用于使用抗人免疫球蛋白抗体的抗微生物血清学测定的组合物、试剂盒和方法
1.相关申请的交叉引用/通过引用并入声明本技术根据35 usc
ꢀ§ꢀ
119(e)要求2020年4月24日提交的临时申请美国系列号63/015,239的权益。上述引用的专利申请的全部内容在此明确通过引入并入本文。
2.关于联邦资助的研究或开发的声明不适用。
3.背景医学诊断领域利用许多不同形式的测定技术。当怀疑患者被微生物(诸如但不限于细菌或病毒)感染时，可以对来自患者的生物样品进行测定以检测由患者的免疫系统产生的针对微生物的抗体。
4.当期望检测患者血清和血浆中的抗病毒或抗细菌抗原抗体(诸如但不限于igg、igm和/或iga)时，已采用桥接血清学测定，其中固定化病毒/细菌抗原和标记的病毒/细菌抗原经常用于配制测定试剂。在另一个实例中，乳胶颗粒凝集测定利用病毒/细菌抗原包被的乳胶颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。
5.然而，由于与抗体过量相关的不确定性(即钩状效应)、需要早期检测病毒/细菌感染，并且一些患者样品中的抗病毒/细菌抗体滴度低，需要减少测试所需的样品量，同时还增强由测定生成的信号。
6.因此，本领域中需要克服现有技术的缺点和缺陷的针对微生物抗原的抗体的新的和改进的测定法。本公开正是涉及此类用于检测针对微生物抗原的抗体的新的和改进的试剂、试剂盒、微流体装置和方法。
7.附图简要说明图1示意性描绘利用loci
®
测定形式的sars-cov-2总(cov2t)测定(siemens healthineers, tarrytown, ny)。
8.图2示意性描绘根据本公开构建的血清学测定形式，其包括与抗人免疫球蛋白抗体组合的图1的cov2t loci
®
测定形式。
9.图3示意性描绘抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式。
10.图4示意性描绘根据本发明构建且通过包括抗人免疫球蛋白抗体而增强的抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式。
11.详细描述在通过示例性语言和结果的方式详细解释本公开的至少一个实施方案之前，应理解，所述本公开不限于下面的描述中阐述的其对组分的构造和排列的细节的应用。本公开能够具有其他实施方案，或者能够以各种方式实践或实施。因此，本文使用的语言意欲被给予最广泛的可能范围和含义；并且实施方案意味着是示例性的—而非穷举性的。而且，应该理解，本文采用的措辞和术语是为了描述的目的，并且不应被认为是限制性的。
12.除非本文另有定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复
数术语应包括单数。前述技术和程序通常根据本领域众所周知的常规方法、并且如在本说明书通篇引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述而实施。与本文所述的分析化学、合成有机化学以及药用和药物化学结合利用的命名及其实验室程序和技术是本领域中众所周知和常用的那些。标准技术用于化学合成和化学分析。
13.本说明书中提及的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物指示本公开所属领域的技术人员的技术水平。在本技术的任何部分中引用的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物在本文中明确地通过引用以其整体并入，其程度如同每个单独的专利或出版物被具体和个别地指出通过引用并入一样。
14.鉴于本公开，无需过度实验即可制备和执行本文公开的所有组合物、试剂盒、装置和/或方法。尽管已经在具体实施方案的方面描述了所述组合物、试剂盒、装置和/或方法，但对于本领域技术人员将显而易见的是，在不脱离本公开的构思、精神和范围的情况下，可对所述组合物、试剂盒、装置和/或方法、以及在本文描述的方法的步骤或步骤顺序中应用变化。认为对于本领域技术人员显而易见的所有此类类似的取代和修改在如所附权利要求书限定的本公开的精神、范围和构思内。
15.如根据本公开所利用，除非另有指示，否则以下术语应理解为具有以下含义：与权利要求和/或说明书中的术语“包括”结合使用时，术语“一个/种(a)”或“一个/种(an)”的使用可意味着“一个/种(one)”，但它也与“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义一致。因此，术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，对“一种化合物”的提及可指一种或多种化合物、2种或更多种化合物、3种或更多种化合物、4种或更多种化合物或更大数目的化合物。术语“多个/种”是指“两个/种或更多个/种”。
16.术语“至少一个/种”的使用将被理解为包括一个/种以及多于一个/种的任何数量，包括但不限于2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100个/种等。术语“至少一个/种”可延伸多至100或1000或更多个/种，这取决于它所附接的术语；此外，100/1000的数量不视为限制性的，因为更高的限值也可产生令人满意的结果。此外，术语“x、y和z中的至少一个/种”的使用将被理解为包括单独的x，单独的y和单独的z，以及x、y和z的任何组合。序数术语(即，“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等)的使用仅用于区分两个或更多个事项的目的，并且不意味着暗示例如一个事项相对于另一事项的任何顺序或次序或重要性、或任何添加次序。
17.在权利要求中使用术语“或”用于意指包括性的“和/或”，除非明确指出仅指替代方案或者除非替代方案是互相排斥的。例如，以下任一种都满足条件“a或b”：a为真(或存在)且b为假(或不存在)，a为假(或不存在)且b为真(或存在)，并且a和b两者均为真(或存在)。
18.如本文所用，对“一个实施方案(one embodiment)”、“一个实施方案(an embodiment)”、“一些实施方案”、“一个实例(one example)”、“例如”或“一个实例(an example)”的任何引用意指结合该实施方案描述的具体要素、特征、结构或特点包括在至少一个实施方案中。例如，说明书中各个地方出现的短语“在一些实施方案中”或“一个实例”不一定全部是指同一实施方案。此外，对一个或多个实施方案或实例的所有引用都应被解释为对权利要求非限定性的。
19.在整个申请中，术语“约”用于指示，值包括用于测定该值的组合物/仪器/装置、方
法的误差的固有变化，或研究受试者间存在的变化。例如，但不限于，当利用术语“约”时，指定值可以与列举值相差正负20%，或15%，或12%，或11%，或10%，或9%，或8%，或7%，或6%，或5%，或4%，或3%，或2%，或1%，因为此类变化适用于执行公开的方法并由本领域普通技术人员所理解。
20.如在本说明书和一个或多个权利要求中所用，术语“包含(comprising)”(和任何形式的包含，例如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(和任何形式的具有，例如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(和任何形式的包括，例如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(和任何形式的含有，例如“含有(contains)”和“含有(contain)”)都是包括性的或开放式的，并且不排除另外的未列举的要素或方法步骤。
21.如本文所用的术语“或其组合”是指所述术语之前列出的事项的所有排列和组合。例如，“a、b、c或其组合”意欲包括以下中的至少一个：a、b、c、ab、ac、bc或abc，并且如果次序在特定上下文中是重要的，则也包括ba、ca、cb、cba、bca、acb、bac或cab。继续该实例，明确包括的是含有一个或多个事项或术语的重复的组合，例如bb、aaa、aab、bbc、aaabcccc、cbbaaa、cababb等等。本领域技术人员将理解，除非从上下文可见，否则通常对任何组合中的事项或术语的数量没有限制。
22.如本文所用，术语“实质上(substantially)”意味着随后描述的事件或情况完全发生或者随后描述的事件或情况在大范围或程度上发生。例如，当与具体事件或环境相关时，术语“实质上”意味着随后描述的事件或情况发生在至少80％的时间、或至少85％的时间、或至少90％的时间、或至少95％的时间。术语“实质上相邻”可以意指两个事项与彼此100%相邻，或者两个事项与彼此密切接近，但与彼此不是100%相邻，或者两个事项之一的一部分与另一事项不是100%相邻，而是与另一事项密切接近。
23.如本文所用，短语“与
…
缔合(associated with)”和“与
…
偶联(coupled to)”包括两个部分彼此直接缔合/结合以及两个部分彼此间接缔合/结合二者。缔合/偶联的非限制性实例包括例如通过直接的键或通过间隔基团将一个部分与另一个部分共价结合，直接或借助与所述部分结合的特异性结合对成员将一个部分与另一个部分非共价结合，诸如通过将一个部分溶解在另一个部分中或通过合成而将一个部分掺入另一个部分，和将一个部分涂覆在另一个部分上。
24.术语“类似物”和“衍生物”在本文中可互换使用，并且是指如下的物质，其在其结构中包含与给定化合物相同的基本碳骨架和碳官能度，但也可以含有对其的一个或多个取代。如本文中所用，术语“取代”将被理解为是指用残基r替换化合物上的至少一个取代基。在某些非限制性实施方案中，r可以包括h，羟基，硫醇，选自氟化物、氯化物、溴化物或碘化物的卤化物，选自下列之一的c1-c4化合物：任选取代的直链、支链或环状烷基，和直链支链或环状烯基，其中任选的取代基选自一种或多种烯基烷基、炔基烷基、环烷基、环烯基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基、任选取代的杂环烯基烷基、芳基环烷基和芳基杂环烷基，其中每个是任选取代的，其中所述任选的取代基选自下列中的一种或多种：烯基烷基、炔基烷基、环烷基、环烯基烷基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、任选取代的杂环烯基烷基、芳基环烷基和芳基杂环烷基、苯基、氰基、羟基、烷基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基、烷硫基、氨基、-nh(烷基)、-nh(环烷基)2、羧基和-c(o))-烷基。
