一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及农业抗菌剂技术领域，具体为一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂及其制备方法。


背景技术：

2.抗菌剂就是能抑制细菌生长的物质，虽然无法杀死细菌但可以抑制细菌的生长，阻止细菌滋生过多、危害健康，周围的病菌时刻在侵害农作物的生长国策很难过，大多数的时候，作物体内的免疫系统，可以应付这些病菌的入侵，但如果病菌突然大量繁殖，超过了防御系统所能应付的范围，作物就会发病枯萎，所以从农业预防的角度来看，抑制细菌的滋生是很重要的，但是现有的农业抗菌剂在培养前期缺乏对培养基进行预处理，培养基中残留的菌种会影响有益菌的活化过程，从而降低了抗菌剂的制备效率，同时，在扩增培养的过程中，菌群产生的乳酸过量会抑制菌群的扩增，从而降低了制备后抗菌剂的质量，且在菌剂制备之后没有对菌剂进行浓缩处理，制备后的抗菌剂中会残留水分，从而影响了抗菌剂的实际效果，因此设计一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂及其制备方法是很有必要的。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂，配方包括：乳酸菌、柠檬酸菌、柠檬酸、复合缓冲盐、抑制剂、琼脂粉和费氏丙酸杆菌；各组分的重量份数分别是：50～60份的乳酸菌、7～13份的柠檬酸、25～35份的复合缓冲盐、0.5～0.8份的抑制剂、60～70份的琼脂粉和5～7份的费氏丙酸杆菌。
5.优选的，所述复合缓冲盐由柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠混合而成，且柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠的重量比为5:3:3:1。
6.一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂制备方法，包括以下步骤：步骤一，原料称取；步骤二，活化灭菌；步骤三，活化培养；步骤四，离心分离；步骤五，扩增培养；步骤六，压缩制剂；
7.其中上述步骤一中，按照各组分的重量份数分别称取50～60份的乳酸菌、7～13份的柠檬酸、25～35份的复合缓冲盐、0.5～0.8份的抑制剂、60～70份的琼脂粉和5～7份的费氏丙酸杆菌，备用；
8.其中上述步骤二中，分别向三支试管中加入相同质量份数的固体培养基，随后将步骤一中备好的琼脂粉和抑制剂均分为三份，再分别加入装有固体培养基的试管中，接着将三支试管放入灭菌室中进行灭菌处理，之后取出进行冷却处理，冷却后向三支试管中分别加入步骤一中备好的乳酸菌、柠檬酸菌和费氏丙酸杆菌，分布得到乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费氏丙酸杆菌活化基体，备用；
9.其中上述步骤三中，将步骤二中备好的乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费
氏丙酸杆菌活化基体分别放入振荡培养箱中进行恒温活化，活化后分别得到乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液，备用；
10.其中上述步骤四中，将上述步骤三中备好的乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液分布放入高速离心机中进行离心分离，离心分离后分别得到乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂，然后将乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂放入搅拌箱中，并加入步骤一中备好的柠檬酸，随后进行恒温搅拌，恒温搅拌后得到复配菌剂液，备用；
11.其中上述步骤五中，向培养皿中加入mrs液体培养基，然后将培养皿放入灭菌室中进行灭菌处理，之后取出进行冷却处理，冷却后向培养皿中加入步骤四中备好的复配菌剂液和步骤一中备好的复合缓冲盐，再加入质量份数为50～60份的麦芽汁，之后放入恒温室中进行扩散培养，扩散培养后得到菌群制剂，备用；
12.其中上述步骤六中，将上述步骤五中备好的菌群制剂放入高速离心机中进行离心处理，之后将分离后的上清液倒入压缩机中进行浓缩处理，浓缩处理后得到基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂。
13.优选的，所述步骤二中，向每支试管中加入固体培养基的质量份数为7500～8000份，灭菌处理的温度为120～122℃，灭菌处理的时间为0.2～0.3h，冷却处理将试管中固体培养基的温度降低至25～28℃。
