一种鹿晶益气生血丸及其制备工艺和应用

1.本发明涉及药物制备领域，具体涉及一种鹿晶益气生血丸及其制备工艺和应用。


背景技术：

2.中医认为“人体以阴阳、气血、津液”等为人体生命运行为主，若阴阳失衡、气血失养、津亏液乏等都使人失去正常的生理功能和机制，气血是维持人体生命的重要组成部分，而气和血是不可独立而存在的，气乃血之源，血因气始，二者缺一不可，血无气而不以存，无气而血无以摄，则会导致气不摄血，血则无以循经，从而引起脏腑失于濡养和血不载气两方面引起的病证。脏腑失于濡养，一般表现是面色苍白或萎黄、嘴唇指甲颜色淡白无华、皮肤干燥、头发枯焦，患者自己感觉到头晕、目眩、手脚麻木、筋脉拘挛、心悸、失眠多梦以及大便燥结、小便不利，女性月经量突然减少，甚至停经等症状。血不载气，病人不仅有血虚的症状，而且还有少气懒言、语言声音低微、疲倦乏力、气短自汗、便秘腹泻，怕冷易于感冒、记忆力减退等气虚的症状。
3.引起气血虚主要有以下方面：(1)脾胃虚弱：生成血液的基本物质主要来源于脾胃所化生的水谷精微。《内经》说：“中焦受气取汁，变化而赤，是谓血。”《证治准绳》说：“脾胃者，气血之父也”。脾胃功能强健，可将摄入的水谷精微转化为气血。如饮食不节或肝胆之病横犯脾胃，致脾胃功能减弱，精微不足，生化无源，久则出现血虚。血虚则可进一步引起其他脏腑功能失常。(2)饮食不足：人体脏腑靠气血津液滋养，气血津液靠水谷精微来化生。清代喻昌《医门法律》说：“饮食多自能生血，饮食少则血不生”。如饮食数量不足，长期饥饿，气血生化无源，势必导致血虚。另外，饮食量虽然充足，但嗜欲偏食，亦同样出现造血原料的缺乏，使生化之源不足，而出现血虚，并导致其他病证。(3)失血过多：外伤失血过多，月经过多，或其他慢性失血证皆可造成血虚证。另外，由于出血，日久则导致瘀血内阻，脉络不通，一方面造成再出血，另一方面也影响新血的生成，继而加重血虚。(4)肾气亏虚：肾藏精，精生髓，精髓可以化血。若先天禀赋不足，后天失养及房劳过度等均可引起肾虚，而肾虚则精少，精亏则血虚。(5)劳作过度：大病、久病消耗精气，或大汗、吐利、出血损伤阳气阴液；强力劳作能耗伤气血，久之则气虚血亏；劳心太过，易使阴血暗耗，心血亏虚等，均可导致血虚。
4.中医中药在造血功能改善方面具有西药无法比拟的优越性，无毒副作用，用药安全，适用于长期服用，很受临床医生和广泛患者的青睐，我院血液科医生依据中医整体观念，发挥中医辨证施治优势，针对不同病因多角度进行治疗，虚实结合、标本兼治，采用黄芪味甘、性微温，归肺、脾经，有补气升阳、生津养血之功；白芍味苦、酸，性微寒，归肝、脾经，有养血调经、敛阴止汗之功，二者合用益气养血为君药；党参味甘，性平，归脾肺经，有健脾益肺，养血生津之效，炙甘草味甘，性平，归心、肺、脾、胃经，取其补脾和胃，益气复脉之功，炒酸枣仁味甘、酸，性平，归肝、胆、心经，具养气补肝，宁心安神之效，三药同用既辅助君药益气养血又有养血安神之功为臣药；鹿血晶补血；麸炒白术健脾燥湿；熟地益阴；当归、茯苓、麸炒白术补虚药，健脾益气；酒黄精大补肾阴，益精养血；龙眼肉益精养血，大补元气；制远志补肾填精；木香行气止痛,健脾消食,；白芍补虚药，养血敛阴，根据中医理论，按照特定的
重量份配比制备而成，诸药合用，大补元气、益精养血，使病人的元气得到修复，从而达到气旺血生、气血和而不妄行，增强了人体免疫力。本方具有补气养血，养心安神之功效。主治气虚血亏、心脾两虚证，适用于缺铁性贫血中医证属气血亏虚证。该中药处方对于气血两虚的病人具有治愈率高、效果显著；成为我院血液科医生的协定方。但该方剂型为汤剂，存在以下缺点：1.煎液体积较大、味苦，服用、携带不方便；2.多系依据医生处方临时配制应用，不宜大量制备，也不利于及时抢救危重病人；3.易发霉、发酵、不能久贮。
5.为了解决上述问题，申请人结合处方经过大量的制备摸索试验，采用单因素方差分析、正交试验法、hplc法等现代技术，研究制备工艺，对协定方进行了分析，并根据处方折算摸索出了丸剂的制备工艺，该制备工艺简单易行，且丸剂体积小，服用、携带、贮存都比较方便，该剂型溶散、释放药物缓慢，可延长药效，降低毒性、刺激性，减少不良反应；且药理研究证明，鹿晶益气生血丸能够明显提高缺铁性贫血大鼠模型的血红蛋白(hgb)、红细胞压积(hct)，提高肝、脾、肾及小肠等组织的铁含量，可改善缺铁性贫血大鼠的缺铁性贫血状态，具有良好的补铁效果。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种鹿晶益气生血丸。
7.本发明的另一目的是提供一种鹿晶益气生血丸的制备工艺。
8.本发明的另一目的是提供一种鹿晶益气生血丸在制备治疗慢性病或病后调和气血药物方面的应用。
9.所述鹿晶益气生血丸处方为：生黄芪500-700g、当归100-150g、党参200-300g、茯苓100-200g、麸炒白术200-400g、炙甘草100-150g、鹿血晶10-30g、炒酸枣仁100-150g、制远志100-200g、木香100-200g、酒黄精100-200g、熟地200-300g、白芍100-200g、龙眼肉200-400g。
10.优选的，
11.所述鹿晶益气生血丸处方为：生黄芪550-650g、当归120-150g、党参220-280g、茯苓150-180g、麸炒白术250-350g、炙甘草110-140g、鹿血晶15-25g、炒酸枣仁110-130g、制远志150-180g、木香150-180g、酒黄精150-180g、熟地220-250g、白芍150-180g、龙眼肉250-350g。
12.进一步优选的，
13.所述鹿晶益气生血丸处方为：生黄芪600g、当归120g、党参240g、茯苓180g、麸炒白术300g、炙甘草120g、鹿血晶20g、炒酸枣仁120g、制远志180g、木香180g、酒黄精180g、熟地240g、白芍180g、龙眼肉300g。
14.所述鹿晶益气生血丸的制备工艺包括以下步骤：
15.(1)称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加6-10倍量的水浸泡0.5-2小时，煎煮30-60分钟，收集煎液；第二、三次加6-10倍量的水，煎煮30-60分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.00-1.30，作为润湿剂备用；
16.(2)另取处方量1/2的生黄芪、当归、茯苓、麸炒白术、制远志、炒酸枣仁、白芍、木香混合粉碎过100目筛，取鹿血晶粉碎过100目筛，合并细粉，混合均匀，备用；
