抗转铁蛋白受体（TFR）抗体及其用途的制作方法

抗转铁蛋白受体(tfr)抗体及其用途
1.相关申请
2.本技术根据35 u.s.c
§
119(e)要求以下的申请日权益：2020年7月23日提交的标题为“anti-transferrin receptor(tfr)antibody and uses thereof”的美国临时申请no.63/055,405；以及2020年1月31日提交的标题为“anti-transferrin receptor(tfr)antibody and uses thereof”的美国临时申请no.62/968,252；其各自的内容均通过引用整体并入本文。
技术领域
3.本技术涉及新的抗转铁蛋白受体(transferrin receptor，tfr)抗体及该抗体的用途。
4.参考作为文本文件通过efs-web提交的序列表
5.本技术包含已通过efs-web以ascii格式提交并且在此通过引用整体并入的序列表。在2021年1月8日创建的所述ascii拷贝被命名为d082470023wo00-seq-zjg并且大小为180千字节。


背景技术：

6.转铁蛋白受体(tfr)是参与铁转运的二聚体跨膜糖蛋白受体。已在人中表征了两种转铁蛋白受体：转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1，tfr1)和转铁蛋白受体2(transferrin receptor 2，tfr2)。已经表明tfr在具有较高转移潜能的癌细胞中过表达。已经表明tfr1在血脑屏障的内皮细胞上表达，可用于允许将大分子递送至脑中。
7.发明概述
8.本公开内容至少部分基于结合转铁蛋白受体的新抗体(抗tfr抗体)的开发。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体以高特异性和亲和力(例如，亚纳摩至纳摩的范围)与人或非人灵长类(non-human primate，nhp)的转铁蛋白受体选择性结合。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体可用于靶向表达tfr的组织和/或(例如，和)细胞。在一些实施方案中，本文中提供的抗tfr抗体用于检测细胞或组织中的tfr。在一些实施方案中，本文中提供的抗tfr抗体用于诊断、治疗或研究应用中。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体用于将分子载荷递送至靶细胞或组织(例如，表达tfr的细胞或组织)。
9.因此，在一些方面中，提供了包含与分子载荷(例如，诊断剂或治疗剂)缀合(例如，共价缀合)的抗tfr抗体的复合物。在一些实施方案中，抗tfr抗体用于将缀合的分子载荷递送至表达tfr1的细胞或组织(例如，肌肉或脑)，以用于诊断和/或(例如，和)治疗疾病(例如，肌肉疾病或神经系统疾病(neurological disease))。在一些方面中，本公开内容提供了这样的数据：其表明，本文中所述的抗tfr抗体与其他已知的抗tfr抗体相比，在将分子载荷递送至靶细胞(例如，肌细胞)方面具有优异的活性。
10.本公开内容的一些方面提供了与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：表1中列出的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；和/或其中所述抗体包含表1
h3；和/或(例如，和)seq id no：163中所示的cdr-l1、seq id no：13中所示的cdr-l2和seq id no：164中所示的cdr-l3。
17.在一些实施方案中，所述抗体包含seq id no：237或seq id no：239中所示的cdr-h1、seq id no：18中所示的cdr-h2、seq id no：19中所示的cdr-h3；和/或seq id no：20中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3。在一些实施方案中，所述抗体包含seq id no：238或seq id no：240中所示的cdr-h1、seq id no：166中所示的cdr-h2、seq id no：167中所示的cdr-h3；和/或seq id no：168中所示的cdr-l1、seq id no：169中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3。
18.在一些实施方案中，所述抗体包含含有与seq id no：15具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh，和/或(例如，和)含有与seq id no：16具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl。
19.本公开内容的另一些方面提供了与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体(例如，分离的抗体)。在一些实施方案中，所述抗体包含：(i)含有seq id no：23的氨基酸序列的重链可变区(vh)的重链互补决定区1(cdr-h1)、重链互补决定区2(cdr-h2)和重链互补决定区3(cdr-h3)；和/或(例如，和)(ii)含有seq id no：24的氨基酸序列的轻链可变区(vl)的轻链互补决定区1(cdr-l1)、轻链互补决定区2(cdr-l2)和轻链互补决定区3(cdr-l3)。
20.在一些实施方案中，所述抗体包含seq id no：17中所示的cdr-h1、seq id no：18中所示的cdr-h2、seq id no：19中所示的cdr-h3；和/或(例如，和)seq id no：20中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3。在一些实施方案中，所述抗体包含seq id no：165中所示的cdr-h1、seq id no：166中所示的cdr-h2、seq id no：167中所示的cdr-h3；和/或(例如，和)seq id no：168中所示的cdr-l1、seq id no：169中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3。在一些实施方案中，所述抗体包含seq id no：170中所示的cdr-h1、seq id no：171中所示的cdr-h2、seq id no：172中所示的cdr-h3；和/或(例如，和)seq id no：173中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：174中所示的cdr-l3。
21.在一些实施方案中，所述抗体包含含有与seq id no：23具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh，和/或(例如，和)含有与seq id no：24具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl。
22.在一些实施方案中，所述抗体包含具有以下的人框架区或人源化框架区：seq id no：15中所示的vh的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，以及seq id no：16中所示的vl的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3。在一些实施方案中，所述抗体包含具有以下的人框架区或人源化框架区：seq id no：7中所示的vh的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，以及seq id no：8中所示的vl的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3。在一些实施方案中，所述抗体包含具有以下的人框架区或人源化框架区：seq id no：23中所示的vh的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，以及seq id no：24中所示的vl的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3。
23.在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包含人源化vh和/或(例如，和)人源化vl。在一些实施方案中，抗体选自全长igg、fab片段、f(ab’)片段、f(ab’)2片段、scfv和fv。
24.在一些实施方案中，抗体是全长igg。在一些实施方案中，抗体包含同种型igg1、
igg2、igg3或igg4的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含seq id no：175或seq id no：176中所示的同种型igg1的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含含有与seq id no：178具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或(例如，和)含有与seq id no：179具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，抗体包含含有与seq id no：180具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或(例如，和)含有与seq id no：181具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，重链包含与seq id no：182具有至少85％同一性的氨基酸序列，和/或(例如，和)轻链包含与seq id no：183具有至少85％同一性的氨基酸序列。
25.在一些实施方案中，抗体是f(ab’)片段。在一些实施方案中，抗体包含含有与seq id no：185具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或(例如，和)含有与seq id no：179具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，抗体包含含有与seq id no：186具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或(例如，和)含有与seq id no：181具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，抗体包含含有与seq id no：187具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或(例如，和)含有与seq id no：183具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。
26.本文中还提供了与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体(例如，分离的抗体)。在一些实施方案中，所述抗体包含：cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与表1中列出的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3相比，其共同包含不超过10个氨基酸变异，优选不超过8个氨基酸变异，并且更优选不超过5个氨基酸变异；和/或(例如，和)其中所述抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与表1中列出的任一种抗体的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3相比，其共同包含不超过10个氨基酸变异，优选不超过8个氨基酸变异。在一些实施方案中，所述抗体包含表1中列出的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；和/或(例如，和)其中所述抗体包含表1中列出的任一种抗体的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
27.在一些实施方案中，与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体(例如，分离的抗体)包含：以gysitsgyx1(seq id no：286)表示的cdr-h1，其中x1可以是y或g；以ix2fdgx3x4(seq id no：287)表示的cdr-h2，其中x2可以是t或n，x3可以是a或n，并且x4可以是n、t或s；以x5rx6x7ydydx8x9dx
10
(seq id no：288)表示的cdr-h3，其中x5是t或a，x6是s、f或i，x7是s、n或y，x8是p、y或v，x9是i、f或l，并且x
10
是y或f；和/或(例如，和)以qdix
11
nx
12
(seq id no：289)表示的cdr-l1，其中x
11
是s或t并且x
12
是f、c、s或y；以yts(seq id no：13)表示的cdr-l2；以及以qqgx
13
x
14
x
15
px
16
t(seq id no：290)表示的cdr-l3，其中x
13
是h或n，x
14
是t或a，x
15
是l或y，并且x
16
是y、w或f。
28.在一些实施方案中，本文中所述的任一种抗tfr抗体均以小于10-8
m的kd结合转铁蛋白受体1(tfr1)。
29.还提供了编码本文中所述的任何抗体的核酸、包含这样的核酸的载体、包含这样的载体的细胞。
30.本公开内容的另一些方面提供了产生抗tfr1抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适合表达所述抗体的条件下培养包含编码本文中所述任一种抗体的核酸的细胞。
31.本公开内容的另一些方面提供了包含与分子载荷共价连接的本文中所述的任一
种抗体的复合物。在一些实施方案中，分子载荷是诊断剂或治疗剂。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸、多肽或小分子。在一些实施方案中，抗体与分子载荷通过接头连接。在一些实施方案中，接头是可逆接头。在一些实施方案中，接头是val-cit接头。
32.还提供了包含本文中所述的任一种抗体、本文中所述的任一种核酸、本文中所述的任一种载体或本文中所述的任一种复合物的组合物。在一些实施方案中，组合物包含可药用载体。
33.本文中还提供了检测生物样品中的转铁蛋白受体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使本文中所述的任一种抗体与生物样品接触并测量抗体与生物样品的结合。在一些实施方案中，抗体与诊断剂共价连接。在一些实施方案中，生物样品是从怀疑患有与转铁蛋白受体相关的疾病或处于该疾病的风险之中的人对象获得的。在一些实施方案中，接触步骤是通过向对象施用有效量的抗tfr抗体进行的。
34.还提供了将分子载荷递送至细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使本文中所述的任一种复合物与细胞接触。在一些实施例中，细胞是肌细胞。在一些实施方案中，细胞是体外的。在一些实施方案中，细胞在对象中。在一些实施方案中，对象是人。
35.在一些方面中，提供了将分子载荷递送至对象的脑或肌肉的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向对象施用有效量的本文中所述的任一种复合物。在一些实施方案中，施用是静脉内的。
36.在一些方面中，提供了治疗疾病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向对象施用有效量的本文中所述的任一种复合物，例如，其中分子载荷是治疗剂。在一些实施方案中，疾病是神经系统疾病并且分子载荷是用于治疗神经系统疾病的药物。在一些实施方案中，疾病是肌肉疾病，并且例如，分子载荷是用于治疗肌肉疾病的药物。在一些实施方案中，肌肉疾病是罕见的肌肉疾病或肌肉萎缩。
37.附图简述
38.图1描绘了抗tfr抗体的筛选过程。
39.图2a和2b是示出了组织中的tfr1表达的图。图2a：小鼠tfr1；图2b：食蟹猴tfr1。
40.图3是示出了缀合物在非人灵长类(nhp)细胞或来自人dm1患者(dm1)的细胞中的dmpk敲低(knock down，kd)效率的图，所述缀合物包含所选择的与靶向dmpk的对照反义寡核苷酸共价缀合的抗tfr1抗体。
41.图4示出了用于连接抗tfr抗体和分子载荷(例如，寡核苷酸)的接头在不同物种中在静脉内施用之后随时间的血清稳定性。
42.发明详述
43.本公开内容至少部分地基于对人tfr显示出高结合亲和力和特异性的抗tfr抗体(例如，表1中列出的抗体)及其变体的开发。还提供了抗tfr抗体及其变体在研究、诊断/检测和治疗应用中的用途。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体用于将分子载荷(例如，寡核苷酸、肽、小分子)递送至表达tfr的靶细胞或组织。在一些实施方案中，待递送的分子载荷缀合抗tfr抗体并通过受体内化被递送至表达tfr的靶细胞或组织。表达tfr并且可使用本文中所述的抗tfr抗体来靶向的示例性组织包括但不限于：脑、肌肉、肾上腺、阑尾、骨髓、结肠、十二指肠、子宫内膜、食管、脂肪、胆囊、心脏、肾、肝、肺、淋巴结、卵巢、胰腺、胎盘、前列腺、唾液腺、皮肤、小肠、脾、胃、睾丸、甲状腺、膀胱。在一些实施方案中，这样的方法
在肌细胞中以及对于递送通过血脑屏障(其已被证明具有挑战性)具有有益作用。在一些方面中，本公开内容提供了这样的数据：其表明，本文中所述的抗tfr抗体与其他已知的抗tfr抗体相比，在将分子载荷递送至靶细胞(例如，肌细胞)方面具有优异的活性。
44.因此，本公开内容还提供了包含与分子载荷共价连接的任一种抗tfr1抗体的复合物。在一些实施方案中，所述复合物特别可用于递送抑制肌细胞中靶基因的表达或活性的分子载荷，例如，在患有或怀疑患有罕见肌肉疾病或肌肉萎缩(例如，如表7中列出的)的对象中。在一些实施方案中，所述复合物特别可用于将药物递送至脑以用于治疗神经系统疾病(例如，如表8中列出的)。
45.下面提供了本公开内容的另一些方面，包括对限定的术语的描述。
46.i.定义
47.施用：本文中使用的术语“施用”意指以生理和/或(例如，和)药理学上可用的方式向对象提供复合物(例如，以治疗对象中的病症)。
48.大约：本文中使用的术语“大约”或“约”，如应用于一个或更多个目的值时，是指类似于陈述的参考值的值。在某些实施方案中，术语“大约”或“约”是指落入陈述的参考值的任一方向上(大于或小于)15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、或更小以内的值的范围，除非另有说明或在其他情况下从上下文中可以明显看出(除非这样的数字超过可能值的100％)。
49.抗体：本文中使用的术语“抗体”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域或至少一个抗原决定簇(例如，与抗原特异性结合的互补位(paratope))的多肽。在一些实施方案中，抗体是全长抗体。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。然而，在一些实施方案中，抗体是fab片段、f(ab’)片段、f(ab’)2片段、fv片段或scfv片段。在一些实施方案中，抗体是来源于骆驼科抗体的纳米抗体或来源于鲨鱼抗体的纳米抗体。在一些实施方案中，抗体是双抗体。在一些实施方案中，抗体包含具有人种系序列的框架。在另一个实施方案中，抗体包含选自igg、igg1、igg2、igg2a、igg2b、igg2c、igg3、igg4、iga1、iga2、igd、igm和ige恒定结构域的重链恒定结构域。在一些实施方案中，抗体包含重(h)链可变区(在本文中简称为vh)和/或(例如，和)轻(l)链可变区(在本文中简称为vl)。在一些实施方案中，抗体包含恒定结构域，例如fc区。免疫球蛋白恒定结构域是指重链或轻链恒定结构域。人igg重链和轻链恒定结构域氨基酸序列及其功能变异是已知的。关于重链，在一些实施方案中，本文中所述的抗体的重链可以是alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。在一些实施方案中，本文中所述的抗体的重链可包含人alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。在一个具体实施方案中，本文中所述的抗体包含人γ1ch1、ch2和/或(例如，和)ch3结构域。在一些实施方案中，vh结构域的氨基酸序列包含人gamma(γ)重链恒定区的氨基酸序列，例如本领域已知的任何。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，例如，参见美国专利no.5,693,780和kabat e a et al.，(1991)同上。在一些实施方案中，vh结构域包含与本文中提供的任何可变链恒定区具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，对抗体进行修饰，例如，通过糖基化、磷酸化、sumo化(sumoylation)和/或(例如，和)甲基化进行修饰。在一些实施方案中，抗体是与一个或更多个糖或碳水化合物分子缀合的糖基化抗体。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子通过n-糖基化、o-糖
基化、c-糖基化、糖基磷脂酰肌醇化(gpi锚定附着)和/或(例如，和)磷酸糖基化(phosphoglycosylation)与抗体缀合。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是单糖、二糖、寡糖或聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是支化的寡糖或支化的聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子包含甘露糖单元、葡萄糖单元、n-乙酰葡糖胺单元、n-乙酰半乳糖胺单元、半乳糖单元、岩藻糖单元或磷脂单元。在一些实施方案中，抗体是包含多肽的构建体，所述多肽包含与接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域连接的一个或更多个本公开内容的抗原结合片段。接头多肽包含通过肽键连接的两个或更多个氨基酸残基，并且用于连接一个或更多个抗原结合部分。接头多肽的一些实例已有报道(参见，例如，holliger，p.，et al.(1993)proc.natl.acad.sci.usa 90：6444-6448；poljak，r.j.，et al.(1994)structure 2：1121-1123)。另外，抗体可以是更大的免疫黏附分子的一部分，免疫黏附分子通过抗体或抗体部分与一个或更多个其他蛋白质或肽的共价或非共价缔合而形成。这样的免疫黏附分子的一些实例包括使用链霉亲和素核芯区域来制备四聚体scfv分子(kipriyanov，s.m.，et al.(1995)human antibodies and hybridomas 6：93-101)，以及使用半胱氨酸残基、标记肽和c端多组氨酸标签来制备二价和生物素化的scfv分子(kipriyanov，s.m.，et al.(1994)mol.immunol.31：1047-1058)。
50.cdr：本文中使用的术语“cdr”是指抗体可变序列内的互补决定区。典型的抗体分子包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其通常参与抗原结合。vh区和vl区可进一步细分为高变区，也称为“互补决定区”(“complementarity determining region，cdr”)，其中散布有更保守的称为“框架区”(“framework region，fr”)的区域。每个vh和vl通常由三个cdr和四个fr构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。可使用本领域已知的方法，例如通过kabat定义、imgt定义、chothia定义、abm定义和/或(例如，和)接触定义(所有这些都是本领域公知的)来精确鉴定框架区和cdr的范围。参见，例如kabat，e.a.，et al.(1991)sequences of proteins of immunological interest，fifth edition，u.s.department of health and human services，nih publication no.91-3242；the international immunogenetics informationhttp：//www.imgt.org，lefranc，m.-p.et al.，nucleic acids res.，27：209-212(1999)；ruiz，m.et al.，nucleic acids res.，28：219-221(2000)；lefranc，m.-p.，nucleic acids res.，29：207-209(2001)；lefranc，m.-p.，nucleic acids res.，31：307-310(2003)；lefranc，m.-p.et al.，in silico biol.，5，0006(2004)[epub]，5：45-60(2005)；lefranc，m.-p.et al.，nucleic acids res.，33：d593-597(2005)；lefranc，m.-p.et al.，nucleic acids res.，37：d1006-1012(2009)；lefranc，m.-p.et al.，nucleic acids res.，43：d413-422(2015)；chothia et al.，(1989)nature 342：877；chothia，c.et al.(1987)j.mol.biol.196：901-917；al-lazikani et al(1997)j.molec.biol.273：927-948；以及almagro，j.mol.recognit.17：132-143(2004)。还参见hgmp.mrc.ac.uk和bioinf.org.uk/abs。本文中使用的cdr可以是指由本领域已知的任何方法定义的cdr。具有相同cdr的两种抗体意指这两种抗体的该cdr的氨基酸序列相同，如通过相同的方法(例如imgt定义)确定的。
[0051]
重链和轻链的每个可变区中有三个cdr，对于每个可变区分别称为cdr1、cdr2和cdr3。本文中使用的术语“cdr组”是指出现在单个可变区内的能够结合抗原的三个cdr的
组。这些cdr的确切边界已根据不同的系统进行了不同的定义。kabat描述的系统(kabat et al.，sequences of proteins of immunological interest(national institutes of health，bethesda，md.(1987)and(1991))不仅提供了适用于抗体的任何可变区的明确的残基编号系统，而且还提供了定义三个cdr的精确残基边界。这些cdr可被称为kabat cdr。cdr的子部分可被指定为l1、l2和l3或h1、h2和h3，其中“l”和“h”分别指定轻链和重链区域。这些区域可称为chothia cdr，其具有与kabat cdr重叠的边界。padlan(faseb j.9：133-139(1995))和maccallum(j mol biol 262(5)：732-45(1996))已经描述了定义与kabat cdr重叠的cdr的其他边界。另一些cdr边界定义可能并不严格遵循上述系统之一，但仍与kabat cdr重叠，尽管可根据预测或者根据特定残基或残基的组或甚至整个cdr不会显著影响抗原结合的实验发现来缩短或延长它们。尽管优选的实施方案使用kabat或chothia定义的cdr，但是本文中使用的方法可利用根据这些系统中的任何一个定义的cdr。
[0052]
cdr接枝抗体(cdr-grafted antibody)：术语“cdr接枝抗体”是指包含来自一个物种的重链和轻链可变区序列但是其中vh和/或(例如，和)vl的一个或更多个cdr区的序列被来自另一物种的cdr序列替代的抗体，例如具有鼠重链和轻链可变区并且其中一个或更多个鼠cdr(例如，cdr3)已被人cdr序列替代的抗体。
[0053]
嵌合抗体：术语“嵌合抗体”是指包含来自一个物种的重链和轻链可变区序列和来自另一物种的恒定区序列的抗体，例如具有与人恒定区连接的鼠重链和轻链可变区的抗体。
[0054]
互补：本文中使用的术语“互补”是指在两个核苷酸或两组核苷酸之间精确配对的能力。特别地，互补是表征氢键配对引起两个核苷酸或两组核苷酸之间结合的程度的术语。例如，如果寡核苷酸的一个位置处的碱基能够与靶核酸(例如，mrna)的相应位置处的碱基进行氢键合，则认为在该位置处碱基彼此互补。碱基配对可包括规范的沃森-克里克碱基配对和非沃森-克里克碱基配对(例如，wobble碱基配对和hoogsteen碱基配对)二者。例如，在一些实施方案中，对于互补碱基配对，腺苷型碱基(a)与胸苷型碱基(t)或尿嘧啶型碱基(u)互补，胞嘧啶型碱基(c)与鸟苷型碱基(g)互补，并且通用碱基如3-硝基吡咯或5-硝基吲哚可与任何a、c、u或t杂交并被认为是互补的。肌苷(i)在本领域中也被认为是通用碱基，并且被认为与任何a、c、u或t互补。
[0055]
保守氨基酸替换：本文中使用的“保守氨基酸替换”是指不改变进行氨基酸替换的蛋白质的相对电荷或尺寸特征的氨基酸替换。可以根据本领域普通技术人员已知的用于改变多肽序列的方法来制备变体，所述方法例如可以在汇编这样的方法的参考文献中找到：例如molecular cloning：a laboratory manual，j.sambrook，et al.，eds.，fourth edition，cold spring harbor laboratory press，cold spring harbor，new york，2012，或current protocols in molecular biology，f.m.ausubel，et al.，eds.，john wiley&sons，inc.，new york。氨基酸的保守替换包括在以下组内的氨基酸之间进行的替换：(a)m、i、l、v；(b)f、y、w；(c)k、r、h；(d)a、g；(e)s、t；(f)q、n；和(g)e、d。
[0056]
共价连接：本文中使用的术语“共价连接”是指两个或更多个分子通过至少一个共价键连接在一起的特征。在一些实施方案中，两个分子可以通过充当分子之间的接头的单键例如二硫键或二硫桥共价连接在一起。然而，在一些实施方案中，两个或更多个分子可以通过充当接头的分子共价连接在一起，该接头通过多个共价键将两个或更多个分子连接在
一起。在一些实施方案中，接头可以是可切割接头。然而，在一些实施方案中，接头可以是不可切割接头。
[0057]
交叉反应性：如本文所用以及在靶向剂(例如，抗体)的情况下，术语“交叉反应性”是指物质能够以相似亲和力或亲合力与相似类型或类别的超过一种抗原(例如，多个同源物、旁系同源物或直系同源物的抗原)特异性结合的性质。例如，在一些实施方案中，对相似类型或类别的人和非人灵长类抗原(例如，人转铁蛋白受体和非人灵长类转铁蛋白受体)具有交叉反应性的抗体能够以相似亲和力或亲合力与人抗原和非人灵长类抗原结合。在一些实施方案中，抗体对相似类型或类别的人抗原和啮齿动物抗原具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体对相似类型或类别的啮齿动物抗原和非人灵长类抗原具有交叉反应性。在一些实施方案中，抗体对相似类型或类别的人抗原、非人灵长类抗原和啮齿动物抗原具有交叉反应性。
[0058]
框架：本文中使用的术语“框架”或“框架序列”是指可变区减去cdr的剩余序列。由于cdr序列的确切定义可通过不同的系统确定，因此框架序列的含义相应地具有不同解释。六个cdr(轻链的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3和重链的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3)也将轻链和重链上的框架区分为每条链上的四个子区域(fr1、fr2、fr3和fr4)，其中cdr1位于fr1和fr2之间，cdr2位于fr2和fr3之间，并且cdr3位于fr3和fr4之间。在未将特定子区域指定为fr1、fr2、fr3或fr4的情况下，其他人提到的框架区代表单个天然存在的免疫球蛋白链的可变区内的组合的fr。如本文所使用的，fr代表四个子区域之一，并且frs代表构成框架区的四个子区域中的两个或更多个。人重链和轻链受体序列是本领域已知的。在一个实施方案中，本领域已知的受体序列可用于本文中公开的抗体中。
[0059]
人抗体：本文中使用的术语“人抗体”旨在包括具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本公开内容的人抗体可包含不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在cdr中，特别是在cdr3中。然而，本文中使用的术语“人抗体”不意图包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的cdr序列已接枝到人框架序列上的抗体。
[0060]
人源化抗体：术语“人源化抗体”是指包含来自非人物种(例如，小鼠)的重链和轻链可变区序列但是其中vh和/或(例如，和)vl序列的至少一部分已被改变为更加“人样”(即，更类似于人种系可变序列)的抗体。一种类型的人源化抗体是cdr接枝抗体，其中人cdr序列被引入非人vh和vl序列中以替代相应的非人cdr序列。在一个实施方案中，提供了人源化抗tfr抗体和抗原结合部分。这样的抗体可以通过使用传统的杂交瘤技术获得鼠抗转铁蛋白受体单克隆抗体随后使用体外基因工程化进行人源化来产生，例如在kasaian et al的pct公开no.wo 2005/123126 a2中公开的那些。
[0061]
分离的抗体：本文中使用的“分离的抗体”旨在指代基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合转铁蛋白受体的分离的抗体基本上不含特异性结合转铁蛋白受体以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合转铁蛋白受体复合物的分离的抗体可能与其他抗原(例如来自其他物种的转铁蛋白受体分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含其他细胞材料和/或(例如，和)化学物质。
[0062]
分子载荷：本文中使用的术语“分子载荷”是指发挥调节生物学结局作用的分子或物质。在一些实施方案中，分子载荷与抗tfr抗体连接或以其他方式缔合。在一些实施方案
中，分子载荷是小分子、蛋白质、肽、核酸或寡核苷酸。在一些实施方案中，分子载荷发挥调节dna序列的转录、调节蛋白质的表达或调节蛋白质的活性的作用。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸，其包含具有靶基因的互补区的链。
[0063]
寡核苷酸：本文中使用的术语“寡核苷酸”是指长度长至200个核苷酸的寡聚核酸化合物。寡核苷酸的一些实例包括但不限于rnai寡核苷酸(例如，sirna、shrna)、微rna、间隔聚体、混合聚体、亚磷酸二酰胺吗啉代、肽核酸、适配体、指导核酸(例如，cas9指导rna)等。寡核苷酸可以是单链或双链。在一些实施方案中，寡核苷酸可包含一个或更多个经修饰核苷酸(例如，2
’‑
o-甲基糖修饰、嘌呤或嘧啶修饰)。在一些实施方案中，寡核苷酸可包含一个或更多个经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，寡核苷酸可包含一个或更多个硫代磷酸酯键联，其可为rp或sp立体化学构象。
[0064]
重组抗体：本文中使用的术语“重组人抗体”旨在包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(在本公开内容中更详细地描述)，从重组、组合人抗体文库分离的抗体(hoogenboom h.r.，(1997)tib tech.15：62-70；azzazy h.，and highsmith w.e.，(2002)clin.biochem.35：425-445；gavilondo j.v.，and larrick j.w.(2002)biotechniques 29：128-145；hoogenboom h.，and chames p.(2000)immunology today 21：371-378)，从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如，小鼠)分离的抗体(参见例如taylor，l.d.，et al.(1992)nucl.acids res.20：6287-6295；kellermann s-a.，and green l.l.(2002)current opinion in biotechnology 13：593-597；little m.et al(2000)immunology today 21：364-370)，或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他dna序列的任何其他方式制备、表达、产生或分离的抗体。这样的重组人抗体具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，对这样的重组人抗体进行体外诱变(或当使用人ig序列转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，并且因此重组抗体的vh和vl区的氨基酸序列是这样的序列，尽管其来源于人种系vh和vl序列并与之相关，但可能不是体内人抗体种系库中天然存在的。本公开内容的一个实施方案提供了能够结合人转铁蛋白受体的完全人抗体，其可使用本领域公知的技术产生，例如但不限于使用人ig噬菌体文库，例如jermutus et al.的pct公开no.wo 2005/007699 a2中公开的那些。
[0065]
互补区：本文中使用的术语“互补区”是指与例如靶核酸的同源核苷酸序列充分互补的例如寡核苷酸的核苷酸序列，使得两个核苷酸序列能够在生理条件下(例如，在细胞中)彼此退火。在一些实施方案中，互补区与靶核酸的同源核苷酸序列完全互补。然而，在一些实施方案中，互补区与靶核酸的同源核苷酸序列部分互补(例如，至少80％、90％、95％或99％互补)。在一些实施方案中，与靶核酸的同源核苷酸序列相比，互补区包含1、2、3或4个错配。
[0066]
特异性结合：本文中使用的术语“特异性结合”是指分子以一定程度的亲和力或亲合力与结合伴侣结合的能力，该亲和力或亲合力使得分子能够用于在结合测定或其他结合环境中将结合伴侣与合适的对照区分开。关于抗体，术语“特异性结合”是指与合适的一种或更多种参考抗原相比，抗体以一定程度的亲和力或亲合力与特异性抗原结合的能力，该亲和力或亲合力使得抗体能够用于将特异性抗原与其他抗原区分开，例如至允许通过与如本文中所述的抗原结合而优先靶向某些细胞(例如，肌细胞)的程度。在一些实施方案中，如
果抗体与靶标结合的kd为至少约10-4
m、10-5
m、10-6
m、10-7
m、10-8
m、10-9
m、10-10
m、10-11
m、10-12
m、10-13
m或更小，则抗体与靶标特异性结合。在一些实施方案中，抗体与转铁蛋白受体特异性结合。
[0067]
对象：本文中使用的术语“对象”是指哺乳动物。在一些实施方案中，对象是非人灵长类或啮齿动物。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，对象是患者，例如患有或怀疑患有疾病的人患者。在一些实施方案中，对象是患有或怀疑患有由疾病相关重复扩增(例如，在dmpk等位基因中)引起的疾病的人患者。
[0068]
转铁蛋白受体：本文中使用的术语“转铁蛋白受体”(也称为tfrc、cd71、p90、tfr或tfr1)是指结合转铁蛋白以促进通过内吞作用摄取铁的内化细胞表面受体。在一些实施方案中，转铁蛋白受体可以是人来源的(ncbi基因id 7037)、非人灵长类来源的(例如，ncbi基因id 711568或ncbi基因id 102136007)或啮齿动物来源的(例如，ncbi基因id 22042)。另外，已经表征了编码受体的不同同种型的多种人转录物变体(例如，如以以下genbank refseq登录号注释的：np_001121620.1、np_003225.2、np_001300894.1和np_001300895.1)。
[0069]
对应于ncbi序列np_003225.2(转铁蛋白受体蛋白1同种型1，智人(homo sapiens))的示例性人转铁蛋白受体氨基酸序列如下：
[0070][0071]
对应于ncbi序列np_001244232.1(转铁蛋白受体蛋白1，恒河猴(macaca mulatta))的示例性非人灵长类转铁蛋白受体氨基酸序列如下：
[0072][0073]
对应于ncbi序列xp_005545315.1(转铁蛋白受体蛋白1，食蟹猴(macaca fascicularis))的示例性非人灵长类转铁蛋白受体氨基酸序列如下：
[0074][0075]
对应于ncbi序列np_001344227.1(转铁蛋白受体蛋白1，小家鼠(mus musculus))的示例性小鼠转铁蛋白受体氨基酸序列如下：
[0076][0077]2’‑
经修饰核苷：本文中使用的术语“2
’‑
经修饰核苷”和“2
’‑
经修饰核糖核苷”可互换使用，并且是指在2’位置具有经修饰糖部分的核苷。在一些实施方案中，2
’‑
经修饰核苷是2
’‑4’
双环核苷，其中糖的2’和4’位置是桥联的(例如，通过亚甲基、亚乙基或(s)-约束性乙基桥联)。在一些实施方案中，2
’‑
经修饰核苷是非双环的2
’‑
经修饰核苷，例如，其中糖部分的2’位置被取代。2
’‑
经修饰核苷的一些非限制性实例包括：2
’‑
脱氧、2
’‑
氟(2
’‑
f)、2
’‑
o-甲基(2
’‑
o-me)、2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)、2
’‑
o-氨基丙基(2
’‑
o-ap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基(2
’‑
o-dmaoe)、2
’‑
o-二甲基氨基丙基(2
’‑
o-dmap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基氧基乙基(2
’‑
o-dmaeoe)、2
’‑
o-n-甲基乙酰胺基(2
’‑
o-nma)、锁核酸(lna，亚甲基桥联核酸)、亚乙基桥联核酸(ena)和(s)-约束性乙基桥联核酸(cet)。在一些实施方案中，本文中所述的2
’‑
经修饰核苷是高亲和力的经修饰核苷酸和寡核苷酸，其包含相对于未经修饰的寡核苷酸而对靶序列具有提高的亲和力的2
’‑
经修饰核苷酸。下面提供了2
’‑
经修饰核苷之结构的一些实例：
[0078][0079]
ii.抗tfr抗体
[0080]
在一些实施方案中，与转铁蛋白受体结合的物质，例如抗tfr抗体，能够靶向肌细胞和/或(例如，和)介导物质穿过血脑屏障的转运。转铁蛋白受体是将转铁蛋白转运通过细胞膜并参与胞内铁水平的调节和稳态的内化细胞表面受体。本公开内容的一些方面提供了能够结合转铁蛋白受体的转铁蛋白受体结合蛋白。与转铁蛋白受体结合(例如，特异性结合)的抗体可在与转铁蛋白受体结合之后被内化至细胞中，例如通过受体介导的胞吞作用而被内化至细胞中。
[0081]
在一些方面中，本文中提供了以高特异性和亲和力与转铁蛋白受体结合的抗体。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体与转铁蛋白受体的任何胞外表位或暴露于抗体的表位特异性结合。在一些实施方案中，本文中提供的抗tfr抗体与来自人、非人灵长类、小鼠、大鼠等的转铁蛋白受体特异性结合。在一些实施方案中，本文中提供的抗tfr抗体与人转铁蛋白受体结合。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体与如seq id no：228至231中提供的人或非人灵长类转铁蛋白受体的氨基酸区段结合。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体与这样的氨基酸区段结合：对应于如seq id no：228中所示的人转铁蛋白受体的第90至96位氨基酸，其不在转铁蛋白受体的顶端结构域(apical domain)中。
[0082]
在一些实施方案中，抗tfr抗体以至少约10-4
m、10-5
m、10-6
m、10-7
m、10-8
m、10-9
m、10-10
m、10-11
m、10-12
m、10-13
m或更小的结合亲和力(例如，如kd所示)特异性结合tfr1(例如，人或非人类灵长类tfr1)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体以亚纳摩范围的kd与tfr1结合。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体选择性地与转铁蛋白受体1(tfr1)结合但不与转铁蛋白受体2(tfr2)结合。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体与人tfr1和食蟹猴tfr1结合(例如，kd为10-7
m、10-8
m、10-9
m、10-10
m、10-11
m、10-12
m、10-13
m或更小)，但不与小鼠tfr1结合。抗tfr抗体的亲和力和结合动力学可使用任何合适的方法测试，包括但不限于生物传感器技术(例如，octet或biacore)。在一些实施方案中，本文中所述的任一种抗tfr抗体的结合不竞争或抑制转铁蛋白与tfr1的结合。在一些实施方案中，本文中所述
的任一种抗tfr抗体的结合不竞争或抑制hfe-β-2-微球蛋白与tfr1的结合。
[0083]
表1中提供了抗tfr抗体的一些非限制性实例的重链可变结构域和轻链可变结构域以及cdr序列。
[0084]
表1.抗tfr1抗体的一些实例(根据定义的cdr)
[0085]
[0086]
[0087]
[0088]
[0089][0090]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含选自表1的任一种抗tfr抗体的一个或更多个cdr-h(例如，cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3)氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含如针对选自表1的任一种抗体提供的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含选自表1的任一种抗tfr抗体的一个或更多个cdr-l(例如，cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3)氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含如针对选自表1的任一种抗tfr抗体提供的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0091]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含如针对选自表1的任一种抗tfr抗体提供的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。在一些实施方案中，抗体重链和轻链cdr3结构域可在抗体对抗原的结合特异性/亲和力中发挥特别重要的作用。因此，本公开内容的抗tfr抗体可至少包含选自表1的任一种抗tfr抗体的重链和/或(例如，和)轻链的cdr3。
[0092]
在一些实例中，本公开内容的任何抗tfr抗体均具有与选自表1的一种抗tfr抗体的任何cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和/或(例如，和)cdr-l3序列基本上相似的一个或更多个cdr(例如，cdr-h或cdr-l)序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗体的一个或更多个cdr沿着vh(例如，cdr-h1、cdr-h2或cdr-h3)和/或(例如，和)vl(例如，cdr-l1、cdr-l2或cdr-l3)区的位置可改变一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸位置，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，基本上维持了其所来源原始抗体之结合的例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。例如，在一些实施方案中，限定本文中所述的任何抗体的cdr的位置可通过将cdr的n端和/或(例如，和)c端边界相对于本文中所述的任一种抗体的cdr位置移动一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸来改变，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，基本上维持了其所来源原始抗体之结合的例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在另一个实施方案中，本文中所述的抗体的一个或更多个cdr沿着vh(例如，cdr-h1、cdr-h2或cdr-h3)和/或(例如，和)vl(例如，cdr-l1、cdr-l2或cdr-l3)区的长度可改变(例如变得更短或更长)一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特
异性结合(例如，基本上维持了其所来源原始抗体之结合的例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。
[0093]
