一种环保型且开瓶性能稳定的C4检测试剂盒及检测方法与流程

一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒及检测方法
技术领域
1.本发明涉及免疫比浊体外诊断技术领域，尤其涉及一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒及检测方法。


背景技术：

2.c4是血清中含量最高的补体成分，由巨噬细胞、单核细胞、淋巴组织、骨髓、腹膜和肝脏合成的一种球蛋白，在c4转化酶的作用下，裂解成c4a和c4b两个片段，在补体经典激活途径和旁路激活途径中均发挥重要作用。
3.早期的免疫分析技术大部分都是通过沉淀物的形成、凝集及溶血现象的发生和测定由集合体造成的光散色来分析待测样品中特异性蛋白质的有无及含量，但由于这些方法操作繁琐，且精确度差已经被淘汰。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法，其原理为：抗原与抗体在特殊稀释系统中反应且比例合适时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂的作用下，从液相析出，形成微粒，反应液出现浑浊。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。
4.目前上市的大部分试剂基本上都采用苯酚等原料制备，在保存过程中容易出现沉淀，从而导致抗体性能变差，进而直接造成试剂检测结果不准。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒及检测方法，旨在解决有的c4检测试剂盒开瓶稳定性较差的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供了一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒及检测方法，包括第一试剂、第二试剂和补体c4抗原用标准品稀释液；
7.所述第一试剂包括聚乙二醇、叠氮化钠、吐温、蒸馏水、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠；
8.所述第二试剂包括水溶性氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、叠氮化钠、柠檬酸、羊抗人抗体和水。
9.其中，所述第一试剂的制备方法，包括：
10.按预设比例称取所述聚乙二醇、所述叠氮化钠、所述吐温、所述蒸馏水、所述磷酸氢二钠和所述磷酸二氢钠后在预设温度下进行搅拌，得到第一搅拌液；
11.对所述第一搅拌液进行过滤，得到第一试剂。
12.其中，所述第二试剂的制备方法，包括：
13.按预设比例称取所述水溶性氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、叠氮化钠、柠檬酸、羊抗人抗体和水后在预设温度下进行搅拌，得到第二搅拌液；
14.对所述第二搅拌液进行过滤看，得到第二试剂。
15.其中，所述补体c4抗原用标准品稀释液的制备方法为：
16.对一水柠檬酸、氯化钠、叠氮化钠、氢氧化钠、丙三醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、聚乙烯吡咯烷酮和纯化水进行稀释，得到补体c4抗原用标准品稀释液。
17.第二方面，一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒的检测方法，应用于第一方面所述的一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：
18.所述将所述第一试剂倒入样品中混匀，得到第一混合液；
19.对所述第一混合液进读取，得到第一吸光度；
20.将所述第二试剂倒入所述第一混合液中，得到第二混合液；
21.对所述第二混合液进行读取，得到第二吸光度；
22.对所述第一吸光度和所述第二吸光度进行计算，得到第三吸光度；
23.基于所述第三吸光度使用校准品在全自动生化仪上通过内置曲线和模式拟合标准曲线进行计算，得到样品中补体c4的含量
24.本发明的一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒及检测方法，所述第一试剂包括聚乙二醇、叠氮化钠、吐温、蒸馏水、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠；所述第二试剂包括水溶性氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、叠氮化钠、柠檬酸、羊抗人抗体和水，本发明提出c4检测试剂盒的操作更物料更简单无沉淀、性能稳定、成本低廉，测试结果准确，重复性好，且c4试剂盒可广泛用于各种生化仪配套使用，具有更广泛的通用性从而解决有的c4检测试剂盒开瓶稳定性较差的问题。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
26.图1是按预设比例称取所述聚乙二醇、所述叠氮化钠、所述吐温、所述蒸馏水、所述磷酸氢二钠和所述磷酸二氢钠后在预设温度下进行搅拌，得到第一搅拌液的流程图。
27.图2是按预设比例称取所述水溶性氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、叠氮化钠、柠檬酸、羊抗人抗体和水后在预设温度下进行搅拌，得到第二搅拌液的流程图。
28.图3是本发明提供的一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒的检测方法得流程图。
具体实施方式
29.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
30.请参阅图1至图2，第一方面，本发明提供一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒，包括第一试剂、第二试剂和补体c4抗原用标准品稀释液；
31.所述第一试剂包括聚乙二醇、叠氮化钠、吐温、蒸馏水、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠；