17.(3)取细粉，以药汁作为泛制法起模，泛制法泛丸，成型，干燥，选丸，即得。
18.优选的，
19.所述鹿晶益气生血丸的制备工艺步骤(1)具体为：
20.称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加6-8倍量的水浸泡1-2小时，煎煮30-40分钟，收集煎液；第二、三次加6-8倍量的水，煎煮30-40分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.20，作为润湿剂备用。
21.进一步优选的，
22.所述鹿晶益气生血丸的制备工艺步骤(1)具体为：
23.称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加7.5倍量的水浸泡2小时，煎煮30分钟，收集煎液；第二、三次加6倍量的水，煎煮30分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.20，作为润湿剂备用。
24.所述鹿晶益气生血丸的制备工艺步骤(3)所述细粉，用于起模，用量为细粉总量的5％。
25.所述鹿晶益气生血丸的制备工艺步骤(3)所述干燥，温度为80℃，时间2小时。
26.所述鹿晶益气生血丸在制备治疗慢性病或病后调和气血药物方面的应用。
27.优选的，
28.所述鹿晶益气生血丸在制备治疗缺铁性贫血药物中的应用。
29.有益效果：
30.1、本发明通过协定方的分析及处方折算摸索出了丸剂的制备工艺，该工艺简单易行，且剂型体积小，服用、携带、贮存都比较方便，该剂型溶散、释放药物缓慢，可延长药效，降低毒性、刺激性，减少不良反应；适用于慢性病治疗或病后调和气血者。
31.2、本发明的制备工艺通过了预试验一、预试验二、预试验三制备方法的研究，结果显示，药汁量为50ml，细粉量为52g时，起模效果比较好，药汁分散性较好，丸成型较好。
32.3、本发明通过了药材浸泡时间的考察，根据提取液的制备和总固体物收率测定，结果单因素方差分析表明：p＜0.05，说明不同的浸泡时间对出膏率有显著性差异；而因素多重比较结果表明：泡时间0小时与0.5小时、1小时，无显著差异，与浸泡2、6小时出膏率有显著性差异。浸泡2小时和6小时无显著性差异。因此，确定浸泡时间为2小时。
33.4、本发明通过了提取工艺优选的考察，根据出膏率结合浸泡时间研究结果，最终确定的提取工艺为加7.5倍水浸泡2小时，煎煮30分钟，第二次和第三次加6倍水，煎煮30分钟，合并三次的提取液备用。
34.5、本发明制备工艺通过了药汁用量的筛选试验，经过了药汁的制备、固体粉末的制备、水丸的制备、散时限测定、重量差异的考察，根据水丸的、外观、成型性，成品合格率以及溶散性等指标成分考察结果，初步确定药汁的用量为50ml(相对密度为1.20)。
35.6、本发明制备工艺通过了起模用粉量考察，根据水丸的、外观、成型性，成品合格率以及溶散性等指标成分考察结果，5％细粉起模所得成品水丸外观、大小及成品得率相对较好。
36.7、本发明制备工艺通过了黄芪用量在提取工艺比例考察，以水丸的成型、外观、成品量、溶散时限及重量差异作为考察指标，结果显示，黄芪用量在提取工艺中占有不同比例，对外观、成型影响比较大，根据试验结果，综合考虑，优选黄芪用量在提取部分和粉碎部分各占一半。
37.8、本发明制备工艺通过了水丸干燥时间、温度考察，以成品外观、水分、溶散时限、芍药苷含量测定作为指标参数进行考察，结果显示，在以上干燥温度60℃、70℃、80℃条件下，所得样品外观、溶散时限均符合符合要求，芍药苷含量明显变化，其水分分别为11.5％、8.3％、6.2％。综合考虑，优选80℃作为该工艺的干燥温度。
38.9、本发明通过了小试工艺参数的确认试验，采用本发明的工艺生产三批小试样品，以成品的外观、水分、重量差异、溶散时限、芍药苷含量等作为工艺参数的检测指标，结果显示，根据三批小试样品生产，并对各参数进行验证，结果显示该工艺简便、稳定可控，有利于工艺生产。
39.10、本技术通过了鹿晶益气生血丸对低铁饲料致缺铁性贫血小鼠外周血常规的影响的研究，造模前，各组大鼠的血常规各项指标的差异均无统计学意义(p》0.05)。给予低铁饲料42d后，与空白组比较，模型组大鼠的rbc、hgb、hct均明显降低(p《0.05，p《0.01)，模型组大鼠的hgb为63.34g
·
l-1(《100g
·
l-1)，提示缺铁性贫血模型建立成功。给予药物干预后，与模型组比较，鹿晶益气生血丸各剂量组大鼠的hgb、hct均出现明显升高(p《0.05，p《0.01)，rbc有一定升高趋势，但差异无统计学意义(p》0.05)；速力菲组大鼠的hgb亦明显升高(p《0.05)。
40.11、本技术通过了鹿晶益气生血丸对低铁饲料致缺铁性贫血大鼠组织铁的影响的研究，给予低铁饲料42d后，与空白组比较，模型组大鼠肝、脾、肾及小肠等各组织铁的含量均显著降低(p《0.01)。给予药物干预后，与模型组比较，鹿晶益气生血丸高、中、低剂量组及速力菲组大鼠的肝、脾、小肠的铁含量均明显升高(p《0.01)，鹿晶益气生血丸高剂量组及速力菲组大鼠的肾脏铁含量亦明显升高(p《0.01)。
41.12、本研究运用低铁饲料诱导大鼠缺铁性贫血模型，观察了鹿晶益气生血丸对缺铁性贫血的影响，结果显示，鹿晶益气生血丸能够明显提高缺铁性贫血大鼠模型的血红蛋白(hgb)、红细胞压积(hct)，提高肝、脾、肾及小肠等组织的铁含量。本研究结果表明，鹿晶益气生血丸改善缺铁性贫血大鼠的缺铁性贫血状态，具有良好的补铁效果，其治疗缺铁性贫血的作用机制值得重视和进一步研究。
附图说明
42.图1制备工艺流程图；
43.图2不同干燥时间hpcl图；
44.图3不同干燥温度hpcl图；
45.图4三批小试样品hpcl图；
46.图5黄芪薄层鉴别【1-3号鹿晶益气生血丸供试品(批号20220201)；4号黄芪对照药材；5号阴性供试品(缺黄芪饮片)】；
47.图6当归薄层鉴别【1-3号鹿晶益气生血丸供试品(批号20220201)；4号当归对照药材；5号阴性供试品(缺当归饮片)】；
48.图7麸炒白术薄层鉴别【1-3号鹿晶益气生血丸供试品(批号：20220201)；4号白术对照药材；5号阴性供试品(缺麸炒白术饮片)】；
49.图8白芍薄层鉴别【1-3号鹿晶益气生血丸供试品(批号：20220201)；4号白芍对照药材；5号阴性供试品(缺白芍饮片)】；
50.图9芍药苷含量测定专属性试验；