因此，在一些实施方案中，本文中所述的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和/或(例如，和)cdr-h3可比本文中所述的一个或更多个cdr(例如选自表1的任何抗tfr抗体的cdr)短一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，相对于其所来源原始抗体的结合，基本上维持了例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文中所述的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和/或(例如，和)cdr-h3可比本文中所述的一个或更多个cdr(例如选自表1的任何抗tfr抗体的cdr)长一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，相对于其所来源原始抗体的结合，基本上维持了例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，与本文中所述的一个或更多个cdr(例如选自表1的任何抗tfr抗体的cdr)相比，本文中所述的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和/或(例如，和)cdr-h3的氨基部分可延长一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，相对于其所来源原始抗体的结合，基本上维持了例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，与本文中所述的一个或更多个cdr(例如选自表1的任何抗tfr抗体的cdr)相比，本文中所述的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和/或(例如，和)cdr-h3的羧基部分可延长一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，相对于其所来源原始抗体的结合，基本上维持了例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，与本文中所述的一个或更多个cdr(例如选自表1的任何抗tfr抗体的cdr)相比，本文中所述的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和/或(例如，和)cdr-h3的氨基部分可缩短一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，相对于其所来源原始抗体的结合，基本上维持了例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，与本文中所述的一个或更多个cdr(例如选自表1的任何抗tfr抗体的cdr)相比，本文中所述的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和/或(例如，和)cdr-h3的羧基部分可缩短一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，相对于其所来源原始抗体的结合，基本上维持了例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。可使用任何方法来确定是否维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合，例如使用本领域描述的结合测定和条件来确定。
[0094]
在一些实例中，本公开内容的任何抗tfr抗体均具有与选自表1的任一种抗tfr抗体基本上相似的一个或更多个cdr(例如cdr-h或cdr-l)序列。例如，抗体可包含选自表1的任何抗tfr抗体的一个或更多个cdr序列，其与本文中提供的任一个cdr(例如选自表1的任何抗tfr抗体的cdr)的相应cdr区相比包含多至5、4、3、2或1个氨基酸残基变异，只要维持了与转铁蛋白受体(例如，人转铁蛋白受体)的免疫特异性结合(例如，相对于其所来源原始抗
体的结合，基本上维持了例如至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)即可。在一些实施方案中，本文中提供的任何cdr中的任何氨基酸变异均可以是保守变异。保守变异可在残基不太可能参与与转铁蛋白受体蛋白(例如，人转铁蛋白受体蛋白)相互作用的位置(例如如基于晶体结构确定的)处引入cdr中。本公开内容的一些方面提供了抗tfr抗体，其包含本文中提供的一个或更多个重链可变(vh)结构域和/或(例如，和)轻链可变(vl)结构域。在一些实施方案中，本文中提供的任何vh结构域均包含本文中提供的一个或更多个cdr-h序列(例如，cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3)，例如选自表1的任一种抗tfr中提供的任何cdr-h序列。在一些实施方案中，本文中提供的任何vl结构域均包含本文中提供的一个或更多个cdr-l序列(例如，cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3)，例如选自表1的任一种抗tfr抗体中提供的任何cdr-l序列。
[0095]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包括包含选自表1的任一种抗tfr抗体的重链可变结构域和/或(例如，和)轻链可变结构域的任何抗体，及其变体。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包括包含选自表1的任何抗tfr抗体的重链可变和轻链可变对的任何抗体。
[0096]
本公开内容的一些方面提供了抗tfr抗体，其具有与本文中所述的那些中的任何同源的重链可变(vh)和/或(例如，和)轻链可变(vl)结构域氨基酸序列。在一些实施方案中，抗tfr抗体包含与选自表1的任一种抗tfr抗体的重链可变序列和/或轻链可变序列具有至少75％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的重链可变序列或轻链可变序列。在一些实施方案中，同源重链可变和/或(例如，和)轻链可变氨基酸序列在本文中提供的任何cdr序列内均不变化。例如，在一些实施方案中，序列变异的程度(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)可发生在不包括本文中提供的任何cdr序列的重链可变和/或(例如，和)轻链可变序列中。在一些实施方案中，本文中提供的任何抗tfr抗体均包含重链可变序列和轻链可变序列，其包含与选自表1的任何抗tfr抗体的框架序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的框架序列。
[0097]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体可以以相对高的亲和力(例如，kd小于10-6
m、10-7
m、10-8
m、10-9
m、10-10
m、10-11
m或更小)与靶抗原(例如，转铁蛋白受体)结合。例如，本公开内容的抗tfr抗体可以以5pm至500nm(例如，50pm至100nm，例如500pm至50nm)的亲和力与转铁蛋白受体蛋白(例如，人转铁蛋白受体)结合。本公开内容还包含与本文中所述的任何抗体竞争与转铁蛋白受体蛋白(例如，人转铁蛋白受体)的结合并且具有50nm或更小(例如，20nm或更小、10nm或更小、500pm或更小、50pm或更小、5pm或更小)的亲和力的抗体。抗tfr抗体的亲和力和结合动力学可使用任何合适的方法测试，包括但不限于生物传感器技术(例如，octet或biacore)。
[0098]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含选自表1的任一种抗tfr抗体的vl结构域和/或(例如，和)vh结构域，并且包含恒定区，所述恒定区包含igg、ige、igm、igd、iga或igy免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或任何亚类(例如，igg2a和igg2b)的恒定区的氨基酸序列。本领域中描述了人恒定区的一些非限制性实例，例如参见上文kabat e a et al.，(1991)。
[0099]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：7的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容
的抗tfr抗体包含具有seq id no：8的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0100]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：2的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：3的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：4的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0101]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h1；具有seq id no：2的氨基酸序列的cdr-h2，其在第5位处具有氨基酸替换(例如，第5位处的天冬酰胺被例如以下中的任一种替换：arg(r)、lys(k)、asp(d)、glu(e)、gln(q)、his(h)、ser(s)、thr(t)、tyr(y)、cys(c)、trp(w)、met(m)、ala(a)、ile(i)、leu(l)、phe(f)、val(v)、pro(p)、gly(g))；以及具有seq id no：3的氨基酸序列的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：4的氨基酸序列的cdr-l1；具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2；和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3。在一些实施方案中，seq id no：2中所示的cdr-h2的第5位处的氨基酸替换是n5t或n5s。
[0102]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h1；具有seq id no：233或seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2；和具有seq id no：3的氨基酸序列的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：4的氨基酸序列的cdr-l1；具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2；和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3。
[0103]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h1，具有seq id no：2、seq id no：233或seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：3的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。如在本公开内容的任何地方使用的“共同”意指所有三个重链cdr中的氨基酸变异的总数在限定的范围内。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：4的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0104]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h1，具有seq id no：2、seq id no：233或seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：3的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：4的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0105]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：1的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：2、seq id no：233或seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有
不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：3的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：4的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0106]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：7的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：8的氨基酸序列的vl。
[0107]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：7中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：8中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0108]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：7中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：8中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0109]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含seq id no：7中所示的vh，其在第55位处具有氨基酸替换(例如，第55位处的天冬酰胺被例如以下中的任一种替换：arg(r)、lys(k)、asp(d)、glu(e)、gln(q)、his(h)、ser(s)、thr(t)、tyr(y)、cys(c)、trp(w)、met(m)、ala(a)、ile(i)、leu(l)、phe(f)、val(v)、pro(p)、gly(g))。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含seq id no：8中所示的vl。在一些实施方案中，seq id no：7中所示vh的第55位处的氨基酸替换是n55t或n55s。当seq id no：7中所示的vh使用kabat编号系统注释时，将seq id no：7中的第55位氨基酸指定为编号54。当本文中提及n54t或n54s时，其是指使用kabat编号系统的突变。
[0110]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh相对于seq id no：7在第64位处包含氨基酸替换。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh在对应于seq id no：7的第64位的位置处包含met。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：8中所示的vl具有至少80％(例如，80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。
[0111]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含以gysitsgyx1(seq id no：286)表示的cdr-h1，其中x1可以是y或g；以ix2fdgx3x4(seq id no：287)表示的cdr-h2，其中x2可以是t或n，x3可以是a或n，并且x4可以是n、t或s；以及以x5rx6x7ydydx8x9dx
10
(seq id no：
288)表示的cdr-h3，其中x5是t或a，x6是s、f或i，x7是s、n或y，x8是p、y或v，x9是i、f或l，并且x
10
是y或f。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含以qdix
11
nx
12
(seq id no：289)表示的cdr-l1，其中x
11
是s或t并且x
12
是f、c、s或y；以yts(seq id no：13)表示的cdr-l2，以及以qqgx
13
x
14
x
15
px
16
t(seq id no：290)表示的cdr-l3，其中x
13
是h或n，x
14
是t或a，x
15
是l或y，并且x
16
是y、w或f。
[0112]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含如表11中列出的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含如表11中列出的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0113]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：15的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：16的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0114]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：9的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：10的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：11的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：12的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0115]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：9的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：10的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：11的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：12的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0116]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：9的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：10的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：11的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：12的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0117]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：9的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：10的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：11的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：12的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例
如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0118]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：15的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：16的氨基酸序列的vl。
[0119]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：15中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：16中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0120]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：15中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：16中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0121]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：23的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：24的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0122]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：17的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：18的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：19的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：20的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0123]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：17的氨基酸序列的cdr-h1，其在第8位处具有氨基酸替换(例如，第8位处的半胱氨酸被例如以下中的任一种替换：arg(r)、lys(k)、asp(d)、glu(e)、gln(q)、his(h)、ser(s)、thr(t)、tyr(y)、asn(n)、trp(w)、met(m)、ala(a)、ile(i)、leu(l)、phe(f)、val(v)、pro(p)、g1y(g)；具有seq id no：18的氨基酸序列的cdr-h2；和具有seq id no：19的氨基酸序列的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：20的氨基酸序列的cdr-l1；具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2；和具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3。在一些实施方案中，seq id no：17中所示的cdr-h1的第8位处的氨基酸替换是c8d或c8y。
[0124]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：237或seq id no：239的氨基酸序列的cdr-h1；具有seq id no：18的氨基酸序列的cdr-h2；和具有seq id no：19的氨基酸序列的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：具有seq id no：20的氨基酸序列的cdr-l1；具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2；和具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3。
id no：24中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0131]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含seq id no：23中所示的vh，其在第33位处具有氨基酸替换(例如，第33位处的半胱氨酸被例如以下中的任一种替换：arg(r)、lys(k)、asp(d)、glu(e)、gln(q)、his(h)、ser(s)、thr(t)、tyr(y)、asn(n)、trp(w)、met(m)、ala(a)、ile(i)、leu(l)、phe(f)、val(v)、pro(p)、gly(g))。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含seq id no：24中所示的vl。在一些实施方案中，seq id no：23中所示的vh的第33位处的氨基酸替换是c33d或c33y。当seq id no：23中所示的vh用kabat编号系统注释时，将seq id no：23中的第33位氨基酸指定为编号33。
[0132]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：31的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：32的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0133]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：25的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：26的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：27的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：28的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：30的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0134]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：25的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：26的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：27的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：28的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：30的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0135]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：25的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：26的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：27的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：28的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：30的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0136]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：25的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：26的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：27的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：28的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的
cdr-l1；与具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：30的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0137]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：31的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：32的氨基酸序列的vl。
[0138]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：31中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：32中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0139]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：31中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：32中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0140]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：39的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：40的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0141]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：33的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：34的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：35的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：36的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：37的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：38的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0142]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：33的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：34的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：35的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：36的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：37的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：38的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0143]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：33的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：34的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：35的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含
cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：36的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：37的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：38的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0144]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：33的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：34的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：35的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：36的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：37的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：38的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0145]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：39的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：40的氨基酸序列的vl。
[0146]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：39中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：40中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0147]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：39中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：40中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0148]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：47的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：48的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0149]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：41的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：42的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：43的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：44的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：46的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0150]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具
有seq id no：41的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：42的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：43的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：44的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：46的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0151]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：41的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：42的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：43的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：44的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：46的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0152]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：41的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：42的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：43的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：44的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：46的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0153]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：47的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：48的氨基酸序列的vl。
[0154]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：47中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：48中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0155]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：47中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：48中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0156]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：54的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：55的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0157]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：49的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：50的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：51的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：52的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：53的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0158]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：49的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：50的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：51的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：52的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：53的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0159]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：49的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：50的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：51的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：52的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：53的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0160]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：49的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：50的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：51的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：52的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：53的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0161]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：54的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：55的氨基酸序列的vl。
[0162]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：54中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、
15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：55中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0163]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：54中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：55中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0164]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：62的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：63的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0165]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：56的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：57的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：58的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：59的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：60的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：61的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0166]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：56的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：57的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：58的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：59的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：60的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：61的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0167]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：56的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：57的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：58的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：59的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：60的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：61的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0168]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：56的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：57的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：58的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：59的氨基
酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：60的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：61的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0169]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：62的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：63的氨基酸序列的vl。
[0170]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：62中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：63中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0171]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：62中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：63中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0172]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：70的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：71的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0173]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：64的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：65的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：66的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：67的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：68的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：69的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0174]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：64的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：65的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：66的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：67的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：68的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：69的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0175]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：64的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：65的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：66的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、
