用于治疗线粒体功能障碍的作为USP30抑制剂的N-(1-氰基-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺衍生物和对应噁二唑衍生物的制作方法

用于治疗线粒体功能障碍的作为usp30抑制剂的n-(1-氰基-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺衍生物和对应噁二唑衍生物
发明领域
1.本发明涉及一类具有作为去泛素化酶泛素c-端水解酶30(也称作泛素特异性肽酶30(usp30))的抑制剂活性的n-氰基吡咯烷类、其用途、其制备方法和含有所述抑制剂的组合物。这些抑制剂在多种治疗领域(包括涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化)中具有效用。
2.以下引用或依赖的所有文件明确地通过引用并入本文。
3.发明背景
4.泛素是由76个氨基酸组成的小蛋白，其对于细胞中蛋白功能的调节是重要的。泛素化和去泛素化是酶促介导的过程，通过该过程泛素共价结合靶蛋白或通过去泛素化酶(dub)从靶蛋白切割，其中在人细胞中存在大约100种dub，它们基于序列同源性被分成亚家族。usp家族的特征在于其共同的cys和his盒，该盒含有对于其dub活性至关重要的cys和his残基。泛素化和去泛素化过程已经被牵涉到许多细胞功能的调节，包括细胞周期进程、细胞凋亡、细胞表面受体修饰、dna转录和dna修复的调节。因此，泛素系统已经被牵涉到许多疾病状态的发病机制，所述疾病状态包括炎症、病毒感染、代谢功能障碍、cns障碍和肿瘤发生。
5.泛素是线粒体动力学的主要调节剂。线粒体是动态细胞器，其生物发生、融合和裂变事件经由许多关键因子(诸如线粒体融合蛋白(mitofusin))的泛素化受到翻译后调控的调节。在人类中，usp30是在线粒体外膜中发现的517个氨基酸的蛋白(nakamura等人,2008,mol biol 19:1903-11)。它是具有线粒体寻址信号(mitochondrial addressing signal)的唯一去泛素化酶，并且已经被证实使许多线粒体蛋白去泛素化。已经证实，usp30抵抗parkin介导的线粒体自噬，并且usp30活性的下降可以拯救parkin介导的线粒体自噬中的缺陷(bingol等人,2015,nature 510:370-5；gersch等人,2017,nat struct mol biol 24(11):920-930；cunningham等人,2015,nat cell biol 17(2):160-169)。usp30失活也可以增加线粒体蛋白输入，可能通过tom蛋白的泛素化(jacoupy等人,2019,sci rep 9(1):11829)。usp30的一小部分已定位于过氧化物酶体，所述过氧化物酶体通过线粒体和er囊泡的融合产生，其中usp30可能拮抗pex2/过氧化物酶体自噬(pexophagy)途径(riccio等人,2019,j cell biol 218(3):798-807)。e3 ub连接酶march5和去泛素酶usp30与移位酶结合并调节线粒体输入，而march5抵抗线粒体输入并指导底物的降解，usp30去泛素化底物以促进其输入(phu等人,2020,molecular cell 77,1107-1123)。
6.线粒体功能障碍可以被定义为线粒体含量减少(线粒体自噬或线粒体生物发生)、线粒体活性和氧化磷酸化降低，但是也可以被定义为活性氧物质(ros)产生的调节。因此，线粒体功能障碍在非常众多的老化过程和病理学中有作用。
7.例如，帕金森病影响全世界约1000万人(帕金森病基金会)，且其特征在于黑质中多巴胺能神经元的丧失。作为pd基础的确切机制尚不清楚；但是，线粒体功能障碍逐渐被认
为是pd中多巴胺能神经元易感性的关键决定因素，并且是家族性和散发性疾病以及毒素诱导的帕金森症的特征。parkin是已经被牵涉到早发型pd的许多蛋白之一。虽然大多数pd病例与α-突触核蛋白中的缺陷相关，但10％的帕金森病病例与特定的遗传缺陷有关，其中之一是在泛素e3连接酶parkin中。parkin和蛋白激酶pten诱导的假定激酶1(pink1)协同使受损线粒体的线粒体膜蛋白泛素化，从而导致线粒体自噬。线粒体自噬的失调导致氧化性应激增加，这已经被描述为pd的特征。因此，usp30的抑制可能是治疗pd的潜在策略。例如，具有导致活性降低的parkin突变的pd患者可以通过usp30的抑制得到治疗性代偿。
8.已经报道，usp30的耗竭会增强线粒体的线粒体自噬清除率，并且还增强parkin诱导的细胞死亡。还已经证实usp30调节bax/bak依赖性的细胞凋亡，与parkin过表达无关。usp30的耗竭使癌细胞对bh-3模拟物诸如abt-737敏感，而不需要parkin过表达。因此，已经证明了usp30的抗细胞凋亡作用，且因此usp30是抗癌疗法的潜在靶标。
9.在批准蛋白酶体抑制剂硼替佐米用于治疗多发性骨髓瘤以后，泛素-蛋白酶体系统作为癌症治疗靶标已经受到关注。用硼替佐米的延长治疗受限于其相关毒性和耐药性。但是，预期靶向蛋白酶体的泛素-蛋白酶体途径上游的特定方面(例如，dub)的治疗策略被更好地耐受(bedford等人,2011,nature rev 10:29-46)。
10.纤维化疾病(包括肾、肝和肺纤维化)是发病率和死亡率的主要原因，并且可以影响所有组织和器官系统。纤维化被视为对组织或器官的急性或慢性应激的结果，其特征在于细胞外基质沉积、血管/小管/导管/气道通畅性降低和功能受损，最终导致器官衰竭。许多纤维化病症是由生活方式或环境因素促成；但是，一部分纤维化病症可以通过遗传触发物引发或确实被视为特发性的(即没有已知原因)。某些纤维化疾病诸如特发性肺纤维化(ipf)可以用非特异性激酶抑制剂(尼达尼布)或没有充分表征的作用机理的药物(吡非尼酮)治疗。器官纤维化(诸如肾或肝纤维化)的其它治疗会减轻对器官本身的压力(例如用于肝硬化的β阻滞剂，用于慢性肾脏疾病的血管紧张素受体阻滞剂)。对生活方式因素的注意(诸如葡萄糖和饮食控制)也可以影响疾病的进程和严重程度。
11.线粒体功能障碍已经被牵涉到许多纤维化疾病，其中在功能障碍下游的氧化性应激是关键的致病介体，同时atp产生减少。在临床前模型中，线粒体自噬途径的破坏(通过parkin或pink1的突变或敲除)会加重肺纤维化和肾纤维化，并有证据表明氧化性应激增加。
12.kurita等人,2017,respiratory research 18:114公开了促纤维化肌成纤维细胞的积累是ipf中纤维化重塑的关键过程。据称近期的发现表明自噬/线粒体自噬(溶酶体降解机制的组成部分)参与ipf发病机制，并且线粒体自噬通过调节线粒体活性氧物质(ros)介导的血小板-衍生的生长因子受体(pdgfr)活化已经被牵涉到肌成纤维细胞分化。kurita的结果表明，吡非尼酮诱导park2介导的线粒体自噬，并在线粒体自噬不足的情况下抑制肺纤维化发展，这可以至少部分地解释ipf治疗的抗纤维化机制。
13.williams等人,2015,pharmacol res.12月；102:264-269讨论了pink1-parkin介导的自噬通过经线粒体自噬除去受损的线粒体在保护酒精和对乙酰氨基酚诱导的肝损伤中的作用。经建议，usp8的药理学稳定性或usp15和usp30的失活可能是上调parkin诱导的线粒体自噬的潜在治疗靶标并进而保护免于药物诱导的肝损伤。但是，应当指出，dub在转录和翻译后都受到调节，这可能使靶向这些特异性酶的药物开发具有挑战性，并且此外，证
实了磷酸化的泛素对dub具有抗性。作者得出的结论是，上调pink1稳定化或激酶活性可能是比抑制dub更有效的靶标。
14.williams等人,2015,biomolecules 5,2619-2642,和williams等人,2015,am j physiol gastrointest liver physiol 309:g324-g340综述了牵涉进肝脏线粒体稳态的调节中的机制以及这些机制可以如何保护免于酒精诱导的肝疾病。
15.luciani等人,2020,nat.commun.11,970报道了终末分化细胞(terminally differentiated cell)中线粒体网络的失调促成广泛的障碍，包括甲基丙二酸血症(mma)。mma是最常见的遗传性代谢障碍之一，其归因于线粒体甲基丙二酰基-辅酶a变位酶(mmut)的缺乏。mmut缺乏会诱导代谢和线粒体改变，所述改变因pink1/parkin介导的线粒体自噬中的异常而加重，从而造成功能失调的线粒体的积累，其触发上皮应激并最终导致细胞损伤。提示原发性mmut缺乏症、线粒体病变、线粒体自噬功能障碍和上皮应激之间的联系，并提供了mma的潜在治疗前景。
16.kluge等人,bioorganic&medicinal chemistry letters,2018,28 2655-2659报道了usp30的选择性抑制剂加速线粒体自噬。
17.在pct申请wo 2016/046530(us 15/513125、us 15/894025、us 16/448066)、wo 2016/156816(us 15/558632、us 16/297937、us 16/419558、us 16/419747、us 16/788446)、wo 2017/009650(us 15/738900)、wo 2017/093718(us 15/776149)、wo 2017/103614(us 15/781615)、wo 2017/149313(us 16/078518)、wo 2017/109488(us 16/060299)、wo 2017/141036(us 16/070936)、wo 2017/163078(us 16/087515)、wo 2017/158381(us 16/080229)、wo 2017/158388(us 16/080506)、wo 2018/065768(us 16/336685)、wo 2018/060742(us 16/336202)、wo 2018/060689(us 16/334836)、wo 2018/060691(us 16/336363)、wo 2018/220355(us 16/615040)、wo 2018/234755(us 16/615709)、wo 2020/212350、wo 2020/212351和wo 2021/043870中公开了多个系列的n-氰基-取代的杂环的衍生物作为去泛素化酶抑制剂，它们中的每一篇明确地通过引用并入本文。pct申请wo 2019/171042(us 16/977019)(其明确地通过引用并入本文)公开了n-氰基吡咯烷类作为usp30的抑制剂用于治疗纤维化疾病的用途。
18.falgueyret等人,2001,j.med.chem.44,94-104,和pct申请wo 01/77073涉及作为组织蛋白酶k和l的抑制剂的氰基吡咯烷类，其在治疗骨质疏松症和其它骨吸收相关病症方面具有潜在效用。pct申请wo 2015/179190涉及n-酰基乙醇胺水解酸性酰胺酶抑制剂，其在治疗溃疡性结肠炎和克罗恩氏病方面具有潜在效用。pct申请wo 2013/030218涉及作为泛素特异性蛋白酶(诸如usp7)的抑制剂的喹唑啉-4-酮化合物，其在治疗癌症、神经变性疾病、炎症性障碍和病毒感染方面具有潜在效用。pct申请wo 2015/017502和wo 2016/019237涉及布鲁顿氏酪氨酸激酶的抑制剂，其在治疗疾病诸如自身免疫性疾病、炎性疾病和癌症中具有潜在效用。pct申请wo 2009/026197、wo 2009/129365、wo 2009/129370和wo 2009/129371涉及作为组织蛋白酶c的抑制剂的氰基吡咯烷类，其在治疗copd中具有潜在效用。美国专利申请us 2008/0300268涉及作为酪氨酸激酶受体pdgfr的抑制剂的多芳族化合物。pct申请wo 2019/222468、wo 2019/071073、wo 2020/036940和wo 2020/072964、rusilowicz-jones等人,2020,biorxiv 2020.04.16.044206(2020年4月20日)、和tsefou等人,biorxiv 2021.02.02.429344(2021年2月2日)涉及作为usp30抑制剂的含有氰胺的化合
1052)，以及在患有辅酶q缺乏症的患者中的原发性肾小管病变。mtdna中的突变可以造成母系遗传性小管间质性(tubulointerstitial)疾病(connor等人,2017,plos genet 13(3):e1006620)。
25.关于肾损伤中的线粒体质量控制，(tang等人,2018,autophagy 14(5):880-897)证实了pink1 ko和park2 ko小鼠在缺血性aki后肾损伤加重，从而提示，pink1/parkin介导的线粒体自噬在iri后在肾脏中起保护作用。另外，parkin/pink1线粒体自噬会保护免于顺铂诱导的肾损伤(wang等人,2018,cell death dis 9(11):1113)。有限的ckd模型可用于线粒体自噬研究，纤维化中线粒体质量控制的支持性证据来自对纤维化肺病症诸如copd和ipf的研究。parkin敲除的动物响应于博来霉素显示加重的肺纤维化(kobayashi等人,2016,j immunol,197:504-516)。类似地，来自parkin敲除的(ko)动物的气道上皮细胞显示对香烟烟气的加重纤维化和衰老应答(araya等人,2019,autophagy 15(3):510-526)。
26.通过它们模拟与人病症一致的纤维化病理学(例如胶原沉积)的能力，临床前模型可用于研究潜在的新治疗剂。临床前模型可以是毒素介导的(例如用于肺和皮肤纤维化的博来霉素)、外科手术的(例如用于急性小管间质性纤维化的缺血/再灌注损伤模型和单侧输尿管阻塞模型)和遗传性的(例如用于糖尿病性肾病的糖尿病性(db/db)小鼠)。例如，先前针对指定ipf治疗(尼达尼布和吡非尼酮)给出的两个实例在博来霉素肺纤维化模型中显示出效力。
27.因此，需要作为usp30抑制剂的化合物，其用于治疗或预防其中指示抑制usp30的病症。特别地，需要usp30抑制剂，其具有合适的和/或改进的性能以便最大化针对目标疾病的效力。
28.发明概述
29.本发明涉及式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，所述式(i)选自式(i)(i)和式(i)(ii)：
[0030][0031]
其中：
[0032]
x是ch或n；
[0033]
r1选自(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)氟代烷基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑；
[0034]
r2选自氢、卤素、(c
1-c4)烷氧基和环丙氧基；且
[0035]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0036]
本发明还涉及式(i)的化合物的用途，特别是在治疗涉及线粒体功能障碍的病症,癌症和纤维化中的用途，还涉及其制备方法和含有所述化合物的药物组合物。
[0037]
发明详述
[0038]
本发明涉及usp30抑制剂，其具有合适的和/或改善的性能以便最大化对目标疾病的效力。这样的性能包括，例如，效能、选择性、物理化学性能、adme(吸收、分布、代谢和排
泄)性能(包括pk(药代动力学)特性)和安全性谱。
[0039]
通常需要在有关测定中使药物分子对靶酶的效能最大化以便降低要施用给患者的有效/起效剂量。使用本文描述的体外生化荧光偏振(fp)测定，可以试验本发明的化合物的usp30亲和力。
[0040]
usp30是位于线粒体的外膜中的跨膜蛋白，线粒体是存在于细胞内的产生能量的细胞器。因此，能够在体外证明细胞活性是有利的，因为这是可能指示在其生理环境中(即在此处usp30抑制剂化合物能够穿透细胞)结合靶标的更大能力的许多组成部分之一。usp30细胞蛋白质印迹(wb)测定旨在使用不可逆活性探针试验化合物对细胞中usp30的活性以监测usp30活性。与细胞蛋白质印迹测定类似，靶标结合评估(离体)可以在来自施用化合物的动物的脑或肾组织样品中进行。
[0041]
为了将靶标结合知识扩展到下游药效动力学，可以进行tom20(一种线粒体外膜蛋白)泛素化的评估。
[0042]
一般而言，重要的是，药物对其期望的靶酶尽可能具有选择性；额外的活性产生副作用的可能性。许多dub的确切生理作用尚未完全确定，但是，无论这些dub可能发挥或不发挥什么作用，确保任何药物相对于未知生理功能的相关机制靶标具有选择性是一个合理的药物化学规则。可以针对其筛选本发明化合物的dub酶的代表性例子是uchl1、uchl3、uchl5、yod1、senp2、senp6、trabid、bap1、cezanne、mindy2/fam63b、otu1、otud3、otud5、otud6a、otud6b、otub1/ubch5b、otub2、cyld、vcpip、amsh-lp、josd1、josd2、usp1/uaf1、usp2、usp4、usp5、usp6、usp7、usp8、usp9x、usp10、usp11、usp12/uaf1、usp13、usp14、usp15、usp16、usp19、usp20、usp21、usp22、usp24、usp25、usp28、usp32、usp34、usp35、usp36、usp45、usp46/uaf1、usp47和usp48。优选地，本发明的化合物相对于这些dub酶中的一种或多种对usp30具有良好选择性。
[0043]
除了相对于其它dub酶的选择性外，药物对其它靶标的低亲和力也是重要的，并且可以针对多组靶标进行药理性能分析以评估潜在脱靶效应的可能性并使潜在脱靶效应最小化。可以针对其筛选本发明化合物的靶标的例子是工业标准eurofins-cerep safetyscreen44组的那些，其包括44种靶标作为gpcr受体、转运蛋白、离子通道、核受体和激酶和非激酶酶的代表性选择。优选地，本发明的化合物对该筛选组的靶标具有不显著的亲和力。可以针对其筛选本发明化合物的靶标的其它例子是thermo fisher selectscreen激酶谱分析组的激酶，其包括39种靶标作为激酶酶的代表性选择。优选地，本发明的化合物对该筛选组的靶标具有不显著的亲和力。此外，可以针对其筛选本发明化合物的特定酶类别的例子是组织蛋白酶(例如组织蛋白酶a、b、c、h、k、l、l2、s、v和z)。优选地，本发明的化合物相对于这些酶中的一种或多种对usp30具有良好选择性。
[0044]
也需求具有有利药代动力学性能使得它们适合于口服施用的化合物。口服施用的药物应当具有良好的生物利用度；这是一种容易穿过胃肠(gi)道并且在其从胃肠道进入体循环时不经受广泛代谢的能力。一旦药物进入体循环，代谢速率在确定药物在体内的停留时间方面也是重要的。
[0045]
因此，药物分子具有能轻易穿过胃肠道并且仅在体内缓慢代谢的性能显然是有利的。caco-2测定是一种被广泛接受的用于预测给定分子穿过胃肠道的能力的模型。药物分子的代谢的大部分通常发生在肝脏中，并且使用全细胞肝细胞(动物或人)的体外测定是被
广泛接受的用于测量给定分子对肝脏中代谢的敏感性的方法。这样的测定旨在从肝细胞计算清除率值预测体内清除率。
[0046]
预计具有良好caco-2通量且对肝细胞稳定的化合物具有良好的口服生物利用度(通过胃肠道的良好吸收和在它穿过肝脏时化合物的最少提取)和在体内的长停留时间，该时间对于药物有效而言是足够的。
[0047]
化合物的溶解度是为了预期的药理学应答在体循环中实现期望的药物浓度的一个重要因素。低水溶性是新化学实体的制剂开发遇到的一个问题，并且为了被吸收，药物必须以溶液的形式存在于吸收部位处。可以使用比浊溶解度测定测量化合物的动力学溶解度，来自该测定的数据还可以与caco-2渗透性数据结合使用以预测剂量依赖性的人肠吸收。
[0048]
可以使用指示化合物的暴露性能的标准测定来测量的其它参数包括、例如血浆稳定性(半衰期测量)、血液auc、c
max
、c
min
和t
max
值。
[0049]
cns障碍(包括阿尔茨海默氏病、帕金森病和本文描述的其它障碍)的治疗需要药物分子靶向脑，这需要适当穿透血脑屏障。因此，需求具有有效血脑穿透性能并在脑中提供合适的停留时间以起效的usp30抑制剂。通过利用mdr1-mdck细胞单层(用mdr-1转染的madin-darby犬肾细胞，mdr-1导致人外流转运蛋白p-糖蛋白的过表达)体外通量测定，可以测量化合物可以穿过血脑屏障的可能性。此外，也可以使用体内动物模型直接在脑和血浆中测量暴露。
[0050]
也需求具有有利安全性谱的化合物，可以通过多种标准体外和体内方法测量安全性谱。可以使用细胞毒性反向筛选(counter-screen)来测定在特定细胞系(例如hct116)中的抗增殖/细胞毒性作用，这通过响应于线粒体活性的rezasurin(alamarblue
tm
)到resofurin的荧光检测实现。
[0051]
还可以进行毒理学和安全性研究以鉴定不良作用的潜在靶器官，并定义治疗指数以设定在临床试验中的初始起始剂量。监管要求通常要求在至少两种实验动物物种中进行研究，一种啮齿动物(大鼠或小鼠)和一种非啮齿动物(兔、狗、非人灵长类动物或其它合适的物种)。
[0052]
细菌回复突变测定(埃姆斯试验)可以用于评价本发明化合物的致突变性能，其通常使用细菌菌株鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)，该菌株是用于氨基酸组氨酸的生物合成的突变体。
[0053]
通过评价微核的存在，微核测定可以用于确定化合物是否具有遗传毒性。微核可以含有由dna断裂(断裂剂)产生的染色体片段或由有丝分裂器的破坏(非整倍体诱变剂(aneugens))产生的完整染色体。
[0054]
herg预测器测定提供了关于试验化合物与钾通道的可能结合以及在超声心动图上的潜在qt延长的有价值信息。herg电流的抑制造成qt间期延长，从而导致潜在致死性室性快速型心律失常(尖端扭转型室性心动过速)。通常，测定数据可以从自动化膜片钳测定平台产生。
[0055]
因此，本发明涉及usp30抑制剂，其具有合适的和/或改进的性能以便最大化对目标疾病的效力。这样的性能包括，例如，效能、选择性、物理化学性能、adme(吸收、分布、代谢和排泄)性能(包括pk(药代动力学)特性)和安全性谱。
[0056]
已发现本发明的化合物表现出上文所鉴别的性能中的一种或多种，所述性能是显著的和意料之外的。例如，本发明的实施例1-12对usp30高度有效，如在本文描述的生化测定中测量的。本发明的所有这些实施例(1-12)相对于其它dub和组织蛋白酶，对usp30具有显著的选择性。本发明的化合物的显著的和意料之外的性能使它们特别适合用于治疗和/或预防与usp30活性相关的疾病。
[0057]
根据第一方面，本发明提供了式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，所述式(i)选自式(i)(i)和式(i)(ii)：
[0058][0059]
其中：
[0060]
x是ch或n；
[0061]
r1选自(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)氟代烷基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑；
[0062]
r2选自氢、卤素、(c
1-c4)烷氧基和环丙氧基；且
[0063]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0064]
式(i)的化合物作为具有所示的绝对立体化学的单一立体异构体存在。
[0065]
烷基和烷氧基基团可以是直链或支链并且含有1-4个碳原子。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和仲丁基。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和叔丁氧基。
[0066]
卤素是指氟、氯、溴或碘，特别地是氟或氯。氟代烷基基团可以含有一个或多个氟取代基。例子是氟甲基、二氟甲基和三氟甲基。n-连接的三唑可以是1,2,3-三唑或1,2,4-三唑，并且在本发明的所有实施方案中优选地是1,2,3-三唑-1-基环。
[0067]
除非另有说明，否则术语“被取代”是指被一个或多个所定义的基团取代。在其中基团可以选自超过一个可替代基团的情况下，所选择的基团可以相同或不同。术语“独立地”是指，在超过一个取代基选自超过一个可能的取代基的情况下，那些取代基可以相同或不同。
[0068]
下面定义了式(i)的化合物的优选实施方案。
[0069]
优选地，r1选自甲基、ch2f、chf2、cf3、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。
[0070]
更优选地，r1选自甲基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。最优选地，r1是ch2och3。