51.图10芍药苷含量测定线性关系。
具体实施方式
52.下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步地具体说明。
53.实施例1处方
54.生黄芪600g、当归120g、党参240g、茯苓180g、麸炒白术300g、炙甘草120g、鹿血晶20g、炒酸枣仁120g、制远志180g、木香180g、酒黄精180g、熟地240g、白芍180g、龙眼肉300g。
55.实施例2处方
56.生黄芪500g、当归100g、党参200g、茯苓100g、麸炒白术200g、炙甘草100g、鹿血晶10g、炒酸枣仁100g、制远志100g、木香100g、酒黄精100g、熟地200g、白芍100g、龙眼肉200g。
57.实施例3处方
58.生黄芪700g、当归150g、党参300g、茯苓200g、麸炒白术400g、炙甘草150g、鹿血晶30g、炒酸枣仁150g、制远志200g、木香200g、酒黄精200g、熟地300g、白芍200g、龙眼肉400g。
59.实施例4处方
60.生黄芪550g、当归120g、党参220g、茯苓150g、麸炒白术250g、炙甘草110g、鹿血晶15g、炒酸枣仁110g、制远志150g、木香150g、酒黄精150g、熟地220g、白芍150g、龙眼肉250g。
61.实施例5处方
62.生黄芪650g、当归150g、党参280g、茯苓180g、麸炒白术350g、炙甘草140g、鹿血晶25g、炒酸枣仁130g、制远志180g、木香180g、酒黄精180g、熟地250g、白芍180g、龙眼肉350g。
63.实施例1-5的处方分别按实施例6-10的任一制备工艺制备
64.实施例6制备工艺
65.(1)称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加7.5倍量的水浸泡2小时，煎煮30分钟，收集煎液；第二、三次加6倍量的水，煎煮30分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.20，作为润湿剂备用；
66.(2)另取处方量1/2的生黄芪、当归、茯苓、麸炒白术、制远志、炒酸枣仁、白芍、木香混合粉碎过100目筛，取鹿血晶粉碎过100目筛，合并细粉，混合均匀，备用；
67.(3)取细粉总量的5％，以药汁作为泛制法起模，泛制法泛丸，成型，80℃干燥2小时，选丸，即得。
68.实施例7制备工艺
69.(1)称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加6倍量的水浸泡0.5小时，煎煮30分钟，收集煎液；第二、三次加6倍量的水，煎煮30分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.00，作为润湿剂备用；
70.(2)另取处方量1/2的生黄芪、当归、茯苓、麸炒白术、制远志、炒酸枣仁、白芍、木香混合粉碎过100目筛，取鹿血晶粉碎过100目筛，合并细粉，混合均匀，备用；
71.(3)取细粉总量的4％，以药汁作为泛制法起模，泛制法泛丸，成型，60℃干燥1小时，选丸，即得。
72.实施例8制备工艺
73.(1)称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加10倍量的水
浸泡2小时，煎煮60分钟，收集煎液；第二、三次加10倍量的水，煎煮60分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.30，作为润湿剂备用；
74.(2)另取处方量1/2的生黄芪、当归、茯苓、麸炒白术、制远志、炒酸枣仁、白芍、木香混合粉碎过100目筛，取鹿血晶粉碎过100目筛，合并细粉，混合均匀，备用；
75.(3)取细粉总量的5％，以药汁作为泛制法起模，泛制法泛丸，成型，80℃干燥2小时，选丸，即得。
76.实施例9制备工艺
77.(1)称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加8倍量的水浸泡1小时，煎煮40分钟，收集煎液；第二、三次加8倍量的水，煎煮40分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.20，作为润湿剂备用；
78.(2)另取处方量1/2的生黄芪、当归、茯苓、麸炒白术、制远志、炒酸枣仁、白芍、木香混合粉碎过100目筛，取鹿血晶粉碎过100目筛，合并细粉，混合均匀，备用；
79.(3)取细粉总量的4.5％，以药汁作为泛制法起模，泛制法泛丸，成型，70℃干燥1.5小时，选丸，即得。
80.实施例10制备工艺
81.(1)称取处方量1/2的生黄芪、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉，加7倍量的水浸泡1.5小时，煎煮50分钟，收集煎液；第二、三次加7倍量的水，煎煮50分钟，收集煎液；合并三次煎液，过筛，滤液浓缩至相对密度为1.20，作为润湿剂备用；
82.(2)另取处方量1/2的生黄芪、当归、茯苓、麸炒白术、制远志、炒酸枣仁、白芍、木香混合粉碎过100目筛，取鹿血晶粉碎过100目筛，合并细粉，混合均匀，备用；
83.(3)取细粉总量的5％，以药汁作为泛制法起模，泛制法泛丸，成型，75℃干燥2小时，选丸，即得。
84.为了进一步验证本发明的有效性，发明进行了一系列的验证试验，具体如下：
85.一鹿晶益气生血丸工艺研究
86.(一)制备工艺资料研究
87.1.处方
[0088][0089]
2.制备工艺
[0090]
称取处方中饮片生黄芪(1/2处方量)、党参、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉6味饮片，加7.5倍量的水，浸泡1小时，煎煮三次，煎煮时间每次1小时，第二、三次加7倍量的水，三次煎液合并滤过100目筛，滤液浓缩，得浓缩液约50ml(相对密度1.20)，作为润湿剂备用；另取处方中的饮片生黄芪(1/2处方量)、当归、茯苓、炒白术、制远志、炒酸枣仁、白芍、木香混合打粉过100目筛，所得细粉与单独粉碎的鹿血晶(过100目)混匀备用；取细粉和药汁以泛制法制丸，干燥，制成1000g，即得。
[0091]
3.处方折算
[0092]
3.1处方来源及分析
[0093]