95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：67的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：68的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：69的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0176]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：64的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：65的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：66的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：67的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：68的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：69的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0177]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：70的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：71的氨基酸序列的vl。
[0178]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：70所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：71中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0179]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：70中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：71中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0180]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：77的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：78的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0181]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：73的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：76的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0182]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：73的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：76的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0183]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：73的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：76的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0184]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：73的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：76的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0185]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：77的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：78的氨基酸序列的vl。
[0186]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：77中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：78中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0187]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：77中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：78中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一
性的氨基酸序列。
[0188]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：85的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：86的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0189]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：81的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：84的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0190]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：81的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：84的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0191]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：81的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：84的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0192]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：80的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：81的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：84的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0193]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：85的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：86的氨基酸序列的vl。
[0194]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：85中所
示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：86中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0195]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：85中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：86中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0196]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：89的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：90的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0197]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：87的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：88的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0198]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：87的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：88的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0199]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：87的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：88的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0200]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：72的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：87的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：74的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。
作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：88的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0201]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：89的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：90的氨基酸序列的vl。
[0202]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：89中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：90中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0203]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：89中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：90中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0204]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：97的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：98的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0205]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：91的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：92的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：93的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：94的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：95的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：96的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0206]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：91的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：92的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：93的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：94的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：95的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：96的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0207]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：91的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：92的氨基酸序列的cdr-h2
no：60的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：103的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0214]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：99的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：100的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：101的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：102的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：60的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：103的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0215]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：99的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：100的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：101的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：102的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：60的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：103的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0216]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：104的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：105的氨基酸序列的vl。
[0217]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：104中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：105中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0218]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：104中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：105中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0219]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：112的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：113的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0220]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：106的氨基酸序
列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：107的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：108的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：109的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：110的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：111的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0221]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：106的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：107的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：108的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：109的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：110的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：111的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0222]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：106的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：107的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：108的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：109的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：110的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：111的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0223]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：106的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：107的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：108的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：109的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：110的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：111的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0224]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：112的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：113的氨基酸序列的vl。
[0225]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：112中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：113中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0226]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：112中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：113中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0227]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：117的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：118的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0228]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：114的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：115的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：116的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0229]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：114的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：115的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：116的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0230]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：114的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：115的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：116的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0231]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：114的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：115的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：82的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：83的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：116的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的
cdr-l3。
[0232]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：117的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：118的氨基酸序列的vl。
[0233]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：117中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：118中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0234]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：117中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：118中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0235]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：124的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：125的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0236]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：119的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：120的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：121的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：122的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：123的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0237]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：119的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：120的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：121的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：122的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：123的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0238]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：119的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：120的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：121的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：122的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：123的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0239]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：119的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：120的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：121的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：122的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：123的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0240]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：124的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：125的氨基酸序列的vl。
[0241]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：124中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：125中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0242]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：124中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：125中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0243]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：132的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：133的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0244]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：126的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：127的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：128的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：129的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：130的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：131的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0245]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：126的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：127的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：128的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包
含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：129的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：130的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：131的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0246]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：126的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：127的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：128的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：129的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：130的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：131的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0247]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：126的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：127的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：128的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：129的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：130的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：131的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0248]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：132的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：133的氨基酸序列的vl。
[0249]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：132中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：133中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0250]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：132中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：133中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0251]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：136的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：137的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0252]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：2的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：134的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：135的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0253]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：2的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：134的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：135的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0254]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：2的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：134的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：135的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0255]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：79的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：2的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：134的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：75的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：45的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：135的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0256]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：136的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：137的氨基酸序列的vl。
[0257]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：136中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：137中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0258]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：136中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：137中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0259]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：143的氨基酸序列的重链可变结构域的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：144的氨基酸序列的轻链可变结构域的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0260]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：138的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：139的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：140的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)、具有seq id no：141的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：142的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)。
[0261]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：138的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：139的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：140的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：141的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：142的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0262]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：138的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：139的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：140的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：141的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：142的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0263]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：138的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：139的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：140的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：141的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：29的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：142的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变
异)的cdr-l3。
[0264]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：143的氨基酸序列的vh。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含含有seq id no：144的氨基酸序列的vl。
[0265]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh与seq id no：143中所示的vh相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl与seq id no：144中所示的vl相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0266]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含vh，所述vh包含与seq id no：143中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含vl，所述vl包含与seq id no：144中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0267]
当使用不同的定义系统(例如，imgt定义、kabat定义或chothia定义)时，抗体的cdr可能具有不同的氨基酸序列。定义系统用数字对给定抗体序列(例如，vh或vl序列)中的每个氨基酸进行注释，并且在表2中提供了对应于重链cdr和轻链cdr的数字。表1中列出的cdr是根据imgt定义限定的。表3中提供了根据不同定义系统的抗tfr抗体实例的cdr序列。本领域技术人员能够使用不同的编号系统推导出表1中提供的抗tfr抗体的cdr序列。
[0268]
表2.cdr限定
[0269] imgt1kabat2chothia3cdr-h127-3831-3526-32cdr-h256-6550-6553-55cdr-h3105-116/11795-10296-101cdr-l127-3824-3426-32cdr-l256-6550-5650-52cdr-l3105-116/11789-9791-96
[0270]1the international immunogenetics informationimgt.org，lefranc，m.-p.et al.，nucleic acids res.，27：209-212(1999)
[0271]2kabat et al.(1991)sequences of proteins of immunological interest，fifth edition，u.s.department of health and human services，nih publication no.91-3242
[0272]3chothia et al.，j.mol.biol.196：901-917(1987))
[0273]
表3.根据不同定义系统的抗tfr抗体实例的cdr序列
[0274]
[0275]
[0276][0277]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：145的氨基酸序列的cdr-h1(根据kabat定义系统)，具有seq id no：146、seq id no：234或seq id no：236的氨基酸序列的cdr-h2(根据kabat定义系统)，具有seq id no：147的氨基酸序列的cdr-h3(根据kabat定义系统)，具有seq id no：148的氨基酸序列的cdr-l1(根据kabat定义系统)，具有seq id no：149的氨基酸序列的cdr-l2(根据kabat定义系统)和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3(根据kabat定义系统)。
[0278]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：145的氨基酸序列的cdr-h1，具有seq id no：146、seq id no：234或seq id no：236的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：147的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：148的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：149的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0279]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：145的氨基酸序列的cdr-h1，具有seq id no：146、seq id no：234或seq id no：236的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：147的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：148的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：149的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0280]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：145的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：146、seq id no：234或seq id no：236的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：147的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：148的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：149的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0281]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：150的氨基酸序
列的cdr-h1(根据chothia定义系统)，具有seq id no：151、seq id no：277或seq id no：278的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)，具有seq id no：152的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)，具有seq id no：153的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia定义系统)，具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：154的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)。