[0071]
优选地，r2选自氢、氯、氟、甲氧基和环丙氧基。
[0072]
更优选地，r2选自氢、氯、甲氧基和环丙氧基。
[0073]
最优选地，r2是氢。
[0074]
优选地，r3、r4和r5各自独立地选自氢、氯和氟。
[0075]
最优选地，r3、r4和r5各自是氢。
[0076]
根据本发明的一个方面，式(i)的化合物具有式(i)(i)：
[0077][0078]
根据本发明的另一个方面，式(i)的化合物具有式(i)(ii)：
[0079][0080]
根据第一个优选方面，本发明提供了式(i)(i)的化合物，其中x是ch；提供式(ia)(i)的化合物：
[0081][0082]
其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0083]
r1选自(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)氟代烷基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑；
[0084]
r2选自氢、卤素、(c
1-c4)烷氧基和环丙氧基；且
[0085]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0086]
下面定义了式(ia)(i)的化合物的优选实施方案。
[0087]
优选地，r1选自甲基、ch2f、chf2、cf3、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。
[0088]
更优选地，r1选自甲基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。最优选地，r1是ch2och3。
[0089]
优选地，r2选自氢、氯、氟、甲氧基和环丙氧基。
[0090]
更优选地，r2选自氢、氯、甲氧基和环丙氧基。
[0091]
更优选地，r2选自氢和环丙氧基。
[0092]
最优选地，r2是氢。
[0093]
优选地，r3、r4和r5各自独立地选自氢、氯和氟。
[0094]
最优选地，r3、r4和r5各自是氢。
[0095]
根据第二个优选方面，本发明提供了式(i)(i)的化合物，其中x是n；提供式(ib)(i)的化合物：
[0096][0097]
其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0098]
r1选自(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)氟代烷基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑；
[0099]
r2选自氢、卤素、(c
1-c4)烷氧基和环丙氧基；且
[0100]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0101]
下面定义了式(ib)(i)的化合物的优选实施方案。
[0102]
优选地，r1选自甲基、ch2f、chf2、cf3、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。
[0103]
更优选地，r1选自甲基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。
[0104]
最优选地，r1选自甲基和ch2och3。
[0105]
优选地，r2选自氢、氯、氟、甲氧基和环丙氧基。
[0106]
更优选地，r2选自氢、氯、甲氧基和环丙氧基。
[0107]
最优选地，r2是氢。
[0108]
优选地，r3、r4和r5各自独立地选自氢、氯和氟。
[0109]
最优选地，r3、r4和r5各自是氢。
[0110]
本发明的优选的式(i)(i)的化合物选自：
[0111]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0112]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0113]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0114]
n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0115]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0116]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0117]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0118]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0119]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0120]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)
苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；和
[0121]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0122]
或其药学上可接受的盐。
[0123]
根据第三个优选方面，本发明提供了式(i)(ii)的化合物，其中x是ch；提供式(ia)(ii)的化合物：
[0124][0125]
其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0126]
r1选自(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)氟代烷基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑；
[0127]
r2选自氢、卤素、(c
1-c4)烷氧基和环丙氧基；且
[0128]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0129]
下面定义了式(ia)(ii)的化合物的优选实施方案。
[0130]
优选地，r1选自甲基、ch2f、chf2、cf3、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。
[0131]
更优选地，r1选自甲基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。最优选地，r1是ch2och3。
[0132]
优选地，r2选自氢、氯、氟、甲氧基和环丙氧基。
[0133]
更优选地，r2选自氢、氯、甲氧基和环丙氧基。
[0134]
还更优选地，r2选自氢和环丙氧基。
[0135]
最优选地，r2是氢。
[0136]
优选地，r3、r4和r5各自独立地选自氢、氯和氟。
[0137]
最优选地，r3、r4和r5各自是氢。
[0138]
根据第四个优选方面，本发明提供了式(i)(ii)的化合物，其中x是n；提供式(ib)(ii)的化合物：
[0139][0140]
其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0141]
r1选自(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)氟代烷基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑；
[0142]
r2选自氢、卤素、(c
1-c4)烷氧基和环丙氧基；且
[0143]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0144]
下面定义了式(ib)(ii)的化合物的优选实施方案。
[0145]
优选地，r1选自甲基、ch2f、chf2、cf3、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。
[0146]
更优选地，r1选自甲基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。最优选地，r1选自甲基和ch2och3。
[0147]
优选地，r2选自氢、氯、氟、甲氧基和环丙氧基。
[0148]
更优选地，r2选自氢、氯、甲氧基和环丙氧基。
[0149]
最优选地，r2是氢。
[0150]
优选地，r3、r4和r5各自独立地选自氢、氯和氟。
[0151]
最优选地，r3、r4和r5各自是氢。
[0152]
本发明的优选的式(i)(ii)的化合物选自：
[0153]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0154]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0155]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0156]
n-((3r,5r)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0157]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0158]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0159]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0160]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0161]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0162]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；和
[0163]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0164]
或其药学上可接受的盐。
[0165]
式(i)的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐(包括二盐)。
[0166]
合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。例子包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、羟苯酰苯甲酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、磷酸氢盐、羟乙基磺酸盐、d-和l-乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、棕榈酸盐(palmate)、磷酸盐、蔗糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐硫酸盐、d-和l-酒石酸盐和甲
苯磺酸盐。
[0167]
合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。例子包括铝、铵、精氨酸、二苄基乙二胺、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌盐。
[0168]
关于合适的盐的综述，参见stahl和wermuth,handbook of pharmaceutical salts:properties,selection,and use,wiley-vch,魏因海姆,德国(2002)。
[0169]
通过将式(i)的化合物的溶液与期望的酸或碱(根据需要)混合在一起，可以容易地制备式(i)的化合物的药学上可接受的盐。所述盐可以从溶液中沉淀并可以通过过滤收集或可以通过溶剂的蒸发来回收。
[0170]
根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括水合物和溶剂化物，其中结晶的溶剂可以被同位素取代，例如d2o、丙酮-d6、dmso-d6。
[0171]
笼形包合物、药物-宿主包合络合物也在本发明的范围内，其中与上述溶剂化物相反，药物和宿主以非化学计量的量存在。关于这样的络合物的综述，参见haleblian的j.pharm sci,64(8),1269-1288(1975年8月)。
[0172]
在下文中所有对式(i)的化合物的提及包括对其盐的提及以及对式(i)的化合物及其盐的溶剂化物和笼形包合物的提及。
[0173]
本发明包括如上文所定义的式(i)的化合物的所有多晶型物。
[0174]
式(i)的化合物的所谓“前药”也在本发明的范围内。因此，某些本身几乎没有药理活性或没有药理活性的式(i)的化合物的衍生物在施用至身体内或身体上时被代谢，可以产生具有期望活性的式(i)的化合物。这样的衍生物被称作“前药”。
[0175]
例如，可以如下生产根据本发明的前药：用例如h bundgaard的“design of prodrugs”(elsevier,1985)中所述的某些本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moieties)”的某些部分替代在式(i)的化合物中存在的适当官能团。
[0176]
最后，某些式(i)的化合物自身可以充当式(i)的其它化合物的前药。
[0177]
含有氮原子的式(i)的化合物的某些衍生物还可以形成相应的n-氧化物，并且这样的化合物也在本发明的范围内。
[0178]
在本发明的范围内包括式(i)的化合物的所有互变异构形式。
[0179]
用于制备/分离各对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯的前体手性合成，或使用例如手性高效液相色谱法(hplc)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。可替换地，外消旋体(或外消旋的前体)可以与合适的光学活性化合物例如醇反应，或者在式(i)的化合物含有酸性或碱性部分的情况下，与碱或酸诸如1-苯基乙胺或酒石酸反应。得到的非对映异构体混合物可以通过色谱法和/或分步结晶分离，并且将一种或两种非对映异构体通过技术人员众所周知的方式转化为相应的纯对映异构体。本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用色谱法(通常hplc)以对映异构体富集形式获得，在不对称树脂上使用由烃、通常庚烷或己烷组成的流动相，所述流动相含有0-50体积％的丙烷-2-醇(通常2％至20％)和0-5体积％的烷基胺(通常0.1％二乙胺)。浓缩洗脱液，得到富集的混合物。本发明包括式(i)的化合物的所有晶体形式，包括其外消旋体和外消旋混合物(混合体)。通过本领域技术人员已知的常规技术，可以分离立体异构体混合体-参见，例如，e.l.eliel和s.h.wilen的“stereochemistry of organic compounds”(wiley,new york,1994)。
[0180]
式(i)的化合物在被r1和酰胺取代的吡咯烷环的碳原子处含有两个手性中心，并
且所述立体中心可以以(r)或(s)构型存在。根据iupac命名法，立体异构体的绝对构型(r)和(s)的指定取决于取代基的性质和顺序法则程序的应用。因此，式(i)的化合物可以以四种立体异构形式存在。
[0181]
本发明的式(i)的化合物作为单一立体异构体存在。酰胺取代基的吡咯烷碳原子作为(r)-立体中心存在，而r1基团的吡咯烷碳原子的指定取决于取代基的性质。将式(i)的化合物分离为单一立体异构体并且可以以至少60％、优选地至少80％、更优选地至少90％、更优选地至少95％、例如96％、97％、98％、99％或100％的立体异构体过量存在。
[0182]
额外的手性中心可以在r1取代基本身之内存在于式(i)的化合物中。在本发明的范围内包括式(i)的化合物的所有这样的立体异构形式。
[0183]
本发明还包括式(i)的化合物的所有药学上可接受的同位素变体。将同位素变体定义为其中至少一个原子被具有相同原子数但原子质量不同于在自然界中通常发现的原子质量的原子替代的变体。
[0184]
适用于包含在本发明化合物中的同位素的例子包括：氢的同位素，诸如2h和3h，碳的同位素，诸如
13
c和
14
c，氮的同位素，诸如
15
n，氧的同位素，诸如
17
o和
18
o，磷的同位素，诸如
32
p，硫的同位素，诸如
35
s，氟的同位素，诸如
18
f，和氯的同位素，诸如
36
cl。
[0185]
用同位素诸如氘取代本发明的化合物可能提供某些由更大代谢稳定性引起的治疗优点，例如，增加的体内半衰期或减小的剂量需求，且因此在某些情况下可能是优选的。
[0186]
式(i)的化合物的某些同位素变体，例如，掺入放射性同位素的那些，可用在药物和/或底物组织分布研究中。考虑到它们易于掺入和检测方便，放射性同位素氚和
14
c对于该目的是特别有用的。
[0187]
通过本领域技术人员已知的常规技术，或通过与附随实施例和制备中所述的那些类似的方法，使用合适试剂的适当同位素变体，通常可以制备式(i)的化合物的同位素变体。
[0188]
式(i)的化合物是去泛素化酶usp30的抑制剂。
[0189]
根据另一个方面，本发明提供了用于用作药物的如本文中定义的式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0190]
根据另一个方面，本发明提供了治疗或预防哺乳动物的已知usp30的抑制会产生有益效果或可以证实usp30的抑制会产生有益效果的障碍或病症的方法，其包含给所述哺乳动物施用治疗有效量的如本文中定义的式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0191]
根据另一个方面，本发明提供了如本文中定义的式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防已知usp30的抑制会产生有益效果或可以证实usp30的抑制会产生有益效果的障碍或病症。药物的制备可以尤其包括式(i)的化合物或其盐的化学合成，或包含所述化合物或盐的组合物或制剂的制备，或包含所述化合物的任何药物的包装。
[0192]
根据另一个方面，本发明提供了一种抑制患者中的usp30的方法，其包含给所述患者施用治疗有效量的如本文中定义的式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0193]
受益于usp30活性的障碍或病症选自涉及线粒体功能障碍的病症、癌症和纤维化。
[0194]
在本发明的所有方面的一个优选实施方案中，受益于usp30活性的障碍或病症是涉及线粒体功能障碍的病症。
[0195]
线粒体功能障碍是由线粒体的缺陷引起，线粒体是存在于身体的每个细胞(红细胞除外)中的专门隔室。当线粒体失灵时，在细胞内产生的能量越来越少，随之而来的是细胞损伤或甚至细胞死亡。如果该过程在身体各处重复，发生这种情况的受试者的生命会受到严重损害。线粒体疾病似乎最常出现在对能量要求非常高的器官中，诸如脑、心脏、肝脏、骨骼肌、肾脏以及内分泌和呼吸系统。
[0196]
涉及线粒体功能障碍的病症可以选自涉及线粒体自噬缺陷的病症、涉及线粒体dna突变的病症、涉及线粒体氧化性应激的病症、涉及线粒体膜电位缺陷的病症、线粒体生物发生、涉及线粒体形状或形态缺陷的病症、以及涉及溶酶体贮积缺陷的病症。
[0197]
具体地，涉及线粒体功能障碍的病症可以选自：神经变性疾病；多发性硬化(ms)；线粒体脑病、乳酸性酸中毒和中风样发作(melas)综合征；母系遗传性糖尿病和耳聋(midd)；莱伯遗传性视神经病变(lhon)；癌症(包括，例如，乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌或组织器官的其它癌症和血细胞癌诸如淋巴瘤和白血病、多发性骨髓瘤、转移性癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌)；神经病、共济失调、视网膜色素变性、母系遗传性利氏综合征(narp-mils)；danon病；糖尿病；糖尿病性肾病；代谢障碍；心力衰竭；导致心肌梗死的缺血性心脏病；精神病学疾病、例如精神分裂症；多种硫酸酯酶缺乏症(msd)；黏脂贮积症ii(ml ii)；黏脂贮积症iii(ml iii)；黏脂贮积症iv(ml iv)；gml-神经节苷脂贮积病(gm1)；神经元蜡样质-脂褐质沉积症(ncl1)；阿尔珀斯病；巴思综合征；β-氧化缺乏症；肉碱-酰基-肉碱缺乏症；肉碱缺乏症；肌酸缺乏综合征；辅酶q10缺乏症；复合体i缺乏症；复合体ii缺乏症；复合体iii缺乏症；复合体iv缺乏症；复合体v缺乏症；cox缺乏症；慢性进行性眼外肌麻痹综合征(cpeo)；cpt i缺乏症；cpt ii缺乏症；戊二酸尿症ii型；卡恩斯-塞尔综合征；乳酸性酸中毒；长链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症(lchad)；利氏病或综合征；利氏综合征法国-加拿大(lsfc)变体；致死性婴儿心肌病(lic)；勒夫特病；中链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症(mcad)；肌阵挛型癫痫和破碎红纤维(merrf)综合征；线粒体细胞病；线粒体隐性共济失调综合征；线粒体dna耗竭综合征；肌神经胃肠道障碍和脑病；皮尔逊综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏症；丙酮酸羧化酶缺乏症；polg突变；中/短链3-羟基酰基辅酶a脱氢酶(m/schad)缺乏症；极长链酰基辅酶a脱氢酶(vlcad)缺乏症；过氧化物酶体障碍；甲基丙二酸血症；甲羟戊酸激酶缺乏症；年龄依赖性的认知功能和肌肉强度下降；以及与神经变性和神经精神病学障碍相关的认知损害。
[0198]
涉及线粒体功能障碍的病症可以是cns障碍，例如神经变性疾病。
[0199]
神经变性疾病包括、但不限于帕金森病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化(als)、亨廷顿病、缺血、中风、路易体痴呆、多系统萎缩(msa)、进行性核上性麻痹(psp)、皮质基底节变性(cbd)和额颞叶痴呆。
[0200]
具体地，本发明的化合物可用于治疗或预防帕金森病，包括、但不限于与α-突触核蛋白、parkin、pink1、gba和lrrk2中的突变有关的pd，以及常染色体隐性的青少年帕金森病(ar-jp)或早发型帕金森病(eopd)，其中parkin或pink1被突变、截短或删除。
[0201]
具体地，本发明的化合物可用于治疗与神经变性和神经精神病学障碍相关的认知
损害，包括，例如，与阿尔茨海默氏病和帕金森病相关的认知损害、ad和pd的临床前或前驱形式、亨廷顿病、路易体痴呆疾病、与精神分裂症相关的认知损害、情绪障碍、双相和重性抑郁障碍。
[0202]
当用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症时，本文描述的本发明的化合物或其药物组合物可以与一种或多种另外的药剂组合。所述化合物可以与一种或多种另外的药剂组合，所述另外的药剂选自左旋多巴、多巴胺激动剂、单氨基加氧酶(mao)b抑制剂、儿茶酚o-甲基转移酶(comt)抑制剂、抗胆碱能药、利鲁唑、金刚烷胺、胆碱酯酶抑制剂、美金刚、丁苯那嗪、抗精神病药、地西泮、氯硝西泮、抗抑郁药和抗惊厥药。所述化合物可以与减少/除去神经变性疾病中的致病蛋白聚集体的药剂组合，所述药剂是例如减少/除去帕金森病、多系统萎缩或路易体痴呆中的α-突触核蛋白的药剂；减少/除去阿尔茨海默氏病或进行性核上性麻痹中的tau的药剂；减少/除去als或额颞叶痴呆中的tdp-43的药剂。
[0203]
在本发明的所有方面的另一个优选实施方案中，受益于usp30活性的障碍或病症是癌症。所述癌症可能与线粒体功能障碍相关。优选的癌症包括，例如，乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌或组织器官的其它癌症和血细胞癌诸如淋巴瘤和白血病、多发性骨髓瘤、转移性癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结肠直肠癌、结肠直肠癌和非小细胞肺癌。
[0204]
具体地，本发明的化合物可用于治疗或预防其中细胞凋亡途径失调的癌症，和更具体地其中bcl-2家族的蛋白发生突变或过表达或表达不足的癌症。
[0205]
