一种检测茶叶中毒死蜱的方法

一种检测茶叶中毒死蜱的方法【
技术领域：
：】1.本发明涉及一种sers基底与碳点催化相结合的检测茶叶中毒死蜱的方法，属于拉曼光谱分析检测
技术领域：
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背景技术：
：：2.毒死蜱(chlorpyrifos)是一种毒性中等的有机磷杀虫剂，对水稻、小麦、茶叶等农作物上多种咀嚼式和刺吸式害虫，以及茶尺蠖、茶角盲蝽等茶树害虫也具有较好的防治作用，被广泛应用于防治农作物害虫和家庭卫生害虫等方面。毒死蜱具有环境持久性和生物蓄积性，存在dna损伤、基因突变等遗传毒性，如果毒死蜱残留通过环境等途径进入人类等哺乳动物体中导致中毒，可能会增加肺癌、白血病等癌症的潜在风险，甚至出现神经系统功能异常、身体瘫痪，或直接导致死亡，长期低剂量暴露会对人类的健康造成极大的威胁。3.毒死蜱广泛应用于茶树的防虫防病，因此其容易残留于茶叶中。因此，构建快速简单的检测方法来检测茶叶中毒死蜱非常有意义。为了预防毒死蜱农残可能带来的危害，人们应用了许多方法检测茶叶中毒死蜱残留。目前，常见茶叶中毒死蜱检测方法存在一下缺点：4.1.采用液相色谱法不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。当无纯物质对照时，定性鉴定就很困难，这时需借助质谱、红外和化学法等配合；另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析，其灵敏度较低，限制了其在痕量分析中的广泛应用；5.2.采用气相色谱-质谱法，由于仪器设备型体较大，且必须专业人员操作，不适用于推广灵活使用，无法用于现场检测；6.3.液相色谱-质谱法在检测分析领域是常见的技术，但液相色谱-质谱法仪器结构比较复杂、价格比较昂贵、操作复杂、检测速度慢、费时、需要专业人员操作，不适用于推广灵活使用；7.4.sers技术应用于茶叶中毒死蜱的相关应用，需要结合较很多复杂的密度泛函理论，或者其他复杂的计算理论模型等，方法不够简单，检测效率不高；8.5.目前，茶叶制备检测样品后，经一次毒死蜱的检测，过后的样品，不能再用于下次毒死蜱的检查，样品回收率低。9.目前，运用适配体作为分子识别的手段是研究的热点，它与靶标结合的特异性和高亲和力与抗体相当甚至更具优势，并且具有合成简单快速，适用范围广，易于进行化学修饰和多功能化等等优点，将其与sers技术相结合检测农残具有较大的应用前景。本技术将利用适配体调控sers基底与碳点催化相结合以此建立一种简便、快速、灵敏高、无需复杂预处理、选择性好的检测茶叶中毒死蜱的sers方法。技术实现要素：10.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种利用适配体调控sers基底与碳点催化相结合以此建立一种简单、灵敏、便捷、无需复杂预处理sers检测茶叶中毒死蜱的方法。11.实现本方案目的的技术方案是：一种检测茶叶中毒死蜱的方法，包括富勒烯(c60)配置、掺金碳点(cdau)的制备和sers法测定毒死蜱，具体步骤如下：12.(1)取一定质量的富勒烯(c60)溶解于适量体积的甲苯中，加入一定体积的超纯水，放置于超声波清洗仪中超声至甲苯全部挥发，得到溶液呈深黄色悬浮液，得到富勒烯溶液，此时溶液呈亮紫色溶液。因为富勒烯是亲脂性纳米材料，在大多数极性溶剂中的溶解性较差，选择甲苯可促进富勒烯充分溶解，提升富勒烯的分散性，提高后续检测分辨率；并且富勒烯(c60)为非金属单质，是一种由60个碳原子构成的分子，是单纯由碳原子结合形成的稳定分子，它具有60个顶点和32个面，多为稳定的五边形和六边形，这些性能提高了它们作为非均相碳催化剂的活性，使它们成为高效的催化剂；13.(2)取适量上述富勒烯(c60)溶液，然后加入haucl4溶液，放置在超声波清洗仪中超声溶解于去离子水中，得到透明溶液；14.(3)将上述透明溶液转入消解罐中，密封后置于微波消解仪中，微波消解加热运行时间为15min，等待反应结束后，取出冷却至室温，得到淡红色澄清溶液，记为cdau；15.(4)在100ml锥形瓶中加入0～0.30mmol/l浓度的毒死蜱适配体溶液和0～34μg/ml浓度的cdau溶液混匀静置反应；16.(5)等步骤(4)溶液反应完成后依次加入适量浓度的毒死蜱混合静置9min，使适配体与靶物质能充分结合，从而使适配体从cdau表面脱离，cdau催化活性就会提高，体系的sers强度升高；17.(6)然后加入0～60mmol/l的葡萄糖作为还原剂和0～1.18mmol/l的hcl、0～0.90g/l的haucl4溶液混匀定容。