一种沙棘-二甲双胍的草药复合物及其制备方法

mtor途径，降低磷-p70s6激酶、akt(ser 473)和磷-4e-bp1(t37/46)的磷酸化水平，同时合成cat、gtp、谷胱甘肽s-转移酶(gst)、谷胱甘肽还原酶(gsr)、sod和抗致癌转录因子干扰素调节因子-1(irf-1)的合成，导致癌细胞凋亡和抑制。
6.同样，二甲双胍来自山羊豆属(galega officinal)；山羊豆通常被称为法国丁香或山羊草或意大利菲奇或西班牙圣草或教授草。山羊豆是一种美国食品药品监督管理局 (fda)批准的物质。它与绿豆或豆科植物有关，被称为豆科，豆科亚科，豆目，木兰科。它是一种草本植物，由于其强大的抗氧化、免疫调节、抗炎、促凋亡和抗肿瘤特性，被证明对ii型糖尿病和各种类型的癌症，如结肠癌、直肠癌、胰腺癌和肝癌有预防和治疗潜力。此外，二甲双胍通过激活共济失调症突变体(atm)和肝脏激酶 b1(lkb1)来抑制mtor活性。atm和lkb1激活单磷酸腺苷激活激酶(ampk)，防止蛋白质合成和肿瘤细胞生长。同时，二甲双胍可以通过启动ampk来调节p53蛋白，从而最终阻止肿瘤细胞周期。此外，有证据表明，mtor的存在是一种叫做缺氧诱导因子(hif-1)的活性所必需的。hif-1是一个关键的转录调节器，它能使基因和细胞适应缺氧，并能在放疗期间引起癌细胞的抵抗。因此，ampk可以间接地抑制 hif-1的活性，抑制肿瘤细胞在缺氧状态下的生长。另外二甲双胍在用于化疗时可以增强肿瘤细胞对治疗的反应，降低复发的可能性和发病率，减少肿瘤的转移和恶变率。
7.每种抗癌草药物质的药代动力学特征和理化性质不同，因此创造最佳的传递方式是具有挑战性的。精确的细胞内靶点和有效的抗癌物质组合浓度将加强抗癌调节和减少肿瘤细胞引起的系统细胞毒性。而携带药用特性的促凋亡新型抗癌草药物质的共囊化为从药材或植物中开发出具有生物相容性和无毒的抗癌药物提供了一种有希望的战略，以协同的方式有效抑制恶性肿瘤的发展。