纤维化是指在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增生和瘤形成以后发生的细胞外基质组分的积累。通过本发明的化合物和组合物可以治疗的纤维化障碍尤其包括与主要器官疾病相关的纤维化/纤维化障碍，例如间质性肺病(ild)、肝硬化、非酒精性脂肪肝病(nafld)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)(肝纤维化)、肾脏疾病(肾纤维化)、急性肾损伤(aki)、急性肾脏疾病(akd)、慢性肾脏疾病(ckd)、移植肾功能延迟、心脏或血管疾病(心脏纤维化)和眼部疾病；纤维增生性障碍，例如，全身和局部硬皮病、瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕、动脉粥样硬化、再狭窄和迪皮特朗氏挛缩；与创伤相关的瘢痕形成，例如，外科手术并发症、化疗药物诱导的纤维化(例如博来霉素诱导的纤维化)、辐射诱导的纤维化、意外损伤和烧伤)；腹膜后纤维化(奥蒙德氏病)；和接受腹膜透析的患者中的腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成，通常在肾移植后。参见，例如，wynn等人,2004,nat rev immunol.8月；4(8):583-594。因此，本发明涉及治疗或预防主要器官(包括、例如肺、肝、肾、心脏、皮肤、眼、胃肠道、腹膜和骨髓)的纤维化/纤维化障碍和/或与主要器官(包括、例如肺、肝、肾、心脏、皮肤、眼、胃肠道、腹膜和骨髓)相关的纤维化/纤维化障碍和本文描述的其它疾病/障碍的方法，以及用于所述方法中的化合物和组合物。
[0206]
所述化合物可以与用作肾脏疾病治疗的药剂组合，所述药剂包括抗糖尿病剂、心血管疾病药剂以及靶向疾病有关途径诸如氧化性应激(包括、但不限于nrf2/keap-1途径)和抗细胞凋亡途径(包括、但不限于抗p53药剂)的新型药剂。
[0207]
间质性肺病(ild)包括其中肺部炎症和纤维化为最终常见病理学途径的障碍，例如，结节病、硅沉着病、药物反应、感染和胶原血管病，诸如类风湿性关节炎和系统性硬化症(硬皮病)。肺的纤维化障碍包括、例如肺纤维化、特发性肺纤维化(ipf)、普通型间质性肺炎(uip)、间质性肺病、隐原性致纤维性肺泡炎(cfa)、闭塞性细支气管炎和支气管扩张。
[0208]
特发性肺纤维化(ipf)是最常见的ild类型并且尚无已知的原因。
[0209]
所述化合物可以与作为ipf治疗和潜在ild治疗的药剂(包括尼达尼布和吡非尼酮)组合。
[0210]
肝硬化具有与ild相似的原因，并且包括，例如，与病毒性肝炎,血吸虫病和慢性酒精中毒相关的硬化。
[0211]
肾脏疾病可能与糖尿病相关，糖尿病可以损伤肾脏并使肾脏形成瘢痕，从而导致进行性功能丧失，以及高血压疾病。肾纤维化可能发生在肾脏疾病的任何阶段，从损伤后急性肾脏疾病(akd)和慢性肾脏疾病(ckd)诸如偶然性ckd和进行性ckd到终末期肾脏疾病(esrd)。肾纤维化可以作为心血管疾病诸如高血压或糖尿病的结果而发生，高血压和糖尿病都对肾功能造成巨大压力，其促进纤维化应答。但是，肾纤维化也可以是特发性的(没有已知原因)，并且某些遗传性线粒体疾病也出现肾纤维化表现和相关症状。
[0212]
心脏病可以产生瘢痕组织，所述瘢痕组织可以损害心脏的泵送能力。
[0213]
眼部疾病包括，例如，黄斑变性以及视网膜和玻璃体视网膜病变，它们可以损害视力。
[0214]
在一个优选的实施方案中，本发明涉及特发性肺纤维化(ipf)的治疗或预防。
[0215]
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及肾纤维化的治疗或预防。
[0216]
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及急性肾损伤(aki)的治疗或预防，尤其在高风险患者中。例子包括手术后aki，例如器官移植，诸如由于缺血再灌注损伤、移植物功能延迟；肿瘤学，诸如化学疗法引起的aki；造影剂诱导的肾病，诸如直接的小管细胞毒性、血液动力学缺血和渗透效应；急性间质性肾炎，诸如由于药物或感染；由阻塞诸如肾结石引起的aki；和covid-19诱导的aki。特定的高风险患者亚组是正在接受心脏外科手术(例如，冠状动脉旁路移植术和/或瓣膜外科手术)的患者。对于aki存在已确定的静态危险因素，诸如年龄65岁或更大、胰岛素依赖型糖尿病、ckd(具有小于60ml/min/1.73m2的估计肾小球滤过率[egfr]的成年人是特别危险的)、心力衰竭、肝疾病、aki病史。
[0217]
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及由这样的aki引起的急性肾脏疾病(akd)或慢性肾脏疾病(ckd)的治疗或预防，包括、例如，小管间质性纤维化和糖尿病性肾病。
[0218]
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及肝疾病的治疗或预防，包括、但不限于nafld、nash、肝硬化、门静脉高血压、急性肝衰竭和肝细胞癌。肝疾病诸如nafld和nash可能与各种代谢病症诸如代谢综合征和ii型糖尿病相关，其也会增加各种糖尿病相关病状的风险，包括糖尿病性视网膜病变和周围神经病变。
[0219]
当用于治疗或预防涉及肝病和代谢功能障碍的病症时，如本文所述的本发明的化合物或其药物组合物可以与一种或多种另外的药剂组合，所述另外的药剂包括二甲双胍、磺酰脲类、dpp-4抑制剂、glp-1激动剂、ppar激动剂、sglt2抑制剂、血管紧张素-转换酶(ace)抑制剂和血管紧张素ii受体阻滞剂(arb)。
[0220]
利氏综合征是一种罕见的影响中枢神经系统的遗传性神经代谢障碍。这种进行性障碍开始于3个月至2岁之间的婴儿。它罕见地发生在青少年和成人中。利氏综合征可以由编码线粒体蛋白的核dna中的突变、线粒体dna中的突变(母系遗传性利氏综合征-mils)造成，或由位于x染色体的短臂上的称作丙酮酸脱氢酶的酶的缺乏造成(x-连锁的利氏综合征)。利氏综合征的症状通常迅速进展。最早的征象可能是吸吮能力差，以及头部控制和运
动技能的丧失。这些症状可能伴有食欲不振、呕吐、易怒、持续哭闹和癫痫发作。随着障碍进展，症状还可能包括全身无力、肌张力缺乏和乳酸性酸中毒发作，其可以导致呼吸和肾功能受损。
[0221]
在母系遗传性利氏综合征(mils)中，线粒体dna中的基因突变(以》90％的高比例)干扰在运动移动中发挥作用的脑区域中的运行细胞的能量来源。线粒体dna中的基因突变导致这些细胞中长期缺乏能量，这又影响中枢神经系统并导致运动功能进行性退化。当导致mils的线粒体dna中的基因突变较不丰富(低于90％)时，这种病症称作神经病共济失调和视网膜色素变性(narp)。还存在利氏病的一种形式(被称作x-连锁的利氏病)，其为产生另一组对细胞代谢重要的物质的基因中的突变的结果。存在利氏综合征的另一种变体，其被称作法国-加拿大变体，其特征在于称作lrpprc的基因中的突变。类似的神经学症状表达为利氏综合征的症状，尽管在法国-加拿大变体中通常也观察到了肝脂肪变性。
[0222]
在一个优选的实施方案中，本发明涉及利氏综合征或病的治疗或预防，包括、例如，x-连锁的利氏病、利氏综合征法国-加拿大变体和/或与利氏病相关的症状。
[0223]
所述化合物可以与可用作线粒体疾病治疗的新型药剂(包括、但不限于烟酰胺核苷)组合。
[0224]
对“治疗”的提及包括在暂时或永久基础上改善症状、缓解症状、消除症状的原因的手段。本发明的化合物可用于治疗在人类和其它哺乳动物中的本文中公开的疾病。
[0225]
在另一个实施方案中，本发明包括本文中公开的疾病的预防性治疗并且包括预防或减慢所述障碍或病症的症状的出现的手段。本发明的化合物可用于预防在人类和其它哺乳动物中的本文中公开的疾病。
[0226]
需要治疗或预防的患者可以例如是患有所述病症或处于患所述病症的风险中的人或其它哺乳动物。
[0227]
根据另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含如本文中定义的式(i)的化合物或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐、以及药学上可接受的稀释剂或载体。
[0228]
本发明的药物组合物包含与任何药学上可接受的载体、辅助剂(adjuvant)或媒介物组合的本发明的任何化合物。药学上可接受的载体的例子是本领域技术人员已知的，并且包括、但不限于防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，取决于施用模式和剂型的性质。所述组合物可以是例如片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒、酏剂、锭剂、栓剂、糖浆剂和液体制备物(包括混悬剂和溶液)的形式。在本发明的上下文中的术语“药物组合物”是指包含活性剂且另外包含一种或多种药学上可接受的载体的组合物。所述组合物可以进一步含有选自例如稀释剂、辅助剂、赋形剂、媒介物、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂的成分，取决于施用模式和剂型的性质。
[0229]
如本文中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种另外的药学试剂组合。所述化合物可以与另外的抗肿瘤治疗剂(例如，化疗药物或其它调节蛋白的抑制剂)组合。在一个实施方案中，另外的抗肿瘤治疗剂是bh-3模拟物。在另一个实施方案中，bh-3模拟物可以选自、但不限于abt-737、abt-199、abt-263和奥巴克拉(obatoclax)中的一种或多种。在另一个实施方案中，另外的抗肿瘤剂是化学治疗剂。化学
治疗剂可以选自、但不限于奥拉帕尼、丝裂霉素c、顺铂、卡铂、奥沙利铂、电离辐射(ir)、喜树碱、伊立替康、托泊替康、替莫唑胺、紫杉烷、5-氟嘧啶、吉西他滨和多柔比星。
[0230]
对于纤维化障碍的治疗或预防，例如，如本文中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种另外的药学试剂组合，所述另外的药学试剂选自抗胆碱能药剂、β-2模拟物、类固醇、pde-iv抑制剂、p38 map激酶抑制剂、nk1拮抗剂、ltd4拮抗剂、egfr抑制剂和内皮缩血管肽拮抗剂。
[0231]
具体地，如本文中所述的本发明的化合物或其药物组合物可以单独使用或与一种或多种另外的药学试剂组合，所述另外的药学试剂选自：一般免疫抑制药物，诸如皮质类固醇，免疫抑制剂或细胞毒剂，或抗纤维化剂，诸如吡非尼酮或非特异性的激酶抑制剂(例如尼达尼布)。
[0232]
本发明的药物组合物可以以任何适当有效的方式施用，诸如口服、胃肠外、局部、吸入、鼻内、直肠、阴道内、眼和耳。适合用于递送本发明的化合物的药物组合物和它们的制备方法将是本领域技术人员容易明白的。用于它们的制备的这类组合物和方法可以参见，例如，“remington's pharmaceutical sciences”,第19版(mack publishing company,1995)。
[0233]
口服施用
[0234]
可以口服施用本发明的化合物。口服施用可以包括吞咽，从而化合物进入胃肠道；或可以采用含服或舌下施用，由此使化合物自嘴直接进入血流。
[0235]
适用于口服施用的制剂包括固体制剂诸如片剂、含有微粒、液体或粉末的胶囊剂、锭剂(包括液体填充的)、咀嚼物、多微粒和纳米微粒、凝胶、薄膜(包括粘膜粘着剂)、胚珠样制剂(ovule)、喷雾剂和液体制剂。
[0236]
液体制剂包括混悬剂、溶液、糖浆剂和酏剂。这样的制剂可以用作软胶囊或硬胶囊中的填充剂并且通常包含载体，例如，水、乙醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体制剂还可以通过将固体(例如得自药囊)重构来制备。
[0237]
本发明的化合物也可以以快速溶解、快速崩解剂型使用，诸如liang和chen(2001)在expert opinion in therapeutic patents,11(6),981-986中描述的那些。
[0238]
使用制剂化学家已知的标准方法，例如，通过直接压制、制粒(干法、湿法或熔融)、熔融凝结或挤出，可以制备典型的片剂。片剂制剂可以包含一个或多个层并且可以是包衣的或未包衣的。
[0239]
适用于口服施用的赋形剂的例子包括：载体，例如，纤维素、碳酸钙、磷酸氢钙、甘露醇和柠檬酸钠，制粒粘合剂，例如，聚乙烯基吡咯烷、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和明胶，崩解剂，例如，羟基乙酸淀粉钠和硅酸盐，润滑剂，例如，硬脂酸镁和硬脂酸，润湿剂，例如，月桂基硫酸钠，防腐剂，抗氧化剂，香料和着色剂。
[0240]
用于口服施用的固体制剂可以配制成立即释放和/或调节释放。调节释放制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控双重释放、靶向释放和程序化释放。合适的调节释放技术诸如高能分散体、渗透和包衣颗粒的细节可以参见verma等人,pharmaceutical technology on-line,25(2),1-14(2001)。其它调节释放制剂描述于美国专利号6,106,864。
[0241]
胃肠外施用
[0242]
本发明的化合物还可以直接施用进血流、肌肉或内脏器官。胃肠外施用的适宜手段包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内和皮下。用于胃肠外施用的合适装置包括针(包括显微操作针)注射器、无针注射器和输注技术。
[0243]
胃肠外制剂通常是可能含有赋形剂诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选调至3-9的ph)的水溶液，但是，对于一些应用，它们可以更适当地被配制为无菌的非水性溶液或被配制为要与合适的媒介物(诸如无菌的、无热原的水)结合使用的干燥形式。
[0244]
使用本领域技术人员众所周知的标准制药技术，可以容易地完成在无菌条件下胃肠外制剂的制备，例如，通过冷冻干燥。
[0245]
通过合适的加工，例如，使用高能喷雾干燥的分散体和/或通过使用适当的制剂技术，诸如使用增溶剂，可以增加用于制备胃肠外溶液的式(i)的化合物的溶解度。
[0246]
可以将用于胃肠外施用的制剂配制成立即和/或调节释放。调节释放制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控双重释放、靶向释放和程序化释放。
[0247]
本发明的药物组合物还包括本领域已知的用于绕过血脑屏障的组合物和方法，或可以被直接注射到脑中。合适的注射区域包括大脑皮质、小脑、中脑、脑干、下丘脑、脊髓和心室组织，以及包括颈动脉体和肾上腺髓质在内的pns区域。
[0248]
剂量
[0249]
化合物的有效剂量的大小当然会随着要治疗的病症的严重程度和施用途径的性质而变化。适当剂量的选择是在医师的能力范围内。每日剂量范围是约10μg至约100mg/千克人和非人动物体重，并且通常可以是每剂量约10μg至30mg/千克体重。可以每天施用上述剂量1-3次。
[0250]
例如，口服施用可能需要5mg至1000mg、诸如5至500mg的总每日剂量，而静脉内剂量可能仅需要0.01-30mg/kg体重，诸如0.1-10mg/kg，更优选地0.1-1mg/kg体重。可以在单剂量或分份剂量中施用总每日剂量。
[0251]
技术人员还会明白，在某些病症的治疗或预防中，本发明的化合物可以在“根据需要”基础上(即根据需要或期望)作为单剂量施用。
[0252]
合成方法
[0253]
使用以下一般反应方案和代表性实施例中所述的方法，可以制备式(i)的化合物。在适当的情况下，在方案中的单独转化可以以不同的顺序完成。通过以下非限制性实施例说明本发明，其中使用了以下缩写和定义。通过液相色谱法-质谱法(lcms)或1h nmr或两者表征化合物。
[0254]
根据另一个方面，本发明提供了一种用于制备式(i)(i)的化合物的方法，其包含使式(iv)的化合物(其中y是oh)与式(v)(i)的胺(其中pg是保护基，诸如boc或cbz)反应，以产生式(iii)(i)的酰胺(方案1)。所述酰胺-偶联反应可以使用标准方法进行，例如通过使用偶联剂诸如dcc、hatu、hbtu、edc或通过混合酸酐进行反应。可替换地，使用socl2、pcl3或pcl5，可以将酸(iv)(其中y是oh)转化成酰氯(iv)(其中y是cl)，然后使其与胺(v)(i)反应，优选地在合适的溶剂中在合适的碱存在下。可替换地，可以使化合物(iv)(其中y形成酯)直接与胺(v)(i)反应，优选地在合适的溶剂中。
[0255]
可以使用标准方法将式(iii)(i)的化合物去保护以产生胺(ii)(i)，然后可以使其与溴化氰反应以产生对应的式(i)(i)的化合物。
[0256][0257]
方案1
[0258]
在另一个方面，本发明提供了化合物，其选自式(ii)(i)和(iii)(i)，其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的盐：
[0259][0260]
其中pg是保护基，优选boc或cbz，且x、r1、r2、r3、r4和r5如本文中关于式(i)的化合物及其优选实施方案所定义。当x是ch时，式(ii)(i)、(iii)(i)和(iv)的化合物分别是(iia)(i)、(iiia)(i)和(iva)。当x是n时，式(ii)(i)、(iii)(i)和(iv)的化合物分别是(iib)(i)、(iiib)(i)和(ivb)(i)。
[0261]
根据另一个方面，本发明提供了一种用于制备式(i)(ii)的化合物的方法，其包含使式(iv)的化合物(其中y是oh)与式(v)(ii)的胺(其中pg是保护基，诸如boc或cbz)反应以产生式(iii)(ii)的酰胺(方案2)。所述酰胺-偶联反应可以使用标准方法进行，例如通过使用偶联剂诸如dcc、hatu、hbtu、edc或通过混合酸酐进行反应。可替换地，使用socl2、pcl3或pcl5，可以将酸(iv)(其中y是oh)转化成酰氯(iv)(其中y是cl)，然后使其与胺(v)(ii)反应，优选地在合适的溶剂中在合适的碱存在下。可替换地，可以使化合物(iv)(其中y形成酯)直接与胺(v)(ii)反应，优选地在合适的溶剂中。
[0262]
可以使用标准方法将式(iii)(ii)的化合物去保护以产生胺(ii)(ii)，然后可以使其与溴化氰反应以产生对应的式(i)(ii)的化合物。
[0263][0264]
方案2
[0265]
在另一个方面，本发明提供了化合物，其选自式(ii)(ii)和(iii)(ii)，其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的盐：
[0266][0267]
其中pg是保护基，优选boc或cbz，且x、r1、r2、r3、r4和r5如本文中关于式(i)的化合物及其优选实施方案所定义。当x是ch时，式(ii)(ii)、(iii)(ii)和(iv)的化合物分别是(iia)(ii)、(iiia)(ii)和(iva)。当x是n时，式(ii)(ii)、(iii)(ii)和(iv)的化合物分别是(iib)(ii)、(iiib)(ii)和(ivb)(ii)。
[0268]
保护基优选地选自叔丁基氧基羰基(boc)、苄氧基羰基(cbz)、对甲氧基苄基羰基(meoz)、9-芴基甲氧羰基(fmoc)、乙酰基(ac)、苯甲酰基(bz)、苄基(bn)、氨基甲酸酯、对甲氧基苄基(pmb)、3,4-二甲氧基苄基(dmpm)、对甲氧基苯基(pmp)、甲苯磺酰基(ts)、三氯乙氧基羰基(troc)、4-硝基苯磺酰基(nosyl)和2-硝基苯基次磺酰基(nps)。最优选的是boc和cbz。
[0269]
缩写
[0270]
br s
ꢀꢀ
宽单峰(nmr信号)
ꢀꢀꢀꢀꢀ
meoh
ꢀꢀ
甲醇
[0271]
co
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一氧化碳
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min
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分钟
[0272]dꢀꢀꢀꢀꢀ
双峰(nmr信号)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n2ꢀꢀꢀꢀꢀ
氮气
[0273]
dba
ꢀꢀꢀ
二苄基丙酮
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
nmp
ꢀꢀꢀꢀ
n-甲基吡咯烷酮
[0274]
dcm
ꢀꢀꢀ
二氯甲烷
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
rac
ꢀꢀꢀꢀ
外消旋的
[0275]
dmf
ꢀꢀꢀ
n,n-二甲基甲酰胺
ꢀꢀꢀꢀ
rt
ꢀꢀꢀꢀꢀ
室温
[0276]
dmso
ꢀꢀ
二甲基亚砜
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀsꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
单峰(nmr信号)
[0277]
es
ꢀꢀꢀꢀ
电喷射
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
sfc
ꢀꢀꢀꢀ
超临界流体色谱法
[0278]
etoac 乙酸乙酯
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
socl2ꢀꢀ
亚硫酰氯
[0279]hꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tbd
ꢀꢀꢀꢀ
1,5,7-三氮杂双环
[0280]
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
[4.4.0]癸-5-烯
[0281]
h2ꢀꢀꢀꢀ
氢气
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tea
ꢀꢀꢀꢀ
三乙胺
[0282]mꢀꢀꢀꢀꢀ
多重峰(nmr信号)
ꢀꢀꢀꢀꢀ
tfa
ꢀꢀꢀꢀ
三氟乙酸
[0283]
mscl
ꢀꢀ
甲磺酰氯
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
thf
ꢀꢀꢀꢀ
四氢呋喃
[0284]
mecn
ꢀꢀ
乙腈
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tscl
ꢀꢀꢀ
4-甲苯磺酰氯
[0285]
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
vol
ꢀꢀꢀꢀ
体积
[0286]
hplc
ꢀꢀ
高效液相色谱法
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
lcms
ꢀꢀꢀ
液相色谱法-质谱法
[0287]
lcms/hplc/sfc方法
[0288]
方法c
[0289][0290][0291]
方法c1
[0292][0293]
方法h
[0294][0295][0296]
方法h1
[0297][0298]
方法h3
[0299][0300][0301]
方法j
[0302][0303]
方法m
[0304]
[0305][0306]
方法13
[0307][0308]
方法y3用于分析型手性sfc的方法
[0309]
[0310][0311]
方法y4用于分析型手性sfc的方法
[0312][0313]
方法y5用于分析型手性sfc的方法
[0314]
方法y8用于分析型手性sfc的方法
[0315]
[0316][0317]
方法y9用于分析型手性sfc的方法
[0318][0319]
方法y10用于分析型手性hplc的方法
[0320][0321]
方法y13
[0322][0323]
中间体的合成
[0324]
中间体a
[0325]
5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0326][0327]
(i)br2，dcm，0℃至室温，5h；(ii)nan(cho)2，mecn，80℃，1h，然后meoh，浓hcl，80℃，2h；(iii)k2co3，dcm，0℃至室温，2h；(iv)pocl3，105℃，5h。
[0328]
步骤(i)
[0329]
2-溴-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮
[0330]