葡萄糖不仅价格便宜，还是环保型试剂,hcl电离出大量cl-，cl-存在的情况下，使金离子聚集形成金纳米粒子sers基底，cdau对金纳米粒子sers基底具有很强的催化作用，同时金纳米粒子由于比表面积大，接触面也就增大，并产生较好的sers信号；在葡萄糖还原氯金酸的反应体系中，体系的ph值会影响生产金纳米粒子的尺寸和相貌，若碱性条件下，葡萄糖会发生醛糖和酮糖的互变重排，使起还原作用的醛基变少，hcl添加可用于控制体系ph，进而控制金纳米粒子的生成；18.(7)将上述混合溶液水浴加热50～100℃反应0～24min，用冰水终止反应，将温度快速降下来，防止后续出现缓慢反应；19.(8)取适量步骤(7)终止反应后溶液加入0～0.17μmol/l的维多利亚蓝b(vbb)进行sers检测，加入维多利亚蓝b(vbb)作为体系的探针分子，即拉曼信号的指示剂；20.(9)检测在1616cm-1拉曼位移处的表面增强拉曼散射峰强度i1616cm-1，另外不加毒死蜱溶液做空白，测定其空白值i0，计算δi1616cm-1＝i1616cm-1-i0值。数据采集时，拉曼光谱仪的参数设置为：激光波长633nm，激光功率为3.0mw，采集时间为10s；21.(10)以已知含量毒死蜱绘制标准曲线，采用工作曲线法测定茶叶样品上清液毒死蜱含量，所述茶叶样品上清液的制备工艺包括如下步骤：22.s1：称取5g茶叶样品，研磨成粉末；23.s2：放入50ml离心管中，加入25ml丙酮，漩涡1min，超声提取2min；24.s3：然后放入离心机以4200r/min离心5min，取悬浮液1ml定容至20ml作为试样液；25.s4：量取6ml试样液于10ml离心管中，称取0.28g四氧化三铁、0.13g石墨化碳、600mg无水硫酸镁加入到6ml试样液中，混合震荡1min，以4500r/min转速离心5min，去除基质中叶绿素、矿物质、茶多酚、碳水化合物等物质对检测的干扰，制备得到茶叶上清液。26.优选地，所述步骤(1)中，富勒烯质量：甲苯体积：超纯水体积＝0.02g:20ml:100ml，所制备的富勒烯溶液为0.2g/l。27.优选地，所述步骤(2)中，所述富勒烯(c60)溶液取1.5ml，所述的haucl4质量溶度为0.01g/ml，使用量为70μl，所使用的去离子水为20ml。28.优选地，所述步骤(3)中，微波消解过程温度为180℃，压强为1.0mpa。29.优选地，所述步骤(4)中，毒死蜱适配体溶液为0.14mmol/l，cdau为18μg/l溶液混匀静置反应为5min，使适配体更完全、更好地吸附到碳点的表面。30.优选地，所述步骤(6)中，葡萄糖浓度为45mmol/l，hcl浓度为0.59mmol/l，haucl4浓度为0.65g/l，溶液混匀定容为10ml。31.优选地，所述步骤(7)中，水浴加热温度为70℃，反应时间为18min。32.优选地，所述步骤(8)中，取步骤(7)终止反应后溶液2ml，维多利亚蓝b(vbb)溶液的溶度为0.125μmol/l。33.本发明一种基于适配体调控sers基底与碳点催化相结合的sers检测茶叶中毒死蜱的方法具有以下优点：34.1.在70℃水裕加热的条件下，cdau对葡萄糖和haucl4反应生成金纳米粒子sers基底具有很强的催化作用：由于富勒烯具有光诱导电子转移和较大比表面积的特性，金属纳米粒子由于其较小的尺寸和较大的比表面积而具有特殊的理化性质。用金掺杂富勒烯，形成c-au键，两者的催化活性起到协同作用，加快化学反应中的电子转移能力，使体系更快生成金纳米粒子。35.2.本发明利用适配体调控sers基底与碳点催化相结合以此建立一种简单、灵敏、快速、无需复杂预处理sers检测茶叶中毒死蜱的方法。36.3.经检验验证红茶、白茶和绿茶三种茶叶的回收率为96.80～102.13％，相对标准偏差为2.33～4.04％，茶叶样品回收率高，同时抗干扰性强。【附图说明】37.图1为sers测定痕量毒死蜱的原理图；38.图2为毒死蜱适配体关闭cdau催化反应体系sers光谱图(a：0ng/l毒死蜱 0mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb；b：0ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；39.图3为毒死蜱适配体关闭cdau催化反应体系吸收光谱图(a：0ng/l毒死蜱 0mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb；b：0ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；40.图4为毒死蜱适配体关闭cdau催化反应体系rrs光谱图(a：0ng/l毒死蜱 0mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb；b：0ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；41.