25.如本文所用的术语“样品”将被理解为包括可以根据本公开利用的任何类型的生物样品。可利用的流体生物样品的实例包括但不限于：全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(csf)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液(cystic fluid)、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液(bladder wash)、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液、其组合等。
26.术语“抗体”在本文中以最广义使用，并且是指例如完整单克隆抗体和多克隆抗体，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，以及其表现出结合分析物的期望生物活性的抗体片段及缀合物(诸如但不限于fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv、fd、双抗体、单链抗体和其他抗体片段及其缀合物，其保留完整抗体的可变区的至少一部分)，抗体替代蛋白或肽(即，工程改造的结合蛋白/肽)及其组合或衍生物。所述抗体可以是任何类型或类别(例如，igg、ige、igm、igd和iga)或亚类(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)。
27.如本文所用的术语“loci
®”是指基于发光氧通道测定(loci
®
)技术的商业使用的测定技术。loci
®
先进化学发光测定描述于例如美国专利号5,340,716 (ullman等人)，其全部内容明确地通过引用并入本文。当前可用的loci
®
技术具有高灵敏度，并且使用几种试剂。具体而言，loci
®
测定要求这些试剂中的两种(被称为“sensibead”和“chemibead”)通过其他特异性结合配偶体测定试剂以如下的方式保持，其中sensibead和chemibead彼此密切接近以实现信号。在暴露于特定波长的光后，sensibead释放单线态氧，并且如果两个珠粒密切接近，则单线态氧被转移至chemibead；这引起化学反应，其导致所述chemibead发出光，所述光可以在不同波长处测量。
28.现在转向本公开的某些非限制性实施方案，公开了试剂、试剂盒和微流体装置，其可用于血清学测定中以检测人生物样品中存在的针对微生物的抗体。将抗人免疫球蛋白抗体添加至这些测定的试剂中，所述试剂包括至少一种针对微生物的抗原；这些抗人ig抗体结合待检测的抗微生物抗体并发挥功能以增加桥接血清学测定中的交联和聚集以及增强颗粒凝集测定中的凝集。这些抗人免疫球蛋白抗体的使用增强由这些各种类型的测定生成的信号，同时减少每次测定所需的样品量。
29.本公开的某些非限制性实施方案涉及用于检测人生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的血清学测定的试剂盒。所述试剂盒包括至少两种组分：组合物，其包含标记物和与其直接或间接结合的至少一种微生物的抗原；和至少一种抗人免疫球蛋白(ig)抗体。所述抗人免疫球蛋白抗体结合人生物样品中存在的抗微生物抗体以形成复合物。这些复合物的形成增加能够结合可检测组合物的微生物抗原的抗体叉臂(prong)。也就是说，每个抗人ig抗体可以结合两个人抗微生物抗体的fc片段处；复合物中的存在的这两个人抗微生物抗体(其在未复合时各分出两个叉臂)，在与抗人ig抗体复合后变成四叉臂或多叉臂抗体。因此，这些复合物在抗原桥接血清学测定中更有效地交联微生物抗原。
30.根据本公开可以利用的样品的非限制性实例(且因此在某些非限制性实施方案中，可以基于此配制基质)包括生物样品，如但不限于：全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(csf)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液及其组合。
31.利用本公开的试剂和试剂盒的血清学测定可以检测针对需要检测的任何微生物的抗原的人抗体。例如(但非限制性地)，待检测的微生物可以是细菌、病毒、原生动物、真菌
等。
32.可以根据本公开检测的细菌的非限制性实例包括不动杆菌属(acinetobacter)、放线菌属(actinomyces)、气单胞菌属(aeromonas)、聚合杆菌属(aggregatibacter)、阿托波氏菌属(atopobium)、芽孢杆菌属(bacillus)、拟杆菌属(bacteroides)、巴尔通氏体属(bartonella)、双歧杆菌属(bifidobacterium)、疏螺旋体属(borellia)、布鲁氏菌属(brucella)、弯曲杆菌属(campylobacter)、衣原体属(chlamydia)、嗜衣原体属(chlamydophila)、梭菌属(clostridium)、棒杆菌属(corynebacterium)、考克斯氏体属(coxiella)、艾肯氏菌属(eikenella)、肠杆菌属(enterobacter)、肠球菌属(enterococcus)、埃希氏菌属(escherichia)、真杆菌属(eubacterium)、弗朗西丝氏菌属(francisella)、梭杆菌属(fusobacterium)、加德纳氏菌属(gardnerella)、嗜血菌属(haemophilis)、螺杆菌属(helicobacter)、克雷伯氏菌属(klebsiella)、乳杆菌属(lactobacillus)、李斯特氏菌属(listeria)、动弯杆菌属(mobiluncus)、莫拉氏菌属(moraxella)、分枝杆菌属(mycobacterium)、支原体属(mycoplasma)、奈瑟氏球菌属(neisseria)、微单胞菌属(parviomonas)、巴斯德氏菌属(pasteurella)、卟啉单胞菌属(porphyromonas)、普雷沃氏菌属(prevotella)、丙酸杆菌属(propionibacterium)、变形菌属(proteus)、假单胞菌属(pseudomonas)、立克次氏体属(rickettsia)、沙门氏菌属(salmonella)、沙雷氏菌属(serratia)、志贺氏菌属(shigella)、葡萄球菌属(staphylococcus)、链球菌属(streptococcus)、坦纳菌属(tannerella)、密螺旋体属(treponema)、弧菌属(vibrio)以及耶尔森氏菌属(yersinia)物种等。
33.可以根据本公开检测的病毒的非限制性实例包括腺病毒、星状病毒、冠状病毒(诸如但不限于严重急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)或中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov))、柯萨奇病毒、巨细胞病毒(cmv)、埃可病毒、脑炎病毒、肠道病毒、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒(ebv)、红细胞病毒、汉坦病毒、肝炎病毒、疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒(hiv)、流感病毒、诺如病毒、乳头瘤病毒、副流感病毒、副粘病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒(rsv)、鼻病毒、轮状病毒、风疹病毒、麻疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、西尼罗病毒和寨卡病毒等。
34.可以根据本公开检测的原生动物的非限制性实例包括蛔虫、巴贝斯虫、隐孢子虫(cryptosporidium)、环孢子虫(cyclospora)、内阿米巴虫(entamoeba)、蛲虫(enterobius)、贾第虫(giardia)、膜壳绦虫(hymenolepis)、板口线虫(necator)、疟原虫(plasmodium)、类圆线虫(strongyloides)、绦虫(taenia)、弓形虫(toxoplasma)和毛滴虫(trichomonas)物种等。
35.可以根据本公开检测的真菌的非限制性实例包括酵母、霉菌等，包括(但不限于)假丝酵母属(candida)、隐球菌属(cryptococcus)、表皮癣菌属(epidermophyton)、马拉色菌属(malassezia)、小孢子菌属(microsporum)、毛癣菌属(trichophyton)物种等。
36.在一个具体(但非限制性)实施方案中，通过血清学测定检测的微生物是严重急性呼吸道综合征冠状病毒2 (sars-cov-2)、hiv、乙型肝炎总核心、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒、疱疹病毒(hsv)、cmv、风疹病毒、幽门螺杆菌(h. pylori)或刚地弓形虫(toxoplasma gondii)。
37.所述抗原可以是来自待检测的微生物的任何抗原。可用于检测上面列举的每种微
生物的抗原是本领域中众所周知的并且可广泛得到。此外，可以根据本公开利用的抗原的选择完全在本领域普通技术人员的能力范围内。因此，认为没有必要对其进一步公开。
38.在具体(但非限制性)实施方案中，所述微生物是sars-cov-2，并且所述抗原是本领域已知或本文以其他方式考虑的任何sars-cov-2抗原。例如(但非限制性地)，所述抗原可以来自核衣壳(n)蛋白、刺突(s)蛋白、膜(m)蛋白、包膜(e)蛋白、融合(f)蛋白等。在具体(但非限制性)实施方案中，所述抗原可以来自核衣壳蛋白或刺突蛋白。
39.在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述抗原是sars-cov-2刺突蛋白的s1亚基的受体结合结构域(rbd)。rbd s1抗原可以获得自本领域已知的任何来源。例如(但非限制性地)，该特定抗原商业获得自genscript (piscataway, nj)；meridian life sciences, inc. (memphis, tn)；sino biological us inc. (wayne, pa)；acro biosystems (newark, de)；biorbyt, llc (st. louis, mo)；icosagen, as (san francisco, ca)；和bios pacific inc. (emeryville, ca)。