32.所述第二试剂包括水溶性氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、叠氮化钠、柠檬酸、羊抗人抗体和水。
33.所述第一试剂的制备方法，包括：
34.s11按预设比例称取所述聚乙二醇、所述叠氮化钠、所述吐温、所述蒸馏水、所述磷
酸氢二钠和所述磷酸二氢钠后在预设温度下进行搅拌，得到第一搅拌液；
35.具体的，试剂一按重量份计，分别称取聚乙二醇5～6份、叠氮化钠3～12份、吐温2-15份、纯化水水1000～1650份、磷酸氢二钠0.45～0.55份、磷酸二氢钠15-23份，在25
±
3℃下混合均匀。
36.s12对所述第一搅拌液进行过滤，得到第一试剂。
37.具体的，对所述第一搅拌液进行过滤，得到第一试剂，然后放置2～8℃保存。
38.所述第二试剂的制备方法，包括：
39.s21按预设比例称取所述水溶性氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、叠氮化钠、柠檬酸、羊抗人抗体和水后在预设温度下进行搅拌，得到第二搅拌液；
40.具体的，分别称取水溶性氯化钠1～4份、磷酸氢二钠1～3份、磷酸二氢钠1～2份、叠氮化钠1-2份、柠檬酸1～3份、羊抗人抗体3～20份、纯化水40-55份，在25
±
3℃下混合均匀。
41.s22对所述第二搅拌液进行过滤看，得到第二试剂。
42.具体的，对所述第二搅拌液进行过滤，得到第一试剂，然后放置2～8℃保存。
43.所述补体c4抗原用标准品稀释液的制备方法为：
44.对一水柠檬酸、氯化钠、叠氮化钠、氢氧化钠、丙三醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、聚乙烯吡咯烷酮和纯化水进行稀释，得到补体c4抗原用标准品稀释液。
45.具体的，按比例称取3～6份一水柠檬酸、5～18份氯化钠、1～6份叠氮化钠、2.3～6份氢氧化钠、3.7～9份丙三醇、2～15份磷酸氢二钠、3～16份磷酸二氢钠、3～7份聚乙烯吡咯烷酮和纯化水40-55份，并用校准品稀释成不同浓度的补体c4校准品(s1＝0mg/l；s1＝8mg/l；s1＝16mg/l；s1＝32mg/l；s1＝64mg/l)，然后放置2～8℃保存。
46.请参阅图3，第二方面，一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒的检测方法，应用于第一方面所述的一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：
47.s102对所述第一混合液进读取，得到第一吸光度；
48.具体的，在37℃孵育，在340nm波长下，读取吸光度a1。
49.s103将所述第二试剂倒入所述第一混合液中，得到第二混合液；
50.具体的，在所述第一混合液中加入所述第二试剂混匀，所述第二试剂与所述第一试剂按体积比为1：6加入。
51.s104对所述第二混合液进行读取，得到第二吸光度；
52.具体的，在37℃孵育，在340nm波长下，读取吸光度a2。
53.s105对所述第一吸光度和所述第二吸光度进行计算，得到第三吸光度；
54.具体的，得出吸光度的
△
a，
△
a＝a2-a1。
55.s106基于所述第三吸光度使用校准品在全自动生化仪上通过内置曲线和模式拟合标准曲线进行计算，得到样品中补体c4的含量。
56.具体的，使用校准品在全自动生化仪上通过内置曲线和模式拟合标准曲线，根据吸光度自动计算出待测样品中补体c4的含量。
57.有益效果
58.1、本发明提供的补体c4试剂盒无沉淀、性能稳定、成本低廉，测试结果准确，重复
性好；
59.2、本发明提供的补体c4试剂盒可广泛用于各种生化仪配套使用，具有更广泛的通用性。
60.具体实施例如下：
61.实施例1
62.补体c4检测试剂盒
63.试剂r1
64.试剂名称用量聚乙二醇4份叠氮化钠3份吐温1.5份磷酸氢二钠3份磷酸二氢钠4份
65.表2试剂r2
66.试剂名称用量聚乙二醇4份叠氮化钠7份吐温2份磷酸氢二钠4份磷酸二氢钠3份氯化钠7份
67.表3
68.校准品：
69.补体c4抗原用标准品稀释液(3份一水柠檬酸、7份氯化钠、1份叠氮化钠、2.3份氢氧化钠、3.7份丙三醇、2份磷酸氢二钠、3份磷酸二氢钠、5份聚乙烯吡咯烷酮)
70.实施例2
71.补体c4检测试剂盒
72.试剂r1
73.试剂名称用量聚乙二醇3份叠氮化钠5份吐温2份磷酸氢二钠6份磷酸二氢钠6份
74.表4试剂r2
75.试剂名称用量聚乙二醇2份叠氮化钠3份
吐温7份磷酸氢二钠6份磷酸二氢钠6份氯化钠7份
76.表5
77.校准品：
78.补体c4抗原用标准品稀释液(3份一水柠檬酸、7份氯化钠、1份叠氮化钠、2.3份氢氧化钠、3.7份丙三醇、2份磷酸氢二钠、3份磷酸二氢钠、5份聚乙烯吡咯烷酮)
79.实施例3
80.补体c4检测试剂盒
81.试剂r1
82.试剂名称用量聚乙二醇3份叠氮化钠4份吐温4份磷酸氢二钠8份磷酸二氢钠7份
83.表6试剂r2
[0084][0085][0086]
表7
[0087]
校准品：
[0088]
补体c4抗原用标准品稀释液(3份一水柠檬酸、7份氯化钠、1份叠氮化钠、2.3份氢氧化钠、3.7份丙三醇、2份磷酸氢二钠、3份磷酸二氢钠、5份聚乙烯吡咯烷酮)
[0089]
实施例4
[0090]
补体c4检测试剂盒
[0091]
试剂r1
[0092]
试剂名称用量聚乙二醇9份叠氮化钠7份吐温5份磷酸氢二钠6份磷酸二氢钠7份
[0093]
表8试剂r2
[0094]
试剂名称用量聚乙二醇14份叠氮化钠18份吐温15份磷酸氢二钠7份磷酸二氢钠8份氯化钠7份
[0095]
表9
[0096]
校准品：
[0097]
补体c4抗原用标准品稀释液(3份一水柠檬酸、7份氯化钠、1份叠氮化钠、2.3份氢氧化钠、3.7份丙三醇、2份磷酸氢二钠、3份磷酸二氢钠、5份聚乙烯吡咯烷酮)
[0098]
实施例5
[0099]
补体c4检测试剂盒
[0100]
试剂r1
[0101]
试剂名称用量聚乙二醇16份叠氮化钠10份吐温18份磷酸氢二钠13份磷酸二氢钠12份
[0102]
表10试剂r2
[0103]
试剂名称用量聚乙二醇19份叠氮化钠18份吐温7份磷酸氢二钠4份磷酸二氢钠6份氯化钠9份
[0104]
表11
[0105]
校准品：
[0106]
补体c4抗原用标准品稀释液(3份一水柠檬酸、7份氯化钠、1份叠氮化钠、2.3份氢氧化钠、3.7份丙三醇、2份磷酸氢二钠、3份磷酸二氢钠、5份聚乙烯吡咯烷酮)
[0107]