[0282]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：150的氨基酸序列的cdr-h1，具有seq id no：151、seq id no：277或seq id no：278的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：152的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：153的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：154的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0283]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：150的氨基酸序列的cdr-h1，具有seq id no：151、seq id no：277或seq id no：278的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：152的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：153的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：154的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0284]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：150的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：151、seq id no：277或seq id no：278的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：152的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：153的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：154的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0285]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：155的氨基酸序列的cdr-h1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：156的氨基酸序列的cdr-h2(根据kabat定义系统)、具有seq id no：157的氨基酸序列的cdr-h3(根据kabat定义系统)、具有seq id no：158的氨基酸序列的cdr-l1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：159的氨基酸序列的cdr-l2(根据kabat定义系统)和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3(根据kabat定义系统)。
[0286]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具
no：238或seq id no：240的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：166的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：167的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：168的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：169的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0297]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含具有seq id no：170的氨基酸序列的cdr-h1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：171的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)、具有seq id no：172的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)、具有seq id no：173的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：174的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)。
[0298]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与具有seq id no：170的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：171的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：172的氨基酸序列的cdr-h3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与具有seq id no：173的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：174的氨基酸序列的cdr-l3相比，其共同包含不超过5个氨基酸变异(例如，不超过5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0299]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，其共同与具有seq id no：170的氨基酸序列的cdr-h1、具有seq id no：171的氨基酸序列的cdr-h2和具有seq id no：172的氨基酸序列的cdr-h3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其共同与具有seq id no：173的氨基酸序列的cdr-l1、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2和具有seq id no：174的氨基酸序列的cdr-l3具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0300]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：170的氨基酸序列的cdr-h1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h1；与具有seq id no：171的氨基酸序列的cdr-h2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h2；和/或(例如，和)与具有seq id no：172的氨基酸序列的cdr-h3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-h3。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含：与具有seq id no：173的氨基酸序列的cdr-l1相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l1；与具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l2；和/或(例如，和)与具有seq id no：174
的氨基酸序列的cdr-l3相比，具有不超过3个氨基酸变异(例如，不超过3、2或1个氨基酸变异)的cdr-l3。
[0301]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是人源化抗体(例如，包含表1或表3的一个或更多个cdr的人源化变体)。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含与表1或表3中所示的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3相同的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，并且包含人源化重链可变区和/或(例如，和)人源化轻链可变区。
[0302]
人源化抗体是人免疫球蛋白(接受体抗体)，其中来自接受体的互补决定区(complementary determining region，cdr)的残基被来自具有期望特异性、亲和力和容量(capacity)的非人物种(供体抗体)例如小鼠、大鼠或兔的cdr的残基替代。在一些实施方案中，人免疫球蛋白的fv框架区(framework region，fr)残基被相应的非人残基替代。此外，人源化抗体可包含在接受体抗体或者导入的cdr或框架序列中均未发现但被包含在内以进一步完善和优化抗体性能的残基。一般而言，人源化抗体将包含至少一个并且通常是两个的可变结构域的基本上全部，其中所有或基本上所有的cdr区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有的fr区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体最佳地还将包含免疫球蛋白恒定区或结构域(fc)(通常是人免疫球蛋白的那些)的至少一部分。抗体可具有如wo 99/58572中所述修饰的fc区。人源化抗体的另一些形式具有相对于原始抗体而改变的一个或更多个cdr(一个、两个、三个、四个、五个、六个)，其也称为来源于来自原始抗体的一个或更多个cdr的一个或更多个cdr。人源化抗体还可能涉及亲和力成熟。
[0303]
人源化抗体及其制备方法是已知的，例如，如在以下中描述的：almagro et al.，front.biosci.13：1619-1633(2008)；riechmann et al.，nature 332：323-329(1988)；queen et al.，proc.nat
′
l acad.sci.usa 86：10029-10033(1989)；美国专利no.5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；kashmiri et al.，methods 36：25-34(2005)；padlan et al.，mol.immunol.28：489-498(1991)；dall
′
acqua et al.，methods 36：43-60(2005)；osbourn et al.，methods 36：61-68(2005)；以及klimka et al.，br.j.cancer，83：252-260(2000)，其全部内容均通过引用并入本文。可用于人源化的人框架区在例如以下中描述：sims et al.j.immunol.151：2296(1993)；carter et al.proc.natl.acad.sci.usa，89：4285(1992)；presta et al.j.immunol.，151：2623(1993)；almagro et al.，front.biosci.13：1619-1633(2008))；baca et al.，j.biol.chem.272：10678-10684(1997)以及rosok et al.，j biol.chem.271：22611-22618(1996)，其全部内容均通过引用并入本文。在一些实施方案中，通过将cdr(例如，如表1或表3中所示的)接枝到igkv1-nl1*01和ighv1-3*01人可变结构域中来实现人源化。
[0304]
在一些实施方案中，人源化vh框架或人源化vl框架是共有人框架。在一些实施方案中，共有人源化框架可代表在选择人免疫球蛋白vl或vh框架序列时最常见的氨基酸残基。
[0305]
在一些实施方案中，适合与本文中所述的人源化抗tfr抗体中的重链cdr一起使用的共有人vh框架区包括(亚组iii共有)：
[0306]
a)vh fr1：evqlvesggglvqpggslrlscaas(seq id no：241)；
[0307]
b)vh fr2：wvrqapgkglewv(seq id no：242)；
[0308]
c)vh fr3：rftisrdnskntlylqmnslraedtavyyc(seq id no：243)；和
[0309]
d)vh fr4：wgqgtlvtvss(seq id no：244)。
[0310]
在一些实施方案中，适合与本文中所述的人源化抗tfr抗体中的重链cdr一起使用的共有人vh框架区包括(亚组i共有)：
[0311]
a)vh fr1：qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckas(seq id no：245)；
[0312]
b)vh fr2：wvrqapgqglewm(seq id no：246)；
[0313]
c)vh fr3：rvtitadtststaymelsslrsedtavyyc(seq id no：247)；和
[0314]
d)vhfr4：wgqgtlvtvss(seq id no：244)。
[0315]
在一些实施方案中，适合与本文中所述的人源化抗tfr抗体中的重链cdr一起使用的共有人vh框架区包括(亚组ii共有)：
[0316]
a)vh fr1：qvqlqesgpglvkpsqtlsltctvs(seq id no：249)；
[0317]
b)vh fr2：wirqppgkglewi(seq id no：250)；
[0318]
c)vh fr3：rvtisvdtsknqfslklssvtaadtavyyc(seq id no：251)；和
[0319]
d)vh fr4：wgqgtlvtvss(seq id no：244)。
[0320]
在一些实施方案中，适合与本文中所述的人源化抗tfr抗体中的轻链cdr一起使用的共有人vl框架区包括(亚组i共有)：
[0321]
a)vl fr1：diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seq id no：253)；
[0322]
b)vl er2：wyqqkpgkapklliy(seq id no：254)；
[0323]
c)vl fr3：gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seq id no：256)；和
[0324]
d)vl fr4：fgqgtkveik(seq id no：248)。
[0325]
在一些实施方案中，适合与本文中所述的人源化抗tfr抗体中的轻链cdr一起使用的共有人vl框架区包括(亚组ii共有)：
[0326]
a)vl fr1：divmtqsplslpvtpgepasisc(seq id no：257)；
[0327]
b)vl fr2：wylqkpgqspqlliy(seq id no：258)；
[0328]
c)vl fr3：gvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyyc(seq id no：259)；和
[0329]
d)vlfr4：fgqgtkveik(seq id no：248)。
[0330]
在一些实施方案中，适合与本文中所述的人源化抗tfr抗体中的轻链cdr一起使用的共有人vl框架区包括(亚组iii共有)：
[0331]
a)vl fr1：divmtqspdslavslgeratinc(seq id no：252)；
[0332]
b)vl fr2：wyqqkpgqppklliy(seq id no：255)；
[0333]
c)vl fr3：gvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedfavyyc(seq id no：263)；和
[0334]
d)vlfr4：fgqgtkveik(seq id no：248)。
[0335]
在一些实施方案中，适合与本文中所述的人源化抗tfr抗体中的轻链cdr一起使用的共有人vl框架区包括(亚组iv共有)：
[0336]
a)vl fr1：divmtqspdslavslgeratinc(seq id no：252)；
[0337]
b)vl fr2：wyqqkpgqppklliy(seq id no：255)；
[0338]
c)vl fr3：gvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedfavyyc(seq id no：260)；和
[0339]
d)vl fr4：fgqgtkveik(seq id no：248)。
[0340]
在一些实施方案中，本公开内容的人源化抗tfr抗体包含人源化vh框架区，与本文中所述的任一种共有人vh框架区亚组相比，其共同包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超
过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的人源化抗tfr抗体包含人源化vl框架区，与本文中所述的任一种共有人vl框架区亚组相比，其共同包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0341]
在一些实施方案中，本公开内容的人源化抗tfr抗体包含人源化vh框架区，其共同与本文中所述的任一种共有人vh框架区亚组具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl框架区，其与本文中所述的任一种共有人vl框架区亚组具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0342]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是这样的人源化变体，与表1或表3中列出的任一种vh相比，其包含一个或更多个氨基酸变异(例如，在vh框架区中)；和/或(例如，和)与表1或表3中列出的任一种vl相比，其包含一个或更多个氨基酸变异(例如，在vl框架区中)。
[0343]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是包含vh的人源化抗体，所述vh与表1中列出的任一种抗tfr抗体的vh相比，包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体是包含vl的人源化抗体，所述vl与表1中列出的任一种抗tfr抗体的vl相比，包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0344]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是包含vh的人源化抗体，所述vh包含与seq id no：7、15和23中任一个所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体是包含vl的人源化抗体，所述vl包含与seq id no：8、16和24中任一个所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0345]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是包含vh的人源化抗体，所述vh与seq id no：7、15和23中任一个所示的vh相比，包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体是包含vl的人源化抗体，所述vl与seq id no：8、16和24中任一个所示的vl相比，包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0346]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是包含vh的人源化抗体，所述vh包含与seq id no：7、15和23中任一个所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体是包含vl的人源化抗体，所述vl包含与seq id no：8、16和24中任一个所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。
[0347]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是包含vh的人源化抗体，所述vh相对于seq id no：7、15和23中任一个所示的vh在第1，2，5，9，11，12，13，17，20，23，33，38，40，
id no：234或seq id no：236的氨基酸序列的cdr-h2(根据kabat定义系统)，具有seq id no：147的氨基酸序列的cdr-h3(根据kabat定义系统)，并且在框架区中与seq id no：7中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：148的氨基酸序列的cdr-l1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：149的氨基酸序列的cdr-l2(根据kabat定义系统)和具有seq id no：6的氨基酸序列的cdr-l3(根据kabat定义系统)，并且在框架区中与seq id no：8中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0352]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：150的氨基酸序列的cdr-h1(根据chothia定义系统)，具有seq id no：151、seq id no：277或seq id no：278的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)，具有seq id no：152的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)，并且与seq id no：7中所示的vh相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：153的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：154的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)，并且与seq id no：8中所示的vl相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0353]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：150的氨基酸序列的cdr-h1(根据chothia定义系统)，具有seq id no：151、seq id no：277或seq id no：278的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)，具有seq id no：152的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)，并且在框架区中与seq id no：7中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：153的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：5的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：154的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)，并且在框架区中与seq id no：8中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0354]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：9的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：10的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：11的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)，并且与seq id no：15中所示的vh相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：12的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)，并且与seq id no：16中所示的vl相比，在框架区包含不超
过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0355]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：9的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：10的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)、具有seq id no：11的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)，并且在框架区中与seq id no：15中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：12的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)，并且在框架区中与seq id no：16中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0356]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：155的氨基酸序列的cdr-h1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：156的氨基酸序列的cdr-h2(根据kabat定义系统)、具有seq id no：157的氨基酸序列的cdr-h3(根据kabat定义系统)，并且与seq id no：15中所示的vh相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：158的氨基酸序列的cdr-l1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：159的氨基酸序列的cdr-l2(根据kabat定义系统)和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3(根据kabat定义系统)，并且与seq id no：16中所示的vl相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0357]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：155的氨基酸序列的cdr-h1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：156的氨基酸序列的cdr-h2(根据kabat定义系统)、具有seq id no：157的氨基酸序列的cdr-h3(根据kabat定义系统)，并且在框架区中与seq id no：15中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：158的氨基酸序列的cdr-l1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：159的氨基酸序列的cdr-l2(根据kabat定义系统)和具有seq id no：14的氨基酸序列的cdr-l3(根据kabat定义系统)，并且在框架区中与seq id no：16中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0358]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：160的氨基酸序列的cdr-h1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：161的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)、具有seq id no：162的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)，并且与seq id no：15中所示的vh相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：163的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia
定义系统)、具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：164的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)，并且与seq id no：16中所示的vl相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0359]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：160的氨基酸序列的cdr-h1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：161的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)、具有seq id no：162的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)，并且在框架区中与seq id no：15中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：163的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：13的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：164的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)，并且在框架区中与seq id no：16中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0360]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：17、seq id no：237或seq id no：239的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)，具有seq id no：18的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)，具有seq id no：19的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)，并且与seq id no：23中所示的vh相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：20的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)，并且与seq id no：24中所示的vl相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0361]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：17、seq id no：237或seq id no：239的氨基酸序列的cdr-h1(根据imgt定义系统)，具有seq id no：18的氨基酸序列的cdr-h2(根据imgt定义系统)，具有seq id no：19的氨基酸序列的cdr-h3(根据imgt定义系统)，并且在框架区中与seq id no：23中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：20的氨基酸序列的cdr-l1(根据imgt定义系统)、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2(根据imgt定义系统)和具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3(根据imgt定义系统)，并且在框架区中与seq id no：24中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0362]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：165、seq id no：238或seq id no：240的氨基酸序列的cdr-h1(根据kabat定义系统)，具有seq id no：166的氨基酸序列的cdr-h2(根据kabat定义系统)，具有seq id no：167的氨基酸序列的cdr-h3(根据kabat定义系统)，并且与seq id no：23中所示的vh相
比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：168的氨基酸序列的cdr-l1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：169的氨基酸序列的cdr-l2(根据kabat定义系统)和具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3(根据kabat定义系统)，并且与seq id no：24中所示的vl相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0363]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：165、seq id no：238或seq id no：240的氨基酸序列的cdr-h1(根据kabat定义系统)，具有seq id no：166的氨基酸序列的cdr-h2(根据kabat定义系统)，具有seq id no：167的氨基酸序列的cdr-h3(根据kabat定义系统)，并且在框架区中与seq id no：23中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：168的氨基酸序列的cdr-l1(根据kabat定义系统)、具有seq id no：169的氨基酸序列的cdr-l2(根据kabat定义系统)和具有seq id no：22的氨基酸序列的cdr-l3(根据kabat定义系统)，并且在框架区中与seq id no：24中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0364]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：170的氨基酸序列的cdr-h1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：171的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)、具有seq id no：172的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)，并且与seq id no：23中所示的vh相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：173的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：174的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)，并且与seq id no：24中所示的vl相比，在框架区中包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。
[0365]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vh，所述人源化vh包含具有seq id no：170的氨基酸序列的cdr-h1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：171的氨基酸序列的cdr-h2(根据chothia定义系统)、具有seq id no：172的氨基酸序列的cdr-h3(根据chothia定义系统)，并且在框架区中与seq id no：23中所示的vh具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含人源化vl，所述人源化vl包含具有seq id no：173的氨基酸序列的cdr-l1(根据chothia定义系统)、具有seq id no：21的氨基酸序列的cdr-l2(根据chothia定义系统)和具有seq id no：174的氨基酸序列的cdr-l3(根据chothia定义系统)，并且在框架区中与seq id no：24中所示的vl具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性。
[0366]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体是嵌合抗体，其可包含来自人抗体的重恒定区和轻恒定区。嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或可变区的一部分以及来自第二物种的恒定区的抗体。通常来说，在这些嵌合抗体中，轻链和重链二者的可变区模拟来源于一种哺乳动物(例如，非人哺乳动物，例如小鼠、兔和大鼠)的抗体的可变区，而恒定部分与来源于另一种哺乳动物(例如人)的抗体中的序列同源。在一些实施方案中，可在可变区和/或(例如，和)恒定区中进行氨基酸修饰。
[0367]
在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体是嵌合抗体，其可包含来自人抗体的重恒定区和轻恒定区。嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或可变区的一部分以及来自第二物种的恒定区的抗体。通常来说，在这些嵌合抗体中，轻链和重链二者的可变区模拟来源于一种哺乳动物(例如，非人哺乳动物，例如小鼠、兔和大鼠)的抗体的可变区，而恒定部分与来源于另一种哺乳动物(例如人)的抗体中的序列同源。在一些实施方案中，可在可变区和/或(例如，和)恒定区中进行氨基酸修饰。
[0368]
在一些实施方案中，本文中所述的任何抗tfr抗体的重链可包含重链恒定区(ch)或其一部分(例如，ch1、ch2、ch3或其组合)。重链恒定区可具有任何合适的来源，例如人、小鼠、大鼠或兔。在一个具体实例中，重链恒定区来自人igg例如igg1、igg2或igg4(γ重链)。以下给出了人igg1恒定区的一个实例：
[0369][0370]
在一些实施方案中，本文中所述的任何抗tfr抗体的重链包含突变体人igg1恒定区。例如，已知在人igg1的ch2结构域中引入lala突变(来源于mab b12的突变体，其已突变以用ala234和ala235替换较低的铰链残基leu234leu235)降低了fcg受体结合(bruhns，p.，et al.(2009)和xu，d.et al.(2000))。以下提供了突变体人igg1恒定区(突变加粗并带有下划线)：
[0371][0372]
在一些实施方案中，本文中所述的任何抗tfr抗体的轻链可还包含轻链恒定区(cl)，其可以是本领域已知的任何cl。在一些实例中，cl是κ轻链。在另一些实例中，cl是λ轻链。在一些实施方案中，cl是κ轻链，以下提供了其序列：
[0373][0374]
其他抗体重链和轻链恒定区是本领域公知的，例如在imgt数据库(www.imgt.org)或www.vbase2.org/vbstat.php.中提供的那些，二者均通过引用并入本文。
[0375]
在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种vh或其任意变体以及与seq id no：175或seq id no：176具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种vh或其任意变体以及与seq id no：175或seq id no：176相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种vh或其任意变体以及seq id no：175中所示的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种vh或其任意变体以及seq id no：176中所示的重链恒定区。
[0376]
在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含表1中列出的任一种vl或其任意变体以及与seq id no：177具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的轻链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含表1中列出的任一种vl或其任意变体以及与seq id no：177相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的轻链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含表1中列出的任一种vl或其任意变体以及seq id no：177中所示的轻链恒定区。
[0377]
下表4中提供了所述抗tfr抗体的igg重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列的一些实例。
[0378]
表4.抗tfr igg实例的重链序列和轻链序列
[0379]
[0380]
no：269或seq id no：270具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含与seq id no：179具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：178、seq id no：269或seq id no：270的氨基酸序列的重链。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：179的氨基酸序列的轻链。
[0385]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含重链，所述重链与seq id no：180中所示的重链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链与seq id no：181中所示的轻链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含与seq id no：180具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含与seq id no：181具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：180的氨基酸序列的重链。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：181的氨基酸序列的轻链。
[0386]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含重链，所述重链与seq id no：182、seq id no：271或seq id no：272中所示的重链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链与seq id no：183中所示的轻链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含与seq id no：182、seq id no：271或seq id no：272具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含与seq id no：183具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：182、seq id no：271或seq id no：272的氨基酸序列的重链。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：183的氨基酸序列的轻链。
[0387]
在一些实施方案中，抗tfr抗体是完整抗体(全长抗体)的fab片段、f(ab’)片段或f(ab’)2片段。完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段可通过常规方法(例如，重组或通过使用酶例如木瓜蛋白酶消化全长igg的重链恒定区)来制备。例如，f(ab’)2片段可通过胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化抗体分子来产生，并且fab片段可通过还原f(ab’)2片段的二硫桥来产生。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr1抗体的f(ab’)片段中的重链恒定区包含以下氨基酸序列：
[0388]
[0389]
在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种vh或其任意变体以及与seq id no：184具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含表1中列出的任一种vh或其任意变体以及与seq id no：184相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)的重链恒定区。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含表1列出的任一种vh或其任意变体以及seq id no：184中所示的重链恒定区。
[0390]
表5中提供了本文中所述的抗tfr抗体的f(ab’)氨基酸序列的一些实例。
[0391]
表5.抗tfr f(ab’)的一些实例的重链序列和轻链序列
[0392]
[0393][0394]
*vh/vl序列带有下划线
[0395]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含重链，所述重链与seq id no：185、186、187和273至276中任一个中所示的重链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链与seq id no：179、181和183中任一个中所示的轻链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含与seq id no：185、186、187和273至276中的任一个具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含与seq id no：179、181和183中的任一个具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含seq id no：185、186、187和273至276中任一个的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含seq id no：179、181和183中任一个的氨基酸序列。
[0396]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含重链，所述重链与seq id no：185、seq id no：273或seq id no：274中所示的重链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链与seq id no：179中所示的轻链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含与seq id no：185、seq id no：273或seq id no：274具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含与seq id no：179具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：185、seq id no：273或seq id no：274的氨基酸序列的重链。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：179的氨基酸序列的轻链。
[0397]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含重链，所述重链与seq id no：186中所示的重链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链与seq id no：181中所示的轻链相比包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、10、11、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含与seq id no：186具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含与seq id no：181具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：186的氨基酸序列的重链。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：181的氨基酸序列的轻链。