图5为不同浓度毒死蜱开启cdau催化反应的体系sers光谱图；42.图6为不同浓度毒死蜱开启cdau催化反应的体系紫外吸收光谱图(a:0ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/lglu 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb；b：a 12.8ng/l毒死蜱；c:a 117.8ng/l毒死蜱；d:a 222.8ng/l毒死蜱；e:a 327.8ng/l毒死蜱；f:a 432.8ng/l毒死蜱)；43.图7为不同浓度毒死蜱开启cdau催化反应的体系rrs光谱图(a:0ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb；b.a 12.8ng/l毒死蜱；c:a 117.8ng/l毒死蜱；d:a 222.8ng/l毒死蜱；e:a 327.8ng/l毒死蜱；f:a 432.8ng/l毒死蜱)；44.图8为毒死蜱浓度为0ng/l金纳米电镜图(0ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；45.图9为毒死蜱浓度为117.8ng/l金纳米电镜图图(117.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 0.018mg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb.)；46.图10为不加毒死蜱和适配体金纳米电镜图(0ng/l毒死蜱 0mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；47.图11为cdau溶液浓度对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 xμg/lcdau 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 70℃ 18min 0.59mol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；48.图12为葡萄糖浓度对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 xmmol/l葡萄糖 70℃ 18min 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；49.图13为haucl4浓度对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l xg/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 70℃ 18min 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；50.图14为毒死蜱适配体浓度对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 xmmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 70℃ 18min 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；51.图15为hcl浓度对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 70℃ 18min xmmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；52.图16为温度对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 x℃ 18min 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；53.图17为时间对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 70℃ xmin 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)；54.图18为vbb浓度对毒死蜱检测体系的影响图(432.8ng/l毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 70℃ 18min 0.59mmol/lhcl xμmol/lvbb)；55.