基础方源于我院血液科xxx医生的协定方，剂型为汤剂，处方剂量为：黄芪30g，当归6g，党参12g，茯苓9g，炒白术15g，炙甘草6g，鹿血晶1g，炒酸枣仁6g，制远志9g，木香9g，酒黄精9g，熟地12g，白芍9g，龙眼肉15g。剂量总计为148g；如果全处方打粉，以水泛丸，其服用量相对较大，初步考虑将处方中粘性相对较大的饮片进行提取浓缩，以药汁作为湿润剂，泛制法泛丸。
[0094]
3.2处方折算
[0095]
水丸制作折算：按临床基础方称取黄芪15g、党参12g、炙甘草6g、酒黄精9g、熟地12g、龙眼肉15g提取药汁约50ml作为湿润剂，另取黄芪15g、当归6g、茯苓9g、炒白术15g、制远志9g、炒酸枣仁6g、木香9g、白芍9g粉碎过100目，鹿血晶1g单独粉碎，与细粉混合均匀，以药汁作为湿润剂泛丸，干燥，所得丸成品50g，以此折算，制备1000g水丸，相当于20倍基础处方。
[0096]
4.预试验
[0097]
4.1预试验一
[0098]
(1)药汁的制备按基础方称取黄芪30g、党参12g、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉6味中药饮片，加10倍量水，提取两次，每次30分钟，收集药汁作为湿润剂，备用。
[0099]
(2)细粉制备按基础方称取当归、茯苓、炒白术、制远志、炒酸枣仁、木香、白芍,粉碎过100目，鹿血晶单独粉碎，与其他细粉混合均匀，备用。
[0100]
(3)制备样品以药汁作为湿润剂，取少量细粉起模，按泛制法泛丸：起模、成型、盖面、干燥、选丸流程制备样品。预试验结果见表1。
[0101]
表1预试验结果
[0102][0103]
结果分析：该法泛丸所用药汁和细粉的比例接近1:1。故考虑药汁浓缩至50ml左右作为湿润剂泛丸。
[0104]
4.2预试验二
[0105]
参照预试验一项下将药汁浓缩至50ml，作为湿润剂进行泛丸，结果见表2。
[0106]
表2预试验结果
[0107][0108]
结果分析：工艺参数下泛丸，药汁过于黏稠，分散困难，外观色泽有差异。
[0109]
4.3预试验三
[0110]
(1)物料准备称取基础方中饮片黄芪15g(1/2处方量)与党参12g、炙甘草、酒黄精、熟地、龙眼肉饮片进行提取，另取黄芪15(1/2处方量)与当归、茯苓、炒白术、制远志、炒酸枣仁、木香、白芍混合粉碎过100目筛，鹿血晶单独粉碎，与其他细粉混合均匀，备用。
[0111]
(2)成型与结果分析
[0112]
取少量的细粉作为起模，以药汁作为湿润剂，泛制泛泛丸、成型、盖面、干燥、选丸即得。结果见表3。
[0113]
表3预试验结果
[0114][0115]
结果分析起模效果比较好，药汁分散性较好，丸成型较好。在此基础上对其工艺关键参数进行考察。
[0116]
5.制备工艺流程图，见图1。
[0117]
(二)制备工艺研究
[0118]
1.实验材料
[0119]
1.1设备与仪器
[0120]
g200-q夹层锅(重庆市长寿湖机械制造有限公司)；2500c多功能粉碎机(永康市艾泽拉电气有限公司)；wf-30b万能粉碎机(江阴市双佳机械制造有限公司)；ct-c热风循环干燥箱(中国常州建达干燥设备有限公司)；1260infinity型hplc仪(安捷伦科技有限公司)。
[0121]
1.2试药
[0122]
芍药苷对照品(批号：110736-202044)来源于中国食品药品检定研究所；饮片均来源于贵阳济仁堂饮片有限公司；分析甲醇(批号:67-56-1)、乙腈(批号:75-05-8)来源于sigma-a ldrich化工试剂有限公司；磷酸(批号：20120425)来源于国药集团化学试剂有限公司。
[0123]
2.实验方法与结果
[0124]
2.1处方分析
[0125]
处方共14味中药，剂量较大，为方便临床应用，拟制备成水丸，但处方中黏性中药较多，直接粉碎困难，且服用量大，因此对处方部分饮片进行提取，所得药汁作为湿润剂，另一部分进行粉粹成细粉，泛制法制丸。
[0126]
2.2考察指标选择
[0127]
本制剂制备主要分为提取工艺和成型工艺两部分，提取工艺以出膏率为指标进行考察；成型工艺，将白芍主要药效成分芍药苷含量作为指标成分进行考察，同时考察起模用粉量、药汁用量、干燥温度、干燥时间、成型难易程度、外观、溶散时限、重量差异等指标，优选最佳成型工艺。
[0128]
2.3提取工艺参数考察
[0129]
2.3.1饮片吸水率考察
[0130]
称取3份提取用的处方饮片加入6倍量水浸泡，每隔一段时间观察一次浸润程度，待药物浸透为止，滤过至尽，药渣称重，计算吸水率(％)，试验结果见表4。
[0131]
表4药材吸水率试验结果
[0132][0133]
结果可知，药材吸水率为126.96％，结合大生产实际，在水提取时，确定为第一次加水时多加1.5倍量的水。
[0134]
2.3.2饮片浸泡时间考察
[0135]
在满足饮片吸水率条件下，考察浸泡时间，以总固体物收率为考察指标，优选适宜浸泡时间。
[0136]
(1)提取液制备
[0137]
称取处方中需提取部分的饮片，首次加9.5倍量水，第二次加8倍量水，考虑水煎液浸泡时间过长容易滋生细菌变质，并结合生产可行性，设计浸泡0h、0.5h、1h、2h、6h共5种样品，煎煮2次，每次30min，过滤，合并滤液，药液定溶至250ml，备用。
[0138]
(2)总固体物收率测定
[0139]
精密移取提取液25ml，各两份，至已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥，参照文献[10]，计算总固体物收率，运用spss23软件进行统计分析。结果见表5、表6、表7。
[0140]
表5浸泡时间对出膏率的影响
[0141][0142]
表6浸泡时间对出膏率单因素方差分析表
[0143][0144]
表7浸泡时间对出膏率因素多重比较结果
[0145][0146]
[0147]
*.平均值差值的显著性水平为0.05。
[0148]
结果：单因素方差分析表明p＜0.05，说明不同的浸泡时间对出膏率有显著性差异；而因素多重比较结果表明泡时间0h与0.5h、1h，无显著差异，与浸泡2h、6h出膏率有显著性差异。浸泡2h和6h无显著性差异。因此，确定浸泡时间为2h。
[0149]
2.3.3提取工艺参数正交试验
[0150]
按照正交试验设计考察煎煮次数、煎煮时间、加水量三个影响煎煮效果的主要因素，按每个因素3水平，用l9(34)正交表安排试验，见表8。以出膏率为指标对提取工艺进行评价，优选水提条件，结果见表9、表10。
[0151]
表8因素水平表
