一种宝藿苷I葡聚糖包合物的用途的制作方法

一种宝藿苷i葡聚糖包合物的用途
技术领域
1.本发明涉及家禽消费品领域，具体涉及一种宝藿苷i葡聚糖包合物在制备用于提高家禽品质的饲料添加剂中的用途。


背景技术：

2.随着人民生活水平的提高，食品品质和口味的升级要求以及营养价值的更高追求，使得家禽养殖模式的更新换代日新月异；随着集约化养殖模式的普及，养殖过程中和家禽如成熟蛋鸡经过产蛋高峰期的高强度代谢后，会出现严重代谢性障碍,导致肝脏和腹部脂肪蓄积,机体抗氧化功能和生殖系统功能减退,对家禽的机体健康，生产性能和肉蛋品质产生较大的负面影响，制约着我国蛋鸡产业的发展，因此如何提高蛋鸡产蛋后期的生产性能，改善家禽品质是当前家禽业面临的一个重要问题。
3.淫羊藿是多年生的草本植物，包括小檗科植物心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿、朝鲜淫羊藿、粗毛淫羊藿等，具有广泛的药用价值，被收录于《中国兽药典2015版》中。宝藿苷i为淫羊藿发挥作用的体内活性结构，国际纯粹与应用化学联合会（iupac）将其命名为3-(α-l-鼠李糖吡喃氧基)-4'-甲氧基-5,7-二羟基-8-丙炔基黄酮。但是由于宝藿苷i口服吸收较差，生物利用度低，限制了宝藿苷i效用的发挥。
4.目前还没有以宝藿苷i为活性成分提高家禽品质的食品或饲料添加剂的研究报道。


技术实现要素：

5.为解决上述问题，本发明提供了一种宝藿苷i葡聚糖包合物在制备用于提高家禽品质的饲料添加剂中的用途 ；所述宝藿苷i葡聚糖包合物是由下述重量配比的原料组成：葡聚糖20~100份，宝藿苷i5份。
6.进一步地，所述宝藿苷i葡聚糖包合物是由下述重量配比的原料组成：葡聚糖95份，宝藿苷i5份。
7.进一步地，所述葡聚糖为β-1,3/α-1,3-葡聚糖。
8.进一步地，所述β-1,3/α-1,3-葡聚糖是以磷酸二氢钠、硝酸钾、硫酸镁、氯化钙、硫酸亚铁、硫酸锰和蔗糖为原料，加普沙土壤杆菌zx09发酵制成。
9.进一步地，所述饲料添加剂是以宝藿苷i葡聚糖包合物为活性成分，加上药品或食品上可接受的辅料制备而成的制剂；所述制剂为口服制剂；所述口服制剂为颗粒剂、溶液剂、粉剂或膏剂。
10.进一步地，所述饲料添加剂是提高家禽生长性能、肉质品质、免疫力的饲料添加剂。
11.进一步地，所述家禽包括鸡、鸭、鹅、鸽。
12.本发明所述的“p值”即概率，反映某一事件发生的可能性大小；统计学根据显著性检验方法所得到的p值，一般以p《0.05 为有统计学差异，p《0.01 为有显著统计学差异，p《
0.001为有极其显著的统计学差异；其含义是样本间的差异由抽样误差所致的概率小于0.05、0.01、0.001。
13.本发明所述“宝藿苷乙醇溶液”是宝藿苷i溶解于乙醇制备得到的溶液。
14.本发明宝藿苷i葡聚糖包合物，可以改善宝藿苷i生物利用度，克服现有宝藿苷i应用技术中存在的口服吸收较差的缺陷，将其应用于家禽中，可显著提高家禽生长性能、肉质品质、免疫力，具备实际推广应用的价值。
15.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
16.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
