用于治疗眼部疾病的叶酸类物质制剂的制作方法

用于治疗眼部疾病的叶酸类物质制剂
1.本发明涉及叶酸类物质组合物的技术领域以及与升高的视网膜静脉压相关的眼部疾病的管理和治疗。
2.视神经和视网膜的疾病和退行性病症是世界上的视力障碍或失明的主要原因。全世界约有3亿人患有眼部疾病引起的不同形式的视力障碍。高比例（大约80%）的视力障碍可以预防，但仍存在未满足的需求。
3.存在多种形式的视网膜病变。视网膜病变的实例是糖尿病视网膜病变（dr）、高血压视网膜病变和遗传性视网膜病变。
4.糖尿病视网膜病变（也称为糖尿病性眼疾病）是由糖尿病引起的视网膜损伤的病症。其是发达国家导致失明的主要原因。
5.糖尿病视网膜病变影响大量患有糖尿病20年或更久的患者。通过有效的治疗和对眼睛的监测，可以减少很大一部分新病例。一个人患糖尿病时间越久，他或她患糖尿病视网膜病变的机会就越高。
6.糖尿病视网膜病变通常没有早期预警症状。但是，通常，患有黄斑水肿的人可能出现视力模糊，使得难以进行阅读或驾驶。在某些情况下，白天的视力将变好或变差。
7.dr的第一阶段，也称为非增生性糖尿病视网膜病变（npdr），几乎没有症状。检测npdr的唯一方法是通过眼底检查，其中可以看到微动脉瘤（动脉壁中充满血液的微小凸起、毛细血管膨出(capillary outpouchings)）和渗出物(exsudates)等。荧光素血管造影可以特别好地显示狭窄或阻塞的视网膜血管（血液流动不足或视网膜缺血），也就是说，存在未灌注的组织区域。此外，还可以观察到视网膜内出血、脂质分泌物和视网膜水肿、视网膜微梗死、irma（视网膜内微血管异常）以及静脉串珠和升高的视网膜静脉压。
8.黄斑水肿（其中血管将其内容物泄漏至黄斑区）可以在dr的任何阶段发生，但更频繁地在dr的增生形式中发生。其症状是视力模糊和在双眼中不同的图像变暗或扭曲。百分之十（10%）的糖尿病患者会出现与黄斑水肿相关的视力丧失。光学相干断层扫描可显示积液引起的视网膜增厚区域。
9.dr的第二阶段，当异常的新血管（与较高的血管内皮生长因子(vegf)水平相关联的新生血管）在眼睛后部形成时，被称为增生性糖尿病视网膜病变（pdr），这些可能会泄漏或甚至破裂和出血(玻璃体出血)和模糊视力，因为这些新血管是脆弱的。第一次出现这种出血时，其可能不很严重。在大多数情况下，其将会留下几滴血迹或漂浮在一个人的视野中的斑点，尽管该斑点常常在几个小时后消失。
10.黄斑变性（md）是另一种频繁发生的视网膜疾病。md表示中央视网膜部分（称为黄斑，负责高敏锐度视力）中的光感受器丧失。年龄相关性黄斑变性（amd）被描述为“干”或“湿”形式。amd的湿性、渗出性、新生血管形式影响大约10%的amd患者，其特征是通过视网膜色素上皮（rpe）生长的异常血管，导致出血、渗出、瘢痕或浆液性视网膜脱离。玻璃膜疣的形成是干性amd的典型特征。90%的amd患者具有以视网膜色素上皮萎缩和黄斑光感受器丧失为特征的干性形式。尽管采用光动力疗法和vegf抑制剂（均用于治疗湿性amd）已经在弱化方面获得了一些成功，目前仍无治愈任何形式amd的有效手段。
11.在wang j.等人, eye and vision, 2019,6:21中报道了一系列病例，其中用非处方多种维生素组合物治疗患有非增生性糖尿病视网膜病变或高血压性视网膜病变的患者。所有患者具有一种或多种mthfr多态性。主要发现是减少了视网膜出血和微动脉瘤以及减少了渗出物和黄斑水肿。但是，视网膜血液流动似乎并未显著改变。