40.所述抗-人ig抗体可特异性结合任何本领域已知或本文以其它方式考虑的人类免疫球蛋白分子的任何部分。例如(但非限制性地)，所述抗体可针对人igg、ige、igm、igd和/或iga，和/或其任何部分(诸如，但不限于，抗-人γ链、抗-人h l、抗-人轻链等)。抗人ig抗体(包括但不限于抗人igg、抗人igm和/或抗人iga抗体以及识别两种或更多种人免疫球蛋白抗体的抗体)是本领域中众所周知的，可广泛商业获得，并且已被广泛研究。例如(但非限制性地)，抗-人igg单克隆和/或多克隆抗体的一些商业来源包括rockland immunochemicals、inc. (pottstown, pa)、usbiological life sciences (swampscott, ma)、santa cruz biotechnology、inc. (dallas, tx)、jackson immuno research labs、inc. (west grove, pa)、thermo fisher scientific (waltham, ma)和sigma-aldrich corp. (st. louis, mo)。然而，这个列表不包括全部，并可以根据本公开利用的抗-人ig抗体还有许多另外的商业来源。因此，本领域普通技术人员将能够清楚且毫无疑义地鉴别和选择可以根据本公开利用的各种抗-人ig抗体，并因此认为没有必要对所述抗-人ig抗体或其特性进一步描述。
41.包含标记物和与其结合直接或间接的至少一种微生物的抗原的组合物可以具有允许检测与其结合的针对微生物的抗体的任何物理和/或结构特征。例如(但非限制性地)，所述组合物可以假设颗粒、珠粒、表面或基底等的形式。可用于血清学测定中的组合物是本领域中众所周知的并且可商购获得。同样，可用于此类组合物中的标记物是本领域中众所周知的并且可商购获得。进一步，用于特定血清学测定形式的特定组合物和标记物的选择完全在本领域普通技术人员的能力范围内。因此，认为不必对其进一步描述。然而，仅仅为了实例的目的，下文提供了几种不同的血清学测定形式和与其一起利用的特定组合物。
42.本公开的试剂盒可以被设计用于与本领域已知或本文以其他方式描述的任何血清学测定形式一起使用。例如但非限制性地，所述试剂盒可以被设计用于均质颗粒标记的血清学测定中，所述测定利用病毒/细菌抗原包被的颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。在这种类型的测定形式中，试剂盒的抗人ig抗体结合待检测的抗微生物抗体并发挥功能以增强颗粒凝集测定中的凝集，且因此增强由检测产生的信号，同时减少所需的样品量。这种血清学测定形式的一个非限制性实例是颗粒增强的比浊抑制免疫测定(“petinia”)。petinia测定形式的非限制性实例描述于美国专利号7,
186,518；5,147,529；5,128,103；5,158,871；4,661,408；5,151,348；5,302,532；5,422,284；5,447,870；和5,434,051；其公开内容以其整体并入本文。
43.可以根据本公开利用的血清学测定形式的另一个非限制性实例是桥接测定。这种类型的测定的结构涉及使用两种组分，其均结合待检测的分析物，且因此形成可检测的桥。设计用于这种类型的测定形式中的本公开的试剂盒包括：如上文所述的第一组合物(即，包含标记物和与其直接或间接结合的至少一种微生物的抗原的组合物)，至少一种如上文所述的抗人免疫球蛋白抗体，以及也具有与其直接或间接结合的至少一种微生物抗原的第二组合物(其中两种组合物的抗原可以是相同或不同的)。以这种方式，当微生物抗体分别结合第一和第二组合物的第一和第二抗原时形成复合物，由此微生物抗体在形成复合物时“桥接”第一和第二组合物。
44.用于桥接测定形式中的第二含抗原组合物通常被设计用于分离和/或检测由结合第一和第二组合物的第一和第二抗原的微生物抗体的桥接形成的复合物。在某些非限制性实施方案中，所述第二组合物包含至少一种抗原直接或间接结合的固定表面；因此，第二组合物提供了固定表面，在其上可以形成复合物且因此与样品的其余部分和测定的非结合组分分离。然而，使用固定表面作为第二组合物的一部分仅仅是为了举例说明的目的；所述第二组合物可以具有允许分离和/或检测在抗微生物抗体和第一和第二组合物之间形成的复合物的任何物理和/或结构特征。例如(但非限制性地)，所述第二组合物还可以假设颗粒、珠粒、固定或非固定表面或基底等的形式。
45.在桥接测定形式的另一个具体(但非限制性)实施方案中，所述试剂盒可以进一步包括一种或多种用于化学发光检测系统的试剂，诸如(但非限制性地)发光氧通道测定(loci
®
)形式。在该具体(但非限制性)实例中，所述试剂盒包括包含单线态氧可激活的化学发光化合物(诸如(但不限于) chemibead)的组合物和包含敏化剂(诸如(但不限于)) sensibead)的组合物，其各自具有与其直接或间接结合的微生物抗原。在一个替代实施方案中，所述试剂盒含有用于在测定之前或期间将组合物直接或间接附接至微生物抗原的试剂。
46.在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述试剂盒的第一组合物被进一步定义为包含单线态氧可激活的化学发光化合物，所述单线态氧可激活的化学发光化合物具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原。除了至少一种抗人免疫球蛋白抗体以外，所述试剂盒进一步包含第二组合物，其包含能够在其激发状态下生成单线态氧的敏化剂和与所述敏化剂直接或间接结合的第二微生物抗原。
47.当所述试剂盒含有包含敏化剂和第二微生物抗原的第二组合物时，所述第二组合物可以不与已经与敏化剂结合的第二微生物抗原布置在试剂盒中。也就是说，所述试剂盒不是包含含有敏化剂和第二抗原两者的单一第二组合物，而是可以包括两种试剂：(i)组合物，其包含能够在其激发态下生成单线态氧且具有与其直接或间接结合的生物素-特异性结合配偶体的敏化剂；和(ii)第二微生物抗原，其中第二抗原是生物素化的。
48.化学发光化合物(化学发光剂)是化学可激活且作为这种激活的结果而发射特定波长的光的化合物。通过举例说明而非限制性地，化学发光剂的实例包括例如：能够与单线态氧或过氧化物反应以形成可以分解成酮类或羧酸衍生物的氢过氧化物或二氧环丁烷(dioxetane)的烯烃类；可以通过光的作用分解的稳定二氧环丁烷；可以与单线态氧反应以
形成二酮类的炔烃类；可以形成偶氮化合物或偶氮羰基化合物的腙类或酰肼类，诸如(但不限于)鲁米诺；和可以形成内过氧化物的芳族化合物。作为激活反应的结果，化学发光剂直接或间接引起发光。
49.在某些实施方案中，单线态氧可激活的化学发光化合物可以是这样的物质，其经历与单线态氧的化学反应以形成亚稳态中间物质，所述亚稳态中间物质可分解，并同时或随后发射光。包含化学发光化合物的组合物可通过激活的化学发光化合物直接激发；或者，所述组合物可进一步包含至少一种荧光分子，所述荧光分子由激活的化学发光化合物激发。
50.敏化剂是生成用于激活化学发光化合物的反应性中间产物(诸如例如单线态氧)的分子，通常是化合物。在一些非限制性实施方案中，所述敏化剂是光敏剂。通过实例而非限制性地，可以化学激活(通过，例如酶和金属盐)的其他敏化剂包括，借助外部光源的激活或不借助外部光源的激活而可以产生单线态氧的其他物质和组合物。例如，某些化合物已经显示催化过氧化氢转化为单线态氧和水。其他敏化剂物质和组合物的非限制性实例包括碱土金属ca、sr和ba的氧化物；d0构型中的3a、4a、sa和6a族的元素的衍生物；锕系元素和镧系元素的氧化物；和氧化剂cio-、bro-、au
3
、io
3-和io
4-；和具体而言，钼酸根、过氧钼酸根、钨酸根和过氧钨酸根离子，和乙腈。下列参考文献(其在此明确地以其整体通过引用并入)提供了关于也落入本公开的范围内的敏化剂物质和组合物的进一步公开内容：aubry, j. am. chem. soc., 107:5844-5849 (1985)；aubry, j. org. chem., 54:726-728 (1989)；b
ö
hme和brauer, inorg. chem., 31:3468-3471 (1992)；niu和foote, inorg. chem., 31:3472-3476 (1992)；nardello等人, inorg. chem., 34:4950-4957 (1995)；aubry和bouttemy, j. am. chem. soc., 119:5286-5294 (1997)；和almeida等人, anal. chim. acta, 482:99-104 (2003)；其各自的完整内容在此明确地通过引用并入本文。
51.光敏剂的范围内还包括不是真的敏化剂、但在热、光、电离辐射或化学激活的激发下将释放单线态氧分子的化合物。此类化合物的成员包括例如(但非限制性地)，内过氧化物，诸如1,4-二羧基乙基-1,4-萘内过氧化物、9,10-二苯基蒽-9,10-内过氧化物和5,6,11,12-四苯基萘5,12-内过氧化物。加热这些化合物或这些化合物直接吸收光而释放单线态氧。
52.光敏剂是用于通过例如用光激发生成单线态氧而激活光活性化合物的敏化剂。光敏剂是光可激活的，且包括例如染料和芳族化合物，并且通常是由共价键合的原子构成的化合物，通常具有多个共轭的双键或三键。所述化合物应当吸收在约200 nm至约1,100 nm的波长范围内、诸如(但不限于)约300 nm至约1,000 nm的范围内或约450 nm至950 nm的范围内的光，在激发波长下，其最大吸光度时的消光系数大于500 m-1 cm-1
，或大于5,000 m-1 cm-1
，或大于50,000 m-1 cm-1
。光敏剂应当是相对光稳定的，且可以不与单线态氧有效反应。通过举例说明而非限制性地，光敏剂的实例包括：丙酮；二苯甲酮；9-噻吨酮；伊红；9,10-二溴蒽；亚甲基蓝；金属卟啉类诸如(但不限于)血卟啉；酞菁；叶绿素；玫瑰红；和巴克敏斯特富勒烯以及这些化合物的衍生物。
53.可以根据本公开利用的化学发光化合物和光敏剂的具体、非限制性实例记载于美国专利号5,340,716 (ullman，等人)，其完整内容在此明确地通过引用并入本文。
54.可以根据本公开内容利用本领域中已知或本文另外考虑的任何生物素-特异性结
合配偶体。在某些非限制性实施方案中，所述生物素-特异性结合配偶体是针对生物素的抗体。在其他非限制性实施方案中，所述生物素-特异性结合配偶体是抗生物素蛋白或其类似物。
55.根据本公开，可以利用本领域已知或本文另外考虑的任何抗生物素蛋白类似物，只要抗生物素蛋白或抗生物素蛋白类似物：(1)能够与敏化剂缔合；(2)能够结合生物素化的分析物-特异性结合配偶体；和(3)能够结合样品中可能存在的生物素。可以根据本公开利用的抗生物素蛋白类似物的非限制性实例包括kang等人(j drug target (1995) 3:159-65)(其全部内容明确地通过引用并入本文)中公开的那些。抗生物素蛋白类似物的具体非限制性实例包括抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、traptavidin、中性抗生物素蛋白、neutralite抗生物素蛋白、neutravidin、lite-抗生物素蛋白、琥珀酰化抗生物素蛋白、其他形式的修饰或基因工程改造的抗生物素蛋白，上述任一种的酯、盐和/或衍生物等。