[0152][0153]
表9提取工艺条件l9(34)正交试验安排及直观分析结果
[0154][0155]
表10提取工艺条件l9(34)正交试验方差分析结果
[0156][0157]
结果可知：各因素对出膏率的影响为a》c》b，a因素不同水平差异较大，最佳方案为a3c3b1；但是从方差分析结果可见三个因素均无显著性差异，因此选择方案a3b1c1为最佳提取工艺。结合吸水率及浸泡时间结果，确定提取工艺为：饮片浸泡2h，煎煮3次(首次加7.5倍量水，2、3次加6倍量水)煎煮时间30min。
[0158]
2.4成型工艺考察
[0159]
2.4.1药汁用量考察
[0160]
按提取工艺制备药汁3份，分别浓缩至密度1.10、1.20、1.30，备用。另取3份剩余处方量饮片混合粉碎过100目筛，混匀。以5％细粉起模、成型、盖面、干燥、选丸，即得成品，以成品成型程度、外观、成品量、溶散时限、重量差异作为指标筛选药汁密度，结果见表11。
[0161]
(1)重量差异
[0162]
参照文献[9]中方法，以10丸为1份，取供试品10份，分别称定重量，再与平均重量比较，重量差异为
±
10％，超出重量差异限度的不得多于2份，并不得有1份超出限度1倍。
[0163]
(2)溶散时限测定
[0164]
取供试品6丸，选择孔径为1.0mm的筛网，参照崩解时限检测法[9]进行检查，本品应在1h内全部溶散；操作过程中如供试品黏附挡板妨碍检查时，应另取6丸，以不加挡板进行检查，上述检查，应在规定时间内全部通过筛网，如有细小颗粒状物未通过筛网，但已经软化且无硬心者可按符合规定论。
[0165]
表11药汁用量对外观、成品量、溶散时限、重量差异的影响
[0166][0167]
结果可知：药汁密度1.10泛丸易成型但容易粘连；药汁密度1.30泛丸不易成型且色泽不均匀、重量差异不符合规定；药汁密度1.20易成型，色泽均匀，溶散时限、重量差异均符合规定，因此确定药汁浓缩密度为1.20。
[0168]
2.4.2起模用粉量考察
[0169]
分别以3％、7％细粉量进行起模，以水丸的成型、外观、成品量、溶散时限及重量差异作为考察指标。结果见表12。
[0170]
表12起模细粉量筛选结果
[0171]
[0172]
结果可知：3％的细粉起模不易成型，色泽不均匀，重量差异不符合规定；7％细粉起模，不易成型，色泽不均匀，重量差异不符合规定；5％细粉起模易成型，粒度适宜，色泽均匀，溶散时限及重量差异均符合规定，因此确定以5％细粉起模。
[0173]
2.4.3成型样品品干燥时间考察
[0174]
以芍药苷含量、外观、水分、溶散时限为指标，设置温度为80℃，考察干燥时间(1h、2h、3h)对成型样品的影响。
[0175]
(1)干燥时间对芍药苷含量影响
[0176]
1)对照品溶液的制备
[0177]
取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含60ug的溶液，即得。
[0178]
2)供试品溶液的制备
[0179]
取供试品约1g，精密称定，置25ml容量瓶中，加稀乙醇20ml超声处理(240w,频率45khz)30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0180]
3)芍药苷含量测定
[0181]
参照文献
[10]
，采用hplc法对芍药苷含量进行测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，以乙腈-0.1％磷酸溶液(14:86)为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。结果见表13、图2。
[0182]
表13干燥时间对芍药苷含量影响
[0183][0184]
(2)干燥时间对外观、水分、溶散时限的影响
[0185]
将样品至干燥箱内，设置温度为80℃，分别于干燥后1h、2h、3h取样，考察外观、水分、溶散时限。结果见表14。
[0186]
表14干燥时间对外观、水分、溶散时限的影响
[0187][0188]
以上结果可知，干燥时间分别在1h、2h、3h条件下，成型样品芍药苷含量、外观、水分、溶散时限、均无明显差异，干燥时间在1h，水分超标，因此优选干燥时间为2h。
[0189]
2.4.4成型样品干燥温度考察
[0190]
取样品三份置于干燥箱中分别设置温度为60℃、70℃、80℃进行干燥，2h后取出，
以芍药苷含量、外观、水分、溶散时限为指标，考察干燥温度对成型样品的影响。
[0191]
(1)干燥温度对芍药苷含量影响
[0192]
按照2.4.3项下方法测定芍药苷含量，结果见表15，图3。
[0193]
表15干燥温度对芍药苷含量的影响
[0194][0195]
(2)干燥温度对外观、水分、溶散时限的影响
[0196]
将样品至干燥箱内，分别设置60℃、70℃、80℃，于干燥后2h取样，考察外观、水分、溶散时限。结果见表16。
[0197]
表16干燥温度对外观、水分、溶散时限的影响
[0198][0199]
以上结果可知：干燥温度(60℃、70℃、80℃)下样品外观、溶散时限均符合要求，芍药苷含量明显变化，水分分别为11.5％、8.3％、6.2％。因此，优选80℃作为该工艺的干燥温度。
[0200]
2.5小试工艺参数验证
[0201]
根据以上研究结果，初步确定鹿晶益气生血丸的生产工艺为：取处方中需提取饮片浸泡2h，煎煮3次(首次加7.5倍量水，2、3次加6倍量水)煎煮时间30min，过筛，合并滤液浓缩至相对密度1.20，作为润湿剂备用；另取处方剩余饮片混合粉碎过100目筛，得细粉混匀；取5％细粉与润湿剂起模，泛丸成型，0℃干燥2h，选丸，即得。采用该工艺生产三批小试样品，检测成品的外观、水分、溶散时限、重量差异、芍药苷含量，验证生产工艺参数。结果见表17、表18、图4。
[0202]
表17鹿晶益气生血丸小试样品外观检测结果
[0203][0204]
表18三批小试样品芍药苷检测结果
[0205][0206]
由以上结果可知：三批小试样品外观、水分、溶散时限、重量差异、芍药苷含量参数，检测结果稳定与工艺研究数据相符，证明该工艺简便、稳定可控，有利于工艺生产。
[0207]
3结论
[0208]
通过鹿晶益气生血丸生产关键环节工艺研究，优选出最佳工艺参数，并进行了工艺参数验证，结果显示该工艺简便、稳定可控，可用于制剂生产，为该品种申请医院制剂备案批件，奠定了实验基础。
[0209]