12.richardson等人（us 6 207 190）公开了用于治疗慢性青光眼的包含四种生物因子官能团的混合物的组合物。这四种官能团是包含叶酸的cgmp提高剂、包含镁的细胞内钙信号调节剂、包含α-生育酚的细胞膜完整性维护剂、和包含α-硫辛酸的高胰岛素血症调节剂。该组合物主要意在改善局部和全身内皮健康。虽然叶酸被描述了该组合物的一种组分，但并未提及甲基四氢叶酸类物质和甲酰基四氢叶酸类物质。眼内压（iop）被描述为慢性青光眼的重要因素。
13.brian buell（wo 2011/163301）描述了在患有与叶酸代谢或相互交织的代谢循环相关的某些类型的代谢异常的患者中，使用任选与甲基-b
12
、维生素b6和维生素d3中的一种或多种组合的下游叶酸类化合物在非叶酸缺乏症受试者中治疗视觉障碍的方法。该视觉障碍包括神经病变、视网膜病变、黄斑变性和相关的眼部病变。特别地，解决了叶酸类物质循环和bh4循环中的故障，其中该故障由c677t和a1298c突变中的一种或多种引起。l-甲基-叶酸类物质是优选的下游叶酸类化合物。没有描述眼内压（特别是视网膜静脉压）在眼部疾病中的作用和用于治疗其的组合物。
14.sosnowski等人（us 2004/0087479）公开了与（提高的）同型半胱氨酸水平相关并可以用包含与叶酸或叶酸类物质、维生素b6和维生素b
12
组合的右美沙芬（dm）的组合物治疗的疾病，如青光眼、迟发性运动障碍和心血管疾病。叶酸类物质通常被描述为并可以是叶酸、单和多谷氨酰基叶酸类物质、二氢和四氢叶酸类物质、甲基和甲酰基叶酸类物质的形式。高度优选的是叶酸作为叶酸类物质。该组合物可包含许多其它化合物，例如维生素e、卵磷脂、β-胡萝卜素等。右美沙芬和其它nmda受体拮抗剂已知用于治疗青光眼。该组合物可用于降低血液中的同型半胱氨酸水平，而没有以较高水平使用单一成分的副作用。没有公开关于眼内压和视网膜静脉压的信息。
15.ep 3 616 700（aprofol）描述了许多用于治疗眼病的包含叶酸盐的组合物，所述眼病与存在升高的眼内压（iop）相关。此外，因眼部引流不足造成的升高的眼内压（iop）被描述为青光眼的最常见的原因，青光眼是几种不同类型的眼部疾病引起的症状，所述眼部疾病会因损伤视神经而导致视力丧失。证明对青光眼有效的药物疗法通过减少房水产生或通过促进眼部引流来降低iop。未提及视网膜静脉压（rvp）。
16.在cybulska-heinrich等人, the empa journal, 2015, 6:5中，描述了糖尿病视网膜病变（dr）与（高）视网膜静脉压之间的关联。结果显示患有dr的糖尿病患者中rvp显著升高。在未患有dr的糖尿病患者中rvp并未升高。这表明患有dr的患者的rvp明显高于iop。
17.青光眼是一种由几种不同的全身性疾病和眼部疾病引起的病症，这些疾病会通过损伤视神经而导致视力丧失。由于眼部引流不足导致的升高的眼内压（iop）是青光眼的最常见原因。青光眼通常随眼睛年龄的增长而发展，或者其可能因眼睛受伤、炎症和肿瘤或在白内障或糖尿病的晚期病例中发生。其也可能由类固醇治疗引起的iop升高所引起。证明对青光眼有效的药物疗法通过减少房水产生或通过促进眼部引流来降低iop。
18.ico升高有不同的潜在原因，其中之一是假性剥脱综合征。假性剥脱综合征（通常
缩写为pex且有时缩写为pes或pxs）是一种与衰老相关的全身性疾病，主要表现在眼睛中，其特征是微观颗粒状淀粉样蛋白纤维的积累。剥脱综合征（xfs）是一种与年龄相关的疾病，其中异常纤维状细胞外物质在许多眼部组织中产生并积累。其眼部表现涉及眼前节的所有结构，以及结膜和眼眶结构。