56.能够被激活的化学发光化合物激发并以特定的、可检测的波长发光的本领域中已知的任何荧光分子可以根据本公开用作(a)和(b)(以及(e)，如果存在的话)的荧光分子，只要由每个荧光分子产生的信号都可与由利用的其他荧光分子产生的信号不同地检测到。也就是说，(a)的荧光分子必须发射与(b)的荧光分子发射光的波长充分不同的波长的光，使得当同时检测时两个信号可以与彼此区分。在一个具体(但非限制性)实例中，根据本公开利用的每种荧光分子独立地选自铽、铀、钐、铕、钆和镝。例如(但不限于)，铽发射约545 nm的波长的光，铀发射约612 nm的波长的光，且钐发射约645 nm的波长的光。
57.本公开的试剂盒可用于抗微生物抗体的定性和/或定量测量。
58.可以以任何形式提供试剂盒中存在的测定组分/试剂，所述形式允许它们根据本公开概念发挥功能。例如但非限制性地，每种试剂可以以液体形式提供并且以散装和/或单一等分试样形式设置在试剂盒内。或者，在一个具体(但非限制性)实施方案中，一种或多种试剂可以以单一等分试样冻干试剂的形式设置于试剂盒中。微流体装置中干燥试剂的使用详细描述于美国专利号9,244,085 (samproni)，其完整内容在此明确地通过引用并入本文。
59.除了上文详细描述的测定组分/试剂以外，所述试剂盒可以进一步含有用于进行本文描述或另外考虑的任何特定测定的其他试剂。这些额外的试剂的性质将取决于特定的测定形式，并且其鉴定完全在本领域普通技术人员的技能范围内；因此，认为没有必要对其另外描述。此外，试剂盒中存在的组分/试剂可以各自在分开的容器/隔室中，或者各种组分/试剂可以被组合于一个或多个容器/隔室中，这取决于所述组分/试剂的交叉反应性和稳定性。此外，所述试剂盒可包括其中设置组分/试剂的微流体装置。
60.所述试剂盒中的各种组分/试剂的相对量可以广泛变化，以提供组分/试剂的浓度，其实质上优化需要在测定方法期间发生的反应，并且进一步实质上优化测定的灵敏度。在适当情况下，试剂盒中的一种或多种组分/试剂可以提供为干燥粉末，诸如冻干粉末，并且所述试剂盒可进一步包括用于溶解干燥试剂的赋形剂；以该方式，可以从这些组分获得具有用于进行根据本公开的方法或测定的适当浓度的试剂溶液。试剂盒中可以包括的其他试剂的非限制性实例包括洗涤溶液、校准溶液、质量控制溶液、稀释溶液、赋形剂、干扰溶液、阳性对照、阴性对照等。此外，所述试剂盒可进一步包括解释如何使用试剂盒的一组书面说明。该性质的试剂盒可用于本文描述或另外考虑的任何方法。
61.本公开的某些非限制性实施方案涉及微流体装置，其含有本文描述或以其他方式考虑的任何血清学测定试剂。例如(但非限制性地)，本公开的某些额外非限制性实施方案涉及微流体装置，其包括上文所述的任何试剂盒的组分。
62.具体地，某些非限制性实施方案包括经由本文描述或以其他方式考虑的血清学测定来检测生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的微流体装置。所述微流体装置包括：(i)通过其施加生物样品的入口通道；和(ii)至少一个能够与所述入口通道流体连通的第一隔室。(ii)的隔室含有单独或与本文描述或以其他方式考虑的一种或多种其他试剂(诸如但不限于一种或多种用于血清学测定中的试剂)组合的本文描述或以其他方式考虑的任何试剂。例如(但非限制性地)，所述一种或多种试剂包括抗人免疫球蛋白抗体和第一和/或第二组合物，所述组合物含有如上文所述或本文以其他方式考虑的抗微生物抗原。
63.在某些非限制性实施方案中，(ii)的所有试剂(以及如上文所述的任何额外要素)存在于同一隔室中。在替代非限制性实施方案中，所述试剂在两个或更多个隔室之间分开。
64.所述微流体装置可以提供有隔室的任何排列以及各种组分在其之间的分布，其允许所述装置根据本公开发挥功能。
65.可以密封微流体装置的任何隔室，以便将其中设置的试剂保持于基本上气密的环境中，直至使用它们；例如，可以密封含有冻干试剂的隔室以防止试剂的任何无意重构。入口通道和一个隔室，以及两个隔室可以被描述为“能够与彼此流体连通”；该短语指示所述隔室各自仍可以被密封，但在刺穿在其中或在其之间形成的密封物后，两个隔室能够在其之间具有流体流动。
66.本公开的微流体装置可以提供有本领域中已知的或本文另外考虑的任何其他期望特征。例如但非限制性地，本公开的微流体装置可以进一步包括读取室；所述读取室可以是含有上文所述的试剂的任何隔室，或者所述读取室可以与所述隔室流体连通。
67.所述微流体装置可以进一步包括一个或多个额外的隔室，其含有其他溶液，诸如(但不限于)洗涤溶液、校准溶液、质量控制溶液、稀释溶液、赋形剂、干扰溶液、阳性对照、阴性对照等。这些额外隔室可以与其他隔室中的一个或多个流体连通。例如，所述微流体装置可以进一步包括一个或多个含有洗涤溶液的隔室，并且这些隔室能够与所述装置的任何其他隔室流体连通。在另一个实例中，所述微流体装置可以进一步包括一个或多个含有用于溶解一种或多种干燥试剂的赋形剂的隔室，并且所述隔室可能够与所述装置的任何其他隔室流体连通。在又一个进一步实例中，所述微流体装置可以包括一个或多个含有稀释溶液的隔室，并且所述隔室能够与所述装置的任何其他隔室流体连通。
68.本公开的某些非限制性实施方案涉及检测人生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的方法。在一个非限制性实施方案中，所述方法包括以下步骤：(1)同时或全部或部分依次组合：(a)怀疑含有针对所述微生物的抗体的人生物样品，(b)本文公开或以其他方式考虑的包含标记物和与其直接或间接结合的至少一种微生物抗原的任何组合物，和(c)本文公开或以其他方式考虑的任何抗人免疫球蛋白抗体中的至少一种；(2)使(b)和(c)与(a)中存在的针对所述微生物的抗体结合，其中(b)与针对所述微生物的抗体的结合导致复合物的形成，且其中(c)与针对所述微生物的抗体的结合导致形成一种或多种复合物的聚集体，其含有(a)中的至少两种；和(3)检测复合物/聚集体以确定所述样品中存在的针对所述微生物的抗体的存在和/或浓度。
69.利用化学发光检测系统的用于检测人生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的方法的一个具体(但非限制性)实施方案包括以下步骤：(1)将怀疑含有针对所述微生物的抗体的人生物样品与以下同时或全部或部分依次组合：(a)组合物，其包含具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原的单线态氧可激活的化学发光化合物；(b)组合物，其包含能够在其激发状态下生成单线态氧的敏化剂和与所述敏化剂直接或间接结合的第二微生物抗原；和(c)至少一种抗人免疫球蛋白抗体；(2)使(a)、(b)和(c)与所述样品中存在的针对所述微生物的抗体结合，其中(a)和(b)与针对所述微生物的抗体的结合导致形成复合物，其中使所述敏化剂与所述化学发光化合物密切接近，且其中(c)与针对所述微生物的抗体的结合导致形成一种或多种复合物的聚集体，其含有(a)中的至少两种和/或(b)中的至少两种；(3)激活所述敏化剂以生成单线态氧，其中所述复合物中存在的敏化剂的激活引起每种复合物中存在的化学发光化合物的激活；和(4)测定由所述复合物中激活的化学发光化合物生成的化学发光量，以确定所述样品中存在的针对所述微生物的抗体的存在和/或浓度。
70.能够经由本文描述或以其他方式考虑的测定形式检测的任何抗微生物抗体都可以通过本公开的血清学测定来检测。在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述抗体是针对sars-covid2病毒的抗病毒抗原抗体。
71.在一些非限制性测定实施方案中，利用的信号产生系统(sps)成员包括敏化剂，诸如，例如，光敏剂和化学发光分子组合物，并且其各自都具有与其直接或间接附接的微生物的抗原(或能够在测定期间具有与其直接或间接附接的抗原)；在这些测定实施方案中，所述敏化剂的激活产生的产物激活化学发光组合物，由此生成可检测信号，所述可检测信号涉及所检测的结合的人抗微生物抗体的量。本公开可基于的测定平台的一个示例性(但非限制性)实施方案是发光氧通道测定(loci
®
; siemens healthcare diagnostics inc., tarrytown, ny)。loci
®
测定描述于例如美国专利号5,340,716 (ullman等人)，其全部内容明确地通过引用并入本文。
72.在一个具体(但非限制性)测定实施方案中，所述测定通过将生物样品与两种或更多种loci
®
形式的试剂一起孵育来进行。例如(但非限制性地)，可以将生物样品与单线态氧可激活的化学发光化合物(诸如(但不限于) chemibead)和包含敏化剂(诸如(但不限于) sensibead)的组合物(其各自具有与其直接或间接结合的微生物抗原)孵育。在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述生物样品与以下同时或全部或部分依次组合：(i)组合物，其包含：具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原的单线态氧可激活的化学发光化合物；(ii)组合物，其包含能够在其激发状态下生成单线态氧的敏化剂和与其直接或间接结合的第二微生物抗原；和(iii)至少一种抗人免疫球蛋白抗体。在另一个具体(但非限制性)实施方案中，所述生物样品与以下同时或全部或部分依次组合：(i)组合物，其包含：具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原的单线态氧可激活的化学发光化合物；(ii)组合物，其包含能够在其激发态下生成单线态氧且具有与其直接或间接结合的生物素-特异性结合配偶体的敏化剂；(iii)第二微生物抗原，其中第二抗原是生物素化的；和(iv)至少一种抗人免疫球蛋白抗体。
73.在第二步中，将所述组分一起孵育以使含有化学发光化合物的组合物、含有敏化剂的组合物和抗人免疫球蛋白抗体与生物样品中存在的人抗微生物抗体结合，由此导致形
成复合物/聚集体，其中一种或多种敏化剂与一种或多种化学发光化合物紧密接近。
74.在第三步中，敏化剂被激活以生成单线态氧，其中所述复合物/聚集体中存在的敏化剂的激活引起每种复合物/聚集体中存在的化学发光化合物的激活。
75.在第四步中，由复合物/聚集体中激活的化学发光化合物生成的化学发光量用于检测生物样品中人抗微生物抗体的量。