[0398]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr抗体包含重链，所述重链与seq id no：187、seq id no：275或seq id no：276中所示的重链相比，包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。作为替代或补充(例如，补充)，本公开内容的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链与seq id no：183中所示的轻链相比，包含不超过25个氨基酸变异(例如，不超过25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸变异)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含重链，所述重链包含与seq id no：187、seq id no：275或seq id no：276具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含轻链，所述轻链包含与seq id no：183具有至少75％(例如，75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：187、seq id no：275或seq id no：276的氨基酸序列的重链。作为替代或补充(例如，补充)，本文中所述的抗tfr抗体包含含有seq id no：183的氨基酸序列的轻链。
[0399]
本文中所述的抗tfr受体抗体可以是任何抗体形式，包括但不限于完整(即全长)抗体、其抗原结合片段(例如fab、f(ab’)、f(ab’)2、fv)、单链抗体、双特异性抗体或纳米抗体。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体是scfv。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体是scfv-fab(例如，与恒定区的一部分融合的scfv)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr受体抗体是与恒定区(例如，seq id no：175或seq id no：176中所示的人igg1恒定区或其一部分，例如fc部分)在c端或n端融合的scfv。
[0400]
在一些实施方案中，可在残基不太可能参与与靶抗原(例如，转铁蛋白受体)相互作用的位置(例如，如基于晶体结构确定的)处将保守突变引入抗体序列(例如，cdr或框架序列)中。在一些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸替换)引入本文中所述的抗tfr抗体的fc区(例如，在ch2结构域(人igg1的第231至340位残基)和/或(例如，和)ch3结构域(人igg1的第341至447位残基)和/或(例如，和)铰链区中，根据kabat编号系统(例如，kabat中的eu索引)编号)，以改变抗体的一种或更多种功能特性，例如血清半衰期、补体固定、fc受体结合和/或(例如，和)抗原依赖性细胞毒性。
[0401]
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸替换)引入fc区(ch1结构域)的铰链区中，使得铰链区中的半胱氨酸残基的数目改变(例如，增加或减少)，如例如美国专利no.5,677,425中所述。可改变ch1结构域的铰链区中半胱氨酸残基的数目，例如以促进轻链和重链的组装，或改变(例如，提高或降低)抗体的稳定性或促进接头缀合。
[0402]
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸替换)引入本文中所述的肌肉靶向抗体的fc区(例如，在ch2结构域(人igg1的第231至340位残基)和/或(例如，和)ch3结构域(人igg1的第341至447位残基)和/或(例如，和)铰链区中，根据kabat编号系统(例如，kabat中的eu索引)编号)，以提高或降低抗体对效应细胞表面上fc受体(例如，激活的fc受体)的亲和力。降低或提高抗体对fc受体的亲和力的抗体fc区中突变以及将这样的突变引入fc受体或其片段的技术是本领域技术人员已知的。可被进行以改变抗体对fc受体的亲和力的抗体fc受体中突变的一些实例描述于以下中：例如smith p et al.，(2012)pnas 109：6181-6186，美国专利no.6,737,056，以及国际公开no.wo 02/060919、wo 98/23289、和wo 97/34631，其通过引用并入本文。
[0403]
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，替换、插入或缺失)引入igg恒定结构域或其fcrn结合片段(优选地，fc或铰链-fc结构域片段)中以改变(例如，降低或提高)抗体在体内的半衰期。参见例如国际公开no.wo 02/060919、wo 98/23289和wo 97/34631，以及美国专利no.5,869,046、6,121,022、6,277,375和6,165,745，例如将改变(例如，降低或提高)抗体在体内的半衰期的突变。
[0404]
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，替换、插入或缺失)引入igg恒定结构域或其fcrn结合片段(优选地，fc或铰链-fc结构域片段)中以降低体内抗tfr抗体的半衰期。在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，替换、插入或缺失)引入igg恒定结构域或其fcrn结合片段(优选地，fc或铰链-fc结构域片段)中以提高抗体在体内的半衰期。在一些实施方案中，抗体可在第二恒定(ch2)结构域(人igg1的第231至340位残基)和/或(例如，和)第三恒定(ch3)结构域(人igg1的第341至447位残基)(根据kabat中的eu索引(kabat e a et al.，(1991)同上)编号)中具有一个或更多个氨基酸突变(例如，替换)。在一些实施方案中，本文中所述的抗体的igg1的恒定区包含在第252位处的甲硫氨酸(m)至酪氨酸(y)替换，在第254位处的丝氨酸(s)至苏氨酸(t)替换，以及在第256位处的苏氨酸(t)至谷氨酸(e)替换，所述位置根据kabat中的eu索引编号。参见美国专利no.7,658,921，其通过引用并入本文。这种类型的突变体igg(称为“yte突变体”)已显示出与同一抗体的野生型形式相比半衰期提高4倍(参见dall
′
acqua w f et al.，(2006)j biol chem 281：23514-24)。在一些实施方案中，抗体包含igg恒定结构域，该结构域包含在第251至257、285至290、308至314、385至389和428至436位处的氨基酸残基的一个、两个、三个或更多个氨基酸替换，所述位置根据kabat中的eu索引编号。
[0405]
在一些实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸替换引入igg恒定结构域fc区中，以改变抗tfr抗体的效应子功能。对其的亲和力被改变的效应配体可以是例如fc受体或补体的c1组分。该方法在美国专利no.5,624,821和5,648,260中有更详细的描述。在一些实施方案中，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他方式)可降低循环抗体的fc受体结合，从而提高肿瘤定位。对于使恒定结构域缺失或失活从而提高肿瘤定位的突变的描述，参见例如美国专利no.5,585,097和8,591,886。在一些实施方案中，可将一个或更多个氨基酸替换引入本文中所述的抗体的fc区中，以去除fc区上潜在的糖基化位点，这可降低fc受体结合(参见，例如shields r l et al.，(2001)j biol chem 276：6591-604)。
[0406]
在一些实施方案中，可将本文中所述的抗tfr抗体的恒定区中的一个或更多个氨基替换为不同的氨基酸残基，使得抗体具有改变的c1q结合和/或(例如，和)降低或消除的补体依赖性细胞毒性(cdc)。这种方法在美国专利no.6,194,551(idusogie et al)中有更详细的描述。在一些实施方案中，改变本文中所述的抗体的ch2结构域的n端区域中的一个或更多个氨基酸残基，从而改变抗体的固定补体的能力。这种方法在国际公开no.wo 94/29351中有进一步描述。在一些实施方案中，对本文中所述的抗体的fc区进行修饰以提高抗体的介导抗体依赖性细胞毒性(adcc)的能力和/或(例如，和)提高抗体对fcγ受体的亲和力。这种方法在国际公开no.wo 00/42072中有进一步描述。
[0407]
在一些实施方案中，本文中提供的抗体的重链和/或(例如，和)轻链可变结构域序列可用于产生例如cdr接枝、嵌合、人源化或复合的人抗体或抗原结合片段，如本文中其他地方所述。如本领域普通技术人员所理解的，来源于本文中提供的任何抗体的任何变体
(cdr接枝、嵌合、人源化或复合的抗体)可用于本文中所述的组合物和方法中，并将保持特异性结合转铁蛋白受体的能力，从而使得相对于其所来源原始抗体，变体(cdr接枝、嵌合、人源化或复合的抗体)具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的与转铁蛋白受体的结合。
[0408]
在一些实施方案中，本文中提供的抗体包含赋予抗体以期望性质的突变。例如，为了避免归因于已知与天然igg4mab发生的fab臂交换而引起的潜在并发症，本文中提供的抗体可包含稳定性
‘
adair’突变(angal s.，et al.，“a single amino acid substitution abolishes the heterogeneity of chimeric mouse/human(igg4)antibody，”mol immunol 30，105-108；1993)，其中第228位(eu编号，根据kabat编号为第241位残基)丝氨酸转化为脯氨酸，从而产生了igg1样铰链序列。因此，任何抗体都可包含稳定性
‘
adair’突变。
[0409]
在一些实施方案中，对抗体进行修饰，例如，通过糖基化、磷酸化、sumo化和/或(例如，和)甲基化进行修饰。在一些实施方案中，抗体是与一个或更多个糖或碳水化合物分子缀合的糖基化抗体。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子通过n-糖基化、o-糖基化、c-糖基化、糖基磷脂酰肌醇化(gpi锚定附着)和/或(例如，和)磷酸糖基化与抗体缀合。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是单糖、二糖、寡糖或聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子是支化的寡糖或支化的聚糖。在一些实施方案中，一个或更多个糖或碳水化合物分子包含甘露糖单元、葡萄糖单元、n-乙酰葡糖胺单元、n-乙酰半乳糖胺单元、半乳糖单元、岩藻糖单元或磷脂单元。在一些实施方案中，存在约1至10、约1至5、约5至10、约1至4、约1至3或约2个糖分子。在一些实施方案中，糖基化抗体是完全或部分糖基化的。在一些实施方案中，通过化学反应或通过酶促手段使抗体糖基化。在一些实施方案中，抗体在体外或细胞内被糖基化，其可任选地缺少n-或o-糖基化途径中的酶，例如糖基转移酶。在一些实施方案中，用糖或碳水化合物分子对抗体进行官能化，如2014年5月1日公开的标题为“modified antibody，antibody-conjugate and process for the preparation thereof”的国际专利申请公开wo2014065661中所述。
[0410]
在一些实施方案中，本文中所述的任一种抗tfr1抗体可在重链序列和/或(例如，和)轻链序列中包含信号肽(例如，n端信号肽)。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr1抗体包含vh和vl序列中的任一种、igg重链序列和轻链序列中的任一种、或者本文中所述的f(ab’)重链序列和轻链序列中的任一种，并且还包含信号肽(例如，n端信号肽)。在一些实施方案中，信号肽包含氨基酸序列mgwsciilflvatatgvhs(seq id no：232)。
[0411]
在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr是人源化抗体，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr是igg1κ，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区。在一些实施方案中，本公开内容的抗tfr是igg1κ的fab’片段，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区。
[0412]
在一些实施方案中，本文中提供的抗体可具有一种或更多种翻译后修饰。在一些实施方案中，n端环化，也称为焦谷氨酸形成(pyro-glu)，可在产生期间在抗体的n端谷氨酸(glu)和/或谷氨酰胺(gln)残基处发生。在一些实施方案中，焦谷氨酸形成发生在重链序列中。在一些实施方案中，焦谷氨酸形成发生在轻链序列中。
[0413]
iii.抗tfr抗体的制备
[0414]
本文中所述的能够结合tfr的抗体可通过本领域已知的任何方法制备。参见，例如，harlow and lane，(1998)antibodies：a laboratory manual，cold spring harbor laboratory，new york。
[0415]
在一些实施方案中，可通过常规的杂交瘤技术来制备对靶抗原(例如，tfr)具有特异性的抗体。任选地与载体蛋白例如klh偶联的全长靶抗原或其片段可用于对进行宿主动物免疫接种以产生与该抗原结合的抗体。如本文中进一步描述的，宿主动物的免疫接种的途径和方案通常与用于抗体刺激和产生的已建立的和常规的技术保持一致。用于产生小鼠抗体、人源化抗体和人抗体的一般技术是本领域已知的并且在本文中进行了描述。考虑了任何哺乳动物对象(包括人)或从其来源的产生抗体的细胞均可被操作以用作产生哺乳动物(包括人)杂交瘤细胞系的基础。通常来说，向宿主动物腹膜内、肌内、经口、皮下、足底内(intraplantar)和/或(例如，和)皮内接种一定量的免疫原(包括如本文中所述的)。
[0416]
如果期望的话，可对目的(例如，通过杂交瘤产生的)抗体(单克隆的或多克隆的)进行测序，并随后可将多核苷酸序列克隆到用于表达或增殖的载体中。编码目的抗体的序列可保持在宿主细胞中的载体中，并随后可扩增宿主细胞并冷冻以供将来使用。在一个替代方案中，多核苷酸序列可被用于遗传操作以使抗体“人源化”或改善抗体的亲和力(亲和力成熟)或其他特征。例如，如果抗体用于人的临床试验和治疗，则可将恒定区工程化成更类似于人恒定区以避免免疫应答。可期望对抗体序列进行遗传操作以获得对靶抗原更大的亲和力和更大的效力。对本领域技术人员明显的是，可对抗体进行一种或更多种多核苷酸改变并且仍保持其对靶抗原的结合特异性。
[0417]
在另一些实施方案中，可通过使用已被工程化以表达特定人免疫球蛋白的市售小鼠来获得完全人抗体。被设计以产生更期望的(例如，完全人抗体)或更稳健的免疫应答的转基因动物也可用于产生人源化抗体或人抗体。这样的技术的一些实例是来自amgen，inc.(fremont，ca)的xenomouser
tm
和来自medarex，inc.(princeton，nj)的humab-mouser
tm
和tc mouse
tm
或来自harbour antibodies bv(holland)的h2l2小鼠。在另一个替代方案中，可通过噬菌体展示或酵母技术重组地制备抗体。参见，例如，美国专利no.5,565,332；5,580,717；5,733,743和6,265,150；以及winter et al.，(1994)annu.rev.immunol.12：433-455。或者，噬菌体展示技术(mccafferty et al.，(1990)nature 348：552-553)可用于由来自未经免疫接种的供体的免疫球蛋白可变(v)结构域基因库体外产生人抗体和抗体片段。
[0418]
完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段可通过常规方法制备。例如，f(ab
′
)2片段可通过抗体分子的胃蛋白酶消化来产生，并且fab片段可通过还原f(ab
′
)2片段的二硫桥来产生。经遗传工程化的抗体，例如人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体，可通过例如常规重组技术来产生。在一个实例中，编码对靶抗原具有特异性的单克隆抗体的dna可使用常规程序容易地分离和测序(例如，通过使用能够特异性结合编码单克隆抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞充当这样的dna的优选来源。一旦分离，dna即可被置入一种或更多种表达载体中，然后将所述载体转染到宿主细胞(例如在其他情况下不产生免疫球蛋白的大肠杆菌(e.coli)细胞、猿猴cos细胞、中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary，cho)细胞、人hek293细胞或骨髓瘤细胞)中，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。参见例如pct公开no.wo 87/04462。然后可修饰dna，例如，通过替换人重链和轻链恒定结构域的编码序列来代替同源鼠序列，morrison et al.，(1984)
proc.nat.acad.sci.81：6851，或通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分共价连接至免疫球蛋白编码序列。以这种方式，可以制备具有对靶抗原的结合特异性的经遗传工程化的抗体，例如“嵌合”或“杂交”抗体。
[0419]
可通过重组技术通过连接编码重链可变区的核苷酸序列和编码轻链可变区的核苷酸序列来制备单链抗体。优选地，在两个可变区之间并入柔性接头。
[0420]
或者，所描述的用于产生单链抗体的技术(美国专利no.4,946,778和4,704,692)可进行调整以产生噬菌体或酵母scfv文库，并且可遵循常规程序从文库中鉴定出对tfr具有特异性的scfv克隆。可对阳性克隆进行进一步筛选，以鉴定出具有高tfr结合亲和力的那些。
[0421]
遵循本领域已知的和本文中所述的方法获得的抗体可使用本领域公知的方法来表征。例如，一种方法是鉴定与抗原结合的表位，或“表位作图”。本领域已知有许多方法用于对蛋白质上表位的位置进行作图和表征，包括解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争测定、基因片段表达测定和基于合成肽的测定，如例如在harlow and lane，using antibodies，a laboratory manual，cold spring harbor laboratory press，cold spring harbor，n.y.，1999的第11章中所述。在一个实例中，可使用与蛋白水解和质谱偶联的h/d-ex(氢氘交换)来完成表位作图。在另一个实例中，表位作图可用于确定与抗体结合的序列。表位可以是线性表位，即包含在单个氨基酸区段中，或者可以是通过氨基酸的三维相互作用形成的构象表位，其可以不一定包含在单个区段中(一级结构线性序列)。可分离或合成(例如，重组地分离或合成)不同长度(例如，至少4至6个氨基酸长)的肽，并将其用于与抗体的结合测定。在另一个实例中，与抗体结合的表位可在系统筛选中通过使用来源于靶抗原序列的重叠肽并确定抗体的结合来确定。根据基因片段表达测定，将编码靶抗原的开放读码框随机地或通过特定的遗传构建进行片段化，并确定所表达的抗原片段与受试抗体的反应性。例如，基因片段可通过pcr产生，并随后转录并在存在放射性氨基酸的情况下在体外翻译成蛋白质。然后通过免疫沉淀和凝胶电泳来确定抗体与经放射性标记的抗原片段的结合。某些表位还可通过使用展示在噬菌体颗粒表面上的大的随机肽序列文库(噬菌体文库)来鉴定。或者，可在简单结合测定中测试所确定的重叠肽片段文库与受试抗体的结合。在另一个实例中，可进行抗原结合结构域的诱变、结构域交换实验和丙氨酸扫描诱变来鉴定对于表位结合而言所需、足够和/或(例如，和)必需的残基。或者，可使用已知与相同抗原结合的其他抗体进行竞争测定，以确定抗体是否与其他抗体结合相同的表位。竞争测定是本领域技术人员公知的。
[0422]
在一些实例中，通过如下例示的重组技术制备抗tfr抗体。可将编码如本文中所述的抗tfr抗体的重链和轻链的核酸克隆到一个表达载体中，每个核苷酸序列与合适的启动子可操作连接。在一个实例中，编码所述重链和轻链的每个核苷酸序列与不同的启动子可操作连接。或者，编码所述重链和轻链的核苷酸序列可与单个启动子可操作连接，使得重链和轻链二者均由相同的启动子表达。必要时，可在重链编码序列和轻链编码序列之间插入内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site，ires)。
[0423]
在一些实例中，将编码抗体的两条链的核苷酸序列克隆到两种载体中，所述两种载体可被引入到相同或不同的细胞中。当两条链在不同细胞中表达时，可将其各自从表达它们的宿主细胞分离，并且可将所分离的重链和轻链混合并在允许形成抗体的合适条件下
孵育。
[0424]
一般而言，可使用本领域已知的方法将编码抗体的一条链或所有链的核酸序列克隆到与合适的启动子可操作连接的合适表达载体中。例如，可在合适的条件下使核苷酸序列和载体与限制性酶接触，以在每个分子上产生可彼此配对并用连接酶连接在一起的互补末端。或者，可将合成核酸接头与基因的末端连接。这些合成接头包含对应于载体中特定限制性位点的核酸序列。表达载体/启动子的选择将取决于用于产生抗体的宿主细胞的类型。
[0425]
多种启动子可用于表达本文中所述的抗体，包括但不限于巨细胞病毒(cmv)中间早期启动子、病毒ltr(例如，劳斯肉瘤(rous sarcoma)病毒ltr、hiv-ltr、htlv-1ltr)、猿猴病毒40(sv40)早期启动子、大肠杆菌lac uv启动子和单纯疱疹tk病毒启动子。
[0426]
还可使用可调节启动子。这样的可调节启动子包括：使用来自大肠杆菌的lac阻遏物作为转录调节物来调节来自带有lac操纵子的哺乳动物细胞启动子的转录的那些[brown，m.et al.，cell，49：603-612(1987)]，使用四环素阻遏物(tetracycline repressor，tetr)的那些[gossen，m.，and bujard，h.，proc.natl.acad.sci.usa 89：5547-555115(1992)；yao，f.et al.，human gene therapy，9：1939-1950(1998)；shockelt，p.，et al.，proc.natl.acad.sci.usa，92：6522-6526(1995)]。另一些系统包括：fk506二聚体，使用astradiol的vp16或p65，ru486，二酚米乐甾酮(diphenol murislerone)或雷帕霉素。可诱导系统可从invitrogen、clontech和ariad等获得。
[0427]
可使用包含具有操纵子的阻遏物的可调节启动子。在一个实施方案中，来自大肠杆菌的lac阻遏物可作为转录调节物发挥作用来调节来自带有lac操纵子的哺乳动物细胞启动子的转录[m.brown et al.，cell，49：603-612(1987)]；gossen and bujard(1992)；[m.gossen et al.，natl.acad.sci.usa，89：5547-5551(1992)]将四环素阻遏物(tetr)与转录激活物(vp 16)组合以产生tetr-哺乳动物细胞转录激活物融合蛋白tta(tetr-vp 16)，其中teto带有来源于人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，hcmv)启动子的最小启动子，以产生tetr-tet操纵子系统来控制哺乳动物细胞中的基因表达。在一个实施方案中，使用四环素可诱导开关。当四环素操纵子适当地位于cmvie启动子的tata元件下游时，单独的四环素阻遏物(tetr)而不是tetr-哺乳动物细胞转录因子融合衍生物可作为强效反式调节物发挥作用来调节哺乳动物细胞中的基因表达(yao et al.，human gene therapy)。这种四环素可诱导开关的一个特别的优点是它不需要使用在一些情况下对细胞可能有毒性的四环素阻遏物-哺乳动物细胞反式激活子或阻遏物融合蛋白(gossen et al.，natl.acad.sci.usa，89：5547-5551(1992)；shockett et al.，proc.natl.acad.sci.usa，92：6522-6526(1995))，以实现其可调节的作用。
[0428]
另外，载体可包含例如以下中的一些或全部：选择标志物基因，例如用于在哺乳动物细胞中选择稳定或瞬时转染子的新霉素基因；用于高水平转录的来自人cmv的即早期基因的增强子/启动子序列；用于mrna稳定性的来自sv40的转录终止和rna加工信号；用于适当的附加体复制的sv40多瘤复制起点和cole1；内部核糖体结合位点(ires)、多功能多克隆位点；以及用于有义和反义rna的体外转录的t7和sp6rna启动子。合适载体和用于产生含有转基因的载体的方法是本领域公知的并且是可获得的。可用于实践本文中所述方法的多腺苷酸化信号的一些实例包括但不限于人胶原蛋白i多腺苷酸化信号、人胶原蛋白ii多腺苷酸化信号和sv40多腺苷酸化信号。
[0429]
可将包含编码任何抗体的核酸的一种或更多种载体(例如，表达载体)引入到合适的宿主细胞中以用于产生抗体。可在适合于表达抗体或其任何多肽链的条件下培养宿主细胞。这样的抗体或其多肽链可通过常规方法(例如亲和纯化)由所培养细胞(例如，从所述细胞或培养上清液)回收。如果必要的话，可在合适的条件下将抗体的多肽链孵育合适的时间段，从而允许产生抗体。
[0430]
在一些实施方案中，用于制备本文中所述抗体的方法涉及编码抗tfr抗体的重链和轻链二者的重组表达载体，其也如本文中所述。可通过常规方法，例如磷酸钙介导的转染，将重组表达载体引入到合适的宿主细胞(例如，dhfr-cho细胞)中。可选择阳性转化体宿主细胞并在允许表达形成抗体的两条多肽链的合适条件下培养，所述多肽链可从细胞或从培养基回收。必要时，可在允许形成抗体的适合的条件下孵育从宿主细胞回收的两条链。在一些实施方案中，用于表达本文中所述抗tfr抗体的宿主细胞是cho-s细胞(例如，thermofisher catalog# r80007)。
[0431]
在一个实例中，提供了两种重组表达载体，一种编码抗tfr抗体的重链，并且另一种编码抗tfr抗体的轻链。这两种重组表达载体均可通过常规方法例如磷酸钙介导的转染引入到合适的宿主细胞(例如，dhfr-cho细胞)中。
[0432]
或者，可将每种表达载体引入到合适的宿主细胞中。可选择阳性转化体并在允许表达抗体的多肽链的合适条件下培养。当将两种表达载体引入到相同的宿主细胞中时，可从宿主细胞或从培养基回收在其中产生的抗体。如果必要的话，可从宿主细胞或从培养基回收多肽链，并随后在允许形成抗体的合适条件下孵育。当将两种表达载体引入到不同的宿主细胞中时，其各自可从相应的宿主细胞或从相应的培养基回收。然后可在合适的条件下孵育两条多肽链以形成抗体。
[0433]
标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞以及从培养基回收抗体。例如，可用蛋白a或蛋白g偶联基质通过亲和色谱分离一些抗体。
[0434]
编码本文中所述的抗tfr抗体的重链、轻链或这二者的任何核酸(例如，如表6中所提供的)、包含其的载体(例如，表达载体)；和包含所述载体的宿主细胞在本公开内容的范围内。
[0435]
表6.编码表1中列出的抗tfr抗体的vh/vl的核酸序列
[0436]
[0437]
[0438]
[0439]
[0440]
[0441][0442]
在一些实施方案中，抗tfr抗体是人源化抗体，其包含vh和vl，所述vh包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的人框架区，所述vl包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的人框架区，其中所述抗体是通过重组dna技术在中国仓鼠卵巢(cho)细胞悬浮培养物中、任选地在cho-k1细胞(例如，来源于欧洲动物细胞培养物保藏中心(european collection of animal cell culture)的cho-k1细胞，目录号85051005)悬浮培养物中产生的。
[0443]
在一些实施方案中，抗tfr抗体是igg1κ，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区，其中所述抗体是通过重组dna技术在中国仓鼠卵巢(cho)细胞悬浮培养物中、任选地在cho-k1细胞(例如，来源于欧洲动物细胞培养物保藏中心的cho-k1细胞，目录号85051005)悬浮培养物中产生的。
[0444]
在一些实施方案中，抗tfr抗体是igg1κ的fab
′
片段，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区，其中所述抗体是通过重组dna技术在中国仓鼠卵巢(cho)细胞悬浮培养物中、任选地在cho-k1细胞(例如，来源于欧洲动物细胞
培养物保藏中心的cho-k1细胞，目录号85051005)悬浮培养物中产生的。
[0445]
iv.复合物
[0446]
在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体可用于将分子载荷递送至靶细胞或靶组织(例如，表达tfr的细胞或组织)。因此，本公开内容的一些方面提供了包含本文中所述的任一种tfr抗体(例如，如表4和表5中提供的igg或fab形式的3-a4、3-m12或5-h12，及其变体(例如，人源化变体)与分子载荷的复合物。本文中所述的复合物可用于多种应用，例如诊断或治疗应用。
[0447]
在一些实施方案中，复合物包含与寡核苷酸(例如，反义寡核苷酸)共价连接的抗tfr抗体。在一些实施方案中，本文中所述的复合物用于调节至少一种基因、蛋白质和/或(例如，和)核酸的活性或功能。在一些实施方案中，与复合物一起存在的分子载荷负责调节基因、蛋白质、和/或(例如，和)核酸。分子载荷可以是小分子、蛋白质、核酸、寡核苷酸或能够调节细胞中的基因、蛋白质和/或(例如，和)核酸的活性或功能的任何分子实体。在一些实施方案中，分子载荷是靶向肌细胞中的疾病相关重复的寡核苷酸。
[0448]
a.分子载荷
[0449]
本公开内容的一些方面提供了例如，用于调节生物学结局，例如，dna序列的转录、蛋白质的表达或蛋白质的活性的分子载荷，其可与本文中所述的任一种抗tfr抗体连接。在一些实施方案中，这样的分子载荷能够靶向肌细胞，例如在通过所连接的抗tfr抗体递送至肌细胞之后通过与肌细胞中的核酸或蛋白质特异性结合。应理解，根据本公开内容可使用多种类型的分子载荷。例如，分子载荷可包含以下或由以下组成：寡核苷酸(例如，反义寡核苷酸)、肽(例如，结合肌细胞中与疾病相关的核酸或蛋白质的肽)、蛋白质(例如，结合肌细胞中与疾病相关的核酸或蛋白质的蛋白质)或小分子(例如，调节肌细胞中与疾病相关的核酸或蛋白质之功能的小分子)。
[0450]
在一些实施方案中，分子载荷是包含具有表7中提供的基因之互补区的链的寡核苷酸。
[0451]
表7.肌肉疾病和相应基因的列表。
[0452]
[0453]
[0454][0455][0456]
*所引用参考文献的内容通过引用整体并入本文。
[0457]
在一些实施方案中，分子载荷是用于治疗神经系统病症的药剂。本文中使用的“神经系统病症”是指影响cns和/或(例如，和)在cns中具有致病源(etiology)的疾病或病症。cns疾病或病症的一些实例包括但不限于神经病、淀粉样变性、癌症、眼疾病或病症、病毒感染或微生物感染、炎症、局部缺血、神经退行性疾病、癫痫、行为障碍和溶酶体贮积病。出于本技术的目的，cns将被理解为包括眼，其通常通过血-视网膜屏障与身体的其余部分隔离。神经系统病症的一些具体实例包括但不限于神经退行性疾病(包括但不限于路易体病(lewy body disease)、脊髓灰质炎后综合征(postpoliomyelitis syndrome)、夏伊-德拉格综合征(shy-draeger syndrome)、橄榄体脑桥小脑萎缩(olivopontocerebellar atrophy)、帕金森病(parkinson
′
s disease)、多系统萎缩(multiple system atrophy)、纹状体黑质变性(striatonigral degeneration)、tau蛋白病(tauopathy)(包括但不限于阿尔茨海默病(alzheimer disease)和核上性麻痹(supranuclear palsy))、朊病毒病(包括但不限于牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy)、羊瘙痒病(scrapie)、克罗伊茨费尔特-雅各布综合征(creutzfeldt-jakob syndrome)、库鲁病(kuru)、格斯特曼-施特劳斯勒尔-沙因克尔病(gerstmann-straussler-scheinker disease)、慢性消耗病(chronic wasting disease)和致死性家族型失眠症(fatal familial insomnia))、延髓性麻痹(bulbar palsy)、运动神经元病和神经系统异变性病症(包括但不限于卡纳万病(canavan disease)、亨廷顿病(huntington
′
s disease)、神经元蜡样质脂褐质沉积症(neuronal ceroid-lipofuscinosis)、亚历山大病(alexander
′
s disease)、图雷特综合征(tourette
′
s syndrome)、menkes捻转毛综合征(menkes kinky hair syndrome)、科凯恩综合征(cockayne syndrome)、哈勒沃登-施帕茨综合征(halervorden-spatz syndrome)、拉福拉病(lafora disease)、雷特综合征(rett syndrome)、肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration)、莱施-奈恩综合征(lesch-nyhan syndrome)和unverricht-lundborg综合征(unverricht-lundborg syndrome))、痴呆(包括但不限于皮克病(pick
′
s disease)和脊髓小脑共济失调(spinocerebellar ataxia))、癌症(例如，cns的癌症，包括由身体其他部位的癌症引起的脑转移)。在表8中提供了可与本文中所述的任一种抗tfr抗体缀合的神经系统病症药物以及所述药物可治疗的相应病症的一些非限制性实例。
[0458]
表8.神经系统病症药物和所治疗病症的一些实例
[0459][0460]
在一些实施方案中，至少一个(例如，至少2、至少3、至少4、至少5、至少10个)分子载荷(例如，寡核苷酸)与本文中所述的任一种抗tfr连接。在一些实施方案中，与抗tfr抗体连接的所有分子载荷是相同的，例如靶向同一基因。在一些实施方案中，与抗tfr抗体连接的所有分子载荷是不同的，例如分子载荷可靶向相同靶基因的不同部分，或分子载荷可靶向至少两种不同的靶基因。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体可与一些相同的分子载荷和一些不同的分子载荷连接。
[0461]
本公开内容还提供了包含多种复合物的组合物，其中复合物的至少80％(例如，至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)包含与相同数目的分子载荷(例如，寡核苷酸)连接的抗tfr抗体。
[0462]
本文中另外详细描述了示例性分子载荷，然而，应理解，本文中提供的示例性分子载荷并不意味着是限制性的。
[0463]
i.寡核苷酸
[0464]
如本文中所述，任何合适的寡核苷酸均可用作分子载荷。在一些实施方案中，寡核苷酸可被设计为引起mrna的降解(例如，寡核苷酸可以是引起降解的间隔聚体、sirna、核酶
或适配体)。在一些实施方案中，寡核苷酸可被设计为阻断mrna的翻译(例如，寡核苷酸可以是阻断翻译的混合聚体、sirna或适配体)。在一些实施方案中，寡核苷酸可被设计为引起mrna的降解和阻断mrna的翻译。在一些实施方案中，寡核苷酸可以是用于指导酶(例如，基因编辑酶)活性的指导核酸(例如，指导rna)。本文中提供了寡核苷酸的另一些实例。应理解，在一些实施方案中，可以通过将功能序列(例如，反义链序列)从一种格式并入另一种格式来使一种格式的寡核苷酸(例如，反义寡核苷酸)适当地适应于另一种格式(例如，sirna寡核苷酸)。
[0465]
在一些实施方案中，寡核苷酸可包含表7中提供的靶基因的互补区。
[0466]
在一些实施方案中，寡核苷酸可靶向lncrna或mrna，例如用于降解。在一些实施方案中，寡核苷酸可靶向编码参与错配修复途径的蛋白质(例如，msh2、mutlα、mutsβ、mutlα)的核酸，例如用于降解。参与错配修复途径的蛋白质(其中编码这样的蛋白质的mrna可被本文中所述的寡核苷酸靶向)的一些非限制性实例描述于iyer，r.r.et al.，“dna triplet repeat expansion and mismatch repair”annu rev biochem.2015；84：199-226.；和schmidt m.h.and pearson c.e.，“disease-associated repeat instability and mismatch repair”dna repair(amst).2016 feb；38：117-26中。
[0467]
在一些实施方案中，任一种寡核苷酸可以是盐形式，例如如钠盐、钾盐或镁盐。
[0468]
在一些实施方案中，本文中所述的任一种寡核苷酸的5’或3’核苷(例如，末端核苷)任选地通过间隔基(spacer)与胺基缀合。在一些实施方案中，间隔基包含脂族部分。在一些实施方案中，间隔基包含聚乙二醇部分。在一些实施方案中，磷酸二酯键联存在于间隔基与寡核苷酸的5’或3’核苷之间。在一些实施方案中，本文中所述的任何寡核苷酸的5’或3’核苷(例如，末端核苷)与间隔基缀合，所述间隔基是经取代或未经取代的脂族、经取代或未经取代的杂脂族、经取代或未经取代的亚碳环基、经取代或未经取代的亚杂环基、经取代或未经取代的亚芳基、经取代或未经取代的亚杂芳基、-o-，-n(ra)-，-s-，-c(＝o)-，-c(＝o)o-，-c(＝o)nr
a-，-nrac(＝o)-，-nrac(＝o)r
a-，-c(＝o)r
a-，-nrac(＝o)o-，-nrac(＝o)n(ra)-，-oc(＝o)-，-oc(＝o)o-，-oc(＝o)n(ra)-，-s(o)2nr
a-，-nras(o)
2-，或其组合；每个ra独立地是氢或经取代或未经取代的烷基。在某些实施方案中，间隔基是经取代或未经取代的亚烷基、经取代或未经取代的亚杂环基、经取代或未经取代的亚杂芳基、-o-、-n(ra)-或-c(＝o)n(ra)2，或其组合。
[0469]
在一些实施方案中，本文中所述的任一种寡核苷酸的5’或3’核苷与式-nh
2-(ch2)
n-的化合物缀合，其中n是1至12的整数。在一些实施方案中，n是6、7、8、9、10、11或12。在一些实施方案中，磷酸二酯键联存在于式nh
2-(ch2)
n-的化合物与寡核苷酸的5’或3’核苷之间。在一些实施方案中，式nh
2-(ch2)
6-的化合物通过6-氨基-1-己醇(nh
2-(ch2)
6-oh)与寡核苷酸的5’磷酸之间的反应与寡核苷酸缀合。
[0470]
在一些实施方案中，寡核苷酸例如通过胺基与靶向剂，例如肌肉靶向剂例如抗tfr抗体缀合。
[0471]
a.寡核苷酸大小/序列
[0472]
寡核苷酸可具有多种不同的长度，例如，取决于格式。在一些实施方案中，寡核苷酸的长度为7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、75或更多个核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸的长度为8至50个核苷
酸、长度为8至40个核苷酸、长度为8至30个核苷酸、长度为10至15个核苷酸、长度为10至20个核苷酸、长度为15至25个核苷酸、长度为21至23个核苷酸，等。
[0473]
在一些实施方案中，当寡核苷酸的互补核酸序列与靶分子(例如，mrna)的结合干扰靶标(例如，mrna)的正常功能导致活性(例如，抑制翻译)或表达(例如，降解靶mrna)丧失并且具有足够程度的互补性以避免在以下情况下的该序列与非靶标序列的非特异性结合时，出于本公开内容的目的，寡核苷酸的互补核酸序列与靶核酸可特异性地杂交或对靶核酸具有特异性：在其中期望避免非特异性结合的条件下，例如在生理条件下在体内测定或治疗性处理的情况下，以及在体外测定的情况下，在其中在合适的严格条件下进行测定的条件下。因此，在一些实施方案中，寡核苷酸可与靶核酸的连续核苷酸至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％互补。在一些实施方案中，互补核苷酸序列不需要与其所靶向的100％互补来与靶核酸可特异性地杂交或对靶核酸具有特异性。
[0474]
在一些实施方案中，寡核苷酸包含靶核酸之互补区，所述互补区的长度为8至15、8至30、8至40或10至50、或5至50或5至40个核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸与靶核酸的互补区的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个核苷酸。在一些实施方案中，互补区与靶核酸的至少8个连续核苷酸互补。在一些实施方案中，与靶核酸的连续核苷酸部分相比，寡核苷酸可包含1、2或3个碱基错配。在一些实施方案中，寡核苷酸在15个碱基上可具有至多3个错配，或在10个碱基上具有至多2个错配。
[0475]
在一些实施方案中，寡核苷酸与本文中提供的任一种寡核苷酸的靶序列互补(例如，至少85％、至少90％、至少95％或100％)。在一些实施方案中，这样的靶序列与本文中提供的寡核苷酸100％互补。
[0476]
在一些实施方案中，本文中提供的任一种寡核苷酸中的任何一个或更多个胸腺嘧啶碱基(t)可任选地是尿嘧啶碱基(u)，和/或者任何一个或更多个u可任选地是t。
[0477]
b.寡核苷酸修饰：
[0478]
本文中所述的寡核苷酸可被修饰，例如，包含经修饰糖部分、经修饰核苷间键联、经修饰核苷酸和/或(例如，和)其组合。另外，在一些实施方案中，寡核苷酸可表现出以下特性中的一种或更多种：不介导选择性剪接；不是免疫刺激性的；具有核酸酶抗性；与未经修饰寡核苷酸相比具有提高的细胞摄取；对细胞或哺乳动物无毒；提高了在细胞中内部排出内体；使tlr刺激最小化；或避免模式识别受体。本文中所述的寡核苷酸的任何经修饰的化学组成(chemistry)或形式可彼此组合。例如，同一寡核苷酸内可包含一种、两种、三种、四种、五种或更多种不同类型的修饰。
[0479]
在一些实施方案中，可使用某些核苷酸修饰，所述核苷酸修饰使并入它们的寡核苷酸比天然寡脱氧核苷酸或寡核糖核苷酸分子对核酸酶消化更具抗性；这些经修饰寡核苷酸比未经修饰寡核苷酸完整存活更长的时间。经修饰寡核苷酸的一些具体实例包括含有经修饰的主链(backbone)的那些，例如经修饰核苷间键联，例如硫代磷酸酯键联、磷酸三酯键联、甲基膦酸酯键联、短链烷基键联或环烷基糖间键联或短链杂原子键联或杂环糖间键联。因此，本公开内容的寡核苷酸可例如通过并入修饰例如核苷酸修饰而稳定化以抵抗溶核降解。
[0480]
在一些实施方案中，寡核苷酸的长度可以是多至50个或多至100个核苷酸，其中寡核苷酸的2至10、2至15、2至16、2至17、2至18、2至19、2至20、2至25、2至30、2至40、2至45或更多个核苷酸是经修饰核苷酸。寡核苷酸的长度可以是8至30个核苷酸，其中寡核苷酸的2至10、2至15、2至16、2至17、2至18、2至19、2至20、2至25、2至30个核苷酸是经修饰核苷酸。寡核苷酸的长度可以是8至15个核苷酸，其中寡核苷酸的2至4、2至5、2至6、2至7、2至8、2至9、2至10、2至11、2至12、2至13、2至14个核苷酸是经修饰核苷酸。任选地，寡核苷酸可具有除1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个经修饰核苷酸之外的每个核苷酸。寡核苷酸修饰在本文中进一步描述。
[0481]
c.经修饰核苷
[0482]
在一些实施方案中，本文中所述的寡核苷酸包含在糖的2’位置处经修饰的至少一个核苷。在一些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个2
’‑
经修饰核苷。在一些实施方案中，寡核苷酸中的所有核苷均是2
’‑
经修饰核苷。
[0483]
在一些实施方案中，本文中所述的寡核苷酸包含一个或更多个非双环2
’‑
经修饰核苷，例如2
’‑
脱氧、2
’‑
氟(2
’‑
f)、2
’‑
o-甲基(2
’‑
o-me)、2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)、2
’‑
o-氨基丙基(2
’‑
o-ap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基(2
’‑
o-dmaoe)、2
’‑
o-二甲基氨基丙基(2
’‑
o-dmap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基氧基乙基(2
’‑
o-dmaeoe)或2
’‑
o-n-甲基乙酰胺基(2
’‑
o-nma)修饰的核苷。
[0484]
在一些实施方案中，本文中所述的寡核苷酸包含一个或更多个2
’‑4’
双环核苷，其中核糖环包含连接环中的两个原子的桥联部分，例如，通过亚甲基(lna)桥联、亚乙基(ena)桥联或(s)-约束性乙基(cet)桥联将2
’‑
o原子与4
’‑
c原子连接。lna的一些实例描述于国际专利申请公开wo/2008/043753中，其于2008年4月17日公开，并且标题为“rna antagonist compounds for the modulation of pcsk9”，其内容通过引用整体并入本文。ena的一些实例在以下中提供：国际专利公开no.wo 2005/042777，其于2005年5月12日公开，并且标题为“app/ena antisense”；morita et al.，nucleic acid res.，增刊1：241-242，2001；surono et al.，hum.gene ther.，15：749-757，2004；koizumi，curr.opin.mol.ther.，8：144-149，2006以及horie et al.，nucleic acids symp.ser(oxf)，49：171-172，2005；其公开内容通过引用整体并入本文。cet的一些实例在以下中提供：美国专利7,101,993、7,399,845和7,569,686，其各自通过引用整体并入本文。
[0485]
在一些实施方案中，寡核苷酸包含在以下美国专利或专利申请公开之一中公开的经修饰核苷：美国专利7,399,845，其于2008年7月15日授权，并且标题为“6-modified bicyclic nucleic acid analogs”；美国专利7,741,457，其于2010年6月22日授权，并且标题为“6-modified bicyclic nucleic acid analogs”；美国专利8,022,193，其于2011年9月20日授权，并且标题为“6-modified bicyclic nucleic acid analogs”；美国专利7,569,686，其于2009年8月4日授权，并且标题为“compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs”；美国专利7,335,765，其于2008年2月26日授权，并且标题为“novel nucleoside and oligonucleotide analogues”；美国专利7,314,923，其于2008年1月1日授权，并且标题为“novel nucleoside and oligonucleotide analogues”；美国专利7,816,333，其于2010年10月19日授权，并且标题为“oligonucleotide analogues and methods utilizing the same”和美国公开号2011/
z-3’的间隔区y也称为y区、y区段或间隔区段y。在一些实施方案中，间隔区y中的每个核苷是2
’‑
脱氧核糖核苷，并且5’翼区x或3’翼区z均不包含任何2
’‑
脱氧核糖核苷。
[0502]
在一些实施方案中，y区是核苷酸的连续延伸，例如，6个或更多个dna核苷酸的区域，其能够募集rna酶(例如rna酶h)。在一些实施方案中，间隔聚体与靶核酸结合，在该点处rna酶被募集并随后可切割靶核酸。在一些实施方案中，y区5’和3’二者的侧翼是包含高亲和力经修饰核苷，例如1至6个高亲和力经修饰核苷的x和z区。高亲和力经修饰核苷的一些实例包括但不限于2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe、2’o-me、2
’‑
f)或2
’‑4’
双环核苷(例如，lna、cet、ena)。在一些实施方案中，侧翼序列x和z的长度可以是1至20个核苷酸、1至8个核苷酸或1至5个核苷酸。侧翼序列x和z可具有相似长度或不同长度。在一些实施方案中，间隔区段y可以是长度为5至20个核苷酸、5至15个十二个核苷酸或6至10个核苷酸的核苷酸序列。
[0503]
在一些实施方案中，除dna核苷酸之外，间隔聚体寡核苷酸的间隔区可包含已知可被接受用于高效的rna酶h作用的经修饰核苷酸，例如c4
’‑
取代的核苷酸、无环核苷酸和阿拉伯糖(arabino)构型的核苷酸。在一些实施方案中，间隔区包含一个或更多个未经修饰的核苷间。在一些实施方案中，一个或两个侧翼区在至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或更多个核苷酸之间各自独立地包含一个或更多个硫代磷酸酯核苷间键联(例如，硫代磷酸酯核苷间键联或其他键联)。在一些实施方案中，间隔区和两个侧翼区在至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或更多个核苷酸之间各自独立地包含经修饰核苷间键联(例如，硫代磷酸酯核苷间键联或其他键联)。
[0504]
可使用适当的方法产生间隔聚体。教导制备间隔聚体的代表性美国专利、美国专利出版物和pct出版物包括但不限于：美国专利no.5,013,830；5,149,797；5,220,007；5,256,775；5,366,878；5,403,711；5,491,133；5,565,350；5,623,065；5,652,355；5,652,356；5,700,922；5,898,031；7,015,315；7,101,993；7,399,845；7,432,250；7,569,686；7,683,036；7,750,131；8,580,756；9,045,754；9,428,534；9,695,418；10,017,764；10,260,069；9,428,534；8,580,756；美国专利公开no，us20050074801、us20090221685、us20090286969、us20100197762和us20110112170；pct公开no.wo2004069991、wo2005023825、wo2008049085和wo2009090182；以及ep专利no.ep2,149,605，其各自通过引用整体并入本文。
[0505]
在一些实施方案中，间隔聚体的长度为10至40个核苷。例如，间隔聚体的长度可以是10至40、10至35、10至30、10至25、10至20、10至15、15至40、15至35、15至30、15至25、15至20、20至40、20至35、20至30、20至25、25至40、25至35、25至30、30至40、30至35或35至40个核苷。在一些实施方案中，间隔聚体的长度是10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个核苷。
[0506]