19.正常眼压性青光眼（ntg），也称为低眼压性或正常眼压青光眼，是在眼压不超过正常范围的情况下发生视神经损伤的一种形式的青光眼。通常，“正常”压力范围为12-22毫米汞柱。ntg的最主要原因是眼部血流障碍。一个常见的迹象是rvp的升高（fang等人, bmc ophthalmology, 2014 14, 121）。
20.flammer综合征（fs）描述了具有血管对寒冷、情绪压力或高海拔等刺激有改变反应倾向的人的表型。常见的症状是：手和/或脚冰冷、血压低、入睡时间延长、口渴感降低、对气味、疼痛、振动和某些药物的敏感性提高。fs受试者常常是雄心勃勃的成功人士，但也是完美主义的，有时无法释怀。常见的迹象是：基因表达改变、冷刺激后甲襞毛细血管镜下血流停止延长、眼部血液流动的自动调节减少、以及闪烁光刺激后视网膜血管舒张减少。视网膜静脉压平均较高，视网膜星形胶质细胞更常被激活。fs在女性中比男性中更常见，瘦人多于胖人，年轻人多于老年人，毕业生多于蓝领工人，室内工作多于户外工作。相关疾病是：正常眼压性青光眼、眼血管闭塞、色素性视网膜炎、多发性硬化、耳鸣或甚至突发性耳聋。
21.小血管疾病（也称为微血管疾病或微血管病）是一种血管病，即影响体内小血管的血管疾病。冠状动脉小血管疾病是影响心脏的小动脉和毛细血管的一类冠心病（chd）。脑小血管疾病是指影响脑的小动脉、微动脉、小静脉和毛细血管的一组疾病。与年龄相关和与高血压相关的小血管疾病和脑淀粉样血管病是最常见的形式。脑小血管疾病（svd）是一个总称，覆盖了与大脑中的小血管相关的各种异常。已知小血管疾病会导致血管性认知障碍和血管性痴呆。在smallwood等人, neuropathology and applied neurobiology, 2012, 38, 337-343中，脑小血管疾病被描述为老年人认知障碍的主要原因，仅次于阿尔茨海默氏病。采用基于图像的评分系统，该研究证明在svd病理严重程度与认知障碍之间存在显著的相关性。
22.在fang等人, bmc ophthalmology, 2014 14, 121中，研究了fs对视网膜静脉压的影响。该研究的目的是测量原发性开角型青光眼（poag）患者以及具有和不具有fs的健康受试者的眼睛中的视网膜静脉压（rvp）。结果表明，在具有fs的受试者中rvp较高，特别是在患有青光眼的fs受试者中。
23.目前可用的治疗方法可有效减缓眼部疾病的进展。但是，它们通常不能治愈眼部疾病。仍然需要有效治疗眼部或眼睛疾病如黄斑变性（md）、年龄相关性黄斑变性（amd）、糖尿病视网膜病变（dr）、视网膜和脉络膜缺血、青光眼、白内障、色素性视网膜炎、脉络膜新生血管、视网膜变性和眼表疾病。
24.除了升高的rvp的眼部原因外，颅内压或眼眶静脉内压的升高可能是原因。
25.视网膜静脉压（rvp）可定义为视网膜内的脉动静脉中的压力。这包括视网膜中央静脉压，也称为中央视网膜静脉脉动压力（crvpp），如果视网膜中央静脉搏动的话；以及视网膜分支静脉压，如果分支静脉（也称为半静脉和象限静脉）搏动的话。
26.在pillunat kr,等人, br j ophthalmol 2014, 98,1374-1378中，在具有早期、中期和晚期疾病阶段的眼内压（iop）控制的开角型青光眼的患者中评价了视网膜中央静脉
搏动压（crvpp）的作用，并与健康对照组进行了比较。在更晚期的青光眼中，crvpp似乎比先前认为的要高得多。
27.rvp升高的眼部原因可能是机械压迫或眼睛出口处的静脉的功能性收缩。结果是灌注压降低，这增加了缺氧的风险。升高的rvp还提高了跨壁压，并由此提高了视网膜水肿的风险。