17.图1是饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对42日龄肉鸡生长性能影响结果的图；图2是饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对42日龄肉鸡屠宰性能影响结果的图；图3是宝藿苷i葡聚糖对42日龄肉鸡肉品质影响结果的图；图4是宝藿苷i葡聚糖对42日龄肉鸡血液生化影响结果的图；图5是饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对42日龄肉鸡免疫功能影响结果的图；图6是饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对42日龄肉鸡空肠黏膜组织形态影响结果的图；图7是饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对42日龄肉鸡回肠菌数（logcfu/g）影响结果的图。
具体实施方式
18.本发明具体实施方式中的原料、设备通过市售购买获得，其中普沙土壤杆菌zx09（agrobacterium pusense zx09）为南京理工大学发现，并申请了专利cn201010146371.2，该专利获得授权后转让于四川合泰新光生物科技有限公司。
19.实施例1、本发明宝藿苷i葡聚糖包合物的制备
①
β-1,3/α-1,3-葡聚糖制备在发酵罐中加入约15-20l水，加入磷酸二氢钠15-25g、硝酸钾35-45g、硫酸镁4-6g、氯化钙0.1-0.2g、硫酸亚铁0.2-0.3g、硫酸锰0.05-0.10g、泡敌35-45g、蔗糖600g溶解混匀，用氢氧化钠溶液调节ph值至7。蒸汽灭菌110-130℃，30min，灭菌完成后通入无菌空气，夹层通冷却水冷却，冷却完成后，发酵液总体积约为20-25l；向发酵罐接种200ml普沙土壤杆菌zx09种子液，调节通气流量至20l/min，搅拌转速250-300rpm，发酵温度设置为30℃，培养60h。发酵完成后，将发酵液放入桶中，加入95%乙醇沉淀发酵液，取沉淀压干后用鼓风干燥箱干燥，干燥后粉碎得β-1,3/α-1,3-葡聚糖成品。
20.②
宝藿苷i葡聚糖包合物的制备a、取宝藿苷i，加95%乙醇溶解制成浓度为5.0%（0.05g/ml）宝藿苷乙醇溶液；取β-1,3/α-1,3-葡聚糖，加水混合成浓度为1.0%（0.01g/ml）的β-1,3/α-1,3-葡聚糖水溶液；b、将步骤a所得β-1,3/α-1,3-葡聚糖水溶液在80-90℃下水浴搅拌2-3h，然后加入步骤a所得宝藿苷乙醇溶液，葡聚糖水溶液与宝藿苷乙醇溶液的体积比为95:1，继续搅拌
30-60min。冷却后将混合液置于-70℃ 冰箱中预冻10-14h后，置真空冷冻干燥机中冷冻干燥16-20h ，粉碎干燥物得到所述宝藿苷i葡聚糖包合物。
[0021] 实施例2、本发明宝藿苷i葡聚糖包合物的制备
①
β-1,3/α-1,3-葡聚糖制备在发酵罐中加入约15-20l水，加入磷酸二氢钠15-25g、硝酸钾35-45g、硫酸镁4-6g、氯化钙0.1-0.2g、硫酸亚铁0.2-0.3g、硫酸锰0.05-0.10g、泡敌35-45g、蔗糖600g溶解混匀，用氢氧化钠溶液调节ph值至7。蒸汽灭菌110-130℃，30min，灭菌完成后通入无菌空气，夹层通冷却水冷却，冷却完成后，发酵液总体积约为20-25l；向发酵罐接种200ml普沙土壤杆菌zx09种子液，调节通气流量至20l/min，搅拌转速250-300rpm，发酵温度设置为30℃，培养60h。发酵完成后，将发酵液放入桶中，加入95%乙醇沉淀发酵液，取沉淀压干后用鼓风干燥箱干燥，干燥后粉碎得β-1,3/α-1,3-葡聚糖成品。
[0022]
②