在一些实施方案中，间隔聚体中的间隔区y的长度为5至20个核苷。例如，间隔区y的长度可以是5至20、5至15、5至10、10至20、10至15或15至20个核苷。在一些实施方案中，间隔区y的长度是5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷。在一些实施方案中，间隔区y中的每个核苷是2
’‑
脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，间隔区y中的所有核苷均是2
’‑
脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，间隔区y中的一个或更多个核苷是经修饰核苷(例如，2’经修饰核苷，例如本文中所述的那些)。在一些实施方案中，间隔区y中的一个或更
2，3-13-7，7-13-3，4-13-6，6-13-4，5-13-5，1-12-10，10-12-1，2-12-9，9-12-2，3-12-8，8-12-3，4-12-7，7-12-4，5-12-6，6-12-5，4-11-8，8-11-4，5-11-7，7-11-5，6-11-6，1-22-1，1-21-2，2-21-1，1-21-3，3-20-1，2-20-2，1-19-4，4-19-1，2-19-3，3-19-2，1-18-5，2-18-4，4-18-2，3-18-3，1-17-6，6-17-1，2-17-5，5-17-2，3-17-4，4-17-3，1-16-7，7-16-1，2-16-6，6-16-2，3-16-5，5-16-3，4-16-4，1-15-8，8-15-1，2-15-7，7-15-2，3-15-6，6-15-3，4-15-5，5-15-4，2-14-8，8-14-2，3-14-7，7-14-3，4-14-6，6-14-4，5-14-5，3-13-8，8-13-3，4-13-7，7-13-4，5-13-6，6-13-5，4-12-8，8-12-4，5-12-7，7-12-5，6-12-6，5-11-8，8-11-5，6-11-7，或7-11-6。数字表示5
’‑
x-y-z-3’间隔聚体中x、y和z区中的核苷的数目。
[0509]
在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)或间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中的一个或更多个核苷是经修饰核苷酸(例如，高亲和力经修饰核苷)。在一些实施方案中，经修饰核苷(例如，高亲和力经修饰核苷)是2
’‑
经修饰核苷。在一些实施方案中，2
’‑
经修饰核苷是2
’‑4’
双环核苷或非双环2
’‑
经修饰核苷。在一些实施方案中，高亲和力经修饰核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna、cet或ena)或非双环2
’‑
经修饰核苷(例如2
’‑
氟(2
’‑
f)、2
’‑
o-甲基(2
’‑
o-me)、2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)、2
’‑
o-氨基丙基(2
’‑
o-ap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基(2
’‑
o-dmaoe)、2
’‑
o-二甲基氨基丙基(2
’‑
o-dmap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基氧基乙基(2
’‑
o-dmaeoe)或2
’‑
o-n-甲基乙酰胺基(2
’‑
o-nma))。
[0510]
在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)中的一个或更多个核苷是高亲和力经修饰核苷。在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)中的每个核苷是高亲和力经修饰核苷。在一些实施方案中，间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中的一个或更多个核苷是高亲和力经修饰核苷。在一些实施方案中，间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中的每个核苷是高亲和力经修饰核苷。在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)中的一个或更多个核苷是高亲和力经修饰核苷，并且间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中的一个或更多个核苷是高亲和力经修饰核苷。在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)中的每个核苷是高亲和力经修饰核苷，并且间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中的每个核苷是高亲和力经修饰核苷。
[0511]
在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)包含与间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)相同的高亲和力核苷。例如，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)和间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)可包含一个或更多个非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)。在另一个实例中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)和间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)可包含一个或更多个2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)。在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)和间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中的每个核苷是非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)。在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)和间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中的每个核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)。
[0512]
在一些实施方案中，间隔聚体包含5
’‑
x-y-z-3’构型，其中x和z的长度独立地为1至7个(例如，1、2、3、4、5、6或7个)核苷，并且y的长度为6至10个(例如，6、7、8、9或10个)核苷，其中x和z中的每个核苷是非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，并且y中的每个核苷是2
’‑
脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，间隔聚体包含5
’‑
x-y-z-3’构型，其中x
和z的长度独立地为1至7个(例如，1、2、3、4、5、6或7个)核苷，并且y的长度为6至10个(例如，6、7、8、9或10个)核苷，其中x和z中的每个核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)，并且y中的每个核苷是2
’‑
脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)包含与间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)不同的高亲和力核苷。例如，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)可包含一个或更多个非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，并且间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)可包含一个或更多个2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)。在另一个实例中，间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)可包含一个或更多个非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，并且间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)可包含一个或更多个2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)。
[0513]
在一些实施方案中，间隔聚体包含5
’‑
x-y-z-3’构型，其中x和z的长度独立地为1至7个(例如，1、2、3、4、5、6或7个)核苷，并且y的长度为6至10个(例如，6、7、8、9或10个)核苷，其中x中的每个核苷是非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，z中的每个核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)，并且y中的每个核苷是2
’‑
脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，间隔聚体包含5
’‑
x-y-z-3’构型，其中x和z的长度独立地为1至7个(例如，1、2、3、4、5、6或7个)核苷，并且y的长度为6至10个(例如，6、7、8、9或10个)核苷，其中x中的每个核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)，z中的每个核苷是非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，并且y中的每个核苷是2
’‑
脱氧核糖核苷。
[0514]
在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)包含一个或更多个非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)和一个或更多个2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)。在一些实施方案中，间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)包含一个或更多个非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)和一个或更多个2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)。在一些实施方案中，间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)和间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)二者均包含一个或更多个非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)和一个或更多个2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)。
[0515]
在一些实施方案中，间隔聚体包含5
’‑
x-y-z-3’构型，其中x和z的长度独立地为2至7个(例如，2、3、4、5、6或7个)核苷，并且y的长度为6至10个(例如，6、7、8、9或10个)核苷，其中x中第1、2、3、4、5、6或7位(最5’的位置是第1位)中的至少一个但不是全部(例如，1、2、3、4、5或6个)是非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，其中x和z二者中的剩余核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)，并且其中y中的每个核苷是2’脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，间隔聚体包含5
’‑
x-y-z-3’构型，其中x和z的长度独立地为2至7个(例如，2、3、4、5、6或7个)核苷，并且y的长度为6至10个(例如，6、7、8、9或10个)核苷，其中z中第1、2、3、4、5、6或7位(最5’的位置是第1位)中的至少一个但不是全部(例如，1、2、3、4、5或6个)是非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，其中x和z二者中的剩余核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)，并且其中y中的每个核苷是2’脱氧核糖核苷。在一些实施方案中，间隔聚体包含5
’‑
x-y-z-3’构型，其中x和z的长度独立地为2至7个(例如，2、3、4、5、6或7个)核苷，并且y的长度为6至10个(例如，6、7、8、9或10个)核苷，其中x中第1、2、3、4、5、6或7位中的至少一个但不是全部(例如，1、2、3、4、5或6个)和z中第1、2、3、4、5、6或7位(最5’的位置是第1位)中的至少一个位置但不是全部(例如，1、2、3、4、5或6个)是非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)，其中x和z二者中的剩余核苷是2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)，并
且其中y中的每个核苷是2’脱氧核糖核苷。
[0516]
在间隔聚体的5’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的x)和/或间隔聚体的3’翼区(5
’‑
x-y-z-3’式中的z)中具有非双环2
’‑
经修饰核苷(例如，2
’‑
moe或2
’‑
o-me)和2
’‑4’
双环核苷(例如，lna或cet)的混合物的间隔聚体构型的一些非限制性实例包括：bbb-(d)n-bbbaa；kkk-(d)n-kkkaa；lll-(d)n-lllaa；bbb-(d)n-bbbee；kkk-(d)n-kkkee；lll-(d)n-lllee；bbb-(d)n-bbbaa；kkk-(d)n-kkkaa；lll-(d)n-lllaa；bbb-(d)n-bbbee；kkk-(d)n-kkkee；lll-(d)n-lllee；bbb-(d)n-bbbaaa；kkk-(d)n-kkkaaa；lll-(d)n-lllaaa；bbb-(d)n-bbbeee；kkk-(d)n-kkkeee；lll-(d)n-llleee；bbb-(d)n-bbbaaa；kkk-(d)n-kkkaaa；lll-(d)n-lllaaa；bbb-(d)n-bbbeee；kkk-(d)n-kkkeee；lll-(d)n-llleee；baba-(d)n-abab；kaka-(d)n-akak；lala-(d)n-alal；bebe-(d)n-ebeb；keke-(d)n-ekek；lele-(d)n-elel；baba-(d)n-abab；kaka-(d)n-akak；lala-(d)n-alal；bebe-(d)n-ebeb；keke-(d)n-ekek；lele-(d)n-elel；abab-(d)n-abab；akak-(d)n-akak；alal-(d)n-alal；ebeb-(d)n-ebeb；ekek-(d)n-ekek；elel-(d)n-elel；abab-(d)n-abab；akak-(d)n-akak；alal-(d)n-alal；ebeb-(d)n-ebeb；ekek-(d)n-ekek；elel-(d)n-elel；aabb-(d)n-bbaa；bbaa-(d)n-aabb；aakk-(d)n-kkaa；aall-(d)n-llaa；eebb-(d)n-bbee；eekk-(d)n-kkee；eell-(d)n-llee；aabb-(d)n-bbaa；aakk-(d)n-kkaa；aall-(d)n-llaa；eebb-(d)n-bbee；eekk-(d)n-kkee；eell-(d)n-llee；bbb-(d)n-bba；kkk-(d)n-kka；lll-(d)n-lla；bbb-(d)n-bbe；kkk-(d)n-kke；lll-(d)n-lle；bbb-(d)n-bba；kkk-(d)n-kka；lll-(d)n-lla；bbb-(d)n-bbe；kkk-(d)n-kke；lll-(d)n-lle；bbb-(d)n-bba；kkk-(d)n-kka；lll-(d)n-lla；bbb-(d)n-bbe；kkk-(d)n-kke；lll-(d)n-lle；abbb-(d)n-bbba；akkk-(d)n-kkka；alll-(d)n-llla；ebbb-(d)n-bbbe；ekkk-(d)n-kkke；elll-(d)n-llle；abbb-(d)n-bbba；akkk-(d)n-kkka；alll-(d)n-llla；ebbb-(d)n-bbbe；ekkk-(d)n-kkke；elll-(d)n-llle；abbb-(d)n-bbbaa；akkk-(d)n-kkkaa；alll-(d)n-lllaa；ebbb-(d)n-bbbee；ekkk-(d)n-kkkee；elll-(d)n-lllee；abbb-(d)n-bbbaa；akkk-(d)n-kkkaa；alll-(d)n-lllaa；ebbb-(d)n-bbbee；ekkk-(d)n-kkkee；elll-(d)n-lllee；aabbb-(d)n-bbb；aakkk-(d)n-kkk；aalll-(d)n-lll；eebbb-(d)n-bbb；eekkk-(d)n-kkk；eelll-(d)n-lll；aabbb-(d)n-bbb；aakkk-(d)n-kkk；aalll-(d)n-lll；eebbb-(d)n-bbb；eekkk-(d)n-kkk；eelll-(d)n-lll；aabbb-(d)n-bbba；aakkk-(d)n-kkka；aalll-(d)n-llla；eebbb-(d)n-bbbe；eekkk-(d)n-kkke；eelll-(d)n-llle；aabbb-(d)n-bbba；aakkk-(d)n-kkka；aalll-(d)n-llla；eebbb-(d)n-bbbe；eekkk-(d)n-kkke；eelll-(d)n-llle；abbaabb-(d)n-bb；akkaakk-(d)n-kk；allaalll-(d)n-ll；ebbeebb-(d)n-bb；ekkeekk-(d)n-kk；elleell-(d)n-ll；abbaabb-(d)n-bb；akkaakk-(d)n-kk；allaall-(d)n-ll；ebbeebb-(d)n-bb；ekkeekk-(d)n-kk；elleell-(d)n-ll；abbabb-(d)n-bbb；akkakk-(d)n-kkk；allalll-(d)n-lll；ebbebb-(d)n-bbb；ekkekk-(d)n-kkk；ellell-(d)n-lll；abbabb-(d)n-bbb；akkakk-(d)n-kkk；allall-(d)n-lll；ebbebb-(d)n-bbb；ekkekk-(d)n-kkk；ellell-(d)n-lll；eeek-(d)n-eeeeeeee；eek-(d)n-eeeeeeeee；ek-(d)n-eeeeeeeeee；ek-(d)n-eeekk；k-(d)n-eeekeke；k-(d)n-eeekekee；k-(d)n-eekek；ek-(d)n-eeeekeke；ek-(d)n-eeekek；eek-(d)n-keeke；ek-(d)n-eekek；ek-(d)n-keek；eek-(d)n-eeekek；ek-(d)n-keeekee；ek-(d)n-eekeke；ek-(d)n-eeekeke；和ek-(d)n-eeeekek；
[0517][0518]“a”核苷包含2
’‑
经修饰核苷；“b”表示2
’‑4’
双环核苷；“k”表示约束性乙基核苷(cet)；“l”表示lna核苷；以及“e”表示2
’‑
moe修饰的核糖核苷；“d”表示2
’‑
脱氧核糖核苷；“n”表示间隔区段(5
’‑
x-y-z-3’构型中的y)的长度并且是1至20的整数。
[0519]
在一些实施方案中，本文中所述的任一种间隔聚体在x、y和z区的每一个中包含一个或更多个经修饰核苷键联(例如，硫代磷酸酯键联)。在一些实施方案中，本文中所述的任一种间隔聚体中的每个核苷间键联是硫代磷酸酯键联。在一些实施方案中，x、y和z区各自独立地包含硫代磷酸酯键联和磷酸二酯键联的混合物。在一些实施方案中，间隔区y中的每个核苷间键联是硫代磷酸酯键联，5’翼区x包含硫代磷酸酯键联和磷酸二酯键联的混合物，并且3’翼区z包含硫代磷酸酯键联和磷酸二酯键联的混合物。
[0520]
i.混合聚体
[0521]
在一些实施方案中，本文中所述的寡核苷酸可以是混合聚体或者包含混合聚体序列模式。通常来说，混合聚体是包含天然和非天然存在的核苷二者的寡核苷酸或者通常以替代模式包含两种不同类型的非天然存在的核苷的寡核苷酸。混合聚体通常比未经修饰寡核苷酸具有更高的结合亲和力，并且可用于特异性结合靶分子，例如，来阻断靶分子上的结合位点。通常来说，混合聚体不向靶分子募集rna酶并且因此不促进靶分子的切割。已描述了不能募集rna酶h的这样的寡核苷酸，例如，参见wo2007/112754或wo2007/112753。
[0522]
在一些实施方案中，混合聚体包含以下或者由以下组成：重复模式的核苷类似物和天然存在的核苷、或者一种类型的核苷类似物和第二种类型的核苷类似物。然而，混合聚体不需要包含重复模式，并且可替代地包含经修饰核苷和天然存在的核苷的任何排列，或者一种类型的经修饰核苷和第二种类型的经修饰核苷的任何排列。重复模式可以是例如每第二个或每第三个核苷是经修饰核苷(例如lna)，并且剩余核苷是天然存在的核苷，例如dna，或是2’经取代的核苷类似物，例如2’moe或2’氟类似物，或者本文中所述的任何其他经修饰核苷。公认的是，经修饰核苷的重复模式，例如lna单元，可在固定位置例如在5’或3’末端与经修饰核苷组合。
[0523]
在一些实施方案中，混合聚体不包含多于5个、多于4个、多于3个或多于2个连续的天然存在的核苷(例如dna核苷)的区域。在一些实施方案中，混合聚体包含至少一个由至少两个连续的经修饰核苷，例如至少两个连续的lna组成的区域。在一些实施方案中，混合聚体包含至少一个由至少三个连续的经修饰核苷单元，例如至少三个连续的lna组成的区域。
[0524]
在一些实施方案中，混合聚体不包含多于7个、多于6个、多于5个、多于4个、多于3个或多于2个连续的核苷类似物例如lna的区域。在一些实施方案中，lna单元可被其他核苷类似物例如本文中提及的那些替换。
[0525]
混合聚体可被设计为包含亲和力增强的经修饰核苷(例如在非限制性实例中lna核苷和2
’‑
o-me核苷)的混合物。在一些实施方案中，混合聚体在至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或更多个核苷之间包含经修饰核苷间键联(例如，硫代磷酸酯核苷间键联或其他键联)。
[0526]
可使用任何合适的方法产生混合聚体。教导制备混合聚体的代表性美国专利、美国专利出版物和pct出版物包括美国专利公开no.us20060128646、us20090209748、us20090298916、us20110077288和us20120322851以及美国专利no.7687617。
[0527]
在一些实施方案中，混合聚体包含一个或更多个吗啉代核苷。例如，在一些实施方案中，混合聚体可包含与一个或更多个其他核苷(例如，dna、rna核苷)或经修饰核苷(例如，lna、2
’‑
o-me核苷)混合(例如，以交替方式混合)的吗啉代核苷。
[0528]
在一些实施方案中，混合聚体可用于剪接校正或外显子跳读，例如，如以下中报道的：touznik a.，et al.，lna/dna mixmer-based antisense oligonucleotides correct alternative splicing of the smn2 gene and restore smn protein expression in type 1 sma fibroblasts scientific reports，第7卷，article number：3672(2017)，chen s.et al.，synthesis of a morpholino nucleic acid(mna)-uridine phosphoramidite，and exon skipping using mna/2
′‑
o-methyl mixmer antisense oligonucleotide，molecules 2016，21，1582，其各自的内容通过引用并入本文。
[0529]
j.rna干扰(rnai)
[0530]
在一些实施方案中，本文中提供的寡核苷酸可以是小干扰rna(small interfering rna，sirna，也称为短干扰rna或沉默rna)的形式。sirna是一类双链rna分子，通常长度为约20至25个碱基对，其通过细胞中的rna干扰(rnai)途径靶向核酸(例如，mrna)用于降解。sirna分子的特异性可通过分子反义链与其靶rna的结合来确定。有效的sirna分子的长度通常少于30至35个碱基对，以防止通过干扰素应答触发细胞中的非特异性rna干扰途径(尽管更长的sirna也可能是有效的)。在一些实施方案中，sirna分子的长度为7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，或更多个碱基对。在一些实施方案中，sirna分子的长度为8至30个碱基对、长度为10至15个碱基对、长度为10至20个碱基对、长度为15至25个碱基对、长度为19至21个碱基对、长度为21至23个碱基对。
[0531]
在选择适当的靶rna序列之后，可使用适当的方法设计和制备包含与全部或部分靶序列互补的核苷酸序列(即反义序列)的sirna分子(参见，例如pct公开号wo 2004/016735；以及美国专利公开no.2004/0077574和2008/0081791)。sirna分子可以是双链的(即，包含反义链和杂交以形成dsrna的互补有义链的dsrna分子)或单链的(即，仅包含反义链的ssrna分子)。sirna分子可包含具有自身互补的有义链和反义链的双链体(duplex)、不对称双链体、发夹或不对称发夹二级结构。
[0532]
在一些实施方案中，sirna分子的反义链的长度为7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，或更多个核苷酸。在一些实施方案中，反义链的长度为8至50个核苷酸、长度为8至40个核苷酸、长度为8至30个核苷酸、长度为10至15个核苷酸、长度为10至20个核苷酸、长度为15至25个核苷酸、长度为19至21个核苷酸、长度为21至23个核苷酸。
[0533]
在一些实施方案中，sirna分子的有义链的长度为7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，或更多个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为8至50个核苷酸、长度为8至40个核苷酸、长度为8至30个核苷酸、长度为10至15个核苷酸、长度为10至20个核苷酸、长度为15至25个核苷酸、长度为19至21个核苷酸、长度为21至23个核苷酸。
[0534]
在一些实施方案中，sirna分子包含反义链，所述反义链包含靶mrna中的靶区域之互补区。在一些实施方案中，互补区为与靶mrna中的靶区域至少80％、至少85％、至少90％、
至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％互补。在一些实施方案中，靶区域是靶mrna中的连续核苷酸的区域。在一些实施方案中，互补核苷酸序列不需要与其靶标的核苷酸序列100％互补来与靶rna序列可特异性地杂交或对靶rna序列具有特异性。
[0535]
在一些实施方案中，sirna分子包含反义链，所述反义链包含靶rna序列之互补区，并且该互补区的长度在8至15、8至30、8至40、或10至50、或5至50、或5至40个核苷酸的范围内。在一些实施方案中，互补区的长度为5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，或50个核苷酸。在一些实施方案中，互补区与靶rna序列的至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个或更多个连续核苷酸互补。在一些实施方案中，sirna分子包含与靶rna序列的连续核苷酸的一部分相比包含不超过1、2、3、4或5个碱基错配的核苷酸序列。在一些实施方案中，sirna分子包含在15个碱基上具有至多3个错配或在10个碱基上具有至多2个错配的核苷酸序列。
[0536]
在一些实施方案中，sirna分子包含反义链，所述反义链包含与本文中提供的寡核苷酸的靶rna序列互补(例如，至少85％、至少90％、至少95％或100％)的核苷酸序列。在一些实施方案中，sirna分子包含反义链，所述反义链包含与本文中提供的寡核苷酸具有至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，sirna分子包含反义链，所述反义链包含本文中提供的寡核苷酸的至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个或更多个连续核苷酸。
[0537]
双链sirna可包含相同长度或不同长度的有义和反义rna链。双链sirna分子也可由单个寡核苷酸组装成茎-环结构，其中sirna分子的自身互补有义和反义区通过以下连接：基于核酸或基于非核酸的接头，以及环状单链rna，其具有两个或更多个环结构和包含自身互补有义链和反义链的茎，其中环状rna可在体内或体外加工以产生能够介导rnai的活性sirna分子。因此，本文中也考虑了小发夹rna(small hairpin rna，shrna)分子。除通常由间隔区或环序列隔开的反向互补(有义)序列之外，这些分子还包含特定的反义序列。间隔区或环的切割提供了单链rna分子及其反向互补物，使得它们可进行退火以形成dsrna分子(任选地，具有可导致从任一或两条链的3’末端和/或(例如，和)5’末端添加或去除一个、两个、三个或更多个核苷酸的另外的加工步骤)。间隔区可具有足够的长度以允许反义和有义序列在切割间隔区(和任选地，可导致从任一或两条链的3’末端和/或(例如，和)5’末端添加或去除一个、两个、三个、四个或更多个核苷酸的后续加工步骤)之前进行退火并形成双链结构(或茎)。间隔区序列可以是位于两个互补核苷酸序列区域之间的不相关核苷酸序列，当退火成双链核酸时其包含shrna。
[0538]
sirna分子的总长度可根据所设计sirna分子的类型在约14至约100个核苷酸内变化。通常来说，这些核苷酸中的约14至约50个与rna靶序列互补，即构成sirna分子的特异性反义序列。例如，当sirna是双链sirna或单链sirna时，长度可在约14至约50个核苷酸内变
化，而当sirna是shrna或环状分子时，长度可在约40个核苷酸至约100个核苷酸内变化。
[0539]
sirna分子可在分子的一个末端包含3’突出端，另一末端可以是平末端或也具有突出端(5’或3’)。当sirna分子在分子的两个末端均包含突出端时，突出端的长度可相同或不同。在一个实施方案中，本公开内容的sirna分子在分子的两个末端均包含约1至约3个核苷酸的3’突出端。在一些实施方案中，sirna分子在有义链上包含约1至约3个核苷酸的3’突出端。在一些实施方案中，sirna分子在反义链上包含约1至约3个核苷酸的3’突出端。在一些实施方案中，sirna分子在有义链和反义链二者上均包含约1至约3个核苷酸的3’突出端。
[0540]
在一些实施方案中，sirna分子包含一个或更多个经修饰核苷酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)。在一些实施方案中，sirna分子包含一个或更多个经修饰核苷酸和/或(例如，和)一个或更多个经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，经修饰核苷酸是经修饰糖部分(例如，2’经修饰核苷酸)。在一些实施方案中，sirna分子包含一个或更多个2’经修饰核苷酸，例如2
’‑
脱氧、2
’‑
氟(2
’‑
f)、2
’‑
o-甲基(2
’‑
o-me)、2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)、2
’‑
o-氨基丙基(2
’‑
o-ap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基(2
’‑
o-dmaoe)、2
’‑
o-二甲基氨基丙基(2
’‑
o-dmap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基氧基乙基(2
’‑
o-dmaeoe)或2
’‑o‑‑
n-甲基乙酰胺基(2
’‑o‑‑
nma)。在一些实施方案中，sirna分子的每个核苷酸均是经修饰核苷酸(例如，2
’‑
经修饰核苷酸)。在一些实施方案中，sirna分子包含一个或更多个磷酸二酰胺吗啉代。在一些实施方案中，sirna分子的每个核苷酸均是磷酸二酰胺吗啉代。
[0541]
在一些实施方案中，sirna分子包含硫代磷酸酯键联或其他经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，sirna分子包含硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，sirna分子在至少两个核苷酸之间包含硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，sirna分子在所有核苷酸之间均包含硫代磷酸酯核苷间键联。例如，在一些实施方案中，sirna分子在sirna分子的5’或3’末端的第一、第二和/或(例如，和)第三核苷间键联处包含经修饰核苷酸间键联。
[0542]
在一些实施方案中，经修饰核苷酸间键联是含磷的键联。在一些实施方案中，可使用的含磷的键联包括但不限于：硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基膦酸酯和包含3’亚烷基膦酸酯的其他烷基膦酸酯、以及手性膦酸酯、次膦酸酯、包含3
’‑
氨基磷酰胺酯和氨基烷基磷酰胺酯的磷酰胺酯、硫羰基磷酰胺酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯和具有正常3
’‑5’
键联的硼烷磷酸酯、这些的2
’‑5’
连接类似物、以及其中相邻的核苷单元对连接在3
’‑5’
到5
’‑3’
或2
’‑5’
到5
’‑2’
的具有相反极性的那些；参见美国专利no.3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；和5,625,050。
[0543]
本文中所述的sirna分子的任何经修饰化学组成或形式可彼此组合。例如，同一sirna分子内可包含一种、两种、三种、四种、五种或更多种不同类型的修饰。
[0544]
在一些实施方案中，反义链包含一个或更多个经修饰核苷酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)。在一些实施方案中，反义链包含一个或更多个经修饰核苷酸和/或(例如，和)一个或更多个经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，经修饰核苷酸包含经修饰糖部分(例如，2’经修饰核苷酸)。在一些实施方案中，反义链包含一个或更多个2’经修饰核
苷酸，例如2
’‑
脱氧、2
’‑
氟(2
’‑
f)、2
’‑
o-甲基(2
’‑
o-me)、2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)、2
’‑
o-氨基丙基(2
’‑
o-ap)、2
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o-二甲基氨基乙基(2
’‑
o-dmaoe)、2
’‑
o-二甲基氨基丙基(2
’‑
o-dmap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基氧基乙基(2
’‑
o-dmaeoe)或2
’‑o‑‑
n-甲基乙酰胺基(2
’‑o‑‑
nma)。在一些实施方案中，反义链的每个核苷酸均是经修饰核苷酸(例如，2
’‑
经修饰核苷酸)。在一些实施方案中，反义链包含一个或更多个磷酸二酰胺吗啉代。在一些实施方案中，反义链是磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo)。
[0545]
在一些实施方案中，反义链包含硫代磷酸酯键联或其他经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，反义链包含硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，反义链在至少两个核苷酸之间包含硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，反义链在所有核苷酸之间均包含硫代磷酸酯核苷间键联。例如，在一些实施方案中，反义链在sirna分子的5’或3’末端的第一、第二和/或(例如，和)第三核苷间键联处包含经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，经修饰核苷酸间键联是含磷的键联。在一些实施方案中，可使用的含磷的键联包括但不限于：硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基膦酸酯和包含3’亚烷基膦酸酯的其他烷基膦酸酯、以及手性膦酸酯、次膦酸酯、包含3
’‑
氨基磷酰胺酯和氨基烷基磷酰胺酯的磷酰胺酯、硫羰基磷酰胺酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯和具有正常3
’‑5’
键联的硼烷磷酸酯、这些的2
’‑5’
连接类似物、以及其中相邻的核苷单元对连接在3
’‑5’
到5
’‑3’
或2
’‑5’
到5
’‑2’
的具有相反极性的那些；参见美国专利no.3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；和5,625,050。
[0546]
本文中所述的反义链的任何经修饰化学组成或形式可彼此组合。例如，同一反义链内可包含一种、两种、三种、四种、五种或更多种不同类型的修饰。
[0547]
在一些实施方案中，有义链包含一个或更多个经修饰核苷酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)。在一些实施方案中，有义链包含一个或更多个经修饰核苷酸和/或(例如，和)一个或更多个经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，经修饰核苷酸是经修饰糖部分(例如，2’经修饰核苷酸)。在一些实施方案中，有义链包含一个或更多个2’经修饰核苷酸，例如2
’‑
脱氧、2
’‑
氟(2
’‑
f)、2
’‑
o-甲基(2
’‑
o-me)、2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)、2
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o-氨基丙基(2
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o-ap)、2
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o-二甲基氨基乙基(2
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o-dmaoe)、2
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o-二甲基氨基丙基(2
’‑
o-dmap)、2
’‑
o-二甲基氨基乙基氧基乙基(2
’‑
o-dmaeoe)或2
’‑o‑‑
n-甲基乙酰胺基(2
’‑o‑‑
nma)。在一些实施方案中，有义链的每个核苷酸均是经修饰核苷酸(例如，2
’‑
经修饰核苷酸)。在一些实施方案中，有义链包含一个或更多个磷酸二酰胺吗啉代。在一些实施方案中，反义链是磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo)。在一些实施方案中，有义链包含硫代磷酸酯键联或其他经修饰核苷酸间键联。在一些实施方案中，有义链包含硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，有义链在至少两个核苷酸之间包含硫代磷酸酯核苷间键联。在一些实施方案中，有义链在所有核苷酸之间均包含硫代磷酸酯核苷间键联。例如，在一些实施方案中，有义链在有义链的5’或3’末端的第一、第二和/或(例如，和)第三核苷间键联处包含经修饰核苷酸间键联。
[0548]
在一些实施方案中，经修饰核苷酸间键联是含磷的键联。在一些实施方案中，可使
用的含磷的键联包括但不限于：硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基膦酸酯和包含3’亚烷基膦酸酯的其他烷基膦酸酯、以及手性膦酸酯、次膦酸酯、包含3
’‑
氨基磷酰胺酯和氨基烷基磷酰胺酯的磷酰胺酯、硫羰基磷酰胺酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯和具有正常3
’‑5’
键联的硼烷磷酸酯、这些的2
’‑5’
连接类似物、以及其中相邻的核苷单元对连接在3
’‑5’
到5
’‑3’
或2
’‑5’
到5
’‑2’
的具有相反极性的那些；参见美国专利no.3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；和5,625,050。
[0549]
本文中所述的有义链的任何经修饰化学组成或形式可彼此组合。例如，同一有义链内可包含一种、两种、三种、四种、五种或更多种不同类型的修饰。
[0550]
在一些实施方案中，sirna分子的反义链或有义链包含增强或降低rna诱导沉默复合物(rna-induced silencing complex，risc)负载的修饰。在一些实施方案中，sirna分子的反义链包含增强risc负载的修饰。在一些实施方案中，sirna分子的有义链包含降低risc负载并降低脱靶效应的修饰。在一些实施方案中，sirna分子的反义链包含2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)修饰。在切割位点添加2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
moe)基团通过促进经修饰链的定向rna诱导沉默复合物(risc)负载改善了sirna的特异性和沉默活性二者，如song et al.，(2017)mol ther nucleic acids 9：242-250中所述，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，sirna分子的反义链包含提高risc负载的2
’‑
ome-二硫代磷酸酯修饰，如wu et al.，(2014)nat commun 5：3459中所述，其通过引用整体并入本文。
[0551]
在一些实施方案中，sirna分子的有义链包含5
’‑
吗啉代，其降低有义链的risc负载并改善反义链选择和rnai活性，如kumar et al.，(2019)chem commun(camb)55(35)：5139-5142中所述，该文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，sirna分子的有义链是用合成的rna样高亲和力核苷酸类似物锁核酸(lna)来修饰的，其降低有义链的risc负载并进一步增强反义链并入到risc中，如elman et al.，(2005)nucleic acids res.33(1)：439-447中所述，该文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，sirna分子的有义链包含5’解锁核酸(una)修饰，其降低有义链的risc负载并改善反义链的沉默效力，如snead et al.，(2013)mol ther nucleic acids 2(7)：e103中所述，该文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，sirna分子的有义链包含5-硝基吲哚修饰，其降低有义链的rnai效力并降低脱靶效应，如zhang et al.，(2012)chembiochem13(13)：1940-1945中所述，该文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，有义链包含2
’‑
o’甲基(2
’‑
o-me)修饰，其降低有义链的risc负载和脱靶效应，如zheng et al.，faseb(2013)27(10)：4017-4026中所述，该文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，sirna分子的有义链被吗啉代、2
’‑
moe或2
’‑
o-me残基完全替换并且不被risc识别，如kole et al.，(2012)nature reviews.drug discovery 11(2)：125-140中所述，该文献通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，sirna分子的反义链包含2
’‑
moe修饰并且有义链包含2
’‑
o-me修饰(参见例如song et al.，(2017)mol ther nucleic acids 9：242-250)。在一些实施方案中，至少一个(例如，至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少10个)sirna分子与肌肉靶向剂(例如，共价)连接。在一些实施方案中，肌肉靶向剂可包含以下或者由以下组成：核酸(例如，dna或rna)、肽(例如，
抗体)、脂质(例如，微囊泡)或糖部分(例如，多糖)。在一些实施方案中，肌肉靶向剂是抗体。在一些实施方案中，肌肉靶向剂是抗转铁蛋白受体抗体(例如，本文中提供的任一种抗tfr抗体)。在一些实施方案中，肌肉靶向剂可与sirna分子有义链的5’末端连接。在一些实施方案中，肌肉靶向剂可与sirna分子有义链的3’末端连接。在一些实施方案中，肌肉靶向剂可与sirna分子的有义链内部连接。在一些实施方案中，肌肉靶向剂可与sirna分子反义链的5’末端连接。在一些实施方案中，肌肉靶向剂可与sirna分子反义链的3’末端连接。在一些实施方案中，肌肉靶向剂可与sirna分子的反义链内部连接。
[0552]
k.微rna(mirna)
[0553]
在一些实施方案中，寡核苷酸可以是微rna(mirna)。微rna(称为“mirna”)是小的非编码rna，属于通过与靶rna转录物上的互补位点结合来控制基因表达的一类调节分子。通常来说，mirna由大的rna前体(称为初级mirna(pri-mirna))产生，所述rna前体在细胞核中加工成约70个核苷酸的前体mirna，前体mirna折叠成不完美的茎-环结构。这些前体mirna通常在胞质内经历另外的加工步骤，在此长度为18至25个核苷酸的成熟mirna被rna酶iii酶dicer从前体mirna发夹的一侧切离。
[0554]
本文中使用的mirna包括初级mirna、前体mirna、成熟mirna或保留成熟mirna的生物学活性的其变体的片段。在一个实施方案中，mirna的尺寸范围可以是21个核苷酸至170个核苷酸。在一个实施方案中，mirna的尺寸范围是长度为70至170个核苷酸。在另一个实施方案中，可使用长度为21至25个核苷酸的成熟mirna。
[0555]
l.适配体
[0556]
在一些实施方案中，本文中提供的寡核苷酸可以是适配体的形式。通常来说，在分子载荷的情况下，适配体是与靶标(例如细胞中的小分子、蛋白质、核酸)特异性结合的任何核酸。在一些实施方案中，适配体是dna适配体或rna适配体。在一些实施方案中，核酸适配体是单链dna或rna(ssdna或ssrna)。应理解，单链核酸适配体可形成螺旋和/或(例如，和)环结构。形成核酸适配体的核酸可包含天然存在的核苷酸、经修饰核苷酸、具有插入在一个或更多个核苷酸之间的烃接头(例如，亚烷基)或聚醚接头(例如，peg接头)的天然存在的核苷酸、具有插入在一个或更多个核苷酸之间的烃或peg接头的经修饰核苷酸，或其组合。描述适配体和制备适配体的方法的示例性出版物和专利包括，例如，lorsch and szostak，1996；jayasena，1999；美国专利no.5,270,163；5,567,588；5,650,275；5,670,637；5,683,867；5,696,249；5,789,157；5,843,653；5,864,026；5,989,823；6,569,630；8,318,438和pct申请wo 99/31275，其各自通过引用并入本文。
[0557]
m.核酶
[0558]
在一些实施方案中，本文中提供的寡核苷酸可以是核酶的形式。核酶(核糖核酸酶)是能够进行特定的生化反应，类似于蛋白质酶作用的分子，通常是rna分子。核酶是具有催化活性的分子，所述催化活性包括在与该核酶杂交的rna分子(例如，mrna、含rna的底物、lncrna)和核酶本身中的特定磷酸二酯键联处进行切割的能力。
[0559]
核酶可采用数种物理结构之一，其中之一被称为“锤头状的”。锤头状核酶由包含9个保守碱基的催化核心、双链茎和环结构(茎-环ii)以及与靶rna侧翼区催化核心互补的两个区域构成。通过形成双链茎i和iii，侧翼区能够使核酶与靶rna特异性结合。通过3’，5
’‑
磷酸二酯至2’，3
’‑
环状磷酸二酯的酯交换反应，在特定核糖核苷酸三联体旁以顺式(即，切
an m1 strain of streptococcus pyogenes.”ferretti j.j.，mcshan w.m.，ajdic d.j.，savic d.j.，savic g.，lyon k.，primeaux c.，sezate s.，suvorov a.n.，kenton s.，lai h.s.，lin s.p.，qian y.，jia h.g.，najar f.z.，ren q.，zhu h.，song l，white j.，yuan x.，clifton s.w.，roe b.a.，mclaughlin r.e.，proc.natl.acad.sci.u.s.a.98：4658-4663(2001)；“crispr rna maturation by trans-encoded small rna and host factor rnase iii.”deltcheva e.，chylinski k.，sharma c.m.，gonzales k.，chao y.，pirzada z.a.，eckert m.r.，vogel j.，charpentier e.，nature 471：602-607(2011)；和“a programmable dual-rna-guided dna endonuclease in adaptive bacterial immunity.”jinek m.，chylinski k.，fonfara i.，hauer m.，doudna j.a.，charpentier e.science 337：816-821(2012)，其各自的全部内容通过引用并入本文。