28.在gugleta k, klinisches monatsblatt augenheilkunde, 2018, 235, 140-145中，描述了青光眼中内皮缩血管肽-1的意义。内皮缩血管肽-1是一种遍在分子，几乎存在于所有组织中。其主要生理功能是调节血管直径，并由此调节组织中的血液供应。其在局部分泌，并主要在局部发挥其作用。内皮缩血管肽-1参与调节视网膜与视神经中的血液流动。
29.在flammer等人, the empa journal, doi 10.1186/s13167-015-0043-1中，描述了内皮缩血管肽对视网膜静脉压（rvp）的作用。虽然在健康受试者中，rvp通常等于或略高于眼内压（iop）。但在眼部或全身性疾病的患者中其常常显著增加。
30.本发明的一个目的是提供用于治疗疾病，特别是与升高的视网膜静脉压相关的眼部疾病的制剂。
31.视网膜静脉压（rvp）的正常水平被认为是等于或高于眼内压（iop）几毫米汞柱的压力。为了测量rvp，通过视网膜血管血压测定计（例如l
ö
w隐形眼镜测功器）或通过iopstim系统（imedos）提高眼内压（iop），直到相关静脉搏动。这种施加的力也称为视网膜血管血压测定力（odf）。也就是说，如果存在自发性静脉搏动（odf=0），rvp等于iop。如果不存在自发静脉搏动，测量引起自发静脉搏动所需的odf，并且作为rvp = odf iop来计算rvp。
32.视网膜静脉压例如可通过视网膜血管血压测定法如mozaffarieh m.等人, graefes arch clin exp ophthalmol, 2014, 252, 1569-1571中所述测得。视网膜血管血压测定力可以如mustur d.等人, the epma journal, 2017, 8, 339-344中所述测得。
33.当然，视网膜静脉压在临床上健康的眼睛中也可能升高。但是，这可能是全身性病症（自身免疫性疾病）的强烈迹象。
34.根据本发明的用于治疗眼部疾病的制剂包含至少一种叶酸或其盐。该眼部疾病与升高的视网膜静脉压有关。
35.与升高的视网膜静脉压有关、相关或由升高的视网膜静脉压引起的眼部疾病是糖尿病视网膜病变、黄斑变性（md）、青光眼如原发性开角型青光眼（poag）、原发性闭角型青光眼（pacg）和正常眼压性青光眼（ntg）。
36.叶酸类物质是叶酸的还原形式，所述叶酸也可用于本发明的制剂。
37.叶酸是生物叶酸类物质的氧化形式和母体化合物。因其稳定性，叶酸用于补充剂和食品强化。但是，叶酸不具有代谢活性，在通过几个酶促催化步骤转化为5-甲基四氢叶酸类物质之前需要还原和一个碳取代。虽然叶酸本身的酶促转化在其途径的几个点处可以是不完全的、被破坏和还原的，其缺乏的影响可能倍增，因为叶酸类物质代谢与其他代谢循环相关，这意味着一个循环中的功能障碍可能诱导其它代谢循环中的功能障碍。另一种形式是5-甲酰基四氢叶酸类物质，其中存在甲酰基部分而不是甲基部分。
38.在进一步的实施方案中，该制剂进一步包含硫供体化合物，优选n-乙酰基半胱氨酸。
39.在另一实施方案中，该制剂附加地包含复合维生素b的至少一种化合物。这些维生素b优选选自维生素b1、维生素b2、维生素b6和维生素b
12
。维生素b
12
是特别优选的。
40.在又一实施方案中，该制剂进一步包含精氨酸或精氨酸酯。
41.此外，该制剂可包含胆碱供体。优选的胆碱供体是甜菜碱。
42.该组合物还可包含化合物乙酰胆碱。
43.此外，该制剂可包含葡糖胺。
44.在进一步的实施方案中，该组合物包含维生素d，其中维生素d3是特别优选的。