14.优选的，所述步骤三中，在振荡培养箱中进行恒温活化时，振荡培养箱中的温度为28～30℃，振荡培养箱中的摇床转速为135～150r/min，恒温活化的时间为70～72h。
15.优选的，所述步骤四中，离心分离时高速离心机中的温度为35～38℃，离心转速为1280～1350r/min，离心分离的时间为0.05～0.08h，恒温搅拌时的温度为35～38℃，搅拌转速为35～50r/min，恒温搅拌0.2～0.3h。
16.优选的，所述步骤五中，加入mrs液体培养基的质量份数为5500～6000份，灭菌处理的温度为120～122℃，灭菌处理的时间为0.2～0.3h，冷却处理将试管中mrs液体培养基的温度降低至25～28℃，扩散培养的温度为35～42℃，且扩散培养的时间为7.5～8h。
17.优选的，所述步骤六中，离心处理时高速离心机中的温度为35～38℃，离心转速为1280～1350r/min，离心处理的时间为0.05～0.08h，压缩机使用的是厚度为0.2μm的浓缩循环过滤膜。
18.与现有技术相比，本发明的有益效果是：该一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂及其制备方法，通过对乳酸菌进行活化扩增形成了乳酸菌菌群，进而利用菌群生成大量乳酸来抑制病菌的生长，从而起到抗菌的作用，在活化培养之前对固体培养基进行高温灭活，去除了培养基中残留的杂菌，保障了有益菌类的正常活化，避免杂菌影响菌剂中有益菌的生长和扩增，从而提高了菌剂的制备效率，在扩增培养的过程中向mrs培养基中加入麦芽汁作为诱导剂有效提高了菌群中乳酸的分解过程，避免乳酸过量抑制菌群的扩增，从而保障了制备后的菌剂质量，通过使用厚度为0.2μm的浓缩循环过滤膜对菌剂进行浓缩处理，消除了菌剂中多余的水分，提高了制备后菌剂的实用效果。
附图说明
19.图1为本发明的方法流程图。
具体实施方式
20.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
21.请参阅图1，本发明提供一种技术方案：
22.实施例1：
23.一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂，配方包括：乳酸菌、柠檬酸菌、柠檬酸、复合缓冲盐、抑制剂、琼脂粉和费氏丙酸杆菌；各组分的重量份数分别是：60份的乳酸菌、13份的柠檬酸、35份的复合缓冲盐、0.8份的抑制剂、70份的琼脂粉和7份的费氏丙酸杆菌，复合缓冲盐由柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠混合而成，且柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠的重量比为5:3:3:1。
24.一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂制备方法，包括以下步骤：步骤一，原料称取；步骤二，活化灭菌；步骤三，活化培养；步骤四，离心分离；步骤五，扩增培养；步骤六，压缩制剂；
25.其中上述步骤一中，按照各组分的重量份数分别称取60份的乳酸菌、13份的柠檬酸、35份的复合缓冲盐、0.8份的抑制剂、70份的琼脂粉和7份的费氏丙酸杆菌，备用；
26.其中上述步骤二中，分别向三支试管中加入质量份数为8000份的固体培养基，随后将步骤一中备好的琼脂粉和抑制剂均分为三份，再分别加入装有固体培养基的试管中，接着将三支试管放入灭菌室中，在122℃的温度下，进行灭菌处理0.3h，之后取出进行冷却处理将试管中固体培养基的温度降低至28℃，冷却后向三支试管中分别加入步骤一中备好的乳酸菌、柠檬酸菌和费氏丙酸杆菌，分布得到乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费氏丙酸杆菌活化基体，备用；
27.其中上述步骤三中，将步骤二中备好的乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费氏丙酸杆菌活化基体分别放入振荡培养箱中，调节振荡培养箱中的摇床转速为150r/min，随后在30℃的温度下，进行恒温活化72h，活化后分别得到乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液，备用；
28.其中上述步骤四中，将上述步骤三中备好的乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液分布放入高速离心机中，随后调节高速离心机的温度为38℃，接着以1350r/min的离心转速进行离心分离0.08h，离心分离后分别得到乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂，然后将乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂放入搅拌箱中，并加入步骤一中备好的柠檬酸，在38℃的温度下，以50r/min的搅拌转速进行恒温搅拌0.3h，恒温搅拌后得到复配菌剂液，备用；
