一种靶向肝脏的脂质体载药系统及其制备方法

技术特征：
1.一种靶向肝脏的脂质体载药系统，其特征是：以半乳糖修饰的红细胞膜与载药脂质体共挤出，得到红细胞膜仿生修饰的肝靶向纳米载药系统。2.一种靶向肝脏的脂质体载药系统的制备方法，其特征是：包含如下步骤：步骤一，靶向材料的制备：将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3400-琥珀酰亚胺（dspe-peg3400-nhs）溶解于无水的n,n二甲基甲酰胺（dmf）中，调节溶液ph为8~9，超声12h，加入半乳糖铵盐酸盐室温下避光反应24h；取出有机溶剂及未反应完的杂质，然后冷冻干燥，得到靶向材料；步骤二，半乳糖修饰红细胞膜（gal-rbc）的制备：取大鼠全血于预先用肝素钠溶液润洗过的离心管中，加入预冷的1
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pbs溶液，离心，弃去上层血浆和白细胞，收集下层积压的红细胞层；用1
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pbs溶液重复清洗3次；加入0.25
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pbs溶液，低渗处理，离心，弃去上清，得到干净的近白色的红细胞膜（rbc）；将制得的rbc重悬于1
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pbs溶液中，加入由步骤一制备的靶向材料，将溶液置于摇床上，避光孵育，离心，弃去上清，收集下层沉淀；用1
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pbs溶液重复清洗3次后，即得半乳糖修饰红细胞膜（gal-rbc）；步骤三，脂质体的制备：将磷脂、胆固醇、fnb置于甲醇中超声溶解，减压旋蒸2h，值得脂质薄膜，随后加入1
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pbs溶液水化形成脂质体；将脂质体超声破碎得到脂质体混悬液；将脂质体混悬液挤出，即得到非诺贝特脂质体（fnb-lip）混悬液；步骤四，半乳糖修饰红细胞膜融合脂质体的制备：取步骤二所制备的gal-rbc，破碎后加入步骤三制备的fnb-lip混悬液，混合均匀后，挤压得到半乳糖修饰的红细胞膜融合非诺贝特脂质体（gal-rbc-fnb-lip）。3.根据权利要求2所述的一种靶向肝脏的脂质体载药系统的制备方法，其特征是：所述步骤一为，精密称取40 mg的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇3400-琥珀酰亚胺（dspe-peg3400-nhs），将其溶解在5 ml无水的n,n二甲基甲酰胺（dmf）中，加入适量的三乙胺（tea）调节溶液的ph值为8~9，待dspe-peg3400-nhs完全溶解后，超声12 h，最后加入半乳糖铵盐酸盐4 mg，室温下避光反应24h；随后以去离子水作为透析介质，使用截留分子量为3500da的透析袋对反应产物溶液避光透析48 h，从而除去有机溶剂以及未反应完的包含半乳糖胺的杂质；将透析后的产物冷冻干燥，即得靶向材料dspe-peg3400-gal。4.根据权利要求2所述的一种靶向肝脏的脂质体载药系统的制备方法，其特征是：所述步骤二为，经眼眶采血后取得sd大鼠全血；取5 ml新鲜大鼠全血于50 ml预先用肝素钠溶液润洗过的离心管中，加入10倍体积预冷的1
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pbs溶液，4℃，6000 rpm，离心10 min，弃去上层血浆和白细胞，收集下层积压的红细胞层；用1
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pbs溶液重复清洗3次；加入4倍体积的0.25
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pbs溶液，置于4℃的摇床中，低渗处理30 min，4 ℃，8000 rpm，离心15 min，弃去上清，重复3次，得到干净的近白色的红细胞膜（rbc）；将制得的rbc重悬于1ml1
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pbs溶液中，加入50μg制备好的dspe-peg3400-gal冻干粉末，将溶液置于37℃的摇床上，100 rpm，避光孵育2 h，4℃，8000 rpm，离心10 min，弃去上清，收集下层沉淀；用1
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pbs溶液重复清洗3次后，即得半乳糖修饰的红细胞膜（gal-rbc）。5.根据权利要求2所述的一种靶向肝脏的脂质体载药系统的制备方法，其特征是：所述步骤三为，精密称取磷脂225 mg、胆固醇25mg、fnb25mg于100 ml茄形瓶中，加入20 ml甲醇，
超声溶解，减压旋蒸2 h，制得脂质薄膜；随后加入10 ml1
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pbs溶液水化30 min形成脂质体；将脂质体转移至10 ml ep管内，240w，室温，超声破碎30min得到脂质体混悬液；使用脂质体挤出器通过200 nm碳酸脂膜将脂质体混悬液挤出15-20次，再经过100 nm 碳酸脂膜挤出15-20次，即得非诺贝特脂质体（fnb-lip）混悬液。6.根据权利要求2所述的一种靶向肝脏的脂质体载药系统的制备方法，其特征是：所述步骤四为，取1ml上述制备的gal-rbc置于10 ml ep管内，100 w， 破碎30 s，间隙10 s，循环10 min;破碎完成后加入1ml步骤三制备的fnb-lip混悬液，混合均匀后，使用脂质体挤出器通过200 nm碳酸脂膜将混合液反复挤压20次，再经过100 nm 碳酸脂膜挤压10次，即得半乳糖修饰的红细胞膜融合非诺贝特脂质体（gal-rbc-fnb-lip）。

技术总结
本发明涉及一种靶向药物载体，特别涉及一种靶向肝脏的脂质体载药系统及其制备方法。靶向肝脏的脂质体载药系统以半乳糖修饰的红细胞膜与载药脂质体共挤出，得到红细胞膜仿生修饰的肝靶向纳米载药系统。制备方法如下：1、制备靶向材料；2、制备半乳糖修饰红细胞膜；3、制备脂质体；4、制备半乳糖修饰红细胞膜融合脂质体。本发明以非诺贝特为模型药物，将其制备脂质体的基础上，成功将红细胞膜与脂质体融合，再外接有肝脏靶向功能的半乳糖基团，提高载体的生物相容性，延长了药物在体内的代谢时间，提高载体的肝脏靶向性。提高载体的肝脏靶向性。提高载体的肝脏靶向性。


技术研发人员：李云兰 秦羽茜 孙岩
受保护的技术使用者：山西医科大学
技术研发日：2022.08.25
技术公布日：2023/1/13