二鹿晶益气生血丸质量标准研究
[0210]
1材料与仪器
[0211]
1.1实验药品与试剂
[0212]
黄芪对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121462-201705)；白术对照药材(国食品药品检定研究院，批号：120925-202013)；当归对照药材(国食品药品检定研究院，批号：121054-201306)；白芍对照药材(国食品药品检定研究院，批号：120905-202011)芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110736-202044)；乙酸乙酯(四川西陇科学有限公司，批号：201013)；正己烷(西陇科学股份有限公司，批号：210220)；甲醇(sigma-aldrich化工试剂有限公司，批号：67-56-1)；乙醇(重庆万盛川东化工有限公司，批号：20200801)；石油醚(天津市致远化学试剂有限公司，批号：20201042)；三氯甲烷(四川西陇化工有限公司，批号：210818)；甲酸(国药集团化学试剂有限公司，批号：t20111209)；乙腈(sigma-aldrich化工试剂有限公司，批号:75-05-8)；磷酸(国药集团化学试剂有限公司，批号：20120425)；薄层层析用硅胶g(青岛海洋化工厂，批号：20211107)鹿晶益气生血丸三批(贵
州中医药大学第二附属医院制剂室提供，批号：20220201/20220202/20220203)。
[0213]
1.2实验仪器
[0214]
1260高效液相色谱仪(agilent technologies)；101-2ab型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；2f-7暗箱三用紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)；sk5210hp型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；auw220d型分析天平(岛津公司)；bhs-6数显恒温水浴锅(宁波市鄞州群安实验仪器有限公司)。
[0215]
2方法与结果
[0216]
2.1性状
[0217]
以外观和气味为指标，检查三批中试样品性状，确定本品性状为棕褐色体；气清香，味微甜。结果见表19。
[0218]
表19鹿晶益气生血丸性状检测结果
[0219][0220]
2.2tlc鉴别
[0221]
2.2.1黄芪tlc鉴别
[0222]
取本品和缺黄芪阴性样品各6g，分别加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加20ml水使溶解，加乙酸乙酯20ml萃取，分取乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，分别作为供试品溶液、阴性对照溶液。另取黄芪对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2020年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10:1)为展开剂，将硅胶g薄层板置盛展开剂的展开缸内饱和10min后展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏约5min，取出，置紫外灯(254nm)下观察。结果：供试品溶液和对照药材在相应的位置上有相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，该方法可以鉴别样品中黄芪(见图5)。
[0223]
2.2.2当归tlc鉴别
[0224]
取本品和缺当归阴性样品各10g，分别加石油醚30ml，超声处理10min，滤过，滤液水浴蒸干后，残渣加乙醇1ml使溶解，分别作为供试品溶液以及阴性对照溶液。另取当归对照药材4g,同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2020年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶g薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果：供试品溶液和对照药材在相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰，该方法可以鉴别样品中当归(见图6)。
[0225]
2.2.3麸炒白术tlc鉴别
[0226]
取本品和缺炒白术阴性样品各5g，加正己烷2ml，超声处理15min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取白术对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2020年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述新制备的三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(100：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰(见图7)。
[0227]
2.2.4白芍tlc鉴别
[0228]
取本品和缺白芍阴性样品各5g，加乙醇10ml，超声5min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液和阴性对照溶液。另取饮片白芍2g,同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2020年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。阴性对照无干扰(见图8)。
[0229]
2.3tlc鉴别方法耐用性考察
[0230]
分别参照2.2项下黄芪、当归、麸炒白术、白芍薄层鉴别方法制备供试品、阴性样品对照溶液及对照药材溶液，点样后的硅胶g板置于不同的环境温度(常温、4℃、35℃)和不同的环境湿度(rh％＝23％、rh％＝56％、rh％＝85％)展开，取出，晾干，在相同的条件下进行观察，结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的色斑。阴性对照无干扰，结果表明：不同环境温度、环境湿度对鹿晶益气生血丸中黄芪、当归、麸炒白术、白芍的鉴别无显著性影响，其鉴别方法耐用性较好。
