示的cdr序列；任选地，所述第一重链可变区具有分别如seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3所示的cdr1、cdr2、cdr3序列；任选地，所述第一轻链可变区具有分别如seq id no：4、seq id no：5、seq id no：6所示的cdr1、cdr2、cdr3序列；任选地，所述第一连接肽具有如seq id no：7所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述第一抗原结合区进一步包括第一fc肽段，所述第一轻链可变区的c端与所述第一fc肽段的n端相连，或所述第一重链可变区的c端与所述第一fc肽段的n端相连；任选地，所述第一fc肽段包括第一铰链区、第一ch2区和第一ch3区；任选地，所述第一铰链区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的铰链区片段；任选地，所述第一ch2区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的ch2区片段；或者所述第一ch2区相比于人源野生型igg1的ch2区片段，具有l234a和/或l235a突变；任选地，所述第一ch3区相比于人源野生型igg1的ch3区片段，具有t366w和/或s354c突变；任选地，所述第一抗原结合区进一步包括第二连接肽；任选地，所述第二连接肽的n端与所述第一轻链可变区的c端相连，所述第二连接肽的c端与所述第一fc肽段的n端相连；或所述第二连接肽的n端与所述第一重链可变区的c端相连，所述第二连接肽的c端与所述第一fc肽段的n端相连；任选地，所述第二连接肽具有如seq id no：8所示的氨基酸序列；任选地，所述第一抗原结合区包括seq id no：9所示的氨基酸序列；任选地，所述第一fc肽段具有如seq id no:10所示的氨基酸序列；任选地，所述第一抗原结合区具有seq id no:11所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述第二抗原结合区包括第一多肽和第二多肽，所述第一多肽和第二多肽通过链间二硫键相连；所述第一多肽包括第二重链可变区、ch1区和第二fc肽段，所述第二重链可变区的c端与所述ch1区的n端相连，所述ch1区的c端与所述第二fc肽段的n端相连；
所述第二多肽包括第二轻链可变区和cl区，所述第二轻链可变区的c端与所述cl区的n端相连；任选地，所述第二fc肽段包括第二铰链区、第二ch2区和第二ch3区；任选地，所述ch1区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的ch1区；任选地，所述第二铰链区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的铰链区片段；任选地，所述第二ch2区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的ch2区片段；或者所述第二ch2区相比于人源野生型igg1的ch2区片段，具有l234a和/或l235a突变；任选地，所述第二ch3区为人源、灵长目源或鼠源野生型igg1的ch3区片段；任选地，所述第二ch3区相比于人源野生型igg1的ch3区片段，具有t366s、l368a、y407v、y349c突变中的至少之一；任选地，所述cl区为人源、灵长目源或鼠源野生型cl区；任选地，所述第二重链可变区包括seq id no：12～14任一项所示的cdr序列；或所述第二轻链可变区包括seq id no：15～17任一项所示的cdr序列；任选地，所述第二重链可变区具有分别如seq id no：12、seq id no：13、seq id no：14所示的cdr1、cdr2、cdr3序列；任选地，所述第二轻链可变区具有分别如seq id no：15、seq id no：16、seq id no：17所示的cdr1、cdr2、cdr3序列；任选地，所述第二重链可变区具有如seq id no：18所示的氨基酸序列；任选地，所述第二轻链可变区具有如seq id no：19所示的氨基酸序列；任选地，所述ch1区和第二fc肽段具有如seq id no:20所示的氨基酸序列；任选地，所述第一多肽具有如seq id no:21所示的氨基酸序列；任选地，所述第二多肽具有如seq id no:22所示的氨基酸序列。5.根据权利要求3或4所述的抗体，其特征在于，所述第一抗原结合区和第二抗原结合区通过knob-into-hole结构进行连接；任选地，所述knob-into-hole结构是由第一ch3区的t366w和/或s354c突变和第二ch3区的t366s、l368a、y407v、y349c至少之一的突变形成的。6.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1～5任一项所述的抗体；任选地，所述核酸分子为dna分子。7.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求6所述的核酸分子；任选地，所述表达载体为非致病性病毒载体；任选地，所述表达载体为腺病毒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体。8.一种制备权利要求1～5任一项所述的抗体的方法，其特征在于，包括：将权利要求7所述的表达载体引入到细胞中；将所述细胞在适于蛋白表达和分泌的条件下进行培养处理，以便获得所述抗体；任选地，所述细胞为真核细胞。9.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞携带权利要求6所述的核酸分子，或权利要求7所述的表达载体或表达权利要求1～5任一项所述的抗体；任选地，所述重组细胞是通过将权利要求7所述的表达载体引入至宿主细胞中而获得的；
任选地，所述重组细胞为真核细胞；优选地，所述重组细胞为哺乳动物细胞。10.一种药物组合物，其特征在于，包括：权利要求1～5任一项所述的抗体、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体或权利要求9所述的重组细胞；任选地，所述药物组合物进一步包括药学上可接受的辅料。11.一种试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1～5任一项所述的抗体、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体或权利要求9所述的重组细胞。12.权利要求1～5任一项所述的抗体、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体、权利要求9所述的重组细胞或权利要求10所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或者预防癌症；任选地，所述癌症选自高表达nectin-4的癌症；任选地，所述高表达nectin-4的癌症为乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、结直肠癌、食管癌、胃癌、肺癌、肝癌或甲状腺癌。13.权利要求1～5任一项所述的抗体、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体或权利要求9所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测4-1bb和/或nectin-4。

技术总结
本发明提供了一种靶向4-1BB和Nectin-4的双特异性的抗体及其用途。抗体包括：第一抗原结合区，所述第一抗原结合区具有4-1BB结合活性；第二抗原结合区，所述第二抗原结合区具有Nectin-4结合活性，第一抗原结合区选自4-1BB单链抗体，第二抗原结合区包括一条Nectin-4重链和一条Nectin-4轻链。该抗体可同时与Nectin-4阳性的肿瘤细胞以及T细胞进行结合，有效介导T细胞杀伤肿瘤细胞，可有效治疗癌症。可有效治疗癌症。


技术研发人员：曹国帅 成赢 李洋洋 武玉伟
受保护的技术使用者：合肥天港免疫药物有限公司
技术研发日：2022.07.19
技术公布日：2022/11/22