76.在上文中详细描述或本文中以其他方式考虑的微生物抗原、单线态氧可激活的化学发光化合物、敏化剂、荧光分子和生物素或其类似物中的任一种都可用于本公开的方法中。
77.例如，在某些具体(但非限制性)实施方案中，单线态氧可激活的化学发光化合物是这样的物质，其经历与单线态氧的化学反应以形成亚稳态中间物质，所述亚稳态中间物质可分解，并同时或随后发射光。
78.在具体(但非限制性)实施方案中，所述敏化剂是光敏剂，且步骤(3)中敏化剂的激活包括用光照射(诸如但不限于在约680 nm处照射)。
79.根据本公开的方法，期望测定针对微生物的抗体的存在的任何样品都可以用作样品。样品的非限制性实例包括生物样品，诸如但不限于全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(csf)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液及其组合。具体非限制性实例包括裂解的全血细胞和裂解的红血细胞。在具体(但非限制性)实例中，所述样品来自人。
80.如上所提及，组合(同时或依次)提供所述方法的各种组分。当依次添加所述方法的各种组分时，可以改变组分的添加次序；本领域普通技术人员可确定向测定添加不同组分的具体期望次序。最简单的添加次序当然是同时添加所有物质，并测定由其产生的信号。或者，可以依次组合每种组分，或组分的组。在某些实施方案中，可以包括在一次或多次添加之后的一个或多个步骤(诸如，但不限于，一个或多个孵育步骤和/或一个或多个洗涤步骤)。
81.在一个替代(但非限制性)实施方案中，利用化学发光检测系统的方法的步骤(1)包括：首先将样品与生物素化的靶标分析物-特异性结合配偶体和包含敏化剂的组合物组合并将其孵育，然后添加包含单线态氧可激活的化学发光化合物的组合物。或者，所述方法的步骤(1)包括：首先将样品与包含单线态氧可激活的化学发光化合物的组合物组合并将其孵育，然后添加包含敏化剂的组合物。在该后者实施方案中，可以在孵育步骤之前或之后添加生物素化的靶标分析物-特异性结合配偶体。
82.尽管上述实施方案已关于检测人样品中的抗体进行描述，但应理解，本公开的范围不限于与人样品一起使用。相反，上文所述的任何实施方案都可以适用于检测来自其他哺乳动物的生物样品中的针对微生物的抗体。因此，本公开还包括用于通过用抗哺乳动物免疫球蛋白(其对应于由其取生物样品的物种)代替上述所有实施方案中利用的抗人免疫球蛋白抗体来检测非人哺乳动物生物样品中的抗微生物抗体的组合物、试剂盒、装置和方法。
83.实施例下文提供了实施例。然而，应理解本公开，其应用不限于本文公开的具体实验、结果和实验室程序。反而，该实施例仅作为各个实施方案之一提供，并且意在是示例性的，而
非穷举性的。
84.实施例1在2020年6月，美国食品药品监督管理局(fda)为siemens healthineers (malvern, pa)开发的基于实验室的总抗体测试颁发了紧急使用授权(eua)，用于检测血液中的sars-cov-2抗体(包括igm和igg)的存在。sars-cov-2病毒表面上的刺突蛋白使得病毒能够穿透并感染多个器官和血管中发现的人细胞。siemens healthineers的总抗体cov2t测定显示在图1中，并且被设计用于检测针对刺突蛋白的抗体。这些抗体中的一些据信中和sars-cov-2病毒，且因此预防感染。为sars-cov-2开发的多种潜在疫苗将刺突蛋白纳入其关注。
85.在本实施例中，比较了两种loci
®
测定形式。第一种形式如图1中所示并利用用荧光素标记的sars-cov-2刺突蛋白的s1亚基的受体结合结构域(s1的rbd)预先形成的抗fitc chemibeads，和与生物素-s1的rbd结合的链霉抗生物素蛋白包被的sensibeads。用这种测定形式获得的结果显示于表1中标记为“0μg/ml 4h5"的列中。
86.第二种loci
®
形式如图2中所示且包括根据本公开，将抗人免疫球蛋白抗体添加至图1的测定形式。具体而言，利用的抗人ig抗体被命名为4h5并且含有抗igg抗体。将4h5抗体以0.5、1和2μg/ml的浓度添加至测定形式中，如表1的第三至第五列中所示。
87.使用的材料：cov2t lot5散装试剂(siemens healthineers, tarrytown, ny)；4h5抗体，6.38mg/ml，无nan3；来自genscript (piscataway, nj)的sars-cov-2 s1 rbd抗体，l mg/ml；bsa；和nhs。
88.在实验设计中，将已知量的抗rbd抗体掺入bsa和nhs，同时使用表1中所示量的4h5抗体掺入cv2t生物素-rbd试剂。然后，如图1或2中所示进行测定(取决于是否存在4h5抗体)，并在dimension exl 300001系统(siemens)上用10 μl ss与20 μl生物素-rbd测量作为千计数的信号。
89.表1
6%bsa,ph7.4pbs缓冲液中的抗rbdab0
µ
g/ml4h50.5
µ
g/ml4h51
µ
g/ml4h52
µ
g/ml4h50
µ
g/ml22220.1
µ
g/ml35540.5
µ
g/ml67567361
µ
g/ml72262611615
µ
g/ml17219534975
90.如所见，当与cov2t测定试剂组合时，将抗人ig抗体添加至测定形式中具有协同效应，并且将由测定产生的信号大大增加多个数量级。在反应混合物中，含有病毒抗原包被的chemibead、病毒抗原包被的sensibead和患者样品中的抗病毒抗体的复合物的形成，生成初始的化学发光信号。通过添加抗人igg抗体(4h5克隆)，更高量级的chemibead和sensibead复合物(其具有抗人ig抗体与抗病毒抗体的fc片段的二级结合)的形成导致对测定信号的协同作用，其在没有抗人ig抗体的情况下生成的初始信号之上。
91.尽管实施例1-2涉及检测cov2t抗体，但应理解该技术适用于检测针对任何微生物的抗体。因此，在这两个实施例中使用cov2t测定法仅仅为了实例的目的，而不是限制本公开的范围。
92.实施例2
尽管实施例1涉及将抗人ig抗体添加至基于loci
®
测定形式的血清学测定中，但抗人ig抗体的添加可以与其他血清学测定形式一起使用以减少所需的样品量并增加生成的信号。例如(但非限制性地)，可以受益于添加抗人ig抗体的其他血清学测定形式是颗粒凝集测定。这些测定基于均质颗粒标记的血清学测定形式，其利用病毒/细菌抗原包被的乳胶颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。
93.颗粒凝集测定形式的一个具体(但非限制性)实例是颗粒增强的比浊抑制免疫测定(“petinia”)。petinia测定形式的非限制性实例公开于美国专利号7,186,518；5,147,529；5,128,103；5,158,871；4,661,408；5,151,348；5,302,532；5,422,284；5,447,870；和5,434,051；其公开内容以其整体并入本文。
94.图3描绘了抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式的一个实例，其利用病毒/细菌抗原包被的乳胶颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。
95.相比之下，图4描绘根据本公开构建且通过包含抗人免疫球蛋白抗体而增强的抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式。这些抗人ig抗体结合待检测的抗微生物抗体，并发挥功能以增强颗粒凝集测定中的凝集作用。与上述loci
®
测定一样，使用抗人免疫球蛋白抗体增强由颗粒凝集测定生成的信号，同时减少每次测定所需的样品量。
96.因此，根据本公开，已经提供了完全满足上文所述的目的和优点的组合物、试剂盒和装置以及其生产和使用方法。尽管已经结合上文阐述的具体附图、实验、结果和语言描述了本公开，但显然，许多替代、修改和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，意欲涵盖落入本公开的精神和广泛范围内的所有此类替代、修改和变化。
1.相关申请的交叉引用/通过引用并入声明本技术根据35 usc
ꢀ§ꢀ
119(e)要求2020年4月24日提交的临时申请美国系列号63/015,239的权益。上述引用的专利申请的全部内容在此明确通过引入并入本文。
2.关于联邦资助的研究或开发的声明不适用。
3.背景医学诊断领域利用许多不同形式的测定技术。当怀疑患者被微生物(诸如但不限于细菌或病毒)感染时，可以对来自患者的生物样品进行测定以检测由患者的免疫系统产生的针对微生物的抗体。
4.当期望检测患者血清和血浆中的抗病毒或抗细菌抗原抗体(诸如但不限于igg、igm和/或iga)时，已采用桥接血清学测定，其中固定化病毒/细菌抗原和标记的病毒/细菌抗原经常用于配制测定试剂。在另一个实例中，乳胶颗粒凝集测定利用病毒/细菌抗原包被的乳胶颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。
5.然而，由于与抗体过量相关的不确定性(即钩状效应)、需要早期检测病毒/细菌感染，并且一些患者样品中的抗病毒/细菌抗体滴度低，需要减少测试所需的样品量，同时还增强由测定生成的信号。
6.因此，本领域中需要克服现有技术的缺点和缺陷的针对微生物抗原的抗体的新的和改进的测定法。本公开正是涉及此类用于检测针对微生物抗原的抗体的新的和改进的试剂、试剂盒、微流体装置和方法。
7.附图简要说明图1示意性描绘利用loci
®
测定形式的sars-cov-2总(cov2t)测定(siemens healthineers, tarrytown, ny)。
8.图2示意性描绘根据本公开构建的血清学测定形式，其包括与抗人免疫球蛋白抗体组合的图1的cov2t loci
®
测定形式。
9.图3示意性描绘抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式。
10.图4示意性描绘根据本发明构建且通过包括抗人免疫球蛋白抗体而增强的抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式。
11.详细描述在通过示例性语言和结果的方式详细解释本公开的至少一个实施方案之前，应理解，所述本公开不限于下面的描述中阐述的其对组分的构造和排列的细节的应用。本公开能够具有其他实施方案，或者能够以各种方式实践或实施。因此，本文使用的语言意欲被给予最广泛的可能范围和含义；并且实施方案意味着是示例性的—而非穷举性的。而且，应该理解，本文采用的措辞和术语是为了描述的目的，并且不应被认为是限制性的。
