一种基于二维液相评价外泌体纯度的方法与流程

技术特征：
1.一种基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：通过二维液相色谱评价外泌体纯度；第一维采用尺寸排阻色谱柱，流动相等度洗脱；第二维采用离子色谱柱，流动相梯度洗脱。2.根据权利要求1所述的基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：先通过第一维液相色谱对外泌体样本首次分析，再切换六通阀对外泌体主峰进行中心切割进入第二维液相色谱。3.根据权利要求2所述的基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：第一维液相色谱流动相为tris缓冲液，ph值为7-7.5；第二维液相色谱流动相a为tris缓冲液，第二维液相色谱流动相b为tris缓冲液-盐溶液；流动相a和流动相b的ph值为7-7.5。4.根据权利要求3所述的基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：tris缓冲液浓度为20mm，盐溶液为nacl溶液，nacl盐浓度为1.0m。5.根据权利要求1-4中任一所述的基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：第一维流动相洗脱条件为等度洗脱，流动相流速为0.3-0.6 ml/min，液相六通阀切换阀时间分别为3min-3.8min。6.根据权利要求5所述的基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：第二维流动相洗脱条件为流动相a和b梯度洗脱，流动相流速为0.3ml/min，包括多余两个的固定值洗脱阶段；包括0-4.3min，100%流动相a；4.3-5.0min，100-75%流动相a；5.0-5.1min，75-65%流动相a；5.1-6.1min，65%流动相a；6.1-6.2min，65-55%流动相a；6.2-7.2，55%流动相a；7.2-7.3min，55-45%流动相a；7.3-8.3min，45%流动相a；8.3-8.4min，45-35%流动相a；8.4-9.4min，35%流动相a；9.4-9.5min，35-15%流动相a；9.5-10.5min，15%流动相a；10.5-10.6min，15-0%流动相a；10.6-12min，0%流动相a。7.根据权利要求1-4和6中任一所述的基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：尺寸排阻色谱柱为waters beh 450
ǻ sec，2.5μm，4.6
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150mm；离子交换色谱柱为阴离子交换色谱柱为bia deae-0.1 analytical column，1.3μm。8.根据权利要求1-4和6中任一所述的基于二维液相评价外泌体纯度的方法，其特征在于：在所得图谱中，根据峰面积归一化法分别计算第一维液相色谱和第二维液相色谱中外泌体纯度，二者的乘积即为所检测外泌体样本的纯度。

技术总结
本发明公开一种基于二维液相评价外泌体纯度的方法，通过二维液相色谱仪采用尺寸排阻法和离子交换色谱法结合的方法来评价外泌体纯度；样品首先进入液相色谱仪第一维的尺寸排阻色谱柱，采用第一维液相的流动相等度洗脱，使外泌体进行首次分析；再通过切换液相色谱仪的六通阀，对外泌体主峰部分进行中心切割进入第二维的离子色谱柱对其进行捕捉收集，通过第二维的流动相梯度洗脱进入检测器进行第二次分析。本纯度评价方法操作简单，自动化水平高，占用时间短，准确度高，适合大批样品同时检测，尤其适合未来外泌体大规模工业化生产的纯度评价工作，高效且过程可控。高效且过程可控。高效且过程可控。


技术研发人员：葛啸虎 韩春乐 陆路 何磊 王淼 王娜 高梦雅 孟晓竹 温智钧
受保护的技术使用者：天津外泌体科技有限公司
技术研发日：2022.11.23
技术公布日：2022/12/30