一式两份地进行该反应。在0℃向1-(3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(cas 349-76-8，来自combi-blocks,100.0g,531.49mmol)在dcm(9000ml)中的搅拌溶液中逐滴加入溴(84.93g,27.39ml,531.49mmol)在dcm(1000ml)中的溶液。将混合物缓慢地温热至室温并搅拌5h。将来自两个反应的混合物合并和倒入饱和nahco3溶液(8000ml)中，并用dcm(4x5000ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物悬浮于meoh(1000ml)中，在-78℃搅拌30min以形成沉淀物，将其滤出并在抽吸下收集以提供2-溴-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(280.0g,1048.49mmol,98％收率)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:8.29-8.31(m,2h),8.07(d,j＝8.0hz,1h),7.83(t,j＝7.6hz,1h),5.06(s,2h)。
[0331]
步骤(ii)
[0332]
2-氨基-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮盐酸盐
[0333]
向2-溴-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(276.0g,1033.51mmol)在mecn(2750ml)中的搅拌溶液中加入二甲酰氨基钠(147.32g,1550.27mmol)。将反应混合物在80℃加热1h，然后在减压下浓缩。将残余物用meoh(900ml)和浓hcl(680ml)稀释。然后将混合
物在80℃加热2h，并将其冷却至室温，并将混合物在减压下浓缩。将残余物与异丙醇(1800ml)一起搅拌以形成沉淀物，将其滤出并在抽吸下收集，用异丙醇(200ml)洗涤和在减压下干燥以提供2-氨基-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮盐酸盐(223.0g,930.48mmol,90％收率)。
[0334]
lcms:方法h,2.59min,ms:es 204.0。
[0335]
步骤(iii)
[0336]
2-氧代-2-((2-氧代-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)乙酸乙酯
[0337]
在0℃向2-氨基-1-(3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮hcl盐(285.0g,1189.18mmol)在dcm(3000ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(410.26g,2972.95mmol)。在0℃在2h的时间段内逐滴加入乙基草酰氯(243.48g,199.25ml,1783.77mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入冰冷的水(2000ml)中，并用dcm(2x1000ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以提供2-氧代-2-((2-氧代-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)乙酸乙酯(120.0g,395.72mmol,33％收率)。将该物质不经纯化直接用在下一步中。
[0338]
lcms:方法h,3.07min,ms:es-301.9。
[0339]
步骤(iv)
[0340]
5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0341]
将2-氧代-2-((2-氧代-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙基)-氨基)乙酸乙酯(120.0g,395.72mmol)在pocl3(600ml,5体积)中的搅拌溶液在105℃加热5h。将反应混合物冷却至室温，然后缓慢地倒在碎冰(5kg)上，将混合物用固体nahco3碱化，并用乙酸乙酯(3x4000ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物悬浮于meoh(1500ml)中并在-78℃搅拌0.5h以形成沉淀物，将其过滤并在抽吸下收集以提供5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(85g,298.01mmol,75.30％收率)。
[0342]
lcms:方法h,3.61min,ms:es 286.15；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:8.22(s,1h),8.17(s,1h),8.13(d,j＝7.6hz,1h),7.80-7.86(m,2h),4.40-4.45(m,2h),1.37(t,j＝7.2hz,3h)。
[0343]
中间体b
[0344]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0345][0346]
(i)nah，thf，0℃，3h；(ii)nh2nh2.h2o，meoh，0℃至室温，16h；(iii)k2co3，dcm，0℃至室温，2h；(iv)tscl，tea，dcm，0℃至室温，2h。
[0347]
步骤(i)
[0348]
2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
[0349]
一式三份地进行该反应。在0℃向环丙醇(cas 16545-68-9，来自synthonix,0.52g,9.0mmol)在thf(8ml)中的搅拌溶液中逐份加入nah(60％在油中，0.36g,9.0mmol)并搅拌30min。逐滴加入2-氟-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(cas 556112-92-6，来自oakwood,1.0g,4.50mmol)在thf(2ml)中的溶液，并将混合物在0℃搅拌3h。将三个反应混合物合并和倒入冰冷的水(200ml)中，并用etoac(2x200ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以提供2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(2.1g,8.07mmol,60％收率)。将该物质直接用在下一步中。
[0350]
lcms:方法h,3.92min,ms:es 261.0。
[0351]
步骤(ii)
[0352]
2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰肼
[0353]
在0℃向2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(2.1g,8.07mmol)在meoh(20ml)中的搅拌溶液中逐滴加入水合肼(99％,1.0g,20.19mmol)。将混合物缓慢地温热至室温并搅拌16h，然后在减压下浓缩以产生2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰肼(2.0g,7.68mmol,95％收率)。将该物质直接用在下一步中。
[0354]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 9.21(s,1h),7.82-7.86(m,2h),7.60(d,j＝8.4hz,1h),4.56(br s,2h),4.00-4.08(m,1h),0.73-0.91(m,4h)。
[0355]
步骤(iii)
[0356]
2-(2-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
[0357]
在0℃向2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰肼(2.0g,7.68mmol)在dcm(20ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(3.18g,23.07mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(1.56g,11.53mmol)。将混合物温热至室温，搅拌2h，然后倒入水(100ml)中，并用etoac(2x100ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以提供2-(2-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(3.0g,定量收率)。将该粗制物质直接用在下一步中。
[0358]
lcms:方法h,2.32min,ms:es-359.0。
[0359]
步骤(iv)
[0360]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0361]
在室温向2-(2-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(3.0g,8.33mmol)在dcm(30ml)中的搅拌溶液中加入tea(1.68g,2.3ml,16.66mmol)。在0℃加入甲苯磺酰氯(1.58g,8.33mmol)。将混合物温热至室温，搅拌2h，然后倒入水(100ml)中，并用etoac(2x100ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，15％etoac在正己烷类中)纯化以提供5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(1.2g,3.51mmol，经2步46％收率)。
[0362]
lcms:方法h,3.67min,ms:es 343.1。
[0363]
中间体c
[0364]
5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0365][0366]
(i)nh2nh2.h2o，meoh，0℃至室温，16h；(ii)k2co3，dcm，0℃至室温，2h；(iii)tscl，tea，dcm，0℃至室温，2h。
[0367]
步骤(i)
[0368]
3-(三氟甲基)苯甲酰肼
[0369]
在0℃向3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(cas 2557-13-3，来自combi-blocks,3.0g,14.70mmol)在meoh(30ml)中的搅拌溶液中逐滴加入水合肼(99％,1.83g,36.76mmol)。将混合物缓慢地温热至室温并搅拌16h，然后在减压下浓缩。将残余物倒入水(300ml)中，并用etoac(2x300ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以产生3-(三氟甲基)苯甲酰肼(3.4g,定量收率)。
[0370]
lcms:方法c,1.33min,ms:es 204.9。
[0371]
步骤(ii)
[0372]
2-氧代-2-(2-(3-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)乙酸乙酯
[0373]
在室温向3-(三氟甲基)苯甲酰肼(3.4g,16.66mmol)在dcm(40ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(6.89g,49.98mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(3.41g,2.79ml,24.99mmol)。将混合物温热至室温，搅拌2h，然后倒入水(500ml)中，并用etoac(2x400ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以提供2-氧代-2-(2-(3-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)乙酸乙酯(6.0g,定量收率)。
[0374]
lcms:方法c,1.43min,ms:es 305.0。
[0375]
步骤(iii)
[0376]
5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0377]
在0℃向2-氧代-2-(2-(3-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)乙酸乙酯(6.0g,19.73mmol)在dcm(60ml)中的搅拌溶液中加入tea(3.98g,5.5ml,39.46mmol)和甲苯磺酰氯(3.76g,19.73mmol)。将混合物温热至室温，搅拌2h，然后倒入水(500ml)中，并用dcm(2x300ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，15％etoac在正己烷类中)纯化以提供5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(2.0g,6.99mmol,经3步47％收率)。
[0378]
lcms:方法c,1.71min,ms:es 286.8。
[0379]
中间体d
[0380]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0381][0382]
(i)nah，thf，0℃，2h；(ii)苯基三甲基三溴化铵，室温，1.5h；(iii)nan(cho)2，mecn，80℃，1.5h，然后meoh，浓hcl，80℃，1.5h；(iv)k2co3，dcm，0℃，1h；(v)pocl3，100℃，2h。
[0383]
步骤(i)
[0384]
1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮
[0385]
在0℃向环丙醇(cas 16545-68-9，来自synthonix,0.56g,9.70mmol)在thf(8ml)中的搅拌溶液中逐份加入nah(60％在矿物油中,0.23g,9.70mmol)。在0℃逐滴加入1-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(cas 202664-53-7，来自combi-blocks,1.0g,4.85mmol)在thf(2ml)中的溶液。将混合物在0℃搅拌2h，然后倒入水(100ml)中，并用etoac(2x100ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，6.9％etoac在正己烷类中)纯化以产生1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(0.95g,3.89mmol,80％收率)。
[0386]1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm:8.04(d,j＝2.0hz,1h),7.74-7.76(m,1h),7.48(d,j＝8.8hz,1h),3.90-3.95(m,1h),2.61(s,3h),0.87-0.98(m,4h)。
[0387]
步骤(ii)
[0388]
2-溴-1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮
[0389]
在室温向1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(1.60g,6.56mmol)在thf(10ml)中的搅拌溶液中逐份加入苯基三甲基三溴化铵(2.71g,7.21mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h，然后倒入水(100ml)中，并用etoac(2x150ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，1.8％ etoac在正己烷类中)纯化以产生2-溴-1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(1.58g,4.91mmol,74％收率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm:8.13-8.16(m,1h),7.82(t,j＝8.8hz,1h),7.52(d,j＝7.2hz,1h),4.52(s,2h),3.97-4.00(m,1h),0.97-0.99(m,4h)。
[0390]
步骤(iii)
[0391]
2-氨基-1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮盐酸盐
[0392]
在室温向2-溴-1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(1.50g,4.66mmol)在mecn(15ml)中的搅拌悬浮液中加入二甲酰氨基钠(0.53g,5.59mmol)。将混合物在80℃加热1.5h，然后将其冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用meoh(15ml)和浓hcl(1.5ml)稀释。将混合物再次在80℃加热1.5h，然后将其冷却至室温。将混合物在减压下浓缩，将残余物与乙醚(2x10ml)一起搅拌以形成沉淀物，将其通过在减压下过滤进行收集以提供2-氨
基-1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮hcl盐(0.91g,3.08mmol,66％收率)。lcms:方法c,1.39min,ms:es :260.1。
[0393]
步骤(iv)
[0394]
2-((2-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯
[0395]
在0℃向2-氨基-1-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮hcl盐(0.90g,3.04mmol)在dcm(10ml)中搅拌悬浮液中逐滴加入碳酸钾(1.68g,12.18mmol)和乙基草酰氯(0.83g,6.09mmol)。将混合物在0℃搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x100ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以提供2-((2-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(0.44g,1.24mmol,40％收率)。
[0396]
lcms:方法c,1.72min,ms:es :360.4。
[0397]
步骤(v)
[0398]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯
[0399]
将2-((2-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙酸乙酯(0.44g,1.22mmol)在pocl3(4ml,10体积)中的溶液在100℃加热2h。将混合物冷却至室温并倒入碎冰中，并用etoac(2x100ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物悬浮于meoh(10ml)中并在-78℃搅拌10min。将固体通过在减压下过滤进行收集以提供5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.14g,0.42mmol,34％收率)。
[0400]
lcms:方法c,1.96min,ms:es :342.0。
[0401]
中间体e
[0402]
5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0403][0404]
(i)co气体，pdcl2(dppf)dcm复合物，meoh，naoac，70℃ 16h；(ii)水合肼，meoh，0℃至室温，16h；(iii)乙基草酰氯，k2co3，dcm，0℃至室温，1h；(iv)tscl，tea，dcm，0℃至室温，3h。
[0405]
步骤(i)
[0406]
2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
[0407]
在高压釜中向2-溴-1-甲氧基-4-(三氟甲基)苯(cas 402-10-8,3.0g,11.76mmol)在meoh中的搅拌溶液中加入naoac(4.82g,58.82mmol)，并将混合物用n2脱气并净化20分钟。
[0408]
加入[1,1
′‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)与dcm的复合物(1.91g,2.35mmol)。将混合物在co(g)压力下在70℃加热16h。将混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物倒入水(50ml)中，并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥，
过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，10％etoac在正己烷类中)纯化以产生2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(0.63g,2.69mmol,22％收率)。
[0409]
lcms:方法c,1.31min,ms:没有观察到与产物一致的质量离子。
[0410]
步骤(ii)
[0411]
2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰肼
[0412]
在0℃向2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(0.60g,2.56mmol)在meoh(6ml)中的搅拌溶液中加入水合肼(0.3ml,6.41mmol)。将混合物温热至室温并搅拌16h，然后在减压下浓缩以产生2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰肼(0.57g,2.43mmol,95％收率)。
[0413]
lcms:方法j,3.41min,ms:es 234.8。
[0414]
步骤(iii)
[0415]
2-(2-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
[0416]
在0℃向2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰肼(0.54g,2.31mmol)在dcm(5.4ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.63g,4.61mmol)，随后在0℃逐滴加入乙基草酰氯(0.52ml,4.61mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用dcm(3x150ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥，过滤并浓缩以产生2-(2-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰基)-肼基)-2-氧代乙酸乙酯(0.62g,1.85mmol,80％收率)。
[0417]
lcms:方法j,3.98min,ms:es 335.0。
[0418]
步骤(iv)
[0419]
5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0420]
在0℃向2-(2-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(0.58g,1.73mmol)在dcm(5.8ml)中的搅拌溶液中逐份加入tea(0.75ml,5.21mmol)和tscl(0.33g,1.73mmol)。将混合物温热至室温并搅拌3h，然后倒入水(20ml)中，并用etoac(3x150ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥，并在减压下浓缩，然后将残余物使用快速柱色谱法(硅胶，25％etoac在正己烷类中)纯化以产生5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.3g,0.95mmol,54％收率)。