图19为sers检测毒死蜱的工作曲线图((0，12.8,117.8,222.8,327.8,432.8ng/l)毒死蜱 0.14mmol/l毒死蜱适配体 18μg/l 0.65g/lhaucl4 45mmol/l葡萄糖 0.59mmol/lhcl 0.125μmol/lvbb)。【具体实施方式】56.下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述，对本发明不构成任何限制。本发明中所有实施例所述的毒死蜱适配体具体序列链均为5′‑dnacctgccacgctccgcaagcttagggttacgcctgcagcgattcttgatcgcgctgctggtaatccttctttaagcttggcacccgcatcgt-3′。57.实施例158.一、基本制备方法59.(1)富勒烯配制(c60)60.称取0.02g富勒烯溶解于20ml甲苯中，此时溶液呈亮紫色溶液，加入100ml超纯水，放置于超声波清洗仪中超声至甲苯全部挥发，得到溶液呈深黄色悬浮液，得到0.2g/l富勒烯溶液。61.(2)cdau的制备62.取上述c60溶液1.5ml，然后加入70μl0.01g/mlhaucl4溶液，放置在超声波清洗仪中超声溶解于20ml去离子水中，得到透明溶液，随后转入消解罐中，密封后置于微波消解仪中，设置温度为180℃，压强为1.0mpa，微波消解运行时间为15min。等待反应结束后，取出冷却至室温，得到淡红色澄清溶液，记为cdau，所得碳点以c60浓度计，为13.91mg/l，稀释到0.6μg/ml备用。63.(3)sers法测定毒死蜱64.在100ml锥形瓶中加入140μl0.01mmol/l毒死蜱适配体溶液和300μl0.6μg/mlcdau溶液混匀静置反应5min，反应完成后依次加入适量浓度的毒死蜱混合静置9min，然后加入900μl0.5mol/l葡萄糖，590μl0.01mol/lhcl，650μl0.001g/mlhaucl4溶液混匀定容至10ml，70℃水浴反应18min，用冰水终止反应。取2ml反应液加入25μl1x10-3mol/lvbb进行sers检测。测定1616cm-1拉曼位移处的表面增强拉曼散射峰强度i1616cm-1，另外不加毒死蜱溶液做空白，测定其空白值i0，计算δi1616cm-1＝i1616cm-1-i0值。数据采集时，拉曼光谱仪的参数设置为：激光波长633nm，激光功率为3.0mw，采集时间为10s。65.二、方法原理66.在70℃水裕的条件下，cdau对葡萄糖和haucl4反应生成金纳米粒子sers基底具有很强的催化作用。在合适的反应条件下，cdau具有很强的催化作用，但当体系中加入毒死蜱核酸适配体时，适配体会吸附到cdau的表面，导致碳点的催化活性被抑制，金纳米粒子sers基底生成减少，使得体系的sers强度减弱。当体系中加入靶分子毒死蜱之后，它与适配体发生特异性结合，形成毒死蜱-适配体的复合物而使毒死蜱核酸适配体脱离cdau的表面，cdau的催化作用得到恢复，此时体系的sers强度也会随之增强。随着毒死蜱浓度增加，cdau催化作用相对增强，生成金纳米粒子增多，体系sers信号增强,其原理如图1所示。67.三、测定结果及分析68.(1)毒死蜱适配体关闭cdau催化反应体系sers、rrs、紫外吸收光谱69.由于cdau具有良好吸附性能，在检测体系中加入毒死蜱适配体，cdau表面很快被适配体吸附包裹，使其与葡萄糖-haucl4的催化反应接触面积大大减小，抑制其催化活性，反应生成的金纳米粒子减少，体系的sers强度降低如图2。由图2所示，其在1616cm-1拉曼位移处的表面增强拉曼散射峰强度较大。70.同理，体系的紫外吸收光谱在加入适配体后在305nm和568nm左右处吸收峰明显降低，其结果如图3。71.同理，体系的rrs在加入适配体后也在282nm、370nm和564nm左右处吸收峰明显降低，其结果如4。72.(2)不同浓度毒死蜱开启cdau催化反应73.在体系中加入不同浓度(0ng/l、12.8ng/l、117.8ng/l、222.8ng/l、327.8ng/l、432.8ng/l)的毒死蜱，毒死蜱与适配体发生特异性结合，cdau逐渐暴露，体系催化作用恢复，生成的金纳米粒子增多，以vbb为探针分子，体系sers强度增强，其结果如图5所示，由图5可知：毒死蜱在12.8～432.8ng/l浓度范围内，随着浓度的增加sers强度也随之增强,它们呈正相关关系。74.检测加入不同浓度毒的死蜱检测体系的紫外吸收光谱情况，其结果如图6所示，从图6可知：由于金纳米粒子增多，体系在305nm和568nm左右处紫外吸收信号增强。75.检测加入不同浓度的毒死蜱检测体系的rrs光谱情况，其结果如图7所示，由图7可知：在282nm、370nm和564nm左右处rrs信号增强，这与图5中sers信号增强的现象一致。76.(3)扫描电镜测试77.