45.在一个优选实施方案中，该叶酸盐由叶酸和作为抗衡离子的阳离子组成，其中该阳离子选自精氨酸、胆碱、乙酰胆碱、1,1-二甲基双胍、苯乙基双胍、葡糖胺和二甲基氨基乙醇。
46.以下叶酸是优选的：5-甲酰基-(6s)-四氢叶酸、5-甲酰基-(6rs)-四氢叶酸、10-甲酰基-(6r)-四氢叶酸、5-甲基-(6s)-四氢叶酸、5-甲基-(6rs)-四氢叶酸、(6s)-四氢叶酸、5,10-亚甲基-(6r)-四氢叶酸、5,10-次甲基-(6r)-四氢叶酸、5,10-二甲酰基-(6s)-四氢叶酸、5-甲基-10-甲酰基-(6s)-四氢叶酸。这意味着叶酸盐的阴离子选自前述叶酸。
47.该制剂可以不同的形式配制，如液体制剂、霜剂或胶囊。
48.该制剂的液体形式例如如下。根据本发明的组合物包含左旋亚叶酸的钙盐、镁盐、钠盐或锌盐，以及化合物葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、乳酸钠、乳酸钾、甘油磷酸二钠盐或甘油磷酸二钾盐中的一种或多种。可以使用左旋亚叶酸的盐中的其它阳离子，如精氨酸。
49.该组合物可含有或不含有附加的赋形剂。优选该组合物不含苄醇、氨基丁三醇或单硫代甘油。可以向该组合物中加入赋形剂，如用于在冷冻干燥过程中可接受地成饼的甘露醇，或用于调节渗透压的氯化钠和右旋糖。该溶液的ph通常在6.5至8.5的范围内，并可以在药物产品制造过程中用例如少量的盐酸或氢氧化钠来调节。该溶液可含有抗氧化剂以防止氧化降解。
50.在该组合物中，可以使用至少一种附加化合物，如亚叶酸、(6r,s)-四氢叶酸、(6s)-四氢叶酸、5,10-亚甲基-(6r,s)-四氢叶酸、5,10-亚甲基-(6r)-四氢叶酸、5-甲基-(6r,s)-四氢叶酸或5-甲基-(6s)-四氢叶酸的钙盐、钠盐、镁盐或锌盐，或所述化合物的两种、三种或更多种的混合物。
51.根据本发明的优选组合物包含化合物葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、乳酸钠、乳酸钾、甘油磷酸二钾盐或甘油磷酸二钠盐中的一种或多种。
52.关于组合物中化合物的量，以下比率是优选的。对一摩尔的左旋亚叶酸的钙盐、钠盐、镁盐或锌盐，该组合物优选含有0.8至6.0摩尔、有利地为1.0至4.0摩尔的葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、乳酸钠或乳酸钾。在一个特定实施方案中，对一摩尔的左旋亚叶酸的钙盐、镁盐或锌盐，该组合物优选含有1.5至3.0摩尔的葡萄糖酸钠或葡萄糖酸钾。对一摩尔的盐，此类组合物可含有最低0.8摩尔、优选1.0摩尔、有利地为1.5摩尔和最高6.0摩尔、优选4.0摩尔、有利地为3.0摩尔的葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、乳酸钠或乳酸钾。
53.对一摩尔的左旋亚叶酸的钙盐、钠盐、镁盐或锌盐，其它组合物优选含有0.4至4.0摩尔、优选0.5至3.0摩尔、有利地为0.7至2.0摩尔的甘油磷酸二钠盐或甘油磷酸二钾盐。对一摩尔的盐，此类组合物可含有最低0.4摩尔、优选0.5摩尔、有利地为0.7摩尔和最高4.0摩尔、优选3.0摩尔、有利地为2.0摩尔的甘油磷酸二钠盐或甘油磷酸二钾盐。
54.适于包含在胶囊中的另一示例性组合物或制剂如下。例如，该制剂含有以下组分：叶酸（如l-5-甲基-四氢叶酸或l-5-甲酰基-四氢叶酸）的钙盐，硫供体化合物如n-乙酰基半胱氨酸或其盐，含硒（selene）化合物如l-硒代蛋氨酸，胆钙化醇，d-泛酸钙，维生素b