[0566]
o.多聚体
[0567]
在一些实施方案中，分子载荷可包含通过接头连接的2个或更多个寡核苷酸的多聚体(例如，串联体)。在一些实施方案中，以这种方式，复合物/缀合物的寡核苷酸负载可提高到超过靶向剂上的可用连接位点(例如，抗体上的可用硫醇位点或胺位点)，或者以其他方式调节以实现特定的载荷负载量。多聚体中的寡核苷酸可相同或不同(例如，靶向不同基因或者同一基因或其产物上的不同位点)。
[0568]
在一些实施方案中，多聚体包含通过可切割接头连接在一起的2个或更多个寡核苷酸。然而，在一些实施方案中，多聚体包含通过不可切割接头连接在一起的2个或更多个寡核苷酸。在一些实施方案中，多聚体包含2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个连接在一起的寡核苷酸。在一些实施方案中，多聚体包含2至5、2至10或4至20个连接在一起的寡核苷酸。
[0569]
在一些实施方案中，多聚体包含2个或更多个首尾相连(以线性排列)的寡核苷酸。在一些实施方案中，多聚体包含2个或更多个通过基于寡核苷酸的接头(例如，聚-dt接头，一种无碱基接头)首尾相连的寡核苷酸。在一些实施方案中，多聚体包含一个寡核苷酸的5’末端，其与另一个寡核苷酸的3’末端连接。在一些实施方案中，多聚体包含一个寡核苷酸的3’末端，其与另一个寡核苷酸的3’末端连接。在一些实施方案中，多聚体包含一个寡核苷酸的5’末端，其与另一个寡核苷酸的5’末端连接。尽管如此，在一些实施方案中，多聚体可包含分支结构，所述分支结构包含通过分支接头连接在一起的多个寡核苷酸。
[0570]
可用于本文中提供的复合物中的多聚体的另一些实例在以下中公开：例如，美国专利申请号2015/0315588 a1，标题为methods of delivering multiple targeting oligonucleotides to a cell using cleavable linkers，其于2015年11月5日公开；美国专利申请号2015/0247141 a1，标题为multimeric oligonucleotide compounds，其于2015年9月3日公开；美国专利申请号us 2011/0158937 a1，标题为immunostimulatory oligonucleotide multimers，其于2011年6月30日公开；和美国专利号5,693,773，标题为triplex-forming antisense oligonucleotides having abasic linkers targeting nucleic acids comprising mixed sequences of purines and pyrimidines，其于1997年12月2日授权，其各自的内容通过引用整体并入本文。
[0571]
o.剪接改变寡核苷酸
[0572]
在一些实施方案中，本公开内容的寡核苷酸(例如，包含吗啉代的反义寡核苷酸)靶向剪接。在一些实施方案中，寡核苷酸通过在基因中诱导外显子跳读和恢复读码框来靶
向剪接。作为一个非限制性实例，寡核苷酸可诱导编码移码突变的外显子和/或(例如，和)编码过早终止密码子的外显子的跳读。在一些实施方案中，寡核苷酸可通过阻断剪接体对剪接位点的识别来诱导外显子跳读。在一些实施方案中，与参考蛋白质相比，外显子跳读导致截短但具有功能性的蛋白质(例如，如下所述的截短但具有功能性的dmd蛋白)。在一些实施方案中，寡核苷酸促进包含特定外显子(例如，如下所述的smn2基因的外显子7)。在一些实施方案中，寡核苷酸可通过靶向剪接位点抑制序列来诱导包含外显子。rna剪接参与肌肉疾病，包括迪谢内肌营养不良(dmd)和脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy，sma)。
[0573]
编码肌养蛋白(dmd)的基因中的改变(例如，缺失、点突变和重复)引起dmd。这些改变可导致移码突变和/或(例如，和)无义突变。在一些实施方案中，本公开内容的寡核苷酸促进一个或更多个dmd外显子(例如，外显子8、外显子43、外显子44、外显子45、外显子50、外显子51、外显子52、外显子53和/或(例如，和)外显子55)的跳读，并产生功能性的截短蛋白质。参见，例如，2013年7月16日公开的美国专利no.8,486,907和2014年9月18日公开的u.s.20140275212。
[0574]
在sma中，存在功能性smn1的丢失。尽管smn2基因是smn1的旁系同源物，但smn2基因的选择性剪接主要导致外显子7的跳读和随后产生无法补偿smn1丢失的截短的smn蛋白。在一些实施方案中，本公开内容的寡核苷酸促进包含smn2外显子7。在一些实施方案中，寡核苷酸是靶向smn2剪接位点抑制序列的反义寡核苷酸(参见，例如2010年11月23日公开的美国专利号7,838,657)。
[0575]
ii.小分子：
[0576]
如本文中所述，任何合适的小分子均可用作分子载荷。
[0577]
iii.肽/蛋白质
[0578]
如本文中所述，任何合适的肽或蛋白质均可用作分子载荷。在一些实施方案中，蛋白质是酶(例如酸性α-葡糖苷酶，例如如由gaa基因编码)。可使用数种方法例如噬菌体展示肽文库、单珠单化合物肽文库或位置扫描合成肽组合文库来产生、合成和/或(例如，和)衍生这些肽或蛋白质。示例性的方法已在本领域中表征并通过引用并入(gray，b.p.and brown，k.c.“combinatorial peptide libraries：mining for cell-binding peptides”chem rev.2014，114：2，1020-1081.；samoylova，t.i.and smith，b.f.“elucidation of muscle-binding peptides by phage display screening.”muscle nerve，1999，22：4.460-6.)。
[0579]
iv.核酸构建体
[0580]
如本文中所述，任何合适的基因表达构建体均可用作分子载荷。在一些实施方案中，基因表达构建体可以是载体或cdna片段。在一些实施方案中，基因表达构建体可以是信使rna(mrna)。在一些实施方案中，本文中使用的mrna可以是经修饰mrna，例如，如美国专利8,710,200中所述，其于2014年4月24日授权，标题为“engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression”。在一些实施方案中，mrna可包含5’甲基帽。在一些实施方案中，mrna可包含聚a尾，任选长度多至160个核苷酸。基因表达构建体可编码在肌肉疾病中具有缺陷的蛋白质的序列。在一些实施方案中，基因表达构建体可在肌细胞的细胞核内表达，例如过表达。在一些实施方案中，基因表达构建体编码在肌肉疾病中具有缺陷的基因。在一些实施方案中，基因表达构建体编码包含至少一
analysis，v.47，wiley-interscience，and hoboken，n.j.，2006，和/或(例如，和)chudakov，dm，et al.，physiol rev.90(3)：1103-63，2010，其通过引用并入本文中，用于讨论gfp和许多其他荧光蛋白或发光蛋白。在一些实施方案中，可检测标记包含暗猝灭剂，例如从荧光团吸收激发能量并将能量作为热量消散的物质。
[0584]
还在以下中提供了复合物和分子载荷(例如，可用于靶向肌肉基因的寡核苷酸)的另一些实例：2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy”的国际专利申请公开wo2020/028861；2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy”的国际专利申请公开wo2020/028864，；2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating centronuclear myopathy”的国际专利申请公开wo2020/028844；2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating pompe disease”的国际专利申请公开wo2020/028841；2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating fibrodysplasia ossificans progressiva”的国际专利申请公开wo2020/028831；2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating friedreich’s ataxia”的国际专利申请公开wo2020/028840；2020年2月6日公开，标题为“muscle-targeting complexes and uses thereof”的国际专利申请公开wo2020/028857；2020年2月6日公开，标题为“muscle-targeting complexes and uses thereof in treating muscle atrophy”的国际专利申请公开wo2020/028836；2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies”的国际专利申请公开wo2020/028832；2020年2月6日公开，标题为“muscle targeting complexes and uses thereof for treating hypertrophic cardiomyopathy”的国际专利申请公开wo2020/028842；其各自的内容均通过引用并入本文。
[0585]
b.接头
[0586]
本文中所述的复合物通常包含连接本文中所述的任一种抗tfr抗体与分子载荷的接头。接头包含至少一个共价键。在一些实施方案中，接头可以是连接抗tfr抗体与分子载荷的单键，例如二硫键或二硫桥。然而，在一些实施方案中，接头可通过多个共价键连接本文中所述的任一种抗tfr抗体与分子。在一些实施方案中，接头可以是可切割接头。然而，在一些实施方案中，接头可以是不可切割接头。接头通常在体外和体内是稳定的，并且在某些细胞环境中可以是稳定的。另外，通常来说接头不负面影响抗tfr抗体或分子载荷的功能特性。接头合成的实例和方法是本领域中已知的(参见，例如kline，t。et al.“methods to make homogenous antibody drug conjugates.”pharmaceutical research，2015，32：11，3480-3493.；jain，n.et al.“current adc linker chemistry”pharm res.2015，32：11，3526-3540.；mccombs，j.r.and owen，s.c.“antibody drug conjugates：design and selection of linker，payload and conjugation chemistry”aaps j.2015，17：2，339-351.)。
[0587]
接头的前体通常将包含允许与抗tfr抗体和分子载荷二者连接的两种不同的反应性物质。在一些实施方案中，两种不同的反应性物质可以是亲核体和/或(例如，和)亲电体。
在一些实施方案中，接头通过与抗tfr抗体的赖氨酸残基或半胱氨酸残基缀合而与抗tfr抗体连接。在一些实施方案中，接头通过含马来酰亚胺的接头与抗tfr抗体的半胱氨酸残基连接，其中任选地，含马来酰亚胺的接头包含马来酰亚胺基己酰基或马来酰亚胺基甲基环己烷-1-羧酸根基团。在一些实施方案中，接头通过3-芳基丙腈官能团与抗tfr抗体的半胱氨酸残基或巯基官能化的分子载荷连接。在一些实施方案中，接头与抗tfr抗体的赖氨酸残基连接。在一些实施方案中，接头通过酰胺键、氨基甲酸酯键、酰肼、三唑、硫醚或二硫键与抗tfr抗体和/或(例如，和)分子载荷连接。
[0588]
i.可切割接头
[0589]
可切割接头可以是蛋白酶敏感性接头、ph敏感性接头或谷胱甘肽敏感性接头。这些接头通常仅在胞内可切割，并且优选在胞外环境，例如肌细胞胞外中稳定。
[0590]
蛋白酶敏感性接头可通过蛋白酶酶活性切割。这些接头通常包含肽序列，并且长度可为2至10个氨基酸、约2至5个氨基酸、约5至10个氨基酸、约10个氨基酸、约5个氨基酸、约3个氨基酸或约2个氨基酸。在一些实施方案中，肽序列可包含天然存在的氨基酸(例如半胱氨酸、丙氨酸)或者非天然存在的或经修饰的氨基酸。非天然存在的氨基酸包括β-氨基酸、高氨基酸、脯氨酸衍生物、3-经取代的丙氨酸衍生物、线性核心氨基酸、n-甲基氨基酸和本领域已知的其他氨基酸。在一些实施方案中，蛋白酶敏感性接头包含缬氨酸-瓜氨酸或丙氨酸-瓜氨酸二肽序列。在一些实施方案中，蛋白酶敏感性接头可被溶酶体蛋白酶(例如组织蛋白酶b(cathepsin b))和/或(例如，和)内体蛋白酶切割。
[0591]
ph敏感性接头是在高或低ph环境中容易降解的共价键联。在一些实施方案中，ph敏感性接头可在4至6的ph下被切割。在一些实施方案中，ph敏感性接头包含腙或环缩醛。在一些实施方案中，ph敏感性接头在内体或溶酶体内被切割。
[0592]
在一些实施方案中，谷胱甘肽敏感性接头包含二硫化物部分。在一些实施方案中，谷胱甘肽敏感性接头通过与细胞内的谷胱甘肽物质进行二硫化物交换反应来切割。在一些实施方案中，二硫化物部分还包含至少一种氨基酸，例如半胱氨酸残基。
[0593]
在一些实施方案中，接头是val-cit接头(例如，如美国专利6,214,345中所述，其通过引用并入本文)。在一些实施方案中，在缀合之前，val-cit接头具有以下结构：
[0594][0595]
在一些实施方案中，在缀合之后，val-cit接头具有以下结构：
[0596][0597]
在一些实施方案中，val-cit接头与反应性化学部分(例如，用于点击化学缀合的spaac)连接。在一些实施方案中，在缀合之前，与反应性化学部分(例如，用于点击化学缀合的spaac)连接的val-cit接头具有以下结构：
[0598][0599]
其中n是0至10的任意数字。在一些实施方案中，n是3。
[0600]
在一些实施方案中，与反应性化学部分(例如，用于点击化学缀合的spaac)连接的val-cit接头与分子载荷(例如，寡核苷酸)缀合(例如，通过不同的化学部分缀合)。在一些实施方案中，与反应性化学部分(例如，用于点击化学缀合的spaac)连接并与分子载荷(例如，寡核苷酸)缀合的val-cit接头具有以下结构(在点击化学缀合之前)：
[0601][0602]
其中n是0至10的任意数字。在一些实施方案中，n是3。
[0603]
在一些实施方案中，在与分子载荷(例如，寡核苷酸)缀合之后，并且，val-cit接头具有以下结构：
cyclooctyne compounds and their use in metal-free click reactions”。在一些实施方案中，叠氮化物可以是包含叠氮化物的糖或碳水化合物分子。在一些实施方案中，叠氮化物可以是6-叠氮基-6-脱氧半乳糖或6-叠氮基-n-乙酰半乳糖胺。在一些实施方案中，包含叠氮化物的糖或碳水化合物分子如国际专利申请公开wo2016170186中所述，其于2016年10月27日公开，标题为“process for the modification of a glycoprotein using a glycosyltransferase that is or is derived from a β(1，4)-n-acetylgalactosaminyltransferase”。在一些实施方案中，在叠氮化物和炔烃之间进行环加成反应以形成三唑，其中叠氮化物和炔烃可位于抗tfr抗体、分子载荷或接头上，如以下中所述：国际专利申请公开wo2014065661，其于2014年5月1日公开，标题为“modified antibody，antibody-conjugate and process for the preparation thereof”；或国际专利申请公开wo2016170186，其于2016年10月27日公开，标题为“process for the modification of a glycoprotein using a glycosyltransferase that is or is derived from a β(1，4)-n-acetylgalactosaminyltransferase”。
[0612]
在一些实施方案中，接头还包含间隔基，例如聚乙二醇间隔基或酰基/胺甲酰基磺酰胺间隔基，例如hydraspace
tm
间隔基。在一些实施方案中，间隔基如verkade，j.m.m.et al.，“a polar sulfamide spacer significantly enhances the manufacturability，stability，and therapeutic index of antibody-drug conjugates”，antibodies，2018，7，12中所述。
[0613]
在一些实施方案中，接头通过亲二烯体和二烯/杂二烯之间的第尔斯-阿尔德反应(diels-alder reaction)与抗tfr抗体和/或(例如，和)分子载荷连接，其中亲二烯体和二烯/杂二烯可位于抗tfr抗体、分子载荷或接头上。在一些实施方案中，接头通过其他周环反应(pericyclic reaction)，例如烯反应与抗tfr抗体和/或(例如，和)分子载荷连接。在一些实施方案中，接头通过酰胺、硫代酰胺或磺酰胺键合反应与抗tfr抗体和/或(例如，和)分子载荷连接。在一些实施方案中，接头通过缩合反应与抗tfr抗体和/或(例如，和)分子载荷连接，以形成存在于接头和抗tfr抗体和/或(例如，和)分子载荷之间的肟、腙或氨基脲基团。
[0614]
在一些实施方案中，接头通过亲核体(例如胺或羟基)和亲电体(例如羧酸或醛)之间的共轭加成反应与抗tfr抗体和/或(例如，和)分子载荷连接。在一些实施方案中，在进行接头和抗tfr抗体或分子载荷之间的反应之前，亲核体可存在于接头上并且亲电体可存在于抗tfr抗体或分子载荷上。在一些实施方案中，在进行接头和抗tfr抗体或分子载荷之间的反应之前，亲电体可存在于接头上并且亲核体可存在于抗tfr抗体或分子载荷上。在一些实施方案中，亲电体可以是叠氮化物、五氟苯基、硅中心、羰基、羧酸、酸酐、异氰酸酯、硫代异氰酸酯、琥珀酰亚胺酯、磺基琥珀酰亚胺酯、马来酰亚胺、烷基卤化物、烷基假卤化物、环氧化物、环硫化物、氮丙啶、芳基、活化的磷中心和/或(例如，和)活化的硫中心。在一些实施方案中，亲核体可以是任选经取代的烯烃、任选经取代的炔烃、任选经取代的芳基、任选经取代的杂环基、羟基、氨基、烷基氨基、苯胺基或硫醇基。
[0615]
在一些实施方案中，与反应性化学部分(例如，用于点击化学缀合的spaac)连接的val-cit接头通过以下结构与抗tfr抗体缀合：
[0616][0617]
其中m是0至10的任意数字。在一些实施方案中，m是4。在一些实施方案中，与反应性化学部分(例如，用于点击化学缀合的spaac)连接的val-cit接头与抗tfr抗体缀合，其具有以下结构：
[0618][0619]
其中m是0至10的任意数字。在一些实施方案中，m是4。
[0620]
在一些实施方案中，与反应性化学部分(例如，用于点击化学缀合的spaac)连接并与抗tfr抗体缀合的val-cit接头具有以下结构：
[0621][0622]
其中n是0至10的任意数字，其中m是0至10的任意数字。在一些实施方案中，n是3和/或(例如，和)m是4。
[0623]
在一些实施方案中，抗tfr抗体和分子载荷(例如，寡核苷酸)通过以下结构连接：
[0624][0625]
其中n是0至10的任意数字，其中m是0至10的任意数字。在一些实施方案中，n是3和/或(例如，和)m是4。在一些实施方案中，x是nh(例如，来自赖氨酸的胺基的nh)。在一些实
施方案中，x是s并且抗体是通过与抗体的半胱氨酸缀合被连接的。在一些实施方案中，x是o并且抗体是通过与抗体的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的羟基缀合被连接的。
[0626]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物具有以下结构：
[0627][0628]
其中n是0至10的任意数字，其中m是0至10的任意数字。在一些实施方案中，n是3和/或(例如，和)m是4。
[0629]
在结构式(a)、(b)、(c)和(d)中，l1在一些实施方案中是间隔基，所述间隔基是经取代或未经取代的脂族、经取代或未经取代的杂脂族、经取代或未经取代的亚碳环基、经取代或未经取代的亚杂环基、经取代或未经取代的亚芳基、经取代或未经取代的亚杂芳基、-o-，-n(ra)-，-s-，-c(＝o)-，-c(＝o)o-，-c(＝o)nr
a-，-nrac(＝o)-，-nrac(＝o)ra，-c(＝o)ra，-nrac(＝o)o-，-nrac(＝o)n(ra)-，-oc(＝o)-，-oc(＝o)o-，-oc(＝o)n(ra)-，-s(o)2nr
a-，-nras(o)
2-，或其组合。在一些实施方案中，l1是
[0630][0631]
其中哌嗪部分与寡核苷酸连接，其中l2是
[0632][0633]
在一些实施方案中，l1是：
[0634][0635]
其中哌嗪部分与寡核苷酸连接。
[0636]
在一些实施方案中，l1是
[0637]
在一些实施方案中，l1与寡核苷酸的5’磷酸连接。在一些实施方案中，l1与寡核苷酸的5’硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，l1与寡核苷酸的5’膦酰胺酯连接。
[0638]
在一些实施方案中，l1是任选的(例如，不是必要存在的)。
[0639]
c.抗体-分子载荷复合物的一些实例
[0640]
本文中还提供了包含与本文中所述的任何分子载荷(例如，寡核苷酸)共价连接的任一种本文中所述的抗tfr抗体的复合物的一些非限制性实例。在一些实施方案中，抗tfr抗体(例如，表1中提供的任一种抗tfr抗体)通过接头与分子载荷(例如，寡核苷酸)共价连接。可使用本文中所述的任何接头。在一些实施方案中，如果分子载荷是寡核苷酸，则接头与寡核苷酸的5’末端、3’末端或内部连接。在一些实施方案中，接头通过硫醇反应性键联(例如，通过抗tfr抗体中的半胱氨酸)与抗tfr抗体连接。在一些实施方案中，接头(例如，val-cit接头)通过胺基(例如，通过抗体中的赖氨酸)与抗体(例如，本文中所述的抗tfr抗体)连接。
[0641]
以下提供了复合物的结构的一个实例，其包含通过val-cit接头与分子载荷共价连接的抗tfr抗体：
[0642][0643]
其中接头通过硫醇反应性键联(例如，通过抗体中的半胱氨酸)与抗体连接。
[0644]
以下提供了复合物的结构的另一个实例，其包含通过val-cit接头与分子载荷共价连接的抗tfr抗体：
[0645][0646]
其中n是0至10的数字，其中m是0至10的数字，其中接头通过胺基(例如，赖氨酸残基上的)与抗体连接，和/或(例如，和)其中接头与寡核苷酸(例如，在5’末端、3’末端或内部)连接。在一些实施方案中，接头通过赖氨酸与抗体连接，接头在5’末端与寡核苷酸连接，n是3并且m是4。在一些实施方案中，分子载荷是包含有义链和反义链的寡核苷酸，并且接头在5’末端或3’末端与有义链或反义链连接。
[0647]
应理解，抗体可与具有不同化学计量的分子载荷连接，该特性可被称为药物抗体比(drug to antibody ratio，dar)，其中“药物”是分子载荷。在一些实施方案中，一个分子载荷与一个抗体连接(dar＝1)。在一些实施方案中，两个分子载荷与一个抗体连接(dar＝2)。在一些实施方案中，三个分子载荷与一个抗体连接(dar＝3)。在一些实施方案中，四个分子载荷与一个抗体连接(dar＝4)。在一些实施方案中，提供了不同复合物的混合物，每种复合物具有不同的dar。在一些实施方案中，这样的混合物中的复合物的平均dar可在1至3、1至4、1至5或更大的范围内。可通过将分子载荷缀合至抗体上的不同位点和/或(例如，和)通过将多聚体缀合至抗体上的一个或更多个位点来提高dar。例如，可通过将单个分子载荷缀合至抗体上的两个不同位点或通过将二聚体分子载荷缀合至抗体的单个位点来实现dar为2。
[0648]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的本文中所述的抗tfr抗体(例如，表1中提供的igg或fab形式的3-a4、3-m12和5-h12抗体)。在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过接头(例如，val-cit接头)与分子载荷共价连接的本文中所述的抗tfr抗体(例如，表1中提供的igg或fab形式的3-a4、3-m12和5-h12抗体)。在一些实施方案中，接头(例如，val-cit接头)通过硫醇反应性键联(例如，通过抗体中的半胱氨酸)与抗体(例如，本文中所述的抗tfr抗体)连接。在一些实施方案中，接头(例如，val-cit接头)通过胺基(例如，通过抗体中的赖氨酸)与抗体(例如，本文中所述的抗tfr抗体)连接。
[0649]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含与表3中所示的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3相同的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；以及与表3中所示的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3相同的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0650]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：7的氨基酸序列的vh和具有seq id no：8的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0651]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：7的氨基酸序列的vh(其中第55位处的n被t或s替
换)，和具有seq id no：8的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0652]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：15的氨基酸序列的vh和具有seq id no：16的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0653]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：23的氨基酸序列的vh和具有seq id no：24的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0654]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：23的氨基酸序列的vh(其中第33位处的c被y或d替换)，和具有seq id no：24的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0655]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：178、seq id no：185、seq id no：269、seq id no：270、seq id no：273或seq id no：274的氨基酸序列的重链，和具有seq id no：179的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0656]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：180或seq id no：186的氨基酸序列的重链和具有seq id no：181的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0657]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含具有seq id no：182、seq id no：187、seq id no：271、seq id no：272、seq id no：275或seq id no：276的氨基酸序列的重链，和具有seq id no：183的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0658]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的本文中所述的人源化抗tfr抗体，其中所述抗tfr抗体包含与表3中所示的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3相同的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；以及与表3中所示的cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3相同的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，并且包含人源化vh和人源化vl。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0659]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体是包含vh和vl的人源化抗体，所述vh包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的人框架区，所述vl包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的人框架区。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0660]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体包含vh和vl，所述vh包含具有seq id no：7中所示的vh的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的人框架区，所述vl包含具有seq id no：8中所示的vl的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的人框架区。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0661]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体包含vh和vl，所述vh包含具有seq id no：15中所示的vh的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的人框架区，所述vl包含具有seq id no：16中所示的vl的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的人框架区。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0662]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体包含vh和vl，所述vh包含具有seq id no：23中所示的vh的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的人框架区，所述vl包含具有seq id no：24中所示的vl的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的人框架区。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0663]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体是igg1κ，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0664]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体是igg1κ的fab’片段，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0665]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体是igg1κ的fab’片段，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如，3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区。在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。
[0666]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr抗体，其中所述抗体是igg1κ的fab’片段，其包含具有表1或表3中列出的鼠抗体(例如3a4、3m12或5h12)的cdr的人框架区，其中所述复合物具有以下结构：
[0667][0668]
其中n是3并且m是4。
[0669]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：1中所示的cdr-h1、seq id no：2中所示的cdr-h2、seq id no：3中所示的cdr-h3、seq id no：4中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0670]
[0671]
其中n是3并且m是4。
[0672]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：1中所示的cdr-h1、seq id no：233中所示的cdr-h2、seq id no：3中所示的cdr-h3、seq id no：4中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0673][0674]
其中n是3并且m是4。
[0675]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：1中所示的cdr-h1、seq id no：80中所示的cdr-h2、seq id no：3中所示的cdr-h3、seq id no：4中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0676][0677]
其中n是3并且m是4。
[0678]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：9中所示的cdr-h1、seq id no：10中所示的cdr-h2、seq id no：11中所示的cdr-h3、seq id no：12中所示的cdr-l1、seq id no：13中所示的cdr-l2和seq id no：14中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0679][0680]
其中n是3并且m是4。
[0681]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：17中所示的cdr-h1、seq id no：18中所示的cdr-h2、seq id no：19中所示的cdr-h3、seq id no：20中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0682][0683]
其中n是3并且m是4。
[0684]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：237中所示的cdr-h1、seq id no：18中所示的cdr-h2、seq id no：19中所示的cdr-h3、seq id no：20中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0685][0686]
其中n是3并且m是4。
[0687]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共
价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：239中所示的cdr-h1、seq id no：18中所示的cdr-h2、seq id no：19中所示的cdr-h3、seq id no：20中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0688][0689]
其中n是3并且m是4。
[0690]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：145中所示的cdr-h1、seq id no：146中所示的cdr-h2、seq id no：147中所示的cdr-h3、seq id no：148中所示的cdr-l1、seq id no：149中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0691][0692]
其中n是3并且m是4。
[0693]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：145中所示的cdr-h1、seq id no：234中所示的cdr-h2、seq id no：147中所示的cdr-h3、seq id no：148中所示的cdr-l1、seq id no：149中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0694][0695]
其中n是3并且m是4。
[0696]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：145中所示的cdr-h1、seq id no：236中所示的cdr-h2、seq id no：147中所示的cdr-h3、seq id no：148中所示的cdr-l1、seq id no：149中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0697][0698]
其中n是3并且m是4。
[0699]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：155中所示的cdr-h1、seq id no：156中所示的cdr-h2、seq id no：157中所示的cdr-h3、seq id no：158中所示的cdr-l1、seq id no：159中所示的cdr-l2和seq id no：14中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0700]
[0701]
其中n是3并且m是4。
[0702]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：165中所示的cdr-h1、seq id no：166中所示的cdr-h2、seq id no：167中所示的cdr-h3、seq id no：168中所示的cdr-l1、seq id no：169中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0703][0704]
其中n是3并且m是4。
[0705]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：238中所示的cdr-h1、seq id no：166中所示的cdr-h2、seq id no：167中所示的cdr-h3、seq id no：168中所示的cdr-l1、seq id no：169中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0706][0707]
其中n是3并且m是4。
[0708]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：240中所示的cdr-h1、seq id no：166中所示的cdr-h2、seq id no：167中所示的cdr-h3、seq id no：168中所示的cdr-l1、seq id no：169中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0709][0710]
其中n是3并且m是4。
[0711]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：150中所示的cdr-h1、seq id no：151中所示的cdr-h2、seq id no：152中所示的cdr-h3、seq id no：153中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：154中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0712][0713]
其中n是3并且m是4。
[0714]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：150中所示的cdr-h1、seq id no：277中所示的cdr-h2、seq id no：152中所示的cdr-h3、seq id no：153中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：154中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0715]
[0716]
其中n是3并且m是4。
[0717]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：150中所示的cdr-h1、seq id no：278中所示的cdr-h2、seq id no：152中所示的cdr-h3、seq id no：153中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：154中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0718][0719]
其中n是3并且m是4。
[0720]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：160中所示的cdr-h1、seq id no：161中所示的cdr-h2、seq id no：162中所示的cdr-h3、seq id no：163中所示的cdr-l1、seq id no：13中所示的cdr-l2和seq id no：164中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0721][0722]
其中n是3并且m是4。
[0723]
在一些实施方案中，本文中所述的复合物包含通过赖氨酸与寡核苷酸的5’末端共价连接的抗tfr fab，其中所述抗tfr fab包含seq id no：170中所示的cdr-h1、seq id no：171中所示的cdr-h2、seq id no：172中所示的cdr-h3、seq id no：173中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：174中所示的cdr-l3；其中所述复合物具有以下结构：
[0724][0725]
其中n是3并且m是4。
[0726]
在一些实施方案中，在本文中所述的复合物的任一个实例中，l1是本文中所述的任一种间隔基。
[0727]
在一些实施方案中，l1是：
[0728][0729]
其中哌嗪部分与寡核苷酸连接，其中l2是
[0730][0731]
在一些实施方案中，l1是：
[0732][0733]
其中哌嗪部分与寡核苷酸连接。
[0734]
在一些实施方案中，l1是
[0735]
在一些实施方案中，l1与寡核苷酸的5’磷酸连接。在一些实施方案中，l1与寡核苷酸的5’硫代磷酸酯连接。在一些实施方案中，l1与寡核苷酸的5’膦酰胺酯连接。
[0736]
在一些实施方案中，l1是任选的(例如，不是必要存在的)。
[0737]
iv.制剂
[0738]
本文中提供的抗tfr抗体或复合物可以以任何合适的方式配制。通常来说，本文中提供的抗体或复合物以适用于药物用途的方式配制。例如，可使用使降解最小化、促进递送和/或(例如，和)摄取或者为制剂中的复合物提供另外的有益特性的制剂将抗体或复合物递送至对象。在一些实施方案中，本文中提供了包含抗体或复合物和可药用载体的组合物。可适当地配制这样的组合物使得当施用于对象时，无论是施用至靶细胞的直接环境中或全身性施用，足够量的复合物都能进入靶肌细胞。在一些实施方案中，抗体或复合物被配制在缓冲溶液例如磷酸盐缓冲盐水溶液、脂质体、胶束结构和衣壳中。
[0739]
应理解，在一些实施方案中，组合物可分别包含本文中提供的复合物的一种或更多种组分(例如，抗tfr抗体、接头、分子载荷或它们中任一者的前体分子)。
[0740]
在一些实施方案中，抗体或复合物被配制在水或水溶液(例如，用ph调节的水)中。在一些实施方案中，抗体或复合物被配制在碱性缓冲水溶液(例如，pbs)中。在一些实施方案中，本文中公开的制剂包含赋形剂。在一些实施方案中，赋形剂赋予组合物以改善的稳定性、改善的吸收、改善的溶解性和/或(例如，和)活性成分的治疗性增强。在一些实施方案中，赋形剂是缓冲剂(例如，柠檬酸钠、磷酸钠、tris碱或氢氧化钠)或载剂(例如，缓冲溶液、矿脂(petrolatum)、二甲基亚砜或矿物油)。
[0741]
在一些实施方案中，将复合物或其组分(例如，寡核苷酸或抗体)冻干用于延长其保质期，并随后在使用(例如，施用于对象)之前制成溶液。因此，包含本文中所述的复合物或其组分的组合物中的赋形剂可以是冻干保护剂(例如，甘露醇、乳糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮)或崩解温度调节剂(例如，右旋糖酐、ficoll或明胶)。
[0742]
在一些实施方案中，药物组合物被配制成与其预期施用途径相容。施用途径的一些实例包括肠胃外施用，例如静脉内、皮内、皮下施用。通常来说，施用途径是静脉内或皮下的。
[0743]
适用于可注射使用的药物组合物包含无菌水溶液(在具有水溶性时)或分散体，以及用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，及其合适的混合物。在一些实施方案中，组合物中的制剂包含等张剂，例如糖、多元醇例如甘露醇、山梨醇以及氯化钠。无菌可注射溶液可通过将所需量的复合物与以上列举的成分之一或组合(根据需要)一起并入选定的溶剂中，然后过滤灭菌来制备。
[0744]
在一些实施方案中，组合物可包含至少约0.1％的复合物或其组分，或者更多，尽管活性成分的百分比可为总组合物的重量或体积的约1％至约80％或更多。本领域技术人员将考虑制备这样的药物制剂的因素例如溶解性、生物利用度、生物学半衰期、施用途径、产品保质期以及其他药理学考虑因素，并且因此多种剂量和治疗方案可以是期望的。
[0745]
v.使用方法
[0746]
本公开内容的一些方面提供了本文中所述的抗tfr抗体、抗体片段或变体、编码其的核酸以及复合物的多种用途，包括在研究、诊断方法、检测方法和治疗方法中的用途。在一些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体用于将分子载荷(例如，诊断剂或治疗剂)递送至表达转铁蛋白受体的靶细胞或组织。在一些实施方案中，靶细胞是肌细胞。在一些实施方案
中，靶组织是肌肉。在一些实施方案中，靶组织是脑。为了递送分子载荷，抗tfr抗体可与分子载荷缀合(例如，共价缀合)以形成复合物。
[0747]
a.诊断和检测方法
[0748]
本文中还提供了任一种上述抗体、抗原结合片段、多核苷酸、载体或细胞和任选地合适的手段在诊断和/或(例如，和)检测方法中的用途。例如，抗体或抗原结合片段适合用于免疫测定，在免疫测定中其可用于液相或与固相载体结合。可利用抗体或抗原结合片段的免疫测定的一些实例是直接或间接形式的竞争和非竞争免疫测定。这样的免疫测定的一些实例是酶联免疫测定(enzyme linked immunoassay，elisa)、放射免疫测定(radioimmunoassay，ria)、夹心(免疫测定)、流式细胞术、western印迹测定、免疫沉淀测定、免疫组织化学、免疫显微术、侧向流免疫色谱测定和蛋白质组学阵列。抗原和抗体或抗原结合片段可与许多不同的固体支持物(例如，载体、膜、柱、蛋白质组学阵列等)结合。公知的固体支持物材料的一些实例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚偏二氟乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龙、直链淀粉、天然纤维素和改性纤维素(例如硝酸纤维素)、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁矿。支持物的状态可以是固定的或者混悬在溶液中(例如，珠)。
[0749]
在一些实施方案中，本文中提供的任一种抗tfr抗体可用于检测生物样品中转铁蛋白受体的存在。本文中使用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物样品包含细胞或组织，例如血液、csf和含有bbb的组织。生物样品可以是体外的(例如，培养的)或体内的(例如，在对象中)。本公开内容还考虑了本文中所述的任一种抗tfr抗体在研究应用中的用途(例如，作为用于免疫测定例如western印迹、免疫染色、elisa和/或(例如，和)facs的试剂)。
[0750]
在一些实施方案中，提供了用于诊断或检测方法的抗tfr抗体。在一些方面中，提供了检测生物样品中转铁蛋白受体的存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括在允许抗tfr抗体与转铁蛋白受体结合的条件下，使生物样品与本文中所述的抗tfr抗体接触，并检测在抗tfr抗体与转铁蛋白受体之间是否形成复合物。这样的方法可以是体外或体内方法。在一些实施方案中，抗tfr抗体用于选择适合用抗tfr抗体治疗的对象，例如，其中转铁蛋白受体是用于选择患者的生物标志物。
[0751]
由于转铁蛋白受体在网织红细胞中表达并且因此可被本发明的任何抗体检测到的事实，可使用本文中所述的抗tfr抗体诊断的示例性病症包括涉及未成熟红细胞的病症。这样的病症包括贫血和由网织红细胞水平降低引起的其他病症，或先天性红细胞增多症或真性肿瘤性红细胞增多症，其中由于例如网织红细胞的过度增殖引起的红细胞计数升高导致了血液变稠并伴有生理性症状。
[0752]
在一些实施方案中，为了检测生物样品中转铁蛋白受体的存在/水平，使用经标记的抗tfr抗体。标记包括但不限于直接检测的标记或部分(例如荧光标记、发色标记、电子致密标记、化学发光标记和放射性标记)，以及例如通过酶促反应或分子相互作用间接检测的部分，例如酶或配体。示例性标记包括但不限于放射性同位素32p、14c、125i、3h和131，荧光团例如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明及其衍生物，丹磺酰，伞形酮，萤光素酶，例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利no.4,737,456)，萤光素，2，3-二氢酞嗪二酮，辣根过氧化物酶(hrp)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，杂环氧化酶例如尿酸酶和黄嘌呤氧化