[0421]
lcms:方法j,3.98min,ms:es 317.0。
[0422]
中间体f
[0423]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0424][0425]
(i)socl2，meoh，0℃至70℃5h；(ii)水合肼，meoh，0℃至室温，24h；(iii)乙基草酰氯，k2co3，dcm，0℃至室温，1h；(iv)tscl，tea，dcm，0℃至室温，2h。
[0426]
步骤(i)
[0427]
2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
[0428]
在0℃向2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酸(cas 657-06-7，来自combi-blocks,2.0g,8.93mmol)在meoh(20ml)中的搅拌溶液中逐滴加入socl2(1.58g,13.39mmol)。将混合物在70℃加热5h，然后将其冷却至室温并倒入水(100ml)中，并用etoac(2x100ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩以产生2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(2.1g,8.82mmol,98％收率)。将该粗制物质直接用在下一步中。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:8.15(s,1h),7.96-7.98(m,1h),7.84-7.86(m,1h),3.90(s,3h)。
[0429]
步骤(ii)
[0430]
2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酰肼
[0431]
在0℃向2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.5g,6.30mmol)在meoh(10ml)中的搅拌溶液中逐滴加入水合肼(3ml,2体积)。将混合物温热至室温并搅拌24h，然后倒入水(100ml)中，并用dcm(2x100ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酰肼(1.9g,定量收率)。lcms:方法c,1.33min,ms:es 没有观察到与产物一致的质量离子。
[0432]
步骤(iii)
[0433]
2-(2-(2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯
[0434]
在0℃向2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酰肼(1.9g,7.98mmol)在dcm(15ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(4.41g,31.93mmol)。在0℃逐滴加入乙基草酰氯(2.18g,1.8ml,15.96mmol)。将混合物温热至室温，搅拌1h，然后倒入水(100ml)中，并用dcm(2x100ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以提供2-(2-(2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(1.2g,3.55mmol，经2步56％收率)。
[0435]
lcms:方法c,1.12min,ms:es 339.1。
[0436]
步骤(iv)
[0437]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯
[0438]
在室温向2-(2-(2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙酯(1.1g,3.25mmol)在dcm(10ml)中的搅拌溶液中加入tea(0.98g,1.36ml,9.75mmol)。在0℃加入tscl(0.74g,3.90mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入水(100ml)中，并用dcm(2x80ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，26％etoac在正己烷类中)纯化以提供5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.8g,2.50mmol,70％收率)。
[0439]
lcms:方法c1,1.33min,ms:es 321.2。
[0440]
中间体g
[0441]
(2s,4r)-4-氨基-2-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0442][0443]
(i)mscl，tea，dcm，0℃，1h；(ii)叠氮化钠，dmf，0℃至80℃，4h；(iii)3m libh4在
thf中，thf，-30℃至室温，3h；(iv)mscl，tea，dcm，-10℃至室温，3h；(v)nasme(15％在水中)，meoh，室温，16h；(vi)oxone，meoh：水，0℃至室温，1h；(vii)10％ pd/c(50％湿度)，meoh，h2，室温，2h。
[0444]
步骤(i)
[0445]
(2s,4s)-4-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲基酯
[0446]
一式两份地进行该反应。在0℃向(2s,4s)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲基酯(cas 102195-79-9，来自pharmablock,500g,2038.3mmol,1.0当量)在dcm(5000ml)中的搅拌溶液中加入tea(411.7g,566ml,4076.6mmol,2.0当量)，随后逐滴加入mscl(302.1g,305ml,2649.8mmol,1.3当量)，并将混合物搅拌2h。将其倒入水(2500ml)中并将有机相分离，并将水相进一步用dcm(3000ml)萃取。将有机相合并，并用稀柠檬酸溶液(800ml)和盐水(1500ml)洗涤，并经na2so4干燥。将两批合并，并在减压下浓缩以提供作为棕色半固体的(2s,4s)-4-((甲基磺酰基)-氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲基酯(1200g,3715.2mmol,91％收率)。
[0447]
lcms：方法c，1.51min，ms：[m-56]268.1；1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm：5.26-5.27(m，1h)，4.42-4.56(m，1h)，3.78-3.83(m，5h)，3.04(s，3h)，2.51-2.58(m，2h)，1.51(s，4.5h，boc旋转异构体1)，1.46(s，4.5h，boc旋转异构体2)。
[0448]
步骤(ii)
[0449]
(2s,4r)-4-叠氮基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲基酯
[0450]
在0℃向(2s,4s)-4-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲基酯(500g,1548.0mmol,1.0当量)在dmf(5000ml)中的搅拌溶液中逐份加入nan3(139.3g,2322.0mmol,1.5当量)。将反应混合物逐渐加热至80℃保持4h。将反应混合物冷却至室温并倒入冰冷的水(3500ml)中，并用etoac(3x3000ml)萃取。将有机相合并，并用冰冷的水(4x1000ml)和盐水(2x1000ml)洗涤，经na2so4干燥并在减压下浓缩以提供作为棕色半固体的(2s,4r)-4-叠氮基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲基酯(400g,1481.5mmol,95％收率)。
[0451]
lcms:方法c,1.65min,ms:es 271.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:4.36-4.39(m,1h),4.20-4.27(m,1h),3.65-3.68(m,3h),3.51-3.58(m,1h),3.38-3.41(d,1h),2.29-2.38(m,1h),2.10-2.19(m,1h),1.40(s,4.5h,boc旋转异构体1),1.34(s,4.5h,boc旋转异构体2)。
[0452]
步骤(iii)
[0453]
(2s,4r)-4-叠氮基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0454]
在-30℃向(2s,4r)-4-叠氮基吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲基酯(300g,1111.1mmol,1.0当量)在thf(3000ml)中的搅拌溶液中逐滴加入libh4溶液(3m的在thf中的溶液，47.2g,2166.7mmol,1.95当量)。将混合物温热至室温并搅拌3h。通过在-78℃逐滴加入nahco3饱和溶液(4000ml)淬灭混合物，并在室温搅拌16h。将粗制混合物用etoac(3x3000ml)萃取，并用盐水(1000ml)洗涤。将有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩以产生棕色半固体(220g)。将粗制的半固体通过柱色谱法(23％ etoac在己烷中)纯化以得到作为淡黄色液体的(2s,4r)-4-叠氮基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(202.5g,836.8mmol,75％收率)。
[0455]
lcms:方法c,1.51min,ms:es 243.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:4.77(s,1h),4.24(s,1h),3.77(br s,1h),3.33-3.46(m,4h),2.10-2.15(m,1h),1.98-1.99(m,1h),1.39(s,9h)。
[0456]
步骤(iv)
[0457]
(2s,4r)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸酯
[0458]
在室温向(2s,4r)-4-叠氮基-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(440g,1818.2mmol,1.0当量)在dcm(4400ml)中的搅拌溶液中加入三乙胺(552g,760ml,5454.5mmol,3.0当量)。将混合物搅拌10min，然后在-10℃逐滴加入mscl(312.4g,2727.3mmol,1.5当量)。将混合物缓慢地温热至室温并搅拌3h，然后倒入冰冷的水(4000ml)中并将有机相分离。将水相用dcm(2x2000ml)萃取。将有机相合并，并用稀柠檬酸(2x1000ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供作为棕色液体的(2s,4r)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(550g,定量收率)。将其直接用在下一步中。
[0459]
lcms:方法m,17.67min,ms:[m-56]265.0。
[0460]
步骤(v)
[0461]
(2s,4r)-4-叠氮基-2-((甲硫基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0462]
在室温向(2s,4r)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5.0g,15.62mmol)在meoh(55ml)中的搅拌溶液中逐滴加入甲硫醇钠(15％在水中)(4.4g,62.50mmol)。将混合物在室温搅拌16h，然后倒入水(100ml)中，并用etoac(3x70ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩以产生(2s,4r)-4-叠氮基-2-((甲硫基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.07g,14.96mmol,96％收率)。
[0463]
lcms:方法c,1.94min,ms:es 173.1(m-100)。
[0464]
步骤(vi)
[0465]
(2s,4r)-4-叠氮基-2-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0466]
在0℃向(2s,4r)-4-叠氮基-2-((甲硫基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.0g,14.70mmol)在meoh(20ml)中的搅拌溶液中逐滴加入oxone(过氧单硫酸钾)(13.6g,22.06mmol)在水(20ml)中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(80ml)中，并用etoac(3x80ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩以产生(2s,4r)-4-叠氮基-2-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.88g,12.76mmol,87％收率)。
[0467]
lcms:方法c,1.53min,ms:es 327.2(m 23)。
[0468]
步骤(vii)
[0469]
(2s,4r)-4-氨基-2-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0470]
在室温向(2s,4r)-4-叠氮基-2-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.88g,12.76mmol)在meoh(40ml)中的搅拌溶液中加入10％ pd/c(50％湿度,1.94g,50％w/w)并用h2气体净化2h。将混合物穿过硅藻土过滤，用meoh(70ml)洗涤并在减压下浓缩。将得到的粗制物质溶解在etoac(100ml)中，并用1n hcl(50ml)洗涤。将水层用碳酸氢钠碱化直到ph～8，并用10％的meoh在dcm中的溶液(5x100ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩以产生(2s,4r)-4-氨基-2-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.5g,8.99mmol,70％收率)。
[0471]
lcms:方法c,1.23min,ms:es 279.3。
[0472]
中间体h
[0473]
(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0474][0475]
(i)k2co3，dmf，0℃至室温，48h；(ii)10％ pd/c，h2，meoh，室温，1h。
[0476]
步骤(i)
[0477]
(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0478]
在0℃向1h-1,2,3-三唑(cas 288-36-8，来自spectrochem,0.76g,11.24mmol)在dmf(30ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(3.88g,28.11mmol)。在0℃加入(2s,4r)-4-叠氮基-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.0g,9.37mmol)。将混合物温热至室温并搅拌48h，然后倒入冰冷的水(700ml)中，并用etoac(5x100ml)萃取。将合并的有机相用冰冷的水(2x100ml)洗涤，经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，15-20％ etoac在正己烷类中)纯化以产生(2s,4r)-2-((2h-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较上的斑点，不希望的产物，1.0g,3.41mmol,36％收率)和随后的(40-50％ etoac在正己烷类中)(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较下的斑点，期望的产物，1.0g,3.41mmol,36％收率)。
[0479]
对于不希望的产物(较上的斑点，较小的极性):lcms:方法c,1.67min,ms:es 294.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 7.83(s,2h),4.63-4.65(m,2h),4.02-4.19(m,2h),3.41-3.44(m,1h),3.04-3.14(m,1h),2.00-2.17(m,2h),1.43(s,9h)。
[0480]
对于期望的产物(较下的斑点，较大的极性):lcms:方法c,1.52min,ms:es 294.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 7.96-8.02(m,1h),7.77(s,1h),4.56-4.63(m,2h),4.01-4.21(m,2h),3.41-3.49(m,1h),3.07-3.15(m,1h),1.95-2.08(m,2h),1.39(s,9h)。
[0481]
步骤(ii)
[0482]
(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0483]
向(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-叠氮基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(较下的斑点,1.0g,3.41mmol)在meoh(20ml)中的搅拌溶液中加入10％ pd/c(50％湿度)(0.50g,0.5w/w)。将混合物用h2气体净化1h，然后穿过硅藻土过滤并将滤液在减压下浓缩以产生(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.85g,3.18mmol,93％收率)。
[0484]
lcms:方法c,1.26min,ms:es 268.5。
[0485]
实施例1
[0486]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0487][0488]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0489]
步骤(i)
[0490]
(2s,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0491]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(70.0g,245.42mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9,45.21g,196.33mmol)在thf(700ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tbd(34.16g,245.42mmol)在thf(350ml)中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌16h。将混合物倒入水(3500ml)中，并用etoac(2x2500ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，35％etoac在正己烷类中)纯化以产生(2s,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)-苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(50.0g,106.50mmol,43％收率)。
[0492]
lcms:方法h,3.68min,ms:es 470.1。
[0493]
步骤(ii)
[0494]
n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0495]
在0℃向(2s,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(60.0g,127.81mmol)在dcm(600ml,10体积)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(180ml,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌4h，然后在减压下浓缩以产生n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(70.0g,定量收率)。
[0496]
lcms:方法h,2.77min,ms:es-368.0。
[0497]
步骤(iii)
[0498]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0499]
在0℃向n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁
唑-2-甲酰胺tfa盐(70.0g,144.92mmol)在thf(700ml,10体积)中的搅拌溶液中逐份加入k2co3(59.99g,434.78mmol)。30min以后，在0℃逐滴加入溴化氰(18.43g,173.90mmol)在thf(350ml,5体积)中的溶液，并将混合物在室温搅拌4h。将混合物倒入水(2100ml)中，并用etoac(3x1400ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物与乙醚(2x350ml)一起研磨以产生n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺(24.0g,60.85mmol，经2步47％收率)。
[0500]
lcms:方法h,3.09min,ms:es 395.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.37(d,j＝6.8hz,1h),8.16(s,2h),8.14(d,j＝7.6hz,1h),7.76-7.83(m,2h),4.48-4.52(m,1h),3.99-4.05(m,1h),3.67-3.71(m,1h),3.40-3.49(m,3h),3.32(s,3h),2.09-2.15(m,1h),1.94-2.00(m,1h)；手性sfc:方法y8,4.69min。
[0501]
实施例1的替代合成
[0502]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0503]
在n2气氛下，在0℃向n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(570.0g,1.1801mol)在thf(5.7l)中的搅拌溶液中逐份加入k2co3(488.57g,3.5403mol)。逐滴加入溴化氰(112.5g,1.0621mol)在thf(225ml)中的溶液并在0℃搅拌1h。将混合物温热至室温并搅拌1h。通过tlc(50％ etoac在正己烷类中，产物r
f 0.05；10％ meoh/dcm，产物r