12
如甲基钴胺素，维生素b6如5'-磷酸吡哆醛，维生素b2如核黄素，维生素b1如硝酸硫胺素，玉米黄质，叶黄素，维生素e，即d-α-生育酚，维生素c如抗坏血酸钙，葡糖酸盐如葡糖酸铜，以及含锌化合物，如氧化锌或乙酸锌。
55.例如，该制剂含有以下组分：0.2毫克至2.7毫克的量的l-5-甲基-四氢叶酸的钙盐，40毫克至540毫克的量的n-乙酰基半胱氨酸或其盐，0.005毫克至0.06毫克的量的l-硒代蛋氨酸，0.009毫克至0.1毫克的量的胆钙化醇，1毫克至15毫克的量的d-泛酸钙，0.003毫克至0.1.5毫克的量的甲基钴胺素，1毫克至9毫克的量的5'-磷酸吡哆醛，2毫克至30毫克的量的核黄素，0.2毫克至4.5毫克的量的硝酸硫胺素，1毫克至3毫克的量的玉米黄质，4毫克至15毫克的量的叶黄素，1毫克至16毫克的量的d-α-生育酚，20毫克至100毫克的量的抗坏血酸钙，0.1至2毫克的量的葡糖酸铜和7毫克至80毫克的量的氧化锌。
56.组分n-乙酰基半胱氨酸可以游离酸的形式和以其盐中的一种的形式（例如作为钠盐或钙盐）使用。n-乙酰基半胱氨酸也可以n-乙酰基半胱氨酸-酰胺的形式存在。其它硫供体化合物是硫辛酸。
57.该组合物进一步优选含有一种或多种辅助物质，其选自ngm型精制大豆油、部分氢化31℃-37℃大豆油、部分氢化36℃-42℃大豆油、精制菜籽油、单硬脂酸甘油酯、向日葵或大豆卵磷脂以及蜂蜡。该菜籽油或大豆油提供了活性组分对光和水分的保护。
58.在另一优选方案中，该组合物含有一种或多种助剂，其选自ngm型精制大豆油、部分氢化31℃-37℃大豆油、部分氢化36℃-42℃大豆油、精制菜籽油、单硬脂酸甘油酯、向日葵或大豆卵磷脂、蜂蜡、中等或更长链长度（中等链长度：c6至c
12
，更长链长度：c
13
至c
24
）的甘油三酯、具有至少一种有机磷酸酯的磷酸甘油酯、以及来自链长度为c
20
至c
40
的醇与具有中等或长链长度的脂肪酸的酯化合物。
59.在另一方案中，该组合物包含在胶囊中，例如软明胶胶囊、素食软壳胶囊或硬明胶胶囊。软明胶胶囊优选含有明胶、甘油98%、甘油86%、山梨糖醇70%、二氧化钛、叶绿素铜钠盐和水。
60.用于霜剂的一种示例性制剂包含充分混合的相。相a包含油。相b包含甘油和乳化剂。相c包含水性叶酸类物质组合物，其包含生理有效量的叶酸盐，和任选的至少一种选自葡萄糖酸钠、葡萄糖酸钾、甘油磷酸二钠盐和甘油磷酸二钾盐的化合物。其可以任选包含其它化合物，如可药用缓冲剂，例如三(羟甲基)-氨基甲烷（tris），和可药用抗氧化剂，例如谷胱甘肽。任选的相d包含一种或多种消光剂。二氧化钛可用作白色染料。或者，可以使用二氧化硅。
61.根据本发明的叶酸类物质制剂优选在相c中包含每毫升极性溶剂0.1 毫克至1000 毫克的至少一种选自该叶酸的钙、镁、钠、锌、精氨酸、胆碱、乙酰胆碱、1,1-二甲基双胍、苯乙基双胍和二甲基氨基乙醇盐的叶酸盐。极性溶剂例如是水、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、甘油、二甲亚砜。也可以使用此类极性溶剂的混合物。该叶酸的精氨酸、胆碱、乙酰胆碱、1,1-二甲基双胍、苯乙基双胍、葡糖胺和二甲基氨基乙醇盐是优选的。
62.在另一实施方案中，对一摩尔叶酸盐，相c包含0.8至10摩尔的葡萄糖酸钠或葡萄
糖酸钾。如果相c包含甘油磷酸二钠盐或甘油磷酸二钾盐，这些盐优选以0.4至5摩尔的浓度存在。
63.优选地，根据本发明的制剂在相a中包含由中链三甘油酯(triglycerol)组成的油。此类中链三甘油酯的脂肪酸具有c6至c