12.除非本文另有定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复
数术语应包括单数。前述技术和程序通常根据本领域众所周知的常规方法、并且如在本说明书通篇引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述而实施。与本文所述的分析化学、合成有机化学以及药用和药物化学结合利用的命名及其实验室程序和技术是本领域中众所周知和常用的那些。标准技术用于化学合成和化学分析。
13.本说明书中提及的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物指示本公开所属领域的技术人员的技术水平。在本技术的任何部分中引用的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物在本文中明确地通过引用以其整体并入，其程度如同每个单独的专利或出版物被具体和个别地指出通过引用并入一样。
14.鉴于本公开，无需过度实验即可制备和执行本文公开的所有组合物、试剂盒、装置和/或方法。尽管已经在具体实施方案的方面描述了所述组合物、试剂盒、装置和/或方法，但对于本领域技术人员将显而易见的是，在不脱离本公开的构思、精神和范围的情况下，可对所述组合物、试剂盒、装置和/或方法、以及在本文描述的方法的步骤或步骤顺序中应用变化。认为对于本领域技术人员显而易见的所有此类类似的取代和修改在如所附权利要求书限定的本公开的精神、范围和构思内。
15.如根据本公开所利用，除非另有指示，否则以下术语应理解为具有以下含义：与权利要求和/或说明书中的术语“包括”结合使用时，术语“一个/种(a)”或“一个/种(an)”的使用可意味着“一个/种(one)”，但它也与“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义一致。因此，术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，对“一种化合物”的提及可指一种或多种化合物、2种或更多种化合物、3种或更多种化合物、4种或更多种化合物或更大数目的化合物。术语“多个/种”是指“两个/种或更多个/种”。
16.术语“至少一个/种”的使用将被理解为包括一个/种以及多于一个/种的任何数量，包括但不限于2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100个/种等。术语“至少一个/种”可延伸多至100或1000或更多个/种，这取决于它所附接的术语；此外，100/1000的数量不视为限制性的，因为更高的限值也可产生令人满意的结果。此外，术语“x、y和z中的至少一个/种”的使用将被理解为包括单独的x，单独的y和单独的z，以及x、y和z的任何组合。序数术语(即，“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等)的使用仅用于区分两个或更多个事项的目的，并且不意味着暗示例如一个事项相对于另一事项的任何顺序或次序或重要性、或任何添加次序。
17.在权利要求中使用术语“或”用于意指包括性的“和/或”，除非明确指出仅指替代方案或者除非替代方案是互相排斥的。例如，以下任一种都满足条件“a或b”：a为真(或存在)且b为假(或不存在)，a为假(或不存在)且b为真(或存在)，并且a和b两者均为真(或存在)。
18.如本文所用，对“一个实施方案(one embodiment)”、“一个实施方案(an embodiment)”、“一些实施方案”、“一个实例(one example)”、“例如”或“一个实例(an example)”的任何引用意指结合该实施方案描述的具体要素、特征、结构或特点包括在至少一个实施方案中。例如，说明书中各个地方出现的短语“在一些实施方案中”或“一个实例”不一定全部是指同一实施方案。此外，对一个或多个实施方案或实例的所有引用都应被解释为对权利要求非限定性的。
19.在整个申请中，术语“约”用于指示，值包括用于测定该值的组合物/仪器/装置、方
法的误差的固有变化，或研究受试者间存在的变化。例如，但不限于，当利用术语“约”时，指定值可以与列举值相差正负20%，或15%，或12%，或11%，或10%，或9%，或8%，或7%，或6%，或5%，或4%，或3%，或2%，或1%，因为此类变化适用于执行公开的方法并由本领域普通技术人员所理解。
20.如在本说明书和一个或多个权利要求中所用，术语“包含(comprising)”(和任何形式的包含，例如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(和任何形式的具有，例如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(和任何形式的包括，例如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(和任何形式的含有，例如“含有(contains)”和“含有(contain)”)都是包括性的或开放式的，并且不排除另外的未列举的要素或方法步骤。
21.如本文所用的术语“或其组合”是指所述术语之前列出的事项的所有排列和组合。例如，“a、b、c或其组合”意欲包括以下中的至少一个：a、b、c、ab、ac、bc或abc，并且如果次序在特定上下文中是重要的，则也包括ba、ca、cb、cba、bca、acb、bac或cab。继续该实例，明确包括的是含有一个或多个事项或术语的重复的组合，例如bb、aaa、aab、bbc、aaabcccc、cbbaaa、cababb等等。本领域技术人员将理解，除非从上下文可见，否则通常对任何组合中的事项或术语的数量没有限制。
22.如本文所用，术语“实质上(substantially)”意味着随后描述的事件或情况完全发生或者随后描述的事件或情况在大范围或程度上发生。例如，当与具体事件或环境相关时，术语“实质上”意味着随后描述的事件或情况发生在至少80％的时间、或至少85％的时间、或至少90％的时间、或至少95％的时间。术语“实质上相邻”可以意指两个事项与彼此100%相邻，或者两个事项与彼此密切接近，但与彼此不是100%相邻，或者两个事项之一的一部分与另一事项不是100%相邻，而是与另一事项密切接近。
23.如本文所用，短语“与
…
缔合(associated with)”和“与
…
偶联(coupled to)”包括两个部分彼此直接缔合/结合以及两个部分彼此间接缔合/结合二者。缔合/偶联的非限制性实例包括例如通过直接的键或通过间隔基团将一个部分与另一个部分共价结合，直接或借助与所述部分结合的特异性结合对成员将一个部分与另一个部分非共价结合，诸如通过将一个部分溶解在另一个部分中或通过合成而将一个部分掺入另一个部分，和将一个部分涂覆在另一个部分上。
24.术语“类似物”和“衍生物”在本文中可互换使用，并且是指如下的物质，其在其结构中包含与给定化合物相同的基本碳骨架和碳官能度，但也可以含有对其的一个或多个取代。如本文中所用，术语“取代”将被理解为是指用残基r替换化合物上的至少一个取代基。在某些非限制性实施方案中，r可以包括h，羟基，硫醇，选自氟化物、氯化物、溴化物或碘化物的卤化物，选自下列之一的c1-c4化合物：任选取代的直链、支链或环状烷基，和直链支链或环状烯基，其中任选的取代基选自一种或多种烯基烷基、炔基烷基、环烷基、环烯基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基、任选取代的杂环烯基烷基、芳基环烷基和芳基杂环烷基，其中每个是任选取代的，其中所述任选的取代基选自下列中的一种或多种：烯基烷基、炔基烷基、环烷基、环烯基烷基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、任选取代的杂环烯基烷基、芳基环烷基和芳基杂环烷基、苯基、氰基、羟基、烷基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基、烷硫基、氨基、-nh(烷基)、-nh(环烷基)2、羧基和-c(o))-烷基。
25.如本文所用的术语“样品”将被理解为包括可以根据本公开利用的任何类型的生物样品。可利用的流体生物样品的实例包括但不限于：全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(csf)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液(cystic fluid)、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液(bladder wash)、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液、其组合等。
26.术语“抗体”在本文中以最广义使用，并且是指例如完整单克隆抗体和多克隆抗体，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，以及其表现出结合分析物的期望生物活性的抗体片段及缀合物(诸如但不限于fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv、fd、双抗体、单链抗体和其他抗体片段及其缀合物，其保留完整抗体的可变区的至少一部分)，抗体替代蛋白或肽(即，工程改造的结合蛋白/肽)及其组合或衍生物。所述抗体可以是任何类型或类别(例如，igg、ige、igm、igd和iga)或亚类(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)。
27.如本文所用的术语“loci
®”是指基于发光氧通道测定(loci
®
)技术的商业使用的测定技术。loci
®
先进化学发光测定描述于例如美国专利号5,340,716 (ullman等人)，其全部内容明确地通过引用并入本文。当前可用的loci
®
技术具有高灵敏度，并且使用几种试剂。具体而言，loci
®
测定要求这些试剂中的两种(被称为“sensibead”和“chemibead”)通过其他特异性结合配偶体测定试剂以如下的方式保持，其中sensibead和chemibead彼此密切接近以实现信号。在暴露于特定波长的光后，sensibead释放单线态氧，并且如果两个珠粒密切接近，则单线态氧被转移至chemibead；这引起化学反应，其导致所述chemibead发出光，所述光可以在不同波长处测量。
28.现在转向本公开的某些非限制性实施方案，公开了试剂、试剂盒和微流体装置，其可用于血清学测定中以检测人生物样品中存在的针对微生物的抗体。将抗人免疫球蛋白抗体添加至这些测定的试剂中，所述试剂包括至少一种针对微生物的抗原；这些抗人ig抗体结合待检测的抗微生物抗体并发挥功能以增加桥接血清学测定中的交联和聚集以及增强颗粒凝集测定中的凝集。这些抗人免疫球蛋白抗体的使用增强由这些各种类型的测定生成的信号，同时减少每次测定所需的样品量。