f 0.4)监测反应进程。将混合物用水(2.8l)淬灭，并用etoac(3x5l)萃取。将合并的有机相用盐水溶液(1.5l)洗涤并然后经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生粗产物。将粗制物质通过柱色谱法(硅胶，35％etoac在正己烷类中)纯化。将含有产物的纯级分合并并在减压下在45℃以下蒸馏以提供白色固体，将其进一步在乙醚(2x1l)中研磨以产生作为白色固体的n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(340g,1.18mol,73％收率)。
[0504]
lcms:方法h3,2.96min,ms:es 395.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.36(d,j＝6.8hz,1h),8.15(s,2h),8.12(d,j＝7.6hz,1h),7.75-7.81(m,2h),4.48-4.52(m,1h),3.99-4.05(m,1h),3.67-3.71(m,1h),3.40-3.49(m,3h),3.32(s,3h),2.09-2.16(m,1h),1.94-2.00(m,1h)；手性sfc:方法y13,4.64min,》99.9％ee；hplc:方法13,25.52min；dsc熔化温度峰:94.2℃；高分辨率ms:es 395.1318(计算的精确质量394.1253)。
[0505]
实施例2
[0506]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0507]
[0508][0509]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0510]
步骤(i)
[0511]
(2r,4r)-2-甲基-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0512]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(1.0g,3.51mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 348165-63-9,0.77g,3.86mmol)在thf(10ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tbd(0.58g,4.21mmol)在thf(5ml)中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入冷水(150ml)中，并用etoac(3x70ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，50％ etoac在正己烷类中)纯化以产生(2r,4r)-2-甲基-4-(5-(3-(三氟甲基)-苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.1g,2.50mmol,71％收率)。lcms:方法h,3.76min,ms:es-438.0。
[0513]
步骤(ii)
[0514]
n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0515]
在0℃向(2r,4r)-2-甲基-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g,2.28mmol)在dcm(10ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(4.0ml,4.0体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺tfa盐(1.60g,定量收率)。
[0516]
lcms:方法h,2.78min,ms:es 340.20。
[0517]
步骤(iii)
[0518]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0519]
向n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(1.60g,3.53mmol)在thf(15ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(1.95g,14.13mmol)并在室温搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.45g,4.24mmol)并将反应混合物在室温搅拌30min。将混合物倒入水(50ml)中，并用etoac(3x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，50％ etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺(0.46g,1.26mmol，经2步55％收率)。
[0520]
lcms:方法h,3.15min,ms:es 365.1；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.40(d,j＝6.8hz,1h),8.16(s,2h),8.14(d,j＝7.6hz,1h),7.77-7.83(m,2h),4.46-4.54(m,1h),
3.89-3.93(m,1h),3.77-3.79(m,1h),3.43(dd,j＝10.0,3.2hz,1h),2.13-2.19(m,1h),1.74-1.81(m,1h),1.25(d,j＝6.4hz,3h)；手性sfc:方法y4,3.91min。
[0521]
实施例3
[0522]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺
[0523][0524][0525]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0526]
步骤(i)
[0527]
(2s,4r)-2-((甲基磺酰基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0528]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.50g,1.75mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 2381441-33-2,0.39g,1.40mmol)在thf(2.5ml)中的搅拌溶液中逐份加入tbd(0.24g,1.75mmol)。将混合物温热至室温并搅拌4h，然后倒入水(40ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，49.2％etoac在正己烷类中)纯化以产生(2s,4r)-2-((甲基磺酰基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.09g,0.17mmol,10％收率)。
[0529]
lcms:方法c,1.77min,ms:es 462.4(m-56)。
[0530]
步骤(ii)
[0531]
n-((3r,5s)-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐
[0532]
在0℃向(2s,4r)-2-((甲基磺酰基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)-苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.09g,0.17mmol)在dcm(3ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.88ml,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生n-((3r,5s)-5-((甲基磺酰基)甲基)-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.11g,定量收率)。
[0533]
lcms:方法c,1.40min,ms:es 370.2。
[0534]
步骤(iii)
[0535]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0536]
在室温向n-((3r,5s)-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.10g,0.19mmol)在thf(2ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.13g,0.94mmol)。10min以后，在0℃加入溴化氰(0.02g,0.19mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(20ml)中，并用etoac(2x30ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，90％ etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5s)-1-氰基-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.02g,0.05mmol，经2步30％收率)。
[0537]
lcms:方法h,2.79min,ms:es-441.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.49(d,j＝6.0hz,1h),8.18(s,2h),8.15(d,j＝6.8hz,1h),7.76-7.87(m,2h),4.52-4.62(m,1h),4.33-4.42(m,1h),3.72-3.80(m,1h),3.61-3.69(m,1h),3.48-3.55(m,1h),3.42-3.47(m,1h),3.12(s,3h),2.32-2.39(m,1h),2.11-2.21(m,1h)；手性sfc:方法y5,5.46min。
[0538]
实施例4
[0539]
n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0540][0541][0542]
(i)lioh.h2o，h2o，thf，0℃至室温；(ii)pocl3，吡啶，0℃至室温；(iii)tfa，dcm，0℃至室温；(iv)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0543]
步骤(i)
[0544]
5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸锂
[0545]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.3g,1.05mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入lioh.h2o(0.13g,3.16mmol)在水(2.5ml)中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩。将得到的残余物与甲苯(2x10ml)一起共浓缩，然后与乙醚(10ml)一起研磨以提供5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.50g,定量收率)。
[0546]
lcms:方法c,1.77min,ms:es 258.0。
[0547]
步骤(ii)
[0548]
(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0549]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.30g,1.12mmol)和(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g,0.75mmol)在吡啶(2ml)中的搅拌溶液中逐滴加入pocl3(0.34g,0.21ml,2.25mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，5％的meoh在dcm中的溶液)纯化以产生(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.06g,0.13mmol,17％收率)。
[0550]
lcms:方法j,4.70min,ms:es 507.2。
[0551]
步骤(iii)
[0552]
n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0553]
在0℃向(2s,4r)-2-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.06g,0.12mmol)在dcm(4ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.6ml,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后在减压下浓缩以产生n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.05g,0.1mmol,81％收率)。
[0554]
lcms:方法c,1.36min,ms:es 407.7。
[0555]
步骤(iv)
[0556]
n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0557]
向n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.05g,0.1mmol)在thf(2ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.04g,0.29mmol)，并将混合物在0℃搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.01g,0.1mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x60ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，3.5％的meoh在dcm中的溶液)纯化以产生n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺(0.02g,0.04mmol,45％收率)。
[0558]
lcms:方法h,2.82min,ms:es-430.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 9.42(d,j＝6.4hz,1h),8.20(s,1h),8.17(s,2h),8.13(d,j＝7.2hz,1h),7.78-7.83(m,3h),4.62(d,j＝5.6hz,2h),4.35-4.38(m,2h),3.67(m,1h),3.39-3.48(m,1h),2.17-2.24(m,1h),1.96-2.02(m,1h)；手性hplc:方法y4,4.03min。
[0559]
实施例5
[0560]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0561][0562]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0563]
步骤(i)
[0564]
(2s,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0565]
在0℃向5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.2g,0.58mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9,0.13g,0.58mmol)在thf(4ml)中的搅拌溶液中逐份加入tbd(0.12g,0.88mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，25％etoac在正己烷类中)纯化以产生(2s,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.12g,0.24mmol,40％收率)。
[0566]
lcms:方法h,3.76min,ms:es-525.1。
[0567]
步骤(ii)
[0568]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0569]
在0℃向(2s,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.12g,0.23mmol)在dcm(5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.4ml,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.18g,定量收率)。
[0570]
lcms:方法h,2.87min,ms:es-425.0。
[0571]
步骤(iii)
[0572]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0573]
在室温向5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.18g,0.33mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.14g,0.99mmol)并将混合物搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.03g,0.33mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，60％ etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.04g,0.08mmol，经2步37％收率)。
[0574]
lcms:方法h,3.19min,ms:es 452.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.77(d,j＝6.8hz,1h),8.20(s,1h),8.08(d,j＝8.8hz,1h),7.79(d,j＝8.8hz,1h),4.50-4.53(m,1h),4.15-4.23(m,1h),3.99-4.08(m,1h),3.69-3.73(m,1h),3.41-3.50(m,3h),3.33(s,3h),2.09-2.16(m,1h),1.95-2.02(m,1h),0.89-0.91(m,2h),0.78(m,2h)；手性sfc:方法y4,3.67min。
[0575]
实施例6
[0576]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0577][0578]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0579]
步骤(i)
[0580]
(2r,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0581]
在0℃向5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.23g,0.67mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 348165-63-9,0.13g,0.67mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中逐份加入tbd(0.14g,1.00mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，45％ etoac在正己烷类中)纯化
以产生(2r,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)-苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.07g,0.14mmol,21％收率)。
[0582]
lcms:方法h,4.02min,ms:es-495.4。
[0583]
步骤(ii)
[0584]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0585]
在0℃向(2r,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.06g,0.13mmol)在dcm(3ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.2ml,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)-苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.1g,定量收率)。lcms:方法h,3.05min,ms:es 397.2。
[0586]
步骤(iii)
[0587]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0588]
在室温向5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.1g,0.19mmol)在thf(3ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.08g,0.59mmol)。10min以后，在0℃加入溴化氰(0.02g,0.19mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.03g,0.07mmol，经2步56％收率)。
[0589]
lcms:方法h,3.43min,ms:es-420.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.80(d,j＝6.4hz,1h),8.20(s,1h),8.08(d,j＝8.8hz,1h),7.79(d,j＝8.8hz,1h),4.48-4.57(m,1h),4.15-4.25(m,1h),3.88-3.93(m,1h),3.78(m,1h),3.42-3.60(m,1h),2.15-2.18(m,1h),1.74-1.81(m,1h),1.25(d,j＝6.0hz,3h),0.86-0.92(m,2h),0.76-0.79(m,2h)；手性sfc:方法y4,3.99min。
[0590]
实施例7
[0591]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0592]
[0593]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0594]
步骤(i)
[0595]
(2r,4r)-2-甲基-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0596]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.30g,1.05mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas348165-63-9,0.25g,1.26mmol)在thf(6ml)中的搅拌溶液中逐份加入tbd(0.22g,1.57mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(100ml)中，并用etoac(2x80ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％ etoac在正己烷类中)纯化以产生(2r,4r)-2-甲基-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.21g,0.48mmol,45％收率)。
[0597]
lcms:方法c,1.82min,ms:es 441.0。
[0598]
步骤(ii)
[0599]
n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0600]