技术实现要素：

8.本研究的目的是从药材或植物中开发出具有生物相容性和无毒的抗癌药物，并通过最大限度的药物输送提高肿瘤细胞的靶向效率。为此，我们将分离出沙棘中的多酚 (cnhnon)和黄酮类组分，并与二甲双胍(c4h
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n5)相结合。因为它们在治疗乳腺肿瘤细胞和保护正常组织免受化疗毒害方面具有安全、天然的抗肿瘤、抗炎和抗氧化的作用方式。这些物质具有成本效益，含量丰富，没有或较少副作用。
9.为了实现上述目标，本发明提供一种沙棘-二甲双胍的草药复合物的制备方法，包括如下步骤：
10.1)通过物理研磨的方式处理沙棘以得到粉末；
11.2)对上述粉末加入甲醇，并在黑暗条件下搅拌处理；
12.3)将搅拌结束后的溶液超声处理；
13.4)对超声处理后的溶液进行离心；
14.5)对离心后得到的上清溶液加入蒸馏水进行旋蒸，蒸发出甲醇从而得到半固体状的粉末；
15.6)将得到的半固体状的粉末放置在-40℃～-80℃的环境下保存；
16.7)对保存后的粉末进行冻干处理；
17.8)取上述冻干处理的沙棘粉末和二甲双胍，先后加入到超纯水中，并在黑暗条件下于4℃～8℃进行磁力搅拌，将最后得到的产物标记为沙棘-二甲双胍的草药复合物。
18.作为本发明的优选方案，步骤2)中沙棘的粉末和甲醇的料液比在1:1～1:5g/ml，甲醇的体积浓度为65％～75％，搅拌处理时间为4～10小时。
19.作为本发明的优选方案，步骤3)中的超声处理时间为30～60分钟，超声频率为 20～40khz，超声温度为25～35℃。
20.作为本发明的优选方案，步骤4)中的离心时间为10～20分钟，离心转速为6000 rpm～14000rpm,；更为优选的离心转速为12000rpm。
21.作为本发明的优选方案，步骤5)中的上清溶液和蒸馏水的体积比例为1:1～1:3，旋蒸温度为38～45℃。
22.作为本发明的优选方案，步骤6)中的保存时间为48～72小时。
23.作为本发明的优选方案，步骤7)中的冻干温度为-40～-50℃。若冻干处理的粉末不直接用于制备沙棘-二甲双胍的草药复合物可以在-20℃的条件下保存。
24.作为本发明的优选方案，步骤8)中冻干处理的沙棘粉末和二甲双胍的质量比为 1:1～3:1，超纯水的用量为二甲双胍质量的50-500倍；搅拌时间为24～48小时，搅拌转速为400-600rpm；更为优选的沙棘提取物和二甲双胍的质量比为2:1。
25.本发明还提供了一种所述制备方法制备得到的沙棘-二甲双胍的草药复合物。
26.本发明还提供了一种所制备的沙棘-二甲双胍的草药复合物在制备抗癌药物中的应用。进一步，所述的抗癌药物为基因治疗药物或靶向治疗药物。进一步，所述的抗癌药物为乳腺癌药物、乳腺癌基因治疗药物或乳腺癌靶向治疗药物，沙棘-二甲双胍的草药复合物具有在治疗乳腺肿瘤细胞和保护正常组织免受化疗毒害方面具有安全、天然的抗肿瘤、抗炎和抗氧化的应用潜力。
27.与现有技术相比，本发明具有的有益效果包括：
28.(1)本发明所提出的沙棘-二甲双胍的草药复合物的制备方法对仪器的要求低，方法简单易于操作，重复性好。
29.(2)本发明所制备的分散在超纯水中的沙棘-二甲双胍的草药复合物颗粒的平均粒径在1～2μm之间，具有良好的分散性。
30.(3)本发明制备的沙棘-二甲双胍的草药复合物是基于从自然界的可食用植物中所提取的有机化合物来设计和提取的，赋予了这种沙棘-二甲双胍的草药复合物具有良好的生物可降解性、生物相容性、稳定性、生态友好性。
31.(4)本发明制备的沙棘-二甲双胍的草药复合物可用于基因治疗和靶向治疗，也可用于替代化疗，从而减少由合成药物所带来的器官毒性，无疑使其成为一种安全的、低成本的理想选择。
32.(5)本发明制备的沙棘-二甲双胍的草药复合物在当前全球癌症压力日益加重的背景下，可以减轻由癌症所引起的对患者、医疗系统和国家的健康负担和经济损失。
附图说明
33.图1为本发明沙棘-二甲双胍的草药复合物的合成流程示意图。
34.图2为本发明实施例1所得产物的扫描电镜图。
35.图3为本发明实施例1所得产物的动态光散射尺寸分布图。
36.图4为本发明实施例1所得产物的zeta电位图。证明所制备的沙棘-二甲双胍的草
二甲双胍的草药复合物对于自由基清除的活性测试图，证明所制备的沙棘
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二甲双胍的草药复合物具有良好的清除自由基的活性。通过异硫氰酸荧光素(fitc)，红色溶酶体荧光(dil试剂盒)和蓝色荧光染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi试剂盒)分别标记沙棘-二甲双胍的草药复合物，细胞膜和细胞核，如图12所示为沙棘-二甲双胍的草药复合物在4t1细胞(鼠源乳腺癌细胞)中摄取的激光共聚焦图，证明所制备的沙棘-二甲双胍的草药复合物对细胞有很好的靶向效果。通过cck8法测定沙棘-二甲双胍的草药复合物和细胞共孵育后在450nm处的吸光度，如图13为沙棘-二甲双胍的草药复合物对4t1细胞的cck-8实验结果图，证明所制备的沙棘-二甲双胍的草药复合物具有良好的生物相容性。
51.实施例二
52.通过粉碎的方式将购买的4克沙棘研磨成粉末，对上述粉末加入20毫升的65％体积浓度的甲醇，并在黑暗条件下搅拌10小时；对搅拌结束后的溶液超声处理30分钟。对超声处理后的溶液在12000rpm的转速下离心20分钟；对离心后得到的上清溶液加入10ml的蒸馏水进行旋蒸，蒸发出甲醇从而得到半固体状的粉末；将得到的半固体状的粉末放置在-80℃的环境下保存72小时，而后在-40℃进行冻干处理，对最后得到的粉末保存在-20℃的条件下；取0.1g的上述处理后的沙棘粉末和0.05g的二甲双胍分别加入到10ml超纯水中，并在黑暗条件下于4℃下进行磁力搅拌24小时，将最后得到的产物标记为沙棘-二甲双胍的草药复合物。
53.对比例一
54.通过粉碎的方式将购买的4克沙棘研磨成粉末，对上述粉末加入20毫升的65％体积浓度的乙醇，并在黑暗条件下搅拌4小时；对搅拌结束后的溶液超声处理30分钟。对超声处理后的溶液在12000rpm的转速下离心20分钟；对离心后得到的上清溶液加入10ml的蒸馏水进行旋蒸，蒸发出乙醇从而得到半固体状的粉末；将得到的半固体状的粉末放置在-80℃的环境下保存72小时，而后在-40℃进行冻干处理，对最后得到的粉末保存在-20℃的条件下；取0.1g的上述处理后的沙棘粉末和0.05g的二甲双胍分别加入到10ml超纯水中，并在黑暗条件下于4℃下进行磁力搅拌24小时，无法得到形状规则的沙棘-二甲双胍的草药复合物。
55.以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。