酶，其与使用过氧化氢来氧化染料前体的酶例如hrp、乳过氧化物酶或微过氧化物酶偶联，生物素/抗生物素蛋白、自旋标记、噬菌体标记、稳定的自由基等。在一些实施方案中，可检测标记是适用于体外检测细胞中的转铁蛋白受体的试剂，其可以是放射性分子、放射性药物或铁氧化物颗粒。适用于体内成像的放射性分子包括但不限于
122
i、
123
i、
124
i、
125
i、
131
i、
18
f、
75
br、
76
br、
77
br、
211
at、
225
ac、
177
lu、
153
sm、
186
re、
188
re、
67
cu、
213
bi、
212
bi、
212
pb和
67
ga。适用于体内成像的示例性放射性药物包括
111
in羟基喹啉、
131
i碘化钠、
99
mtc甲溴菲宁(mebrofenin)和
99
mtc红细胞、
123
i碘化钠、
99
mtc依沙美肟(exametazime)、
99
mtc大聚集体白蛋白、
99
mtc medronate、
99
mtc巯替肽(mertiatide)、
99
mtc奥昔膦酸(oxidronate)、
99
mt喷替酸盐(pentetate)、
99
mtc高锝酸盐(pertechnetate)、
99
mtc司他比锝(setamibi)、
99
mtc硫溶胶(sulfur colloid)、
99
mtc替曲膦(tetrofosmin)、铊-201或氙-133。
[0753]
在某些实施方案中，本文中所述的抗tfr抗体可用于将可检测标记递送至靶细胞或组织(例如，肌细胞或穿过血脑屏障到达脑)，以用于细胞或组织的可视化(例如，通过荧光显微术或通过磁共振成像(magnetic resonance imaging，mri)。本文中所述的任何可检测标记均可用于该目的。
[0754]
在一些实施方案中，用于诊断或检测方法的抗tfr抗体缺乏效应子功能或具有降低的效应子功能。在一些实施方案中，用于诊断/检测方法中的抗tfr抗体被工程化为不具有效应子功能或具有降低的效应子功能(例如，通过使用fab、修饰ig主链、引入降低或消除效应子功能的一个或更多个fc突变，和/或(例如，和)修饰抗体的糖基化状态)。
[0755]
多种技术可用于确定抗体与转铁蛋白受体的结合。一种这样的测定是酶联免疫吸附测定(elisa)，其用于确定与人转铁蛋白受体(和脑抗原)结合的能力。根据该测定，将用抗原(例如，重组转铁蛋白受体)包被的板与包含抗tfr抗体的样品一起孵育，并确定抗体与目的抗原的结合。
[0756]
为了进行体内诊断测定，可将合适量的与标记(例如，显像剂或造影剂)缀合的抗tfr抗体施用于需要检查的对象。可通过常规方法基于从标记释放的信号来检测经标记抗体的存在。用于评价全身施用的抗体的摄取和该抗体的其他生物活性的测定是本领域技术人员已知的。
[0757]
为了进行科学研究测定，抗tfr抗体可用于研究转铁蛋白受体的生物活性和/或(例如，和)在胞内检测转铁蛋白受体的存在。例如，可使合适量的抗tfr抗体与怀疑产生转铁蛋白受体的样品(例如，先前未被鉴定为产生转铁蛋白受体的细胞的新细胞类型)接触。抗体和样品可在合适的条件下孵育合适的时间段，以允许抗体与转铁蛋白受体抗原结合。然后可通过常规方法，例如elisa、组织学染色或facs来检测这样的相互作用。
[0758]
b.治疗方法
[0759]
本文中所述的抗tfr抗体可用于递送作为治疗剂的分子载荷(例如，寡核苷酸、肽/蛋白质、核酸构建体等)。在一些方面中，本公开内容还提供了用于治疗疾病的复合物，其包含与分子载荷共价缀合的抗tfr抗体。
[0760]
在一些方面中，本文中所述的包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的复合物在治疗肌肉疾病(例如，罕见肌肉疾病或肌肉萎缩)中是有效的。在一些实施方案中，所述复合物在治疗表7中提供的罕见肌肉疾病中是有效的。在一些实施方案中，肌肉疾病与疾病等位基因相关，例如，特定肌肉疾病的疾病等位基因可包含表7中列出的相应基因的遗传改变。
[0761]
在一些实施方案中，复合物在治疗与表7中“肌肉萎缩基因靶标”部分下所列出的一种或更多种基因的活性相关的肌肉萎缩中是有效的。在一些实施方案中，肌肉萎缩是由于慢性疾病，包括aids、充血性心力衰竭、癌症、慢性阻塞性肺病和肾衰竭或肌肉废用(muscle disuse)。
[0762]
在另一些方面中，本文中所述的包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的复合物在治疗神经系统疾病中是有效的。在一些实施方案中，神经系统疾病包括但不限于神经病、淀粉样变性、癌症、眼疾病或病症、病毒感染或微生物感染、炎症、局部缺血、神经退行性疾病、癫痫、行为障碍和溶酶体贮积病。出于本技术的目的，cns将被理解为包括眼，其通常通过血-视网膜屏障与身体的其余部分隔离。神经系统病症的一些具体实例包括但不限于神经退行性疾病(包括但不限于路易体病、脊髓灰质炎后综合征、夏伊-德拉格综合征、橄榄体脑桥小脑萎缩、帕金森病、多系统萎缩、纹状体黑质变性、tau蛋白病(包括但不限于阿尔茨海默病和核上性麻痹)、朊病毒病(包括但不限于牛海绵状脑病、羊瘙痒病、克罗伊茨费尔特-雅各布综合征、库鲁病、格斯特曼-施特劳斯勒尔-沙因克尔病、慢性消耗病和致死性家族型失眠症)、延髓性麻痹、运动神经元病和神经系统异变性病症(包括但不限于卡纳万病、亨廷顿病、神经元蜡样质脂褐质沉积症、亚历山大病、图雷特综合征、menkes捻转毛综合征、科凯恩综合征、哈勒沃登-施帕茨综合征、拉福拉病、雷特综合征、肝豆状核变性、莱施-奈恩综合征和unverricht-lundborg综合征)、痴呆(包括但不限于皮克病和脊髓小脑共济失调)、癌症(例如，cns的癌症，包括由身体其他部位的癌症引起的脑转移)。在一些实施方案中，为了治疗神经系统疾病，复合物包含与药物(例如，表8中列出的药物)缀合的本文中所述的抗tfr抗体以用于治疗神经系统疾病。
[0763]
在一些实施方案中，对象可以是人对象、非人灵长类对象、啮齿动物对象或任何合适的哺乳动物对象。在一些实施方案中，对象可患有表7中提供的肌肉疾病。在一些实施方案中，对象可患有肌肉萎缩，或处于发生肌肉萎缩的风险中。
[0764]
本公开内容的一个方面包括涉及向对象施用有效量的本文中所述的复合物的方法。在一些实施方案中，可向有治疗需要的对象施用有效量的包含含有与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的复合物的药物组合物。在一些实施方案中，可通过合适的途径施用包含如本文中所述的复合物的药物组合物，所述途径可包括静脉内施用，例如作为推注(bolus)或通过在一段时间内的连续输注。在一些实施方案中，可通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内或鞘内途径进行静脉内施用。在一些实施方案中，药物组合物可以是固体形式、水性形式或液体形式。在一些实施方案中，可将水性或液体形式雾化或冻干。在一些实施方案中，雾化或冻干形式可用水溶液或液体溶液重构。
[0765]
用于静脉内施用的组合物可包含多种载体，例如植物油、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、豆蔻酸异丙酯、乙醇以及多元醇(甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)。对于静脉内注射，水溶性抗体可通过滴注方法施用，通过该方法输注包含抗体和生理学上可接受的赋形剂的药物制剂。生理上可接受的赋形剂可包括，例如5％右旋糖、0.9％盐水、林格液(ringer’s solution)或其他合适的赋形剂。可将肌内制剂，例如抗体的合适可溶性盐形式的无菌制剂溶解在药用赋形剂例如注射用水、0.9％盐水或5％葡萄糖溶液中并施用。
[0766]
在一些实施方案中，包含含有与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的复合物的药物
组合物通过位点特异性或局部递送技术施用。这些技术的一些实例包括复合物的可植入储库源、局部递送导管、位点特异性载体、直接注射或直接应用。
[0767]
在一些实施方案中，包含含有与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的复合物的药物组合物以赋予对象治疗作用的有效浓度施用。如本领域技术人员所公认的，有效量根据疾病的严重程度、所治疗对象的独特特征(例如年龄、身体状况、健康或体重)、治疗的持续时间、任何同时治疗的性质、施用途径和相关因素而变化。这些相关因素是本领域技术人员已知的，并且仅通过常规实验即可解决。在一些实施方案中，有效浓度是被认为对患者安全的最大剂量。在一些实施方案中，有效浓度将是提供最大效力的最低的可能浓度。
[0768]
经验考虑因素(例如复合物在对象中的半衰期)通常将有助于确定用于治疗的药物组合物的浓度。施用频率可凭经验确定和调整以使治疗效力最大化。
[0769]
通常来说，对于本文中所述的任何复合物的施用，根据上述因素，例如安全性或效力，初始候选剂量可为约1至100mg/kg或更高。在一些实施方案中，将施用一次治疗。在一些实施方案中，将每天、每两周、每周、每两个月、每月或以提供最大效力同时使对对象的安全风险最小化的任何时间间隔施用治疗。通常来说，可在整个治疗过程中监测效力和治疗以及安全风险。
[0770]
可使用任何合适的方法评估治疗的效力。在一些实施方案中，可通过评价与肌肉疾病和/或(例如，和)肌肉萎缩相关的症状的观察结果来评估治疗的效力。
[0771]
在一些实施方案中，将包含含有与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的本文中所述的复合物的药物组合物以相对于对照(例如治疗之前基因表达的基线水平)足以抑制至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的靶基因活性或表达的有效浓度施用于对象。
[0772]
在一些实施方案中，向对象单次给药或施用包含含有与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的本文中所述的复合物的药物组合物足以抑制靶基因的活性或表达持续至少1至5天、1至10天、5至15天、10至20天、15至30天、20至40天、25至50天或更多天。在一些实施方案中，向对象单次给药或施用包含含有与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的本文中所述的复合物的药物组合物足以抑制靶基因的活性或表达持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。在一些实施方案中，向对象单次给药或施用包含含有与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的本文中所述的复合物的药物组合物足以抑制靶基因的活性或表达持续至少1、2、3、4、5或6个月。
[0773]
在一些实施方案中，药物组合物可包含多于一种包含与分子载荷共价连接的抗tfr抗体的复合物。在一些实施方案中，药物组合物还可包含用于治疗对象(例如，患有肌肉疾病(例如，表7中提供的肌肉疾病)的人对象)的任何其他合适的治疗剂。在一些实施方案中，其他治疗剂可增强或补充本文中所述复合物的效力。在一些实施方案中，其他治疗剂可发挥功能来治疗与本文中所述复合物的不同的症状或疾病。
[0774]
c.用于治疗和诊断应用的药盒/试剂盒
[0775]
本公开内容还提供了用于如本文中公开的治疗或诊断应用的药盒/试剂盒。这样的药盒/试剂盒可包含一个或更多个容器，所述容器包含抗tfr抗体，例如本文中所述那些中的任一种。
[0776]
在一些实施方案中，药盒/试剂盒可包含用于根据本文中所述的任何方法使用的
说明书。所包含的说明书可包括对施用抗tfr抗体以治疗如本文中所述的那些的靶标疾病、延迟其发作或缓解其的描述。药盒/试剂盒还可包含对基于鉴定个体是否患有靶标疾病来选择适合用于治疗的个体的描述。在另一些实施方案中，说明书包含对处于靶标疾病的风险中的个体施用抗体的描述。
[0777]
涉及使用抗tfr抗体的说明书通常包含关于用于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或子单位剂量。本发明的药盒/试剂盒中提供的说明书通常是标签或包装插页(例如，包含在药盒/试剂盒中的纸页)上的书面说明，但机器可读说明(例如，磁性或光学存储盘上携带的说明书)也是可接受的。
[0778]
标签或包装插页表明该组合物用于治疗可通过调节免疫应答来治疗的疾病或病症(例如自身免疫病)，延迟其发作和/或(例如，和)缓解其。可提供说明书以用于实践本文中所述的任何方法。
[0779]
本发明的药盒/试剂盒在合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐、软包装(例如密封的聚酯薄膜(mylar)或塑料袋)等。
[0780]
还考虑与特定装置(例如吸入器、鼻施用装置(例如，雾化器)或输注装置(例如微型泵))组合使用的包装。药盒/试剂盒可具有无菌进入口(例如容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞的小瓶)。容器还可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是抗tfr抗体，如本文中所述的那些。
[0781]
药盒/试剂盒可任选地提供另外的组分，例如缓冲剂和解释性信息。通常来说，药盒/试剂盒包含容器和在容器上或与容器相连的标签或包装插页。在一些实施方案中，本发明提供了包含上述药盒/试剂盒的内容物的制品。
[0782]
本文中还提供了用于检测样品中的转铁蛋白受体的试剂盒。这样的试剂盒可包含本文中所述的任何抗tfr抗体。在一些情况下，抗tfr抗体可与可检测标记(如本文中所述的那些)缀合。本文中使用的“缀合”或“连接”意指两个实体优选地以实现两个实体之间缔合的治疗/诊断益处的足够的亲和力缔合。两个实体之间的缔合可以是直接的或通过接头，例如聚合物接头。缀合或连接可包括共价或非共价结合以及其他形式的缔合，例如，如一个实体包封在另一个实体之上或之内，或者一个实体或两个实体包封在第三实体(例如胶束)之上或之内。
[0783]
作为替代或补充(例如，补充)，试剂盒可包含能够与抗tfr抗体结合的第二抗体。试剂盒还可包含使用抗tfr抗体来检测转铁蛋白受体的说明书。
实施例
[0784]
实施例1：抗tfr抗体的筛选
[0785]
通过elisa，从用人tfr1的ecd结构域免疫接种的小鼠中，鉴定出总共347种阳性杂交瘤克隆能够与hutfr1结合。然后在数个测定中测试347种抗体来选择最佳候选物(例如，参见图1)。例如，在测试与食蟹猴tfr1的结合的elisa测定中，从候选物池中去除为食蟹猴tfr1非结合物(non-binder)的抗体。随后，将被归纳为已知抗tfr抗体的抗体从候选物池中去除。接下来，在elisa测定中测试剩余抗体结合hutfr2的能力，并从候选物池中去除与
hutfr2结合物结合的抗体。此外，在测试与hepg2和cho细胞的结合的facs测定中，从候选池中去除与cho细胞非特异性结合的抗体。最后，在测试抗tfr抗体和转铁蛋白之间的竞争的竞争性elisa测定中，从候选物池中去除与转铁蛋白竞争与tfr结合并抑制转铁蛋白与tfr结合的抗体。
[0786]
示例性的选择标准包括：
[0787]
·
对人tfr1的kd为约60pm至约20nm
[0788]
·
针对人tfr1和食蟹猴tfr1的kd在1log内
[0789]
·koff
速率在相似的kd范围内
[0790]
·
最少的潜在脱酰胺、异构化或氧化位点
[0791]
这些过滤程序(filter)选择性地将347种阳性杂交瘤克隆缩小范围至约90种克隆。对重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)的一些实例进行测序，并在表1中提供序列。进行计算机序列分析以确定潜在的修饰位点或负责的残基。获得carterra动力学结合数据以确定kd、k
on
和k
off
速率。对所选择的克隆针对彼此进行交叉分箱(cross-binning)，以基于抗体相互竞争的能力将抗体的组放入箱(bin)中。进行线性表位作图以确定任何共有结合位点。
[0792]
组合所有这些数据以选择包含广泛的亲和力、多样化的序列库的20种抗体，并且选择所期望的抗体特性，用于进一步的测试和与分子载荷的缀合。
[0793]
还绘制了三种所选择的抗体(3-a4、3-m12和5-h12)在人tfr1上的结合表位。抗体3-a4与表位kgvepkt结合，该表位对应于seq id no：228中所示的人tfr1的第90至96位氨基酸。基于该结合表位，预计3-a4抗体与tfr1结合，即使在tfr1的胞外结构域被切割时也与tfr1结合。未鉴定出抗体3-m12或5-h12的线性结合表位，表明结合可能是构象的。
[0794]
实施例2：抗tfr1抗体对人tfr1的结合亲和力
[0795]
针对ka(结合速率常数)、kd(解离速率常数)和kd(亲和力)的测量结果，测得所选择的抗tfr1抗体与人tfr1的结合亲和力。使用两种已知的抗tfr1抗体15g11和okt9作为对照。结合实验在carterra lsa上在25c下进行。通过胺偶联在hc30m芯片上制备抗小鼠igg和抗人igg抗体“苔状物(lawn)”。59种igg(58种小鼠mab和1种人mab)被捕获在芯片上。将htfr1、cytfr1和htfr2的稀释系列注射至芯片用于结合(从1000nm开始，1∶3稀释，8个浓度)。
[0796]
结合数据通过以下进行参考：减去来自缓冲分析物注射剂的响应，并整体拟合至1∶1朗缪尔结合模型(langmuir binding model)，以用于使用carterratm动力学软件来评估ka(结合速率常数)、kd(解离速率常数)和kd(亲和力)。使用5至6个浓度以进行曲线拟合。
[0797]
结果显示，56种小鼠mab中的54种显示出与htfr1的结合并且kd值为13pm至50nm。大多数小鼠mab的kd值在个位数纳摩至亚纳摩范围内。56种小鼠mab中的49种显示出与cytfr1的交叉反应性结合并且kd值为16pm至22nm。
[0798]
表9中提供了抗tfr1抗体的ka、kd和kd值。
[0799]
表9.抗tfr1抗体的ka、kd和kd值
[0800][0801]
实施例3：抗tfr1抗体与寡核苷酸的缀合
[0802]
产生了包含与靶向dmpk的反义寡核苷酸(aso)(对照dmpk-aso)共价缀合的抗tfr1抗体的复合物。首先，抗tfr抗体克隆3-a4、3-m12、5-h12、8-k6、9-k23、3-e5、6-d3、4-o12、4-c5、10-p5、2-h19、3-f3、8-o17、3-m9、10-h2、4-j22、9-d4、8-d15、4-h4和9-c4的fab’片段是通过在完整igg的铰链区中或下方用酶切割小鼠单克隆抗体，然后进行部分还原来制备的。fab’被证实在亲合力或亲和力方面与mab相当。
[0803]
通过将抗tfr mab与靶向dmpk的aso经组织蛋白酶可切割接头共价连接来产生肌肉靶向复合物。简言之，将双环[6.1.0]壬炔-peg3-l-缬氨酸-l-瓜氨酸-五氟苯基酯(bcn-peg3-val-cit-pfp)接头分子通过氨基甲酸酯键与靶向dmpk的aso偶联。通过切向流过滤(tangential flow filtration，tff)去除过量的接头和有机溶剂。然后将经纯化的val-cit-接头-aso与叠氮化物功能化抗转铁蛋白受体抗体偶联，所述叠氮化物功能化抗转铁蛋白受体抗体通过用叠氮化物-peg4-pfp修饰赖氨酸上的ε-胺而产生。还使用15g11产生了阳性对照肌肉靶向复合物。
[0804]
然后对抗体偶联反应的产物进行两种纯化方法以去除游离抗体和游离载荷：1)疏水相互作用色谱(hic-hplc)，以及2)尺寸排阻色谱(sec)。hic柱利用递减的盐梯度将游离抗体与缀合物分离。在sec期间，基于a260/a280迹线(trace)进行分馏，以特定地收集经缀合的物质。通过nanodrop a280或bca蛋白测定(针对抗体)和quant-it ribogreen测定(针对载荷)确定缀合物的浓度。计算对应的药物抗体比(dar)。dar为0.8至2.0，并进行了标准化以使得所有样品均接受等量的载荷。
[0805]
然后测试经纯化的复合物的细胞内化和对dmpk的抑制。使非人灵长类(nhp)或dm1(由dm1患者捐赠)细胞在96孔板中生长，并分化成肌管，持续7天。然后用递增浓度(0.5nm、5nm、50nm)的各复合物处理细胞72小时。收获细胞，分离rna，并进行逆转录以产生cdna。在quantstudio 7上使用对ppib(对照)和dmpk具有特异性的taqman试剂盒进行qpcr。计算经处理与未经处理细胞中剩余dmpk转录物的相对量，并在表10和图3中示出结果。
[0806]
结果表明，抗tfr1抗体能够靶向肌细胞，被具有分子载荷(dmpk aso)的肌细胞内化，并且分子载荷(dmpkaso)能够靶向并敲低靶基因(dmpk)。
[0807]
表10.抗tfr1抗体的结合亲和力和缀合物的效力
[0808][0809]
*米自表达/缀合的产率非常低
[0810]
令人感兴趣的是，dmpk敲低结果显示抗tfr与转铁蛋白受体的结合亲和力与将dmpk aso递送至细胞以进行dmpk敲低的效力之间缺乏相关性。出乎意料的是，与对照抗体15g11相比，本文中提供的抗tfr抗体(例如，至少3-a4、3-m12、5-h12、8-k6、3-e5、10-p5、3-m9和9-d4)在将载荷(例如，dmpk aso)递送至靶细胞以及在食蟹猴细胞或人dm1患者细胞中实现分子载荷的生物学作用(例如，dmpk敲低)方面表现出优异的活性，尽管这些抗体与对照抗体15g11对人或食蟹猴转铁蛋白受体的结合亲和力相当(或者，在某些情况下，例如5-h12，结合亲和力更低)。
[0811]
顶级属性(top attribute)例如高hutfr1亲和力、nhp和dm1患者细胞系中dmpk的敲低＞50％、鉴定的与3种独特序列结合的表位、低/无预测的ptm位点以及良好的表达和缀合效率被考虑用于选择用于人源化的克隆。
[0812]
实施例4：抗tfr抗体的结构-活性关系(structure-activity relationship，sar)
[0813]
进行结构-活性关系(sar)分析以确定cdr和/或(例如，和)框架区中的共有序列。该分析显示，3-a4具有与9-b22相同的重链和轻链cdr，并且与9-b22的区别在于在重链框架区中在第64位氨基酸处的一个氨基酸(3-a4中为v，并且在9-b22中为m)。
[0814]
对于抗体3-m12，鉴定出了具有相似重链和/或(例如，和)轻链cdr序列的抗体，包括10c21、10-k10、1-i02、6-b10和9-i3。在下表11中示出了各自的cdr。5-h12具有独特的重链和轻链cdr序列，并且在该分析中未鉴定出共有相似序列的其他抗体。
[0815]
表11. 3-m12的sar分析
[0816][0817]
实施例3.连接抗tfr抗体与分子载荷的接头的血清稳定性
[0818]
在一些实例中与抗体连接的寡核苷酸通过式(c)中示出的可切割接头缀合。重要的是，接头在血清中维持稳定性并提供释放动力学，这有利于在靶肌细胞中积累足够的载荷。这种血清稳定性对于全身静脉内施用、经缀合寡核苷酸在血流中的稳定性、向肌肉组织的递送和治疗性载荷在肌细胞中的内化是重要的。已证实该接头有助于将多种类型的载荷(包括aso、sirna和pmo)精确地与fab缀合。这种灵活性使得能够合理选择适当类型的载荷来解决各肌肉疾病的遗传基础。另外，接头和缀合化学允许针对每种类型的载荷优化所连接载荷分子与各fab之比，并能够实现分子的快速设计、产生和筛选，以能够用于多种肌肉疾病应用。
[0819]
图4示出了体内接头的血清稳定性，其在静脉内给药之后72小时的过程中在多种物种之间是可比的。在每种情况下在给药之后72小时测量到至少75％的稳定性。
[0820]
材料和方法
[0821]
hutfr1/食蟹猴tfr1 elisa实验方案
[0822]
将20μg小瓶的重组hutfr1或食蟹猴tfr1稀释到10ml pbs中。用100μl/孔的在pbs
中的1μg/ml重组hutfr1或食蟹猴tfr1包被高结合、黑色、平底的96孔板(corning#3925)，并在4℃下放置过夜。包被之后，轻弹出液体并用kim-wipe在上面轻拍以去除残留液体。将冻干的bsa以10mg/ml溶解以制成1％w/v溶液，并随后将200μl在pbs中的1％bsa(w/w)添加至具有多通道的每个孔。允许在室温下在振荡器(300rpm)上封闭2小时。将20
×
tbst溶液(thermo#j77500-k2)稀释在无核酸酶的水中。封闭之后，轻弹出液体并将板用300μl tbst洗涤3
×
。将抗tfr1抗体在0.5％bsa/tbst中的系列稀释液添加至第a行，一式三份，其中以列的形式进行8点连续稀释。板上包括阳性对照和同种型对照。稀释范围为5μg/ml至5ng/ml。在室温下将板放置在300rpm的定轨振荡器上，持续60分钟。然后轻弹出液体并将板用300μl tbst洗涤3
×
。将抗(h l)igg-a488(1∶500)(invitrogen#a11013)稀释在在tbst中的0.5％bsa中，并且每孔添加100μl。然后将板在室温下以300rpm在定轨振荡器上孵育60分钟。然后轻弹出液体并将板用300μl tbst洗涤4
×
。在spectramax板读器上在495nm激发、520nm发射(15nm带宽)下读取板。数据以excel文件记录并在prism中分析，以用于ec50计算和log曲线。
[0823]
tfn竞争测定
[0824]
使用两种方法进行ab对tfn或hfe与tfr1之结合的阻断的elisa测定。在两种方法中使用的缓冲液包括洗涤缓冲液：含有补充有0.05％吐温-20的1
×
pbs；和封闭缓冲液：含有补充有3％bsa的1
×
pbs。
[0825]
方法1
[0826]
用1
×
pbs将重组经纯化tfr1-his蛋白稀释至1μg/ml，并等分10μl到每个孔中。然后将板覆盖，在4℃下孵育过夜(12至20小时)，使得板包被有tfr1蛋白。过夜包被之后，将板用洗涤缓冲液洗涤板2
×
。弃去残留的洗涤缓冲液。在室温(rt)下将孔用封闭缓冲液(55μl)孵育1小时。在封闭结束时，弃去封闭溶液。将板用洗涤缓冲液洗涤2
×
。然后用蛋白质结合配偶体预洗涤抗体。预混物a：将对照抗体(20μg/ml，2
×
)与200nm tfn(2
×
)或200nm hfe-his(2
×
)混合。预混物b：将饱和上清液与200nm tfn(2
×
)或200nm hfe-his(2
×
)混合。将预混物a或预混物b(20μl)添加至孔，然后将其在室温下孵育1小时。
[0827]
孵育之后，弃去上清液并将板用洗涤缓冲液洗涤4
×
。在室温下将孔用抗小鼠igg-hrp或抗人igg-hrp(1∶7000稀释；20μl/孔)孵育45分钟。
[0828]
通过将过氧化物酶溶液与鲁米诺(luminol)增强剂溶液以1∶1溶液预混合来制备supersignal elisa pico化学发光底物溶液。将混合物用1
×
pbs稀释至50％。
[0829]
在45分钟孵育之后，使用1
×
洗涤缓冲液将每个板洗涤4
×
。将板旋转180度并再洗涤4
×
。将预混合的supersignal elisa pico底物溶液(20μl)添加至每个孔。在添加底物之后15分钟内，在molecular devices spectramax m3发光计和softmax pro version 6.2上读取板。
[0830]
方法2
[0831]
将tfn储备蛋白解冻并用1
×
pbs稀释至2μg/ml。分配10μl到每个孔中。将每个板覆盖并在4℃下孵育过夜(12至20小时)。
[0832]
过夜包被之后，将板用洗涤缓冲液洗涤2
×
。弃去残留的洗涤缓冲液。将孔用封闭缓冲液(55μl)孵育，并在室温(rt)下孵育1小时。在封闭结束时，弃去封闭溶液。将板用洗涤缓冲液洗涤2
×
。然后将抗体与蛋白质结合配偶体预混合。预混物c：将对照抗体(20μg/ml，2
×
)与30.8μg/ml tfr1(2
×
)混合。预混物d：将饱和上清液与30.8μg/ml tfr1(2
×
)混合。将预混物c或预混物d(20μl)添加至孔，然后将其在室温下孵育1小时。
[0833]
弃去上清液。将板用洗涤缓冲液洗涤4
×
。在室温下将孔用1μg/ml生物素-md10(20μl/孔)孵育45分钟。将板用洗涤缓冲液洗涤4
×
。在室温下将孔用1μg/ml链霉亲和素-hrp(20μl/孔)孵育45分钟。
[0834]
通过将过氧化物酶溶液与鲁米诺增强剂溶液以1∶1溶液预混合来制备supersignal elisa pico化学发光底物溶液。将混合物用1
×
pbs稀释至50％。
[0835]
在45分钟孵育之后，使用1
×
洗涤缓冲液将每个板洗涤4
×
。将板旋转180度并再洗涤4
×
。将预混合的supersignal elisa pico底物溶液(20μl)添加至每个孔。在添加底物之后15分钟内，在molecular devices spectramax m3发光计和softmax pro version 6.2上读取板。
[0836]
逆转录和qpcr
[0837]
程序(superscript iv第一链合成)：
[0838]
1.在冰上解冻所有所需的试剂盒试剂。
[0839]
注意：不要从-20取出superscript iv rt，直到需要时为止。
[0840]
2.将反应混合物1(master mix 1)的组分合并至无核酸酶的管/孔中：
[0841][0842]
3.通过使用移液器简单混合，然后进行离心以收集孔底部的内容物。
[0843]
4.在65℃下将反应混合物1：：rna溶液加热5分钟，然后在冰上孵育至少1.5分钟。
[0844]
5.对5
×
ssiv缓冲液进行涡旋并旋转减速。
[0845]
6.将反应混合物2的组分合并至无核酸酶的管/孔中：
[0846][0847][0848]
7.通过移液器混合。
[0849]
8.向退火的rna反应物添加7ul反应混合物2。
[0850]
9.启动热循环仪并运行rt程序：
[0851]
步骤温度(℃)时间(分钟)
逆转录(保持)2310rt失活(保持)5510储存8010
[0852]
10.储存cdna，直至qpcr准备就绪。
[0853]
程序(qpcr)：
[0854]
1.确定每个taqman试剂盒所需的反应次数：
[0855]
试剂盒样品的#ppib75dmpk75
[0856]
2.制备用于反应的反应混合物：
[0857][0858]
3.将反应混合物等分至96孔板的孔中，如板图所示。
[0859]
4.向孔添加cdna/h2o，如板图所示。
[0860]
5.用黏性覆盖物密封96孔板
[0861]
6.通过涡旋来混合cdna和反应混合物
[0862]
7.简单旋转96孔板以确保所有液体均在每个孔的底部。
[0863]
8.使用12通道微量移液器将96孔板的内容物等分至384孔板(20ul)。
[0864]
9.使用quantstudio 7运行qpcr分析(需要保留(reservation))。
[0865]
另一些实施方案
[0866]
1.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：
[0867]
(i)含有seq id no：7的氨基酸序列的重链可变区(vh)的重链互补决定区1(cdr-h1)、重链互补决定区2(cdr-h2)和重链互补决定区3(cdr-h3)；和/或
[0868]
(ii)含有seq id no：8的氨基酸序列的轻链可变区(vl)的轻链互补决定区1(cdr-l1)、轻链互补决定区2(cdr-l2)和轻链互补决定区3(cdr-l3)。
[0869]
2.实施方案1所述的抗体，其中所述抗体包含：
[0870]
(i)seq id no：1中所示的cdr-h1、seq id no：2中所示的cdr-h2、seq id no：3中所示的cdr-h3；和/或seq id no：4中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；
[0871]
(ii)seq id no：145中所示的cdr-h1、seq id no：146中所示的cdr-h2、seq id no：147中所示的cdr-h3；和/或seq id no：148中所示的cdr-l1、seq id no：149中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；或者
[0872]
(iii)seq id no：150中所示的cdr-h1、seq id no：151中所示的cdr-h2、seq id no：152中所示的cdr-h3；和/或seq id no：153中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：154中所示的cdr-l3。
[0873]
3.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：
[0874]
(i)seq id no：1中所示的cdr-h1、seq id no：233或seq id no：80中所示的cdr-h2、seq id no：3中所示的cdr-h3；和/或seq id no：4中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；
[0875]
(ii)seq id no：145中所示的cdr-h1、seq id no：234或seq id no：236中所示的cdr-h2、seq id no：147中所示的cdr-h3；和/或seq id no：148中所示的cdr-l1、seq id no：149中所示的cdr-l2和seq id no：6中所示的cdr-l3；或者
[0876]
(iii)seq id no：150中所示的cdr-h1、seq id no：277或seq id no：278中所示的cdr-h2、seq id no：152中所示的cdr-h3；和/或seq id no：153中所示的cdr-l1、seq id no：5中所示的cdr-l2和seq id no：154中所示的cdr-l3。
[0877]
4.实施方案1至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有与seq id no：7具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh，和/或含有与seq id no：8具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl。
[0878]
5.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：
[0879]
(i)含有seq id no：15的氨基酸序列的重链可变区(vh)的重链互补决定区1(cdr-h1)、重链互补决定区2(cdr-h2)和重链互补决定区3(cdr-h3)；和/或
[0880]
(ii)含有seq id no：16的氨基酸序列的轻链可变区(vl)的轻链互补决定区1(cdr-l1)、轻链互补决定区2(cdr-l2)和轻链互补决定区3(cdr-l3)。
[0881]
6.实施方案5所述的抗体，其中所述抗体包含：
[0882]
(i)seq id no：9中所示的cdr-h1、seq id no：10中所示的cdr-h2、seq id no：11中所示的cdr-h3；和/或seq id no：12中所示的cdr-l1、seq id no：13中所示的cdr-l2和seq id no：14中所示的cdr-l3；
[0883]
(ii)seq id no：155中所示的cdr-h1、seq id no：156中所示的cdr-h2、seq id no：157中所示的cdr-h3；和/或seq id no：158中所示的cdr-l1、seq id no：159中所示的cdr-l2和seq id no：14中所示的cdr-l3；或者
[0884]
(iii)seq id no：160中所示的cdr-h1、seq id no：161中所示的cdr-h2、seq id no：162中所示的cdr-h3；和/或seq id no：163中所示的cdr-l1、seq id no：13中所示的cdr-l2和seq id no：164中所示的cdr-l3。
[0885]
7.实施方案5或实施方案6所述的抗体，其中所述抗体包含含有与seq id no：15具
有至少85％同一性的氨基酸序列的vh，和/或含有与seq id no：16具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl。
[0886]
8.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：
[0887]
(i)含有seq id no：23的氨基酸序列的重链可变区(vh)的重链互补决定区1(cdr-h1)、重链互补决定区2(cdr-h2)和重链互补决定区3(cdr-h3)；和/或
[0888]
(ii)含有seq id no：24的氨基酸序列的轻链可变区(vl)的轻链互补决定区1(cdr-l1)、轻链互补决定区2(cdr-l2)和轻链互补决定区3(cdr-l3)。
[0889]
9.实施方案8所述的抗体，其中所述抗体包含：
[0890]
(i)seq id no：17中所示的cdr-h1、seq id no：18中所示的cdr-h2、seq id no：19中所示的cdr-h3；和/或seq id no：20中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；
[0891]
(ii)seq id no：165中所示的cdr-h1、seq id no：166中所示的cdr-h2、seq id no：167中所示的cdr-h3；和/或seq id no：168中所示的cdr-l1、seq id no：169中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；或者
[0892]
(iii)seq id no：170中所示的cdr-h1、seq id no：171中所示的cdr-h2、seq id no：172中所示的cdr-h3；和/或seq id no：173中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：174中所示的cdr-l3。
[0893]
10.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：
[0894]
(i)seq id no：237或seq id no：239中所示的cdr-h1、seq id no：18中所示的cdr-h2、seq id no：19中所示的cdr-h3；和/或seq id no：20中所示的cdr-l1、seq id no：21中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3；或者
[0895]
(ii)seq id no：238或seq id no：240中所示的cdr-h1、seq id no：166中所示的cdr-h2、seq id no：167中所示的cdr-h3；和/或seq id no：168中所示的cdr-l1、seq id no：169中所示的cdr-l2和seq id no：22中所示的cdr-l3。
[0896]
11.实施方案8至10中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有与seq id no：23具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh，和/或含有与seq id no：24具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl。
[0897]
12.实施方案1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
[0898]
13.实施方案10所述的抗体，其中所述人源化抗体包含人源化vh和/或人源化vl。
[0899]
14.实施方案1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体选自全长igg、fab片段、f(ab’)片段、f(ab’)2片段、scfv和fv。
[0900]
15.实施方案14所述的抗体，其中所述抗体是全长igg。
[0901]
16.实施方案15所述的抗体，其中所述抗体包含同种型igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。
[0902]
17.实施方案16所述的抗体，其中所述抗体包含seq id no：175或seq id no：176中所示的同种型igg1的重链恒定区。
[0903]
18.实施方案15至17中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
[0904]
(i)含有与seq id no：178具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与seq id no：179具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
[0905]
(ii)含有与seq id no：180具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与seq id no：181具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或者
[0906]
(iii)含有与seq id no：182具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与seq id no：183具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。
[0907]
19.实施方案14所述的抗体，其中所述抗体是f(ab’)片段。
[0908]
20.实施方案19所述的抗体，其中所述抗体包含：
[0909]
(i)含有与seq id no：185具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与seq id no：179具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
[0910]
(ii)含有与seq id no：186具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与seq id no：181具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或者
[0911]
(iii)含有与seq id no：187具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链，和/或含有与seq id no：183具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。
[0912]
21.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，与表1中列出的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3相比，其共同包含不超过10个氨基酸变异，优选不超过8个氨基酸变异，并且更优选不超过5个氨基酸变异；和/或其中所述抗体包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，与表1或表3中列出的任一种抗体的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3相比，其共同包含不超过10个氨基酸变异，优选不超过8个氨基酸变异。
[0913]
22.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含表1中列出的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；和/或其中所述抗体包含表1或表3中列出的任一种抗体的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。
[0914]
23.与人转铁蛋白受体(tfr)结合的抗体，其中所述抗体包含：
[0915]
以gysitsgyx1(seq id no：286)表示的cdr-h1，其中x1可以是y或g；
[0916]
以ix2fdgx3x4(seq id no：287)表示的cdr-h2，其中x2可以是t或n，x3可以是a或n，并且x4可以是n、t或s；
[0917]
以x5rx6x7ydydx8x9dx
10
(seq id no：288)表示的cdr-h3，其中x5是t或a，x6是s、f或i，x7是s、n或y，x8是p、y或v，x9是i、f或l，并且x
10
是y或f；和/或
[0918]
以qdix
11
nx
12
(seq id no：289)表示的cdr-l1，其中x
11
是s或t并且x
12
是f、c、s或y；
[0919]
以yts(seq id no：13)表示的cdr-l2；
[0920]
以及以qqgx
13
x
14
x
15
px
16
t(seq id no：290)表示的cdr-l3，其中x
13
是h或n，x
14
是t或a，x
15
是l或y，并且x
16
是y、w或f。
[0921]
24.实施方案1至21中任一项所述的抗体，其中所述抗体以小于10-9
m的kd结合转铁蛋白受体1(tfr1)。
[0922]
25.核酸，其编码实施方案1至24中任一项所述的抗体。
[0923]
26.载体，其包含实施方案25所述的核酸。
[0924]
27.细胞，其包含实施方案26所述的载体。
[0925]
28.产生抗tfr1抗体的方法，其包括在适合表达所述抗体的条件下培养实施方案27所述的细胞。
[0926]
29.复合物，其包含与分子载荷共价连接的实施方案1至23中任一项所述的抗体。
[0927]
30.实施方案29所述的复合物，其中所述分子载荷是诊断剂或治疗剂。
[0928]
31.实施方案29所述的复合物，其中所述分子载荷是寡核苷酸、多肽或小分子。
[0929]
32.实施方案29至31中任一项所述的复合物，其中所述抗体与所述分子载荷通过接头连接。
[0930]
33.实施方案32所述的复合物，其中所述接头是可逆接头。
[0931]
34.实施方案33所述的复合物，其中所述接头是val-cit接头。
[0932]
35.组合物，其包含实施方案1至23中任一项所述的抗体、实施方案25所述的核酸、实施方案26所述的载体或实施方案26至31中任一项所述的复合物。
[0933]
36.实施方案32所述的组合物，其还包含可药用载体。
[0934]
37.检测生物样品中的转铁蛋白受体的方法，其包括使实施方案1至23中任一项所述的抗体与所述生物样品接触并测量所述抗体与所述生物样品的结合。
[0935]
38.实施方案37所述的方法，其中所述抗体与诊断剂共价连接。
[0936]
39.实施方案38所述的方法，其中所述生物样品是从怀疑患有与转铁蛋白受体相关的疾病或处于该疾病的风险之中的人对象获得的。
[0937]
40.实施方案39所述的方法，其中所述接触步骤通过向所述对象施用有效量的所述抗tfr抗体来进行。
[0938]
41.将分子载荷递送至细胞的方法，其包括使实施方案29至34中任一项所述的复合物与所述细胞接触。
[0939]
42.实施方案41所述的方法，其中所述细胞是肌细胞。
[0940]
43.实施方案41或实施方案42所述的方法，其中所述细胞是体外的。
[0941]
44.实施方案43所述的方法，其中所述细胞在对象中。
[0942]
45.实施方案44所述的方法，其中所述对象是人。
[0943]
46.将分子载荷递送至对象的脑或肌肉的方法，其包括向所述对象施用有效量的实施方案29至34中任一项所述的复合物。
[0944]
47.实施方案46所述的方法，其中所述施用是静脉内的。
[0945]
48.治疗疾病的方法，其包括向对象施用有效量的实施方案29至34中任一项所述的复合物，其中所述分子载荷是治疗剂。
[0946]
49.实施方案48所述的方法，其中所述疾病是神经系统疾病并且所述分子载荷是用于治疗神经系统疾病的药物。
[0947]
50.实施方案48所述的方法，其中所述疾病是肌肉疾病并且所述分子载荷是用于治疗肌肉疾病的药物。
[0948]
51.实施方案50所述的方法，其中所述肌肉疾病是罕见的肌肉疾病或肌肉萎缩。
[0949]
等同方案和术语
[0950]
本文中举例说明性地描述的公开内容可在不存在本文中未具体公开的任何一个或更多个要素、一个或更多个限制的情况下适当地实践。因此，例如，在本文中的每种情况下，术语“包含/包括”、“基本上由......组成”和“由......组成”中的任一个可用其他两个术语中的任一个替换。已采用的术语和表达作为描述而非限制的术语使用，并且使用这样的术语和表达不旨在排除所示出和所描述的特征的任何等同形式或其一部分，而是应认识到，在所公开内容的范围内可进行多种修改。因此，应理解，尽管已通过一些优选的实施方案、任选的特征具体公开了本公开内容，但是本领域技术人员可获取本文中所公开概念的
修改和变化，并且这样的修改和变化被认为是在本公开内容的范围内。
[0951]
另外，在根据马库什组(markush group)或其他替代组描述本公开内容的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本公开内容也因此以马库什组或其他组的任何个体成员或成员亚组的方式描述。
[0952]
应理解，在一些实施方案中，在描述寡核苷酸或其他核酸的结构时可参考序列表中所示的序列。在这样的实施方案中，实际的寡核苷酸或其他核酸与指定序列相比可具有一个或更多个替代核苷酸(例如，dna核苷酸的rna对应物或rna核苷酸的dna对应物)和/或者(例如，和)一个或更多个经修饰核苷酸和/或者(例如，和)一个或更多个经修饰核苷酸间键联和/或者(例如，和)一个或更多个其他修饰，同时保留与指定序列基本相同或相似的互补特性。
[0953]
除非在本文中另外指明或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其是在所附权利要求的上下文中)使用没有数量词修饰的名词将被解释为一个/种或更多个/种。除非另有说明，否则术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”将被解释为开放式术语(即，意指“包括但不限于”)。除非本文中另外指明，否则本文中值范围的记载仅旨在用作分别指代落入该范围内的每个单独值的速记方法，并且每个单独值均被并入说明书中，如同其在本文中被单独记载一样。除非在本文中另外指明或在其他情况下与上下文明显矛盾，否则本文中所述的所有方法均可以以任何合适的顺序进行。除非另有说明，否则本文中提供的任何和所有实例或示例性语言(如“例如”)的使用仅仅旨在更好地说明本发明，并且不对本发明的范围构成限制。说明书中的语言均不应被解释为表示对本发明的实践必要的任何未要求保护的要素。
[0954]
本文中描述了本发明的一些实施方案。在阅读前述说明之后，那些实施实施方案的变化方案对于本领域普通技术人员可变得明显。
[0955]
本发明人预期技术人员在适当时采用这样的变化方案，并且本发明人希望以除本文中具体描述的之外的方式实践本发明。因此，如适用法律所允许的，本发明包括在此所附权利要求中记载的主题的所有修改方案和等同方案。此外，除非在本文中另外指明或在其他情况下与上下文明显矛盾，否则本发明涵盖其所有可能变化方案中的上述要素的任何组合。本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验就能够确定本文中所述的本发明的具体实施方案的许多等同方案。这样的等同方案旨在由所附权利要求书涵盖。