在0℃向(2r,4r)-2-甲基-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.21g,0.48mmol)在dcm(5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.6ml,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.20g,0.44mmol,92％收率)。
[0601]
lcms:方法c,1.33min,ms:es 341.0。
[0602]
步骤(iii)
[0603]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0604]
在室温向n-((3r,5r)-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.20g,0.44mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.18g,1.32mmol)并将混合物搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.05g,0.44mmol)。将混合物在室温搅拌45min，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，60％ etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.12g,0.34mmol,77％收率)。
[0605]
lcms:方法h,3.06min,ms:es-364.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 9.82(d,j＝6.8hz,1h),8.41(d,j＝7.6hz,1h),8.33(s,1h),8.10(d,j＝7.6hz,1h),7.92(t,j＝8.0hz,1h),4.53-4.55(m,1h),3.90-3.95(m,1h),3.78-3.82(m,1h),3.45-3.48(m,1h),2.17-2.19(m,1h),1.77-1.84(m,1h),1.27(d,j＝6.4hz,3h)；手性sfc:方法y3,2.65min。
[0606]
实施例8
[0607]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0608][0609][0610]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0611]
步骤(i)
[0612]
(2s,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0613]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.30g,1.05mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9,0.29g,1.26mmol)在thf(6ml)中的搅拌溶液中逐份加入tbd(0.22g,1.57mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(100ml)中，并用etoac(2x80ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，40％ etoac在正己烷类中)纯化以产生(2s,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.19g,0.40mmol,39％收率)。lcms:方法c,1.79min,ms:es 471.1。
[0614]
步骤(ii)
[0615]
n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0616]
在0℃向(2s,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.19g,0.40mmol)在dcm(5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.6ml,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.18g,0.37mmol,92％收率)。
[0617]
lcms:方法c,1.34min,ms:es 371.0。
[0618]
步骤(iii)
[0619]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0620]
在室温向n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,
3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.18g,0.37mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.15g,1.12mmol)并将混合物搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.04g,0.37mmol)。将混合物在室温搅拌45min，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，70％ etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)-苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.10g,0.26mmol,69％收率)。
[0621]
lcms:方法h,2.99min,ms:es-394.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 9.80(d,j＝6.4hz,1h),8.41(d,j＝7.6hz,1h),8.33(s,1h),8.10(d,j＝8.0hz,1h),7.92(t,j＝8.0hz,1h),4.48-4.59(m,1h),4.0-4.1(m,1h),3.71-3.75(m,1h),3.42-3.51(m,3h),3.36(s,3h),2.11-2.18(m,1h),1.99-2.04(m,1h)；手性sfc:方法y3,2.87min。
[0622]
实施例9
[0623]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺
[0624][0625][0626]
(i)lioh.h2o，h2o，thf，0℃至室温；(ii)pocl3，吡啶，0℃至室温；(iii)tfa，dcm，0℃至室温；(iv)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0627]
步骤(i)
[0628]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸锂
[0629]
在0℃向5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.13g,0.38mmol)在thf(1.5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入lioh.h2o(0.02g,0.57mmol)在水(1.5ml)中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.14g,定量收率)。
[0630]
lcms:方法j,4.16min,ms:es 313.4。
[0631]
步骤(ii)
[0632]
(2s,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0633]
在0℃向5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸锂(0.13g,0.41mmol)和
(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9,0.09g,0.41mmol)在吡啶(4ml)中的搅拌溶液中逐滴加入pocl3(0.19g,1.23mmol)。将混合物在0℃搅拌0.5h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，33.8％ etoac在正己烷类中)纯化以产生(2s,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.09g,0.17mmol，经2步44％收率)。
[0634]
lcms:方法c,1.98min,ms:es 526.2。
[0635]
步骤(iii)
[0636]
5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺
[0637]
在0℃向(2s,4r)-4-(5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.09g,0.17mmol)在dcm(3ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.9ml,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.13g,定量收率)。
[0638]
lcms:方法c,1.44min,ms:es 426.1。
[0639]
步骤(iv)
[0640]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0641]
在室温向5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.12g,0.23mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.10g,0.69mmol)并将混合物搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.02g,0.23mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌1h，然后倒入水(30ml)中，并用etoac(2x40ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，58.6％ etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.01g,0.03mmol，经2步15％收率)。
[0642]
lcms:方法h,3.42min,ms:es 451.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.38(d,j＝6.0hz,1h),8.05(s,1h),7.86(d,j＝8.4hz,1h),7.68-7.72(m,2h),4.45-4.53(m,1h),4.27-4.33(m,1h),3.97-4.06(m,1h),3.67-3.71(m,1h),3.40-3.46(m,3h),3.32(s,3h),2.08-2.19(m,1h),1.91-2.01(m,1h),0.91(br s,4h)；手性hplc:方法y10,7.84min。
[0643]
实施例10
[0644]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0645][0646]
(i)tbd，thf，0℃至室温；(ii)tfa，dcm，0℃至室温；(iii)k2co3，cnbr，thf，0℃至室温。
[0647]
步骤(i)
[0648]
(2s,4r)-4-(5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0649]
在0℃向5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(0.28g,0.88mmol)和(2s,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1207853-53-9,0.224g,0.97mmol)在thf(2.8ml)中的搅拌溶液中加入tbd(0.147g,0.106mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(25ml)中，并用etoac(3x100ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，40％ etoac在正己烷类中)纯化以产生(2s,4r)-4-(5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.19g,0.38mmol,42％收率)。lcms:方法j,4.85min,ms:es 445.0(m-56)。
[0650]
步骤(ii)
[0651]
5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0652]
在0℃向(2s,4r)-4-(5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰氨基)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.19g,0.38mmol)在dcm(1.9ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(1.9ml,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.17g,0.33mmol,87％收率)。将粗制物用于下一步。
[0653]
步骤(iii)
[0654]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0655]
在室温向5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.17g,0.33mmol)在thf(1.7ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.14g,0.99mmol)并将混合物搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.04g,0.39mmol)并
2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.11g,0.22mmol)在dcm(5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(1.1ml,10体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.12g,定量收率)。lcms:方法c1,1.06min,ms:es 405.3。
[0667]
步骤(iii)
[0668]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0669]
在室温向5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺tfa盐(0.12g,0.23mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.10g,0.69mmol)并将混合物搅拌10min。在0℃加入溴化氰(0.02g,0.23mmol)。将混合物温热至室温并搅拌0.5h，然后倒入水(30ml)中，并用etoac(2x30ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，48％ etoac在正己烷类中)纯化以产生5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺(0.02g,0.05mmol，经2步21％收率)。
[0670]
lcms:方法h,3.10min,ms:es 447.1(m 18)

；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.86(m,1h),8.34(s,1h),8.01-8.10(m,2h),4.53(s,1h),4.03(s,1h),3.71-3.72(m,1h),3.43-3.46(m,3h),3.34(s,3h),2.12-2.13(m,1h),1.99-2.00(m,1h),手性sfc:方法y4,3.7min。
[0671]
实施例12
[0672]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0673][0674][0675]
步骤(i)
[0676]
(2r,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
[0677]
在0℃向5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酸乙酯(0.2g,0.70mmol)和(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5,0.13g,0.56mmol)在thf(5ml)中的搅拌溶液中逐份加入tbd(0.15g,1.05mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经无水na2so4干燥，过滤并在
减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％ etoac在正己烷类中)纯化以产生(2r,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.27mmol,39％收率)。
[0678]
lcms:方法c1,1.42min,ms:es 470.2。
[0679]
步骤(ii)
[0680]
n-((3r,5r)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0681]
在0℃向(2r,4r)-2-(甲氧基甲基)-4-(5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.13g,0.27mmol)在dcm(5ml)中的搅拌溶液中逐滴加入tfa(0.39ml,3体积)。将混合物温热至室温并搅拌1h，然后在减压下浓缩以产生n-((3r,5r)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.12g,0.25mmol,89％收率)。
[0682]
lcms:方法c1,1.08min,ms:es 370.3。
[0683]
步骤(iii)
[0684]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0685]
在室温向n-((3r,5r)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺tfa盐(0.12g,0.25mmol)在thf(6ml)中的搅拌溶液中加入k2co3(0.1g,0.74mmol)并搅拌5min。在0℃加入溴化氰(0.03g,0.25mmol)。将混合物在室温搅拌1h，然后倒入水(50ml)中，并用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机相经na2so4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，30％ etoac在正己烷类中)纯化以产生n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺(0.04g,0.10mmol,40％收率)。
[0686]
lcms:方法h1,3.12min,ms:es 395.0；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm:9.20(d,j＝7.6hz,1h),8.12-8.16(m,3h),7.76-7.83(m,2h),4.51-4.54(m,1h),3.91-3.93(m,1h),3.63-3.67(m,1h),3.46-3.55(m,2h),3.37-3.41(m,4h),2.29-2.36(m,1h),1.83-1.88(m,1h)；手性sfc:方法y13,4.93min。
[0687]
实施例13
[0688]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺
[0689][0690]
通过与实施例2类似的方法在步骤(i)中使用(2s,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 708274-46-8)可以制备标题化合物。
[0691]
实施例14
[0692]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0693][0694]
通过与实施例5类似的方法在步骤(i)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)可以制备标题化合物。
[0695]
实施例15
[0696]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0697][0698]
通过与实施例6类似的方法在步骤(i)中使用(2s,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 708274-46-8)可以制备标题化合物。
[0699]
实施例16
[0700]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0701][0702]
通过与实施例7类似的方法在步骤(i)中使用(2s,4r)-4-氨基-2-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 708274-46-8)可以制备标题化合物。
[0703]
实施例17
[0704]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0705][0706]
通过与实施例8类似的方法在步骤(i)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)可以制备标题化合物。
[0707]
实施例18
[0708]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺
[0709][0710]
通过与实施例9类似的方法在步骤(i)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)可以制备标题化合物。
[0711]
实施例19
[0712]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0713][0714]
通过与实施例10类似的方法在步骤(i)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)可以制备标题化合物。
[0715]
实施例20
[0716]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺
[0717][0718]
通过与实施例11类似的方法在步骤(i)中使用(2r,4r)-4-氨基-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas 1123305-98-5)可以制备标题化合物。
[0719]
本发明的化合物的生物活性
[0720]
缩写：
[0721]
tamra羧基四甲基罗丹明
[0722]
pcr
ꢀꢀꢀꢀ
聚合酶链式反应
[0723]
pbs
ꢀꢀꢀꢀ
磷酸盐缓冲盐水
[0724]
edta
ꢀꢀꢀ
乙二胺四乙酸
[0725]
tris
ꢀꢀꢀ
2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇
[0726]
np-40
ꢀꢀ
nonidet p-40,辛基苯氧基聚乙氧基乙醇
[0727]
bsa
ꢀꢀꢀꢀ
牛血清白蛋白
[0728]
pns
ꢀꢀꢀ
周围神经系统
[0729]
bh3
ꢀꢀꢀ
bcl-2同源性结构域3