在毒死蜱检测平台体系中，溶液中毒死蜱浓度为0ng/l时，其电镜图如图8所示，由图8可知：没有毒死蜱与适配体结合释放裸露的cdau，此时适配体对cdau的抑制作用是最强的，金纳米粒子生成的数量最少；78.体系中毒死蜱浓度为117.8ng/l时，其电镜图如图9所示，由图9可知：毒死蜱与适配体结合，使体系中裸露的cdau增加，体系的催化性能得到一定程度的恢复，生成的金纳米粒子比不加农药的有所增加；当体系中不存在适配体和农药时，其电镜图如图10所示，由图10可知：体系生成了大量的金纳米粒子，说明cdau在体系有较好的催化性能，是良好的催化剂。结果表明，毒死蜱可以与适配体结合从而抑制cdau的催化性能，可以间接调控金纳米粒子生成的数量。79.(4)影响体系的各因素优化80.分别对cdau溶液浓度、葡萄糖溶液浓度、haucl4溶液浓度、毒死蜱适配体溶液浓度、hcl溶液浓度因素的进行优化，不同葡萄糖浓度对毒死蜱检测体系的影响结果如图11，不同葡萄糖浓度对毒死蜱检测体系的影响结果如图12，不同haucl4浓度对毒死蜱检测体系的影响结果如图13，不同毒死蜱适配体浓度对毒死蜱检测体系的影响结果如图14，不同hcl浓度对毒死蜱检测体系的影响结果如图15，由图11-15可知cdau溶液浓度、葡萄糖溶液浓度、haucl4溶液浓度、毒死蜱适配体溶液浓度、hcl溶液浓度分别为18μg/l、45mmol/l、0.65g/l、0.14mmol/l、0.59mmol/l时，体系的δi1616cm-1达到最大值。故实验最后选取以上条件为最佳检测条件。检测体系优化完以上条件，再对时间和水裕温度进行优化。不同温度对毒死蜱检测体系的影响结果如图16所示，不同时间对毒死蜱检测体系的影响结果如图17所示，从图16-17可知：当水浴温度为70℃、反应时间为18min时，体系的δi1616cm-1达到最大值，故选取反应水裕温度为70℃，反应时间为18min。最后对vbb探针分子进行优化，其测试结果如图18所示，由图18可知：当检测体系中vbb浓度为0.125μmol/l时，体系δi1616cm-1达到最大值，故选取体系中vbb浓度为0.125μmol/l。81.(5)工作曲线82.根据实验方法，以毒死蜱(ng/l)对δi1616cm-1绘制工作曲线，如图19所示。得到实验结果表明，毒死蜱在12.8～432.8ng/l范围内与δi1616cm-1呈线性关系，其回归线性方程为δi1614cm-1＝4.7812x-0.2417，相关系数r2＝0.9961，检出限为2.40x10-7mg/kg。83.(6)干扰实验84.根据实验方法考察了常见离子(mg2 、na 、cu2 、zn2 、ca2 、ba2 、k 、nh4 、co32-、so42-、cl-、hco3-)、共施农药(联苯菊酯、吡虫啉、哒螨灵、啶虫脒)在毒死蜱222.8ng/ml时对检测体系干扰情况。毒死蜱浓度为222.8ng/l，加入毒死蜱的同时分别加入常见离子：22.28μg/l的mg2 、na 、cu2 、zn2 、ca2 、ba2 、k 、nh4 、co32-、so42-、cl-、hco3-，或共施农药：22.28μg/l的联苯菊酯、吡虫啉、哒螨灵、啶虫脒，检测添加常见离子和共施农药对检测体系的干扰情况，干扰物质影响如表1。从表1中实验结果可以看出，当系统中加入22.28μg/lmg2 、na 、cu2 、zn2 、ca2 、ba2 、k 、nh4 、co32-、so42-、cl-、hco3-不干扰测定；22.28μg/l联苯菊酯、吡虫啉、哒螨灵、啶虫脒不干扰测定；从而说明该方法法具有较好的选择性。85.表1干扰物质影响[0086][0087](7)红茶、白茶和绿茶干茶叶样品分析[0088]分别称取红茶、白茶和绿茶干茶各5g，研磨成粉末，放入50ml离心管中，加入25ml丙酮，漩涡1min,超生提取2min,然后放入离心机以4200r/min离心5min,取悬浮液1ml定容至20ml用于配置222.8ng/l毒死蜱标准样液；量取6ml222.8ng/l毒死蜱标准样液于10ml离心管中，称取0.28g四氧化三铁、0.13g石墨化碳、600mg无水硫酸镁加入到6ml标准样液中，混合震荡1min，以4500r/min转速离心5min，去除基质中叶绿素、矿物质、茶多酚、碳水化合物等物质对检测的干扰，取上清液按照毒死蜱检测平台sers光谱采集实验方法，平行5次对绿茶样品进行加标回收实验。如表2所示，根据实验方法对干绿茶叶进行五次平行加标回收实验，回收率可达到96.80～102.13％，回对标准偏差为2.33～4.04％。[0089]表2样品分析[0090]table3-2sampleanalysis[0091][0092]上述说明时针对本发明较佳可实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。当前第1页12当前第1页12