29.本公开的某些非限制性实施方案涉及用于检测人生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的血清学测定的试剂盒。所述试剂盒包括至少两种组分：组合物，其包含标记物和与其直接或间接结合的至少一种微生物的抗原；和至少一种抗人免疫球蛋白(ig)抗体。所述抗人免疫球蛋白抗体结合人生物样品中存在的抗微生物抗体以形成复合物。这些复合物的形成增加能够结合可检测组合物的微生物抗原的抗体叉臂(prong)。也就是说，每个抗人ig抗体可以结合两个人抗微生物抗体的fc片段处；复合物中的存在的这两个人抗微生物抗体(其在未复合时各分出两个叉臂)，在与抗人ig抗体复合后变成四叉臂或多叉臂抗体。因此，这些复合物在抗原桥接血清学测定中更有效地交联微生物抗原。
30.根据本公开可以利用的样品的非限制性实例(且因此在某些非限制性实施方案中，可以基于此配制基质)包括生物样品，如但不限于：全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(csf)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液及其组合。
31.利用本公开的试剂和试剂盒的血清学测定可以检测针对需要检测的任何微生物的抗原的人抗体。例如(但非限制性地)，待检测的微生物可以是细菌、病毒、原生动物、真菌
等。
32.可以根据本公开检测的细菌的非限制性实例包括不动杆菌属(acinetobacter)、放线菌属(actinomyces)、气单胞菌属(aeromonas)、聚合杆菌属(aggregatibacter)、阿托波氏菌属(atopobium)、芽孢杆菌属(bacillus)、拟杆菌属(bacteroides)、巴尔通氏体属(bartonella)、双歧杆菌属(bifidobacterium)、疏螺旋体属(borellia)、布鲁氏菌属(brucella)、弯曲杆菌属(campylobacter)、衣原体属(chlamydia)、嗜衣原体属(chlamydophila)、梭菌属(clostridium)、棒杆菌属(corynebacterium)、考克斯氏体属(coxiella)、艾肯氏菌属(eikenella)、肠杆菌属(enterobacter)、肠球菌属(enterococcus)、埃希氏菌属(escherichia)、真杆菌属(eubacterium)、弗朗西丝氏菌属(francisella)、梭杆菌属(fusobacterium)、加德纳氏菌属(gardnerella)、嗜血菌属(haemophilis)、螺杆菌属(helicobacter)、克雷伯氏菌属(klebsiella)、乳杆菌属(lactobacillus)、李斯特氏菌属(listeria)、动弯杆菌属(mobiluncus)、莫拉氏菌属(moraxella)、分枝杆菌属(mycobacterium)、支原体属(mycoplasma)、奈瑟氏球菌属(neisseria)、微单胞菌属(parviomonas)、巴斯德氏菌属(pasteurella)、卟啉单胞菌属(porphyromonas)、普雷沃氏菌属(prevotella)、丙酸杆菌属(propionibacterium)、变形菌属(proteus)、假单胞菌属(pseudomonas)、立克次氏体属(rickettsia)、沙门氏菌属(salmonella)、沙雷氏菌属(serratia)、志贺氏菌属(shigella)、葡萄球菌属(staphylococcus)、链球菌属(streptococcus)、坦纳菌属(tannerella)、密螺旋体属(treponema)、弧菌属(vibrio)以及耶尔森氏菌属(yersinia)物种等。
33.可以根据本公开检测的病毒的非限制性实例包括腺病毒、星状病毒、冠状病毒(诸如但不限于严重急性呼吸综合征冠状病毒(sars-cov)或中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov))、柯萨奇病毒、巨细胞病毒(cmv)、埃可病毒、脑炎病毒、肠道病毒、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒(ebv)、红细胞病毒、汉坦病毒、肝炎病毒、疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒(hiv)、流感病毒、诺如病毒、乳头瘤病毒、副流感病毒、副粘病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒(rsv)、鼻病毒、轮状病毒、风疹病毒、麻疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、西尼罗病毒和寨卡病毒等。
34.可以根据本公开检测的原生动物的非限制性实例包括蛔虫、巴贝斯虫、隐孢子虫(cryptosporidium)、环孢子虫(cyclospora)、内阿米巴虫(entamoeba)、蛲虫(enterobius)、贾第虫(giardia)、膜壳绦虫(hymenolepis)、板口线虫(necator)、疟原虫(plasmodium)、类圆线虫(strongyloides)、绦虫(taenia)、弓形虫(toxoplasma)和毛滴虫(trichomonas)物种等。
35.可以根据本公开检测的真菌的非限制性实例包括酵母、霉菌等，包括(但不限于)假丝酵母属(candida)、隐球菌属(cryptococcus)、表皮癣菌属(epidermophyton)、马拉色菌属(malassezia)、小孢子菌属(microsporum)、毛癣菌属(trichophyton)物种等。
36.在一个具体(但非限制性)实施方案中，通过血清学测定检测的微生物是严重急性呼吸道综合征冠状病毒2 (sars-cov-2)、hiv、乙型肝炎总核心、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒、疱疹病毒(hsv)、cmv、风疹病毒、幽门螺杆菌(h. pylori)或刚地弓形虫(toxoplasma gondii)。
37.所述抗原可以是来自待检测的微生物的任何抗原。可用于检测上面列举的每种微
生物的抗原是本领域中众所周知的并且可广泛得到。此外，可以根据本公开利用的抗原的选择完全在本领域普通技术人员的能力范围内。因此，认为没有必要对其进一步公开。
38.在具体(但非限制性)实施方案中，所述微生物是sars-cov-2，并且所述抗原是本领域已知或本文以其他方式考虑的任何sars-cov-2抗原。例如(但非限制性地)，所述抗原可以来自核衣壳(n)蛋白、刺突(s)蛋白、膜(m)蛋白、包膜(e)蛋白、融合(f)蛋白等。在具体(但非限制性)实施方案中，所述抗原可以来自核衣壳蛋白或刺突蛋白。
39.在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述抗原是sars-cov-2刺突蛋白的s1亚基的受体结合结构域(rbd)。rbd s1抗原可以获得自本领域已知的任何来源。例如(但非限制性地)，该特定抗原商业获得自genscript (piscataway, nj)；meridian life sciences, inc. (memphis, tn)；sino biological us inc. (wayne, pa)；acro biosystems (newark, de)；biorbyt, llc (st. louis, mo)；icosagen, as (san francisco, ca)；和bios pacific inc. (emeryville, ca)。
40.所述抗-人ig抗体可特异性结合任何本领域已知或本文以其它方式考虑的人类免疫球蛋白分子的任何部分。例如(但非限制性地)，所述抗体可针对人igg、ige、igm、igd和/或iga，和/或其任何部分(诸如，但不限于，抗-人γ链、抗-人h l、抗-人轻链等)。抗人ig抗体(包括但不限于抗人igg、抗人igm和/或抗人iga抗体以及识别两种或更多种人免疫球蛋白抗体的抗体)是本领域中众所周知的，可广泛商业获得，并且已被广泛研究。例如(但非限制性地)，抗-人igg单克隆和/或多克隆抗体的一些商业来源包括rockland immunochemicals、inc. (pottstown, pa)、usbiological life sciences (swampscott, ma)、santa cruz biotechnology、inc. (dallas, tx)、jackson immuno research labs、inc. (west grove, pa)、thermo fisher scientific (waltham, ma)和sigma-aldrich corp. (st. louis, mo)。然而，这个列表不包括全部，并可以根据本公开利用的抗-人ig抗体还有许多另外的商业来源。因此，本领域普通技术人员将能够清楚且毫无疑义地鉴别和选择可以根据本公开利用的各种抗-人ig抗体，并因此认为没有必要对所述抗-人ig抗体或其特性进一步描述。
41.包含标记物和与其结合直接或间接的至少一种微生物的抗原的组合物可以具有允许检测与其结合的针对微生物的抗体的任何物理和/或结构特征。例如(但非限制性地)，所述组合物可以假设颗粒、珠粒、表面或基底等的形式。可用于血清学测定中的组合物是本领域中众所周知的并且可商购获得。同样，可用于此类组合物中的标记物是本领域中众所周知的并且可商购获得。进一步，用于特定血清学测定形式的特定组合物和标记物的选择完全在本领域普通技术人员的能力范围内。因此，认为不必对其进一步描述。然而，仅仅为了实例的目的，下文提供了几种不同的血清学测定形式和与其一起利用的特定组合物。
42.本公开的试剂盒可以被设计用于与本领域已知或本文以其他方式描述的任何血清学测定形式一起使用。例如但非限制性地，所述试剂盒可以被设计用于均质颗粒标记的血清学测定中，所述测定利用病毒/细菌抗原包被的颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。在这种类型的测定形式中，试剂盒的抗人ig抗体结合待检测的抗微生物抗体并发挥功能以增强颗粒凝集测定中的凝集，且因此增强由检测产生的信号，同时减少所需的样品量。这种血清学测定形式的一个非限制性实例是颗粒增强的比浊抑制免疫测定(“petinia”)。petinia测定形式的非限制性实例描述于美国专利号7,