[0231]
2.4检查
[0232]
参考文献
[7-11]
，进行水分、重量差异、装量差异、溶散时限、微生物限度的检查。
[0233]
2.4.1水分
[0234]
采用水分测定法测定样品水分，结果三批中试中试样品水分分别为5.7％、6.4％、6.1％，均小于9％，符合水丸项下水分的规定(结果见表20)。
[0235]
表20鹿晶益气生血丸水分检查结果
[0236][0237]
2.4.2重量差异
[0238]
照重量差异检查法，以10丸为1份，取供试品10份，分别称定重量，再与平均重量比较，重量差异限度为
±
10％，超出重量差异限度的不得多于2份，并不得有1份超出限度1倍，结果三批中试样品重量差异限度均符合规定。
[0239]
2.4.3装量差异
[0240]
照装量差异检查法，取供试品10袋，分别称定每袋内容物的重量，每袋装量与标示装量(15g)比较，装量差异限度为
±
4％，超出装量差异限度的不得多于2袋，并不得有1袋超出限度1倍。结果三批中试样品装量差异限度均符合规定。
[0241]
2.4.4溶散时限
[0242]
取供试品6丸，选择孔径为1.0mm的筛网，照崩解时限检测法进行检查，本品应在1h内全部溶散；操作过程中如供试品黏附挡板妨碍检查时，应另取6丸，以不加挡板进行检查，上述检查，应在规定时间内全部通过筛网，如有细小颗粒状物未通过筛网，但已经软化且无
硬心者可按符合规定论。结果三批中试样品溶散时限分别为42min、40min、39min，均在1h内全部溶散，符合水丸溶散时限检查规定，结果见表21。
[0243]
表21鹿晶益气生血丸溶散时限检查结果
[0244][0245][0246]
2.4.5微生物限度
[0247]
照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法和控制菌检查法(通则1106)及非无菌药品微生物限度标准检查，结果三批样品微生物限度检查均符合规定(结果见表22)。
[0248]
表22鹿晶益气生血丸微生物限度检查结果
[0249][0250]
2.5含量测定
[0251]
2.5.1色谱条件与系统适用性试验
[0252]
色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，以乙腈-0.1％磷酸溶液(14:86)为流动相；柱温:30℃；流速:1.0ml/min；进样量:10μl。检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
[0253]
2.5.2溶液制备
[0254]
(1)对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ml含50ug的溶液，即得。
[0255]
(2)供试品溶液的制备取供试品约1g，精密称定，置25ml容量瓶中，加稀乙醇20ml超声处理(240w,频率45khz)30分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0256]
(3)阴性对照溶液的制备按处方比例依法制备缺白芍的阴性对照品溶液。
[0257]
2.5.3方法学考察
[0258]
(1)专属性试验
[0259]
精密吸取上述3种溶液各10μl，按拟订色谱条件进样测定。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应保留时间处有相应色谱峰，而阴性对照无相应的色谱峰，表明阴性对照不干扰样品测定(见图9)，目标峰与相邻色谱峰的分离度均＞1.5。
[0260]
(2)线性关系考察
[0261]
分别精密吸取上述对照品溶液制成6份不同浓度的对照溶液，进样量10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，并以对照品浓度(x)为横坐标，以峰面积(y)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程y＝12.0241x 0.8797，r2＝0.9999(n＝6)。结果表明，芍药苷浓度在4.86～194.4μg/ml范围内与峰面积线性关系良好(见图10)。
[0262]
(3)稳定性试验
[0263]
精密吸取上述供试品溶液10μl，分别在0、4、6、8、10、24h进样，记录芍药苷峰面积，峰面积的rsd＝1.14％，表明该供试品溶液的稳定性良好，结果见表23。
[0264]
表23芍药苷含量测定稳定性试验结果
[0265][0266]
(4)重复性试验
[0267]
取同一批(批号为20220201)样品适量，研细，约1g，共6份，精密称定，置25ml容量瓶中，加稀乙醇20ml超声处理(240w,频率45khz)30分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，按上述色谱条件测定。结果平均含量为2.14mg/g，rsd为2.7％(n＝6)，表明本方法重复性良好，见表24。
[0268]
表24芍药苷含量测定重复性试验结果
[0269][0270]
(5)加样回收试验
[0271]
称取已知芍药苷含量的鹿晶益气生血丸样品6份，分别加入一定量的已知芍药苷含量的对照品，按照供试品溶液制备方法进行制备，按上述色谱条件进行进样，计算芍药苷的回收率，结果芍药苷的回收率为98.9％，rsd＝1.7％,表明回收率试验结果良好，结果见表25。
[0272]
表25芍药苷含量测定加样回收试验结果
[0273]
[0274][0275]
(6)耐用性试验
[0276]
取鹿晶益气生血丸适量(批号：20220202)，按2.5.2(2)项下方法制备供试品溶液，考察柱温变化
±
2℃，流速变化
±
0.2ml/min，色谱柱不同对色谱条件的耐受程度。结果表明：在各种不同考察条件下，目标峰与相邻色谱峰的分离度均较好，耐用性好。
[0277]
2.6三批中试样品含量测定
[0278]
取鹿晶益气生血丸的三批样品(20220201、20220202、20220203)，按2.5.2(2)项下方法制备供试品溶液，用hplc法进行测定，结果见表26。
[0279]
表26三批鹿晶益气生血丸芍药苷含量测定结果