12
的链长度。最优选的是辛酸/癸酸三甘油酯的油。此外，其可任选包含二碳酸醇。该二碳酸具有c2至c
10
的链长，并且该醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙醇、丁醇、戊醇。
64.制剂的相b中使用的乳化剂优选具有等于或大于5的hlb值。表面活性剂的亲水-亲脂平衡是其亲水或亲脂程度的量度，通过计算不同分子区域的值来确定，如griffin在1954年所述。1954年著作中描述的用于非离子表面活性剂的griffin方法如下：hlb = 20
×
mh/m，其中mh是该化合物的亲水性部分的分子量，m是该化合物的总分子量。0的hlb值对应于完全亲脂/疏水的分子，20的值对应于完全亲水/疏脂的分子。具有8至16的hlb值的乳化剂适于稳定水包油（o/w）乳液。
65.优选的乳化剂是蔗糖酯，其中该脂肪酸具有c
14
至c
20
的链长度。此类蔗糖酯必须具有等于或大于5的hlb值。最优选的是乳化剂硬脂酸蔗糖酯。
66.实施例1在一项初步研究中，用ocufolin forte
®
，一种如上所述的叶酸类物质制剂治疗患者，其中该制剂包含在胶囊中。该治疗进行十天。未报道治疗的副作用。在治疗周期之前和之后在两只眼睛中如所示那样测量患者的视网膜静脉压。在治疗前，rvp测得为56毫米汞柱（右眼）和59毫米汞柱（左眼）。眼内压（iop）测定为18毫米汞柱（双眼）。在治疗后，rvp测定为32毫米汞柱（右眼）和16毫米汞柱（左眼）。iop测得为16毫米汞柱（双眼）。结果显示rvp大大降低。
67.根据已知方法由患者的血清测得hcy。使用corvisst
®
设备测量iop。根据l
ö
w使用视网膜血管血压测定计进行odf测量。根据等式rvp = iop odf计算视网膜静脉压（以毫米汞柱为单位）。
68.对青光眼患者的进一步测量给出了以下结果：
表1。
69.患者已经补充了ocufolin forte
®
（每天一粒胶囊）。
70.实施例2在中试研究的后续中，进一步评估了患有青光眼的患者中包含l-甲基叶酸类物质的维生素补充剂对视网膜静脉压和同型半胱氨酸血浆水平的效果。
71.所包括的受试者均是患有青光眼和/或眼血管疾病的患者，如正常眼压性青光眼、原发性闭角型青光眼和原发性开角型青光眼。在视神经乳头（onh）中或视神经乳头（onh）处的任何静脉中，初始测得的视网膜血管血压测定力为15毫米汞柱。患者的血清同型半胱氨酸（hcy）水平高于12
ꢀµ
m/l。
72.在总计六个时间点处收集数据。在第1次访问时，进行iop、rvp和hcy血清水平的基线测量（时间点前1）。在第2次访问时，重复基线测量，并随后开始补充维生素（时间点前2）。作为补充剂，以每天一粒胶囊的剂量使用ocufolin
® forte，持续三个月。没有报道来自补充ocufolin
® forte的副作用。
73.在治疗期间，在六周后和在三个月后测量iop和rvp。对于一些患者更频繁地进行测量，例如在两周和四周后（时间点后1、后2、后3和后4）。根据已知方法由患者的血清测量hcy。使用corvisst
®
设备测量iop。根据l
ö
w使用视网膜血管血压测定计进行odf测量。根据等式rvp = iop odf计算视网膜静脉压（以毫米汞柱为单位）。
n = 测量的静脉总数表2。
74.图1显示了在补充ocufolin
® forte之前和期间rvp的发展。
75.除了所有患者中rvp均显著降低外，在ocufolin
® forte补充后，平均同型半胱氨酸（hcy）血清水平在统计学上显著低于之前。