宝藿苷i葡聚糖包合物的制备a、取宝藿苷i，加95%乙醇溶解制成浓度为5.0%（0.05g/ml）宝藿苷乙醇溶液；取β-1,3/α-1,3-葡聚糖，加水混合成浓度为1.0%（0.01g/ml）的β-1,3/α-1,3-葡聚糖水溶液；b、将步骤a所得β-1,3/α-1,3-葡聚糖水溶液在80-90℃下水浴搅拌2-3h，然后加入步骤a所得宝藿苷乙醇溶液，葡聚糖水溶液与宝藿苷乙醇溶液的体积比为20：1，继续搅拌30-60min。冷却后将混合液置于-70℃ 冰箱中预冻10-14h后，置真空冷冻干燥机中冷冻干燥16-20h ，粉碎干燥物得到所述宝藿苷i葡聚糖包合物。
[0023] 实施例3、本发明宝藿苷i葡聚糖包合物的制备
①
β-1,3/α-1,3-葡聚糖制备在发酵罐中加入约15-20l水，加入磷酸二氢钠15-25g、硝酸钾35-45g、硫酸镁4-6g、氯化钙0.1-0.2g、硫酸亚铁0.2-0.3g、硫酸锰0.05-0.10g、泡敌35-45g、蔗糖600g溶解混匀，用氢氧化钠溶液调节ph值至7。蒸汽灭菌110-130℃，30min，灭菌完成后通入无菌空气，夹层通冷却水冷却，冷却完成后，发酵液总体积约为20-25l；向发酵罐接种200ml普沙土壤杆菌zx09种子液，调节通气流量至20l/min，搅拌转速250-300rpm，发酵温度设置为30℃，培养60h。发酵完成后，将发酵液放入桶中，加入95%乙醇沉淀发酵液，取沉淀压干后用鼓风干燥箱干燥，干燥后粉碎得β-1,3/α-1,3-葡聚糖成品。
[0024]
②
宝藿苷i葡聚糖包合物的制备a、取宝藿苷i，加95%乙醇溶解制成浓度为5.0%（0.05g/ml）宝藿苷乙醇溶液；取β-1,3/α-1,3-葡聚糖，加水混合成浓度为1.0%（0.01g/ml）的β-1,3/α-1,3-葡聚糖水溶液；b、将步骤a所得β-1,3/α-1,3-葡聚糖水溶液在80-90℃下水浴搅拌2-3h，然后加入步骤a所得宝藿苷乙醇溶液，葡聚糖水溶液与宝藿苷乙醇溶液的体积比为100：1，继续搅拌30-60min。冷却后将混合液置于-70℃ 冰箱中预冻10-14h后，置真空冷冻干燥机中冷冻干燥16-20h ，粉碎干燥物得到所述宝藿苷i葡聚糖包合物。
[0025] 以下通过试验例来说明本发明的有益效果。
[0026]
试验例1 宝藿苷i葡聚糖包合物在肉鸡中的有效性试验1. 试验目的通过研究宝藿苷i葡聚糖包合物对肉仔鸡生长性能、血液生化、肠道组织结构、养分利用率等的影响，探讨宝藿苷i葡聚糖包合物作为肉鸡饲料添加剂的有效性和应用前景，
为宝藿苷i葡聚糖包合物在肉鸡养殖中的应用提供试验依据和理论参考。
[0027]
2. 试验动物与试验设计按随机原则将360只健康1日龄aa 肉仔鸡分为3个处理组，每个处理组设6个重复，每个重复20只鸡（公母各10只，分笼饲养）。
[0028]
3. 试验饲粮与饲养管理试验采用玉米-豆粕-棉粕型基础饲粮，试验饲粮根据试验设计分别在基础饲粮中添加5mg/kg宝藿苷i 95mg/kg β-1,3/α-1,3-葡聚糖混合物和100mg/kg宝藿苷i葡聚糖包合物(按实施例1制备）构成。宝藿苷i葡聚糖混合物与包合物按设计比例与维生素、微量元素预混料混合后添加。试验饲粮制粒后饲喂。所有饲粮中不含任何抗生素。
[0029]
鸡只采用立体三层镀锌铁丝笼笼养，24小时光照，乳头式饮水器供水，自由采食试验饲粮。1日龄接种马立克氏病、鸡新城疫疫苗，21日龄饮水接种法氏囊病疫苗，23日龄饮水接种鸡新城疫疫苗。鸡舍卫生管理按常规进行。
[0030]
4. 指标测定
①
生长性能试验期间注意观察试验鸡只生长和健康状况，按重复每日记录饲料采食量，死亡鸡只数，死亡鸡只重。于42日龄，鸡只空腹12小时后，分别对每笼肉鸡进行称重，计算42日龄平均体重、平均日增重、平均日采食量、耗料增重比和死淘率。
[0031]
②