[0280][0281]
3.结论
[0282]
课题组对鹿晶益气生血丸中的黄芪、当归、麸炒白术、白芍进行了tlc鉴别，并对其鉴别方法的耐用性进行了考察，结果符合要求证明该鉴别方法方便、简捷、稳定。采用hplc对芍药苷进行定量测定，方法重复性好，专属性、线性、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，能够对芍药苷含量进行高效、准确测定。并对三批中试样品水分、重量差异、装量差异、溶散时限、微生物限度、芍药苷含量进行了检测，结果均符合要求，证明该质量控制方法简便、可行。本研究系统的对鹿晶益气生血丸质量控制进行了评价，方法准确且完善，为鹿晶益气生血丸质量标准建立提供了实验依据，为后期医院制剂品种备案申报奠定了研究基础。
[0283]
三鹿晶益气生血丸对缺铁性贫血大鼠的药理学研究
[0284]
1材料与方法
[0285]
1.1动物及饲料
[0286]
sd大鼠72只，spf级，体重180-220g。雌雄各半，雌性无孕，购自长沙市天勤生物技术有限公司。ain-93g标准配方饲料(含铁量约为70mg
·
kg-1，批号：22031503)、ain-93g低铁饲料(含铁量《10mg
·
kg-1，批号：22030216)，购自睿迪(深圳)生物科技有限公司。
[0287]
1.2药品及试剂
[0288]
鹿晶益气生血丸(批号：20220201)，由贵州中医药大学第二附属医院提供；速力菲片(琥珀酸亚铁片，批号220104)，由金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂提供。组织铁测试盒(批号：20210912)购于南京建成生物工程研究所。
[0289]
1.3主要仪器
[0290]
auw220d型分析天平(岛津公司)；v4800型高通量组织匀浆器，北京鼎昊源科技有
限公司；st16r型高速冷冻离心机、varioska多功能酶标仪，美国thermo公司；2000i型全自动血液分析仪，日本希森美康公司。
[0291]
1.4分组、模型复制及给药
[0292]
将72只sd大鼠适应性喂养7d后，结合体质量、血红蛋白(hgb)均衡原则随机分为空白组、模型组、速力菲组(36mg
·
kg-1，阳性药组)和鹿晶益气生血丸高、中、低剂量组(4.4、2.2、1.1g
·
kg-1)，每组12只，雌雄各半，分笼饲养。每周称体质量1次，根据体质量调整用药量。分组后，空白组大鼠饲喂标准饲料，模型组和各给药组大鼠饲喂低铁饲料造模，持续42d；各组大鼠均置于不锈钢鼠笼喂养，自由摄食和饮用去离子水。模型复制的同时，空白组及模型组灌胃去离子水，速力菲组及鹿晶益气生血丸高、中、低剂量组分别灌胃给予相应剂量药物，灌胃体积20ml
·
kg-1，每天1次，持续给药42d。
[0293]
1.5样本采集、处理
[0294]
末次给药后，收集大鼠全血2ml，室温静置后离心(离心半径10cm，3000r
·
min-1，4℃)15min，取上层血清，于-20℃保存。取小鼠肝、脾、近端小肠、肾，用分析天平精确称量后，按照m∶v＝1∶9的比例加入4℃的生理盐水，置于高通量组织研磨仪进行匀浆，然后采用高速冷冻离心机以离心半径10cm、3 000r
·
min-1离心15min，取上清液，于-20℃保存备用。
[0295]
1.6血常规分析
[0296]
于分组当天及末次给药后，小鼠眼眶取血20μl，立即加入装有2ml血细胞分析仪用稀释液的ep管中，吹打混匀，并于20min内使用全自动血液分析仪检测各组小鼠的红细胞(rbc)、hgb、红细胞压积(hct)。
[0297]
1.7组织生化指标检测
[0298]
使用组织铁试剂盒，按照说明书方法检测各组小鼠肝、脾、小肠、肾组织的铁含量。
[0299]
1.8统计学处理方法
[0300]
采用spss21.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数
±
标准差(x
±
s)表示；多组间比较采用单因素方差分析(one-way anova)，两两比较用lsd检验；以p《0.05为差异具有统学意义。
[0301]
2结果
[0302]
2.1鹿晶益气生血丸对低铁饲料致缺铁性贫血小鼠外周血常规的影响
[0303]
结果见表27。造模前，各组大鼠的血常规各项指标的差异均无统计学意义(p》0.05)。给予低铁饲料42d后，与空白组比较，模型组大鼠的rbc、hgb、hct均明显降低(p《0.05，p《0.01)，模型组大鼠的hgb为63.34g
·
l-1(《100g
·
l-1
)，提示缺铁性贫血模型建立成功
[8]
。给予药物干预后，与模型组比较，鹿晶益气生血丸各剂量组大鼠的hgb、hct均出现明显升高(p《0.05，p《0.01)，rbc有一定升高趋势，但差异无统计学意义(p》0.05)；速力菲组大鼠的hgb亦明显升高(p《0.05)。
[0304]
表27鹿晶益气生血丸对低铁饲料致缺铁性贫血大鼠外周血常规的影响(x
±
s，n＝12)
[0305][0306]
注：与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01
[0307]
2.2鹿晶益气生血丸对低铁饲料致缺铁性贫血大鼠组织铁的影响
[0308]
结果见表28。给予低铁饲料42d后，与空白组比较，模型组大鼠肝、脾、肾及小肠等各组织铁的含量均显著降低(p《0.01)。给予药物干预后，与模型组比较，鹿晶益气生血丸高、中、低剂量组及速力菲组大鼠的肝、脾、小肠的铁含量均明显升高(p《0.01)，鹿晶益气生血丸高剂量组及速力菲组大鼠的肾脏铁含量亦明显升高(p《0.01)。
[0309]
表28鹿晶益气生血丸对低铁饲料致缺铁性贫血大鼠组织铁的影响(x
±
s，n＝12)
[0310][0311]
注：与模型组比较，**p《0.01
[0312]
3结论
[0313]
本研究运用低铁饲料诱导大鼠缺铁性贫血模型，观察了鹿晶益气生血丸对缺铁性贫血的影响，结果显示，鹿晶益气生血丸能够明显提高缺铁性贫血大鼠模型的血红蛋白(hgb)、红细胞压积(hct)，提高肝、脾、肾及小肠等组织的铁含量。本研究结果表明，鹿晶益气生血丸改善缺铁性贫血大鼠的缺铁性贫血状态，具有良好的补铁效果，其治疗缺铁性贫血的作用机制值得重视和进一步研究。
[0314]
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。