[0730]
pten
ꢀꢀꢀ
磷酸酶和张力蛋白同系物
[0731]
sds-page
ꢀꢀ
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
[0732]
dmso
ꢀꢀꢀ
二甲亚砜
[0733]
yfp
ꢀꢀꢀ
黄色荧光蛋白
[0734]
vme
ꢀꢀꢀ
乙烯基甲基酯
[0735]
ha
ꢀꢀꢀꢀ
血凝素
[0736]
ahx
ꢀꢀꢀ
氨基己酸
[0737]
usp30生化ic
50
测定
[0738]
在96-孔聚丙烯v形底板(greiner#651201)中以在50％dmso中的21倍终浓度(对于100μm的终浓度，2100μm)制备稀释板。典型的8点稀释系列终浓度为100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03μm。在黑色384孔板(小体积，greiner 784076)中一式两份进行反应，最终反应体积为21μl。将1μl的50％dmso或稀释的化合物添加到板中。将usp30(boston biochem#e582)在反应缓冲液(40mm tris,ph 7.5,0.005％吐温20,0.5mg/ml bsa,5mmβ-巯基乙醇)中稀释以达到4nm的最终测定浓度，并且将10μl稀释的usp30添加到化合物中。将酶和化合物在室温温育30分钟。通过添加50nm的经由异肽键连接至泛素的tamra标记的肽作为荧光偏振底物，启动反应。加入底物并然后在室温温育2小时以后立即读出反应。在pherastar plus(bmg labtech)上进行读出。λ激发540nm；λ发射590nm。
[0739]
示例性化合物在usp30生化ic
50
测定中的活性：
[0740][0741][0742]
参考实施例
[0743]
示例性化合物在usp30生化ic
50
测定中的活性:
[0744][0745]
脱靶药理学
[0746]
对实施例1在eurofins cerep safetyscreen44组中进行药理学特征分析。在10μm的单一浓度，在本组中对所有靶标观察到小于50％的结合或酶活性的抑制。由于在该测定中对靶标的低亲和力，实施例1具有脱靶相互作用的低概率。
[0747]
tom20-泛素化测定
[0748]
可以用线粒体去极化剂(离子载体(例如cccp、缬氨霉素)、线粒体复合物抑制剂(寡霉素、抗霉素a))攻击人细胞系来诱导tom20的泛素化，然后在有usp30抑制剂存在下进一步促进泛素化。随后通过细胞裂解物的蛋白质印迹法评估tom20泛素化，由于添加的每个泛素分子的8kda分子量增加，可能检测到tom20泛素化加合物，从而导致tom20免疫反应带呈梯状。可以使用梯状免疫反应带的化学发光密度测定法量化tom20泛素化水平。
[0749]
体外细胞毒性(cell tox)：
[0750]
使用alamarblue
tm
在hct116人结肠直肠癌细胞中测定作为测定终点。在96小时连续化合物暴露期间测量化合物细胞毒性。
[0751]
进一步研究
[0752]
log p：分配系数；亲脂性测量。
[0753]
log d：分布系数；亲脂性测量。
[0754]
tpsa：拓扑极性表面积。
[0755]
比浊溶解度：将在dmso中制备的试验化合物溶液稀释到水性缓冲液中。使用比浊法通过在620nm处测量吸光度作为终点。
[0756]
fassif：在ph 6.5测量的禁食状态的人工肠液。
[0757]
hep cl小鼠：小鼠细胞中的体外肝细胞清除率。
[0758]
hep cl人：人细胞中的体外肝细胞清除率。
[0759]
血浆f
u,p
：通过体外平衡透析测定的血浆制品中化合物的游离部分。应当理解，仅未结合的(游离的)化合物能够与靶标接合。
[0760]
脑f
u,br
：通过体外平衡透析测定的脑匀浆制品中化合物的游离部分。应当理解，仅未结合的(游离的)化合物能够与靶标接合。
[0761]
clu：体外清除率。此处所定义的clu为缩放清除率(scaled clearance)，其又从固有清除率计算。固有清除率是由于肝代谢反应而预测的清除率，由化合物在肝细胞制品中的温育确定。以ml/min/kg为单位的该值越低，化合物越稳定。
[0762]
cl体内清除率：每单位时间的从中完全除去物质的血浆(或任何基质)的体积的药代动力学测量。以ml/min/kg为单位的该值越低，化合物越稳定。
[0763]
口服f：口服生物利用度。
[0764]
mdr1-mdck(madin-darby犬肾细胞单层)(体外)通量测定。
[0765]
wt-mdck(野生型)体外通量。
[0766]
kp
uu
为脑中未结合的药物与血浆中未结合的药物之比，并且可以指示治疗外周适应症和/或cns适应症的潜力。
[0767][0768]
实施例具有有益性能，表现出优于其它化合物的潜在优势。例如，对于实施例1，观察到的19ml/min/kg的静脉内血浆清除率(在小鼠中测得)是低的，证实了有价值的血浆稳定性，并且该化合物具有82％的非常高的口服生物利用度。
[0769][0770]
[0771][0772][0773][0774]
[0775][0776]
对比数据
[0777]
参考实施例a、b、c和d是已知的dub抑制剂，它们已经被鉴定为有效的usp30抑制剂并且与本发明的化合物具有一些结构相似性，具有氰胺结构特征。在wo 2016/046530中公开了参考实施例b、c和d具有uchl1抑制活性。
[0778]
与参考实施例a和b相比，实施例1显示出显著改善的肝细胞代谢稳定性(如在小鼠肝细胞中测量的)。
[0779]
与参考实施例b相比，实施例1显示出显著改善的血浆稳定性。
[0780]
对usp30的效能
[0781]
如在生化测定中测量的，本发明的实施例1-12比参考实施例a、b、c和d对usp30明显更有效。例如，实施例1、2、3、4和9的效力是参考实施例a的13-40倍，是参考实施例b和c的33-100倍，并且是参考实施例d的至少490倍。
[0782]
相对于usp2、usp6、usp10、usp16、usp21、usp22、usp25和usp28对usp30的选择性
[0783]
提供的数据证实，与参考实施例a相比，实施例1、2、8、9和12相对于8种dub(usp2、usp6、usp10、usp16、usp21、usp22、usp25和usp28)对usp30显著更具有选择性。这些实施例对usp30的效力是对8种dub中的每一种的效力的至少121至20000倍。这与参考实施例a和b相比是一个显著的选择性优势，参考实施例a和b对usp30的效力分别是对8种dub中的每一种的效力的低至6.5倍和12.7倍(未针对usp6试验“a”)。
[0784]
相对于uchl1对usp30的选择性
[0785]
提供的数据证实，与参考实施例b、c和d相比，实施例1、2、7、8、9、11和12相对于uchl1对usp30显著更具有选择性。这些实施例对usp30的效力是对uchl1的效力的9000倍以上，而参考实施例b、c和d对usp30的效力分别仅是对uchl1的效力的0.5、0.8和1.5倍；
‘
b’和
‘
c’对uchl1更具选择性。
[0786]
相对于组织蛋白酶b、k、l、s和v对usp30的选择性
[0787]
提供的数据证实，与参考实施例a和b相比，实施例1、2、8、9和12相对于组织蛋白酶(b、k、l、s和v)对usp30显著更具有选择性。这些实施例对usp30的效力都是对每种组织蛋白酶的效力的313倍以上。这是相对于参考实施例a和b的显著选择性优势，参考实施例a和b对usp30的效力分别仅是对组织蛋白酶k的效力的6.1和3倍。
[0788]
本发明的化合物相对于现有技术的参考实施例的如上所鉴定的优点是显著的和意料之外的。就其本身且尤其是组合而言，这种优势使本发明的化合物特别适用于治疗或预防与usp30活性相关的疾病。
[0789]
临床前体内模型
[0790]
使用来自公开的文献的标准研究程序，可以试验本发明的化合物在代表性体内疾病模型中的效力，所述标准研究程序包括、例如：
[0791]
(a)博来霉素诱导的肺纤维化模型，这是一种主要的特发性肺纤维化的临床前体内模型。[kobayashi等人,2016,j immunol,197(2):504-516]。
[0792]
(b)饮食诱导的nafld和葡萄糖稳态模型。[nishida等人,2013,lab invest；2月；93(2):230-41]。
[0793]
(c)帕金森病的mptp模型，这是一种常用的范例，用于观察由化学地诱导的线粒体功能障碍引发的脑的多巴胺能系统中的神经变性。[karuppagouner等人,2014,sci rep.2014年5月2日；4:4874]。
[0794]
(d)ndufs4ko利氏综合征模型。[kruse等人,2008,cell metab.4月；7(4):312-20]。
[0795]
(e)年老啮齿动物模型：对海马、认知和运动功能的影响。[kobilo等人,2014,learn mem.jan 17；21(2):119-26；creed等人,2019,neuroscience.jun 15；409:169-179；van skike等人,2020,aging cell.19；e13057]。在该模型中评估了实施例1。
[0796]
(f)单侧输尿管阻塞性肾脏疾病模型(uuo)。
[0797]
uuo造成以肾小管细胞损伤、间质性炎症和纤维化为特征的肾损伤。它用作不可逆的肾后性急性肾损伤(aki)的模型。实验性uuo已经阐明了细胞凋亡、炎症和纤维化的分子机制，所有这些都是肾损伤中的关键过程，无论原发性损伤如何。因此，uuo模型为研究人员提供了除阻塞之外的信息(chevalier等人,2009,kidney int 75(11):1145-1152)。
[0798]
在uuo模型中评估了实施例1，以确定该化合物减轻进行性小管间质性纤维化和慢性肾脏疾病(ckd)的能力。
[0799]
在研究的第1天，给成年c57bl/6小鼠根据下述给药施用方案之一通过经口管饲法给药；媒介物或15mg/kg实施例1(口服)每天2次。在第1天在给药后2小时，研究小鼠接受手术以在两个点结扎左输尿管。随后通过观察肾积水引起的肾盂膨胀证实成功的uuo手术。根据它们的规定的方案对动物给药10天，在该时间点收获肾脏，或进行组织病理学评估和蛋白/rna评估。进行了天狼猩红染色以评估胶原沉积的程度，并采用ihc评估相对α-平滑肌肌动蛋白(α-sma)表达。
[0800]
结果表明，每天2次给药的15mg/kg实施例1(口服)在统计学上减少了胶原沉积，如在结扎的肾脏中减少的天狼猩红染色所证实的。α-sma染色的评估表明，当与媒介物处理的对照组对比时，每天2次15mg/kg实施例1的口服给药导致uuo损伤的肾中的α-sma水平的统计学降低。
[0801]
(g)双侧肾蒂钳夹可以诱导aki，导致缺血再灌注损伤(iri)，导致肾功能严重丧失、肾小管损伤和炎症[lu等人.2012.j nephrol.25(5):738-45]。
[0802]
本发明的段落
[0803]
本发明涉及以下：
[0804]
1.式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，所述式(i)选自式(i)(i)和式(i)(ii)：
[0805][0806]
其中：
[0807]
x是ch或n；
[0808]
r1选自(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)氟代烷基、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑；
[0809]
r2选自氢、卤素、(c
1-c4)烷氧基和环丙氧基；且
[0810]
r3、r4和r5各自独立地选自氢和卤素。
[0811]
2.根据段落1所述的化合物，其中x是ch。
[0812]
3.根据段落1所述的化合物，其中x是n。
[0813]
4.根据段落1-3中的任一段所述的化合物，其中r1选自甲基、ch2f、chf2、cf3、ch2och3、ch2so2ch3和ch
2-n-连接的三唑。
[0814]
5.根据段落4所述的化合物，其中r1是ch2och3。
[0815]
6.根据段落1-5中的任一段所述的化合物，其中r2选自氢、氯、氟、甲氧基和环丙氧基。
[0816]
7.根据段落6所述的化合物，其中r2是氢。
[0817]
8.根据段落1-7中的任一段所述的化合物，其中r3、r4和r5各自独立地选自氢、氯和氟。
[0818]
9.根据段落8所述的化合物，其中r3、r4和r5各自是氢。
[0819]
10.根据段落1-9中的任一段所述的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，所述化合物具有式(i)(i)：
[0820][0821]
11.根据段落10所述的化合物，所述化合物选自：
[0822]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0823]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0824]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0825]
n-((3r,5s)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0826]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0827]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0828]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0829]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0830]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0831]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；和
[0832]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5s)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0833]
或其药学上可接受的盐。
[0834]
12.根据段落1-9中的任一段所述的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，所述化合物具有式(i)(ii)：
[0835][0836]
13.根据段落12所述的化合物，所述化合物选自：
[0837]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)-吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0838]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0839]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-((甲基磺酰基)甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0840]
n-((3r,5r)-5-((1h-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-氰基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-甲酰胺；
[0841]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0842]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0843]
n-((3r,5s)-1-氰基-5-甲基吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0844]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(3-(三氟甲基)苯基)-1,
3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0845]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-环丙氧基-5-(三氟甲基)苯基)-噁唑-2-甲酰胺；
[0846]
n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-5-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；和
[0847]
5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-n-((3r,5r)-1-氰基-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噁二唑-2-甲酰胺；
[0848]
或其药学上可接受的盐。
[0849]
14.用于用作药物的根据段落1-13中的任一段所述的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0850]
15.用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化的根据段落1-13中的任一段所述的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0851]
16.根据段落1-13中的任一段所述的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化。
[0852]
17.一种用于治疗或预防涉及线粒体功能障碍的病症、癌症或纤维化的方法，所述方法包含以下步骤：给有此需要的患者施用有效量的根据段落1-13中的任一段所述的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0853]
18.根据段落15-17所述的化合物、用途或方法，其中所述涉及线粒体功能障碍的病症选自：cns障碍；神经变性疾病；帕金森病；阿尔茨海默氏病；肌萎缩性侧索硬化；亨廷顿病；缺血；中风；路易体痴呆；额颞叶痴呆；多发性硬化；线粒体脑病、乳酸性酸中毒和中风样发作综合征；母系遗传性糖尿病和耳聋；莱伯遗传性视神经病变；神经病、共济失调、视网膜色素变性-母系遗传性利氏综合征；danon病；糖尿病；糖尿病性肾病；代谢障碍；心力衰竭；导致心肌梗死的缺血性心脏病；精神病学疾病、精神分裂症；多种硫酸酯酶缺乏症；黏脂贮积症ii；黏脂贮积症iii；黏脂贮积症iv；gml-神经节苷脂贮积病；神经元蜡样质-脂褐质沉积症；阿尔珀斯病；巴思综合征；β-氧化缺乏症；肉碱-酰基-肉碱缺乏症；肉碱缺乏症；肌酸缺乏综合征；辅酶q10缺乏症；复合体i缺乏症；复合体ii缺乏症；复合体iii缺乏症；复合体iv缺乏症；复合体v缺乏症；cox缺乏症；慢性进行性眼外肌麻痹综合征；cpt i缺乏症；cpt ii缺乏症；戊二酸尿症ii型；卡恩斯-塞尔综合征；乳酸性酸中毒；长链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；利氏病或综合征；利氏综合征法国-加拿大变体；致死性婴儿心肌病；勒夫特病；中链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；肌阵挛型癫痫和破碎红纤维综合征；线粒体细胞病；线粒体隐性共济失调综合征；线粒体dna耗竭综合征；肌神经胃肠道障碍和脑病；皮尔逊综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏症；丙酮酸羧化酶缺乏症；polg突变；中/短链3-羟基酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；极长链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症；过氧化物酶体障碍；甲基丙二酸血症；甲羟戊酸激酶缺乏症；年龄依赖性的认知功能和肌肉强度下降；以及与神经变性和神经精神病学障碍相关的认知损害。
[0854]
19.根据段落18所述的化合物、用途或方法，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿病、缺血、中风、路易体痴呆、多系统萎缩、
进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、额颞叶痴呆；和与α-突触核蛋白、parkin、pink1、gba和lrrk2中的突变有关的帕金森病，以及常染色体隐性的青少年帕金森病或早发型帕金森病(eopd)，其中parkin或pink1被突变、截短或删除。
[0855]
20.根据段落18所述的化合物、用途或方法，其中所述神经变性疾病是利氏综合征或病、x-连锁的利氏病、利氏综合征法国-加拿大变体和/或与利氏病相关的症状。
[0856]
21.根据段落15-17所述的化合物、用途或方法，其中所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌、肝癌、软组织癌、组织器官癌、血细胞癌、cml、aml、套细胞淋巴瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、成纤维细胞肉瘤、平滑肌肉瘤、肝细胞癌、骨肉瘤、食道癌、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、转移性癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、鼻咽癌、结肠直肠癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、其中细胞凋亡途径失调的癌症和其中bcl-2家族的蛋白发生突变或过表达或表达不足的癌症。
[0857]
22.根据段落15-17所述的化合物、用途或方法，其中所述纤维化选自与在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增生和瘤形成以后发生的细胞外基质组分的积累相关的纤维化或纤维化障碍。
[0858]
23.根据段落22所述的化合物、用途或方法，其中所述纤维化选自与主要器官疾病相关的纤维化或纤维化障碍、纤维增生性障碍和与创伤相关的瘢痕形成。
[0859]
24.根据段落23所述的化合物、用途或方法，其中所述纤维化选自与间质性肺病、肝硬化、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪肝病和非酒精性脂肪性肝炎、肾脏疾病、急性肾脏疾病、急性肾损伤、慢性肾脏疾病、移植肾功能延迟、心脏或血管疾病、眼部疾病相关的纤维化或纤维化障碍，全身和局部硬皮病，瘢痕疙瘩，肥厚性瘢痕，动脉粥样硬化，再狭窄，迪皮特朗氏挛缩，外科手术并发症，化疗药物诱导的纤维化，辐射诱导的纤维化，意外损伤和烧伤，腹膜后纤维化，和腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成。
[0860]
25.根据段落24所述的化合物、用途或方法，其中所述与间质性肺病相关的纤维化选自结节病、硅沉着病、药物反应、感染、胶原血管病、类风湿性关节炎、系统性硬化症、硬皮病、肺纤维化、特发性肺纤维化、普通型间质性肺炎、间质性肺病、隐原性致纤维性肺泡炎、闭塞性细支气管炎和支气管扩张。
[0861]
26.根据段落24所述的化合物、用途或方法，其中所述肾脏疾病是急性肾脏疾病、急性肾损伤或慢性肾脏疾病。
[0862]
27.一种药物组合物，其包含在段落1-13中的任一段中定义的式(i)的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0863]
28.一种化合物，其选自式(ii)(i)、(iii)(i)、(ii)(i)和(iii)(ii)：
[0864][0865]
其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的盐；
[0866]
其中r1、r2、r3、r4和r5如在段落1-13中的任一段中关于式(i)的化合物所定义；且pg是保护基，其优选地选自叔丁基氧基羰基、苄氧基羰基、对甲氧基苄基羰基、9-芴基甲氧羰基、乙酰基、苯甲酰基、苄基、氨基甲酸酯、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、对甲氧基苯基、甲苯磺酰基、三氯乙氧基羰基、4-硝基苯磺酰基和2-硝基苯基次磺酰基。