29.其中上述步骤五中，向培养皿中加入质量份数为6000份的mrs液体培养基，然后将培养皿放入灭菌室中在122℃的温度下，进行灭菌处理0.3h，之后取出进行冷却处理将试管中固体培养基的温度降低至28℃，冷却后向培养皿中加入步骤四中备好的复配菌剂液和步骤一中备好的复合缓冲盐，再加入质量份数为60份的麦芽汁，之后放入恒温室中在42℃的温度下进行扩散培养8h，扩散培养后得到菌群制剂，备用；
30.其中上述步骤六中，将上述步骤五中备好的菌群制剂放入高速离心机中在38℃的
温度下，以1350r/min的离心转速进行离心处理0.08h，之后将分离后的上清液倒入压缩机中进行浓缩处理，其中压缩机使用的是厚度为0.2μm的浓缩循环过滤膜，浓缩处理后得到基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂。
31.实施例2：
32.一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂，配方包括：乳酸菌、柠檬酸菌、柠檬酸、复合缓冲盐、抑制剂、琼脂粉和费氏丙酸杆菌；各组分的重量份数分别是：50份的乳酸菌、7份的柠檬酸、25份的复合缓冲盐、0.5份的抑制剂、60份的琼脂粉和5份的费氏丙酸杆菌，复合缓冲盐由柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠混合而成，且柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠的重量比为5:3:3:1。
33.一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂制备方法，包括以下步骤：步骤一，原料称取；步骤二，活化灭菌；步骤三，活化培养；步骤四，离心分离；步骤五，扩增培养；步骤六，压缩制剂；
34.其中上述步骤一中，按照各组分的重量份数分别称取50份的乳酸菌、7份的柠檬酸、25份的复合缓冲盐、0.5份的抑制剂、60份的琼脂粉和5份的费氏丙酸杆菌，备用；
35.其中上述步骤二中，分别向三支试管中加入质量份数为7500份的固体培养基，随后将步骤一中备好的琼脂粉和抑制剂均分为三份，再分别加入装有固体培养基的试管中，接着将三支试管放入灭菌室中，在120℃的温度下，进行灭菌处理0.2h，之后取出进行冷却处理将试管中固体培养基的温度降低至25℃，冷却后向三支试管中分别加入步骤一中备好的乳酸菌、柠檬酸菌和费氏丙酸杆菌，分布得到乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费氏丙酸杆菌活化基体，备用；
36.其中上述步骤三中，将步骤二中备好的乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费氏丙酸杆菌活化基体分别放入振荡培养箱中，调节振荡培养箱中的摇床转速为135r/min，随后在28℃的温度下，进行恒温活化70h，活化后分别得到乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液，备用；
37.其中上述步骤四中，将上述步骤三中备好的乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液分布放入高速离心机中，随后调节高速离心机的温度为35℃，接着以1280r/min的离心转速进行离心分离0.05h，离心分离后分别得到乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂，然后将乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂放入搅拌箱中，并加入步骤一中备好的柠檬酸，在35℃的温度下，以35r/min的搅拌转速进行恒温搅拌0.2h，恒温搅拌后得到复配菌剂液，备用；
38.其中上述步骤五中，向培养皿中加入质量份数为5500份的mrs液体培养基，然后将培养皿放入灭菌室中在120℃的温度下，进行灭菌处理0.2h，之后取出进行冷却处理将试管中固体培养基的温度降低至25℃，冷却后向培养皿中加入步骤四中备好的复配菌剂液和步骤一中备好的复合缓冲盐，再加入质量份数为50份的麦芽汁，之后放入恒温室中在35℃的温度下进行扩散培养7.5h，扩散培养后得到菌群制剂，备用；
39.其中上述步骤六中，将上述步骤五中备好的菌群制剂放入高速离心机中在35℃的温度下，以1280r/min的离心转速进行离心处理0.05h，之后将分离后的上清液倒入压缩机中进行浓缩处理，其中压缩机使用的是厚度为0.2μm的浓缩循环过滤膜，浓缩处理后得到基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂。