屠宰率及肉品质的测定于42日龄重复随机挑选两只鸡（公母各1只）屠宰测定胴体性能、屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率和腹脂率。取左侧胸肌，测定滴水损失、蒸煮损失和肉色。
[0032]
③
血液生化于42日龄时，每重复两只鸡（公母各1只），心脏采血约10毫升，制备血清，采用相应试剂盒在全自动生化分析仪上测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸活性以及血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、肌酐、甘油三酯、脂蛋白、总胆固醇含量。采用免疫比浊试剂盒测定血清免疫球蛋白（iga、igg、和igm）含量。采用红血球凝集抑制法测定血清新城疫抗体滴度。
[0033]
④
空肠黏膜组织形态观察42日龄，每个重复屠宰2只肉鸡（公母各1只），从42日龄屠宰的肉鸡消化道小心分离空肠，从胰胆管到麦克尔憩室，回肠从麦克尔憩室到回肠-腹腔交界处。去除食糜后，取中部1厘米肠段，置于10%甲醛溶液中固定保存。将甲醛固定好的肠段职称5μm切片，苏木精-伊红染色，400
×
显微镜观察。每个切片随机选取10个隐窝和绒毛完整、定向良好的视野，测量绒毛高度和隐窝深度，并计算绒毛高度和隐窝深度的比值。
[0034]
⑤
回肠末端菌群计数42日龄，每个重复屠宰2只肉鸡（公母各1只），采集回肠末端内容物，采用rt-qpcr法定量总菌、大肠杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌。先用上述3个菌种的标准菌株dna混合，用通用引物和设计的16srdna引物扩增后连接载体构建重组质粒作为标准品，制作目的基因序列拷贝数（y）和ct值（x）的标准曲线。然后用粪便dna提取试剂盒提取回肠内容物样品dna，采用sybr green i荧光定量pcr反应体系对样品16srdna进行扩增，测定ct值，带入标准曲线方程求得目的基因序列拷贝数（待测细菌数目）。
[0035]
5. 结果与讨论
①
饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对肉鸡生长性能的影响综合全期试验结果（图1），试验组肉鸡死淘率无明显变化（p》0.05），但平均日增重显著提高，平均日采食量和料重比显著降低（p《0.05）。其中，包合物组日增重显著高于混合物组（p《0.05），而日采食量和料重比显著低于混合物组（p《0.05）。公鸡和母鸡的死淘率无显著差异（p》0.05），其他各项生长指标公鸡显著优于母鸡（p《0.01）。宝藿苷i葡聚糖和性别之间未表现出显著的交互作用（p》0.05）。
[0036]
②
饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对肉鸡屠宰性能的影响方差分析结果（图2）表明，宝藿苷i葡聚糖包合物未影响肉鸡的屠宰率、半净膛率、全净膛率和腹脂率（p》0.05），但显著影响肉鸡的胸肌率和腿肌率（p《0.05）。性别对屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌率和腹脂率均有显著影响（p《0.01），其中公鸡的屠宰率、半净膛率和全净膛率极显著大于母鸡，母鸡的腿肌率和腹脂率显著大于公鸡。宝藿苷i葡聚糖与性别间不存在显著的交互作用（p》0.05）。
[0037]
③
饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对鸡肉品质的影响二因素方差分析结果（图3）表明，试验组各项肉品质指标均无明显变化（p》0.05）。性别对蒸煮损失有显著影响，母鸡胸肌的蒸煮损失高于公鸡（p《0.05）。宝藿苷i葡聚糖和性别交互作用对胸肌亮度，黄度和红度有显著影响（p《0.05）。分性别单因素方差分析表明，包合物组公鸡胸肌亮度显著增加（p《0.05），红度显著降低（p《0.05），但不影响母鸡胸肌亮度和红度；而包合物组母鸡胸肌黄度显著增加，但对公鸡胸肌黄度无影响。
[0038]
④
饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对肉鸡血液生化的影响图4显示，试验组显著影响42日龄肉鸡血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、甘油三酯、高密度脂蛋白、总胆固醇和肌酐（p《0.05）。与混合物组相比，包合物组能显著提高总蛋白、白蛋白和球蛋白（p《0.05），降低尿素氮含量（p《0.05），并显著提高肌酐水平（p《0.05）。上述结果提示，宝藿苷i葡聚糖包合物能改善肉鸡生长蛋白质营养状况，并增加肌肉组织的生长和沉淀。
[0039]
此外，宝藿苷i葡聚糖包合物还能显著降低甘油三酯和总胆固醇，并提高高密度脂蛋白（p《0.05）。此结果表明宝藿苷i葡聚糖包合物对生长肉鸡脂质代谢有一定的调控作用。
[0040]
母鸡血清总蛋白和白蛋白显著高于公鸡，公鸡球蛋白显著高于母鸡（p《0.05）。性别与宝藿苷i葡聚糖包合物互作效应对甘油三酯有显著影响（p《0.05）。分性别单因素方差分析表明，宝藿苷i葡聚糖包合物能降低母鸡的甘油三酯，对公鸡影响不明显。
[0041]
⑤
饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对鸡肉免疫功能的影响二因素方差分析结果显示（图5），与基础组和混合物组相比，包合物组显著提高了血清免疫球蛋白g、m和a的水平（p《0.01，p《0.05）。宝藿苷i葡聚糖并未显著影响肉鸡新城疫抗体滴度（p》0.05）。此外，公鸡和母鸡的血清免疫球蛋白无显著差异（p》0.05），但公鸡的抗体滴度显著高于母鸡（p《0.05）。性别和宝藿苷i葡聚糖之间不存在显著交互作用（p》0.05）。
[0042]
⑥
饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对肉鸡空肠黏膜组织形态的影响二因素方差分析结果显示（图6），宝藿苷i葡聚糖和性别对42日龄肉鸡空肠绒毛高度、隐窝深度及二者比值均无显著影响（p》0.05）。宝藿苷i葡聚糖和性别之间也不存在明显的交互作用（p》0.05）。
[0043]
⑦
饲粮添加宝藿苷i葡聚糖对肉鸡回肠菌群的影响二因素方差分析结果显示（图7），与基础组和混合物组相比，包合物组显著影响42日龄肉鸡回肠总菌、大肠杆菌和双歧杆菌菌数（p《0.01，p《0.05）。性别对回肠菌群也有明显影响，其中母鸡回肠总菌（p《0.05）、双歧杆菌（p《0.05）和乳酸杆菌菌数（p=0.051）均高于公鸡。
[0044]
乳酸杆菌菌数受宝藿苷i葡聚糖和性别之间互作效应的影响（p《0.01）。宝藿苷i葡聚糖对母鸡乳酸杆菌数量影响不显著（p》0.05），但显著提高公鸡乳酸杆菌数（p《0.05）。
[0045]
6. 结论本试验条件下，与基础饲粮和添加宝藿苷i葡聚糖混合物相比，饲粮添加宝藿苷i葡聚糖包合物能够显著提高肉鸡日增重并降低料肉比，增加胴体胸肌和腿肌比例，提高肉鸡血清蛋白含量和肌酐水平，降低血清尿素氮含量，并有提高干物质和能量表观利用率的作用趋势。饲粮添加宝藿苷i葡聚糖包合物能显著增强肉鸡体液免疫功能。