一种穿刺样本固定染色液及其制备方法、应用方法

1.本发明涉及生物技术领域，具体的是一种穿刺样本固定染色液，属于标本处理技术领域。


背景技术：

2.病理学是以细胞形态观察为基础的学科，为临床诊断提供重要依据。随着医疗技术的发展，为方便诊断疾病，减少病人痛苦，组织穿刺技术应用越来越广泛。但随之而来的是穿刺组织固定染色的困难。穿刺样本与常规样本相比体积较小，为细条形。如果穿刺组织在病理科取材过程中未经染色或者染色不足，经过固定、脱水、透明、浸蜡程序后，组织呈白色，在后续包埋切片过程中，组织与石蜡无法分辨，会造成组织遗漏或者切片过程损失，工作则难以进行。所以穿刺组织的染色标记步骤尤其重要。
3.现有技术通常是在组织固定液中滴加伊红染液，这在一定程度上能够让穿刺样本着色，在制造成组织蜡块之前能够起到发现和识别的作用，而用伊红着色的穿刺样本，在经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等形成蜡块以后，部分穿刺样本上的伊红颜色褪色或者颜色变浅，在对蜡块中组织制成病理切片过程中，起不到对穿刺样本的发现与识别作用。
4.综上，本发明提供一种穿刺样本快速固定染色液，与现有技术相比，具有更好的着色性和临床实用性，本发明的应用对提高我国病理事业发展和临床病理诊疗水平具有重要意义。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术中的缺陷，本发明实提供了一种穿刺样本快速固定染色液及其制备方法、应用方法，具有成本低、易配置、使用方便、着色性好的特点。本发明公开了一种穿刺样本快速固定染色液，以重量份计，包括以下成分：
6.13.丙酮100～200份、
7.14.冰醋酸200～400份、
8.15.曙红y 200～400份、
9.16.伊红染液50～200份、
10.17.福尔马林50～200份、
11.二甲基亚砜1～10份、
12.氯化锌50～100份。
13.在一些实施例中，一种穿刺样本快速固定染色液，以重量份计，包括以下成分：
14.丙酮100份、
15.冰醋酸200份、
16.曙红y300份、
17.伊红染液50份、
18.福尔马林100份、
19.二甲基亚砜10份、
20.氯化锌100份。
21.在一些实施例中，一种穿刺样本快速固定染色液的ph值小于4.5。
22.本发明还公开了一种穿刺样本固定染色液的制备方法，包括以下步骤：
23.步骤一：将冰醋酸200～400份、曙红y 200～400份、伊红染液50～200份、氯化锌50～100份混合均匀得a液；
24.步骤二：将丙酮100～200份、福尔马林50～200份、二甲基亚砜1～10份充分混合均匀得b液；
25.步骤三：将步骤一中的a液与步骤二中的b液超声混合均匀得到固定液。
26.可选的，步骤一中超声混合的超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温。
27.本发明同时公开了一种穿刺样本染色固定方法，包括以下步骤：
28.步骤一：用镊子将穿刺组织平行铺平在滤纸上；
29.步骤二：将上述固定染色液滴加在穿刺组织上，固定染色5～30s；
30.步骤三：将固定染色后的穿刺组织放入包埋框；
31.步骤四：脱水、透明、浸蜡和切片。
附图说明
32.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
33.图1为用实施例4固定染色制备的石蜡切片做he染色，图中显示染色均匀，细胞间无挤压无裂隙，制备效果好。
34.图2为用对比例1固定染色制备的石蜡切片做he染色，图中显示染色均匀，细胞间无挤压无裂隙，制备效果好。
具体实施方式
35.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
36.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
37.实施例1制备穿刺样本固定染色液：
38.将冰醋酸200份、曙红y300份、伊红染液100份和氯化锌50份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温；
39.将丙酮200份、福尔马林100份和二甲基亚砜1份充分混合均匀得b液；
40.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温，ph4.0。
41.实施例2
42.将冰醋酸400份、曙红y200份、伊红染液200份和氯化锌80份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～25min，混合温度为室温；
43.将丙酮100份、福尔马林100份和二甲基亚砜10份充分混合均匀得b液；
44.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温，ph3.5。
45.实施例3
46.将冰醋酸150份、曙红y400份、伊红染液50份和氯化锌100份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温；
47.将丙酮150份、福尔马林100份和二甲基亚砜8份充分混合均匀得b液；
48.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温，ph4.5。
49.实施例4
50.将冰醋酸200份、曙红y300份、伊红染液50份和氯化锌100份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温；
51.将丙酮100份、福尔马林100份和二甲基亚砜10份充分混合均匀得b液；
52.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温，ph4.5。
53.对比例1醇溶性伊红染液
54.购自于北金中杉金桥公司的伊红试剂(编号：bsba-4022)。
55.对比例2
56.将冰醋酸200份、曙红y300份、伊红染液50份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温；
57.将丙酮100份、福尔马林100份和二甲基亚砜10份充分混合均匀得b液；
58.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温，ph4.0。
59.对比例3
60.将冰醋酸200份、曙红y300份、伊红染液50份和氯化锌100份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温；
61.将丙酮100份、福尔马林100份充分混合均匀得b液；
62.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温，ph4.5。
63.对比例4
64.将冰醋酸200份、曙红y300份、伊红染液50份超声混合均匀得a液，其中超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温；
65.将丙酮100份、福尔马林100份充分混合均匀得b液；
66.将a液和b液超声混合均匀得到固定液，超声波功率100w，超声时间10～20min，混合温度为室温，ph4.5。
67.实验例1
68.将扁桃体穿刺取样组织，使用上述实施例1～4和对比例1～4制备的固定染色液染色，具体操作如下：
69.步骤一：用镊子将穿刺组织平行铺平在滤纸上；
70.步骤二：将固定染色液滴加在穿刺组织上，固定染色5～30s；
71.步骤三：将固定染色后的穿刺组织放入包埋框；
72.步骤四：脱水、透明、浸蜡和切片。
73.结果如下：
[0074] 染色质量实施例1染色颜色深，包埋组织与石蜡对比较易区分实施例2染色颜色深，包埋组织与石蜡对比较易区分实施例3染色颜色深，包埋组织与石蜡对比较易区分实施例4染色颜色深，包埋组织与石蜡对比鲜明对比例1染色较浅，包埋组织与石蜡对比需仔细分辨对比例2染色较浅，包埋组织与石蜡对比较难分辨对比例3染色较浅，包埋组织与石蜡对比较难分辨对比例4染色浅，包埋组织与石蜡对比很难分辨
[0075]
由上述表格中的检测结果可知，本发明制备的穿刺样本固定染色液染色效果好，能够提高临床样本制备效率。
[0076]
实验例2
[0077]
取上述实施例4和对比例1制备的石蜡切片做常规的he染色，显微镜下观察2种染色固定方法制备的组织切片。观察结果，2种方法制备的切片组织结构均清晰，颜色对比分明。图1为实施例4制备的切片he染色图片，图2为对比例1制备的切片he染色图片。
[0078]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。