40.实施例3：
41.一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂，配方包括：乳酸菌、柠檬酸菌、柠檬酸、复合缓冲盐、抑制剂、琼脂粉和费氏丙酸杆菌；各组分的重量份数分别是：60份的乳酸菌、7份的柠檬酸、35份的复合缓冲盐、0.5份的抑制剂、70份的琼脂粉和5份的费氏丙酸杆菌，复合缓冲盐由柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠混合而成，且柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钾和醋酸钠的重量比为5:3:3:1。
42.一种基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂制备方法，包括以下步骤：步骤一，原料称取；步骤二，活化灭菌；步骤三，活化培养；步骤四，离心分离；步骤五，扩增培养；步骤六，压缩制剂；
43.其中上述步骤一中，按照各组分的重量份数分别称取60份的乳酸菌、7份的柠檬酸、35份的复合缓冲盐、0.5份的抑制剂、70份的琼脂粉和5份的费氏丙酸杆菌，备用；
44.其中上述步骤二中，分别向三支试管中加入质量份数为8000份的固体培养基，随后将步骤一中备好的琼脂粉和抑制剂均分为三份，再分别加入装有固体培养基的试管中，接着将三支试管放入灭菌室中，在120℃的温度下，进行灭菌处理0.3h，之后取出进行冷却处理将试管中固体培养基的温度降低至25℃，冷却后向三支试管中分别加入步骤一中备好的乳酸菌、柠檬酸菌和费氏丙酸杆菌，分布得到乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费氏丙酸杆菌活化基体，备用；
45.其中上述步骤三中，将步骤二中备好的乳酸菌活化基体、柠檬酸菌活化基体和费氏丙酸杆菌活化基体分别放入振荡培养箱中，调节振荡培养箱中的摇床转速为150r/min，随后在28℃的温度下，进行恒温活化72h，活化后分别得到乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液，备用；
46.其中上述步骤四中，将上述步骤三中备好的乳酸菌悬浊液、柠檬酸菌悬浊液和费氏丙酸杆菌悬浊液分布放入高速离心机中，随后调节高速离心机的温度为35℃，接着以1350r/min的离心转速进行离心分离0.05h，离心分离后分别得到乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂，然后将乳酸菌菌剂、柠檬酸菌菌剂和费氏丙酸杆菌菌剂放入搅拌箱中，并加入步骤一中备好的柠檬酸，在38℃的温度下，以35r/min的搅拌转速进行恒温搅拌0.3h，恒温搅拌后得到复配菌剂液，备用；
47.其中上述步骤五中，向培养皿中加入质量份数为5500份的mrs液体培养基，然后将培养皿放入灭菌室中在122℃的温度下，进行灭菌处理0.2h，之后取出进行冷却处理将试管中固体培养基的温度降低至28℃，冷却后向培养皿中加入步骤四中备好的复配菌剂液和步骤一中备好的复合缓冲盐，再加入质量份数为50份的麦芽汁，之后放入恒温室中在42℃的温度下进行扩散培养7.5h，扩散培养后得到菌群制剂，备用；
48.其中上述步骤六中，将上述步骤五中备好的菌群制剂放入高速离心机中在38℃的温度下，以1280r/min的离心转速进行离心处理0.08h，之后将分离后的上清液倒入压缩机中进行浓缩处理，其中压缩机使用的是厚度为0.2μm的浓缩循环过滤膜，浓缩处理后得到基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂。
49.将上述实施例所得基于乳酸菌群的农业微生物抗菌剂分别进行性能检测，并与市面上的普通抗菌剂进行对比，所得结果如下表：
[0050] 含水率杂菌含量
实施例18.14％0.56％实施例26.98％0.66％实施例35.23％0.45％对比例32.35％15.48％
[0051]
基于上述，本发明的优点在于，通过对乳酸菌进行活化和扩增形成了乳酸菌菌群，进而利用菌群生成大量乳酸来抑制病菌的生长，从而起到抗菌的作用，在活化培养之前对固体培养基进行高温灭活，去除了培养基中残留的杂菌，避免杂菌影响菌剂中有益菌的生长和扩增，保障了有益菌类的正常活化，提高了菌剂的制备效率，在扩增培养的过程中向mrs培养基中加入麦芽汁作为诱导剂有效提高了菌群中乳酸的分解过程，避免乳酸过量抑制菌群的扩增，从而保障了制备后的菌剂质量，通过使用浓缩循环过滤膜对分离后的菌剂进行浓缩处理，消除了菌剂中多余的水分，提高了制备后菌剂的实用效果。
[0052]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。