不同实施例检测结果比较
[0108]
1、分别配制一份补体c4浓度为25mg/l的样本，用实施例1的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0109]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月124.725.525.325.725.325.0225.125.325.824.725.525.3
325.225.825.125.925.225.1理论浓度252525252525相对偏差1-1.20％2.00％1.20％2.80％1.20％0.00％相对偏差20.40％1.20％3.20％-1.20％2.00％1.20％相对偏差30.80％3.20％0.40％3.60％0.80％0.40％
[0110]
表12
[0111]
由表12可见，实施例1在1个月6个月和12个月测得的补体c4浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于5％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。
[0112]
实施例1为最优配制比例。
[0113]
2、分别配制一份补体c4浓度为35mg/l的样本，用实施例2的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0114]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月135.735.235.035.435.235.8235.135.235.935.835.235.2335.335.335.135.535.535.4理论浓度353535353535相对偏差12.00％0.57％0.00％1.14％0.57％2.29％相对偏差20.29％0.57％2.57％2.29％0.57％0.57％相对偏差30.86％0.86％0.29％1.43％1.43％1.14％
[0115]
表13
[0116]
由表13可见，实施例2在1个月6个月和12个月测得的补体c4浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于5％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。
[0117]
3、分别配制一份补体c4浓度为25mg/l的样本，用实施例3的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0118]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月125.425.825.025.425.625.3225.125.525.325.325.625.2325.825.325.125.525.525.4理论浓度252525252525相对偏差11.60％3.20％0.00％1.60％2.40％1.20％相对偏差20.40％2.00％1.20％1.20％2.40％0.80％相对偏差33.20％1.20％0.40％2.00％2.00％1.60％
[0119]
表14
[0120]
由表14可见，实施例3在1个月6个月和12个月测得的补体c4浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于5％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。
[0121]
4、分别配制一份补体c4浓度为36mg/l的样本，用实施例4的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0122]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月
136.639.732.346.449.636.3236.343.234.244.734.631.2339.436.135.433.537.535.4理论浓度363636363636相对偏差11.67％10.28％-10.28％28.89％37.78％0.83％相对偏差20.83％20.00％-5.00％24.17％-3.89％-13.33％相对偏差39.44％0.28％-1.67％-6.94％4.17％-1.67％
[0123]
表15
[0124]
由表15可见，实施例4在1个月6个月和12个月测得的补体c4浓度均偏离真实值，并且放置8个月时，相对偏差大于15％，说明本发明的试剂盒重复性不好，测量不准确。
[0125]
5、分别配制一份补体c4浓度为15mg/l的样本，用实施例5的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0126]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月115.415.86.28.46.26.4215.14.29.29.74.710.3315.34.38.28.27.49.1理论浓度151515151515相对偏差12.67％5.33％-58.67％-44.00％-59.00％-57.33％相对偏差20.67％-72.33％-39.00％-35.33％-68.67％-31.33％相对偏差32.00％-71.33％-45.67％-45.33％-50.67％-39.33％
[0127]
表16
[0128]
由表16可见，实施例5在1个月6个月和12个月测得的补体c4浓度均偏离真实值，并且放置8个月时，相对偏差大于15％，说明本发明的试剂盒重复性不好，测量不准确。
[0129]
实施例1的开瓶性能验证：
[0130][0131]
表17
[0132]
由表17可见，实施例1在0至40天测得的补体c4浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于5％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。
[0133]
以上所揭露的仅为本发明一种环保型且开瓶性能稳定的c4检测试剂盒及检测方法较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。