186,518；5,147,529；5,128,103；5,158,871；4,661,408；5,151,348；5,302,532；5,422,284；5,447,870；和5,434,051；其公开内容以其整体并入本文。
43.可以根据本公开利用的血清学测定形式的另一个非限制性实例是桥接测定。这种类型的测定的结构涉及使用两种组分，其均结合待检测的分析物，且因此形成可检测的桥。设计用于这种类型的测定形式中的本公开的试剂盒包括：如上文所述的第一组合物(即，包含标记物和与其直接或间接结合的至少一种微生物的抗原的组合物)，至少一种如上文所述的抗人免疫球蛋白抗体，以及也具有与其直接或间接结合的至少一种微生物抗原的第二组合物(其中两种组合物的抗原可以是相同或不同的)。以这种方式，当微生物抗体分别结合第一和第二组合物的第一和第二抗原时形成复合物，由此微生物抗体在形成复合物时“桥接”第一和第二组合物。
44.用于桥接测定形式中的第二含抗原组合物通常被设计用于分离和/或检测由结合第一和第二组合物的第一和第二抗原的微生物抗体的桥接形成的复合物。在某些非限制性实施方案中，所述第二组合物包含至少一种抗原直接或间接结合的固定表面；因此，第二组合物提供了固定表面，在其上可以形成复合物且因此与样品的其余部分和测定的非结合组分分离。然而，使用固定表面作为第二组合物的一部分仅仅是为了举例说明的目的；所述第二组合物可以具有允许分离和/或检测在抗微生物抗体和第一和第二组合物之间形成的复合物的任何物理和/或结构特征。例如(但非限制性地)，所述第二组合物还可以假设颗粒、珠粒、固定或非固定表面或基底等的形式。
45.在桥接测定形式的另一个具体(但非限制性)实施方案中，所述试剂盒可以进一步包括一种或多种用于化学发光检测系统的试剂，诸如(但非限制性地)发光氧通道测定(loci
®
)形式。在该具体(但非限制性)实例中，所述试剂盒包括包含单线态氧可激活的化学发光化合物(诸如(但不限于) chemibead)的组合物和包含敏化剂(诸如(但不限于)) sensibead)的组合物，其各自具有与其直接或间接结合的微生物抗原。在一个替代实施方案中，所述试剂盒含有用于在测定之前或期间将组合物直接或间接附接至微生物抗原的试剂。
46.在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述试剂盒的第一组合物被进一步定义为包含单线态氧可激活的化学发光化合物，所述单线态氧可激活的化学发光化合物具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原。除了至少一种抗人免疫球蛋白抗体以外，所述试剂盒进一步包含第二组合物，其包含能够在其激发状态下生成单线态氧的敏化剂和与所述敏化剂直接或间接结合的第二微生物抗原。
47.当所述试剂盒含有包含敏化剂和第二微生物抗原的第二组合物时，所述第二组合物可以不与已经与敏化剂结合的第二微生物抗原布置在试剂盒中。也就是说，所述试剂盒不是包含含有敏化剂和第二抗原两者的单一第二组合物，而是可以包括两种试剂：(i)组合物，其包含能够在其激发态下生成单线态氧且具有与其直接或间接结合的生物素-特异性结合配偶体的敏化剂；和(ii)第二微生物抗原，其中第二抗原是生物素化的。
48.化学发光化合物(化学发光剂)是化学可激活且作为这种激活的结果而发射特定波长的光的化合物。通过举例说明而非限制性地，化学发光剂的实例包括例如：能够与单线态氧或过氧化物反应以形成可以分解成酮类或羧酸衍生物的氢过氧化物或二氧环丁烷(dioxetane)的烯烃类；可以通过光的作用分解的稳定二氧环丁烷；可以与单线态氧反应以
形成二酮类的炔烃类；可以形成偶氮化合物或偶氮羰基化合物的腙类或酰肼类，诸如(但不限于)鲁米诺；和可以形成内过氧化物的芳族化合物。作为激活反应的结果，化学发光剂直接或间接引起发光。
49.在某些实施方案中，单线态氧可激活的化学发光化合物可以是这样的物质，其经历与单线态氧的化学反应以形成亚稳态中间物质，所述亚稳态中间物质可分解，并同时或随后发射光。包含化学发光化合物的组合物可通过激活的化学发光化合物直接激发；或者，所述组合物可进一步包含至少一种荧光分子，所述荧光分子由激活的化学发光化合物激发。
50.敏化剂是生成用于激活化学发光化合物的反应性中间产物(诸如例如单线态氧)的分子，通常是化合物。在一些非限制性实施方案中，所述敏化剂是光敏剂。通过实例而非限制性地，可以化学激活(通过，例如酶和金属盐)的其他敏化剂包括，借助外部光源的激活或不借助外部光源的激活而可以产生单线态氧的其他物质和组合物。例如，某些化合物已经显示催化过氧化氢转化为单线态氧和水。其他敏化剂物质和组合物的非限制性实例包括碱土金属ca、sr和ba的氧化物；d0构型中的3a、4a、sa和6a族的元素的衍生物；锕系元素和镧系元素的氧化物；和氧化剂cio-、bro-、au
3
、io
3-和io
4-；和具体而言，钼酸根、过氧钼酸根、钨酸根和过氧钨酸根离子，和乙腈。下列参考文献(其在此明确地以其整体通过引用并入)提供了关于也落入本公开的范围内的敏化剂物质和组合物的进一步公开内容：aubry, j. am. chem. soc., 107:5844-5849 (1985)；aubry, j. org. chem., 54:726-728 (1989)；b
ö
hme和brauer, inorg. chem., 31:3468-3471 (1992)；niu和foote, inorg. chem., 31:3472-3476 (1992)；nardello等人, inorg. chem., 34:4950-4957 (1995)；aubry和bouttemy, j. am. chem. soc., 119:5286-5294 (1997)；和almeida等人, anal. chim. acta, 482:99-104 (2003)；其各自的完整内容在此明确地通过引用并入本文。
51.光敏剂的范围内还包括不是真的敏化剂、但在热、光、电离辐射或化学激活的激发下将释放单线态氧分子的化合物。此类化合物的成员包括例如(但非限制性地)，内过氧化物，诸如1,4-二羧基乙基-1,4-萘内过氧化物、9,10-二苯基蒽-9,10-内过氧化物和5,6,11,12-四苯基萘5,12-内过氧化物。加热这些化合物或这些化合物直接吸收光而释放单线态氧。
52.光敏剂是用于通过例如用光激发生成单线态氧而激活光活性化合物的敏化剂。光敏剂是光可激活的，且包括例如染料和芳族化合物，并且通常是由共价键合的原子构成的化合物，通常具有多个共轭的双键或三键。所述化合物应当吸收在约200 nm至约1,100 nm的波长范围内、诸如(但不限于)约300 nm至约1,000 nm的范围内或约450 nm至950 nm的范围内的光，在激发波长下，其最大吸光度时的消光系数大于500 m-1 cm-1
，或大于5,000 m-1 cm-1
，或大于50,000 m-1 cm-1
。光敏剂应当是相对光稳定的，且可以不与单线态氧有效反应。通过举例说明而非限制性地，光敏剂的实例包括：丙酮；二苯甲酮；9-噻吨酮；伊红；9,10-二溴蒽；亚甲基蓝；金属卟啉类诸如(但不限于)血卟啉；酞菁；叶绿素；玫瑰红；和巴克敏斯特富勒烯以及这些化合物的衍生物。
53.可以根据本公开利用的化学发光化合物和光敏剂的具体、非限制性实例记载于美国专利号5,340,716 (ullman，等人)，其完整内容在此明确地通过引用并入本文。
54.可以根据本公开内容利用本领域中已知或本文另外考虑的任何生物素-特异性结
合配偶体。在某些非限制性实施方案中，所述生物素-特异性结合配偶体是针对生物素的抗体。在其他非限制性实施方案中，所述生物素-特异性结合配偶体是抗生物素蛋白或其类似物。
55.根据本公开，可以利用本领域已知或本文另外考虑的任何抗生物素蛋白类似物，只要抗生物素蛋白或抗生物素蛋白类似物：(1)能够与敏化剂缔合；(2)能够结合生物素化的分析物-特异性结合配偶体；和(3)能够结合样品中可能存在的生物素。可以根据本公开利用的抗生物素蛋白类似物的非限制性实例包括kang等人(j drug target (1995) 3:159-65)(其全部内容明确地通过引用并入本文)中公开的那些。抗生物素蛋白类似物的具体非限制性实例包括抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、traptavidin、中性抗生物素蛋白、neutralite抗生物素蛋白、neutravidin、lite-抗生物素蛋白、琥珀酰化抗生物素蛋白、其他形式的修饰或基因工程改造的抗生物素蛋白，上述任一种的酯、盐和/或衍生物等。
56.能够被激活的化学发光化合物激发并以特定的、可检测的波长发光的本领域中已知的任何荧光分子可以根据本公开用作(a)和(b)(以及(e)，如果存在的话)的荧光分子，只要由每个荧光分子产生的信号都可与由利用的其他荧光分子产生的信号不同地检测到。也就是说，(a)的荧光分子必须发射与(b)的荧光分子发射光的波长充分不同的波长的光，使得当同时检测时两个信号可以与彼此区分。在一个具体(但非限制性)实例中，根据本公开利用的每种荧光分子独立地选自铽、铀、钐、铕、钆和镝。例如(但不限于)，铽发射约545 nm的波长的光，铀发射约612 nm的波长的光，且钐发射约645 nm的波长的光。
57.本公开的试剂盒可用于抗微生物抗体的定性和/或定量测量。
58.可以以任何形式提供试剂盒中存在的测定组分/试剂，所述形式允许它们根据本公开概念发挥功能。例如但非限制性地，每种试剂可以以液体形式提供并且以散装和/或单一等分试样形式设置在试剂盒内。或者，在一个具体(但非限制性)实施方案中，一种或多种试剂可以以单一等分试样冻干试剂的形式设置于试剂盒中。微流体装置中干燥试剂的使用详细描述于美国专利号9,244,085 (samproni)，其完整内容在此明确地通过引用并入本文。
59.除了上文详细描述的测定组分/试剂以外，所述试剂盒可以进一步含有用于进行本文描述或另外考虑的任何特定测定的其他试剂。这些额外的试剂的性质将取决于特定的测定形式，并且其鉴定完全在本领域普通技术人员的技能范围内；因此，认为没有必要对其另外描述。此外，试剂盒中存在的组分/试剂可以各自在分开的容器/隔室中，或者各种组分/试剂可以被组合于一个或多个容器/隔室中，这取决于所述组分/试剂的交叉反应性和稳定性。此外，所述试剂盒可包括其中设置组分/试剂的微流体装置。
60.所述试剂盒中的各种组分/试剂的相对量可以广泛变化，以提供组分/试剂的浓度，其实质上优化需要在测定方法期间发生的反应，并且进一步实质上优化测定的灵敏度。在适当情况下，试剂盒中的一种或多种组分/试剂可以提供为干燥粉末，诸如冻干粉末，并且所述试剂盒可进一步包括用于溶解干燥试剂的赋形剂；以该方式，可以从这些组分获得具有用于进行根据本公开的方法或测定的适当浓度的试剂溶液。试剂盒中可以包括的其他试剂的非限制性实例包括洗涤溶液、校准溶液、质量控制溶液、稀释溶液、赋形剂、干扰溶液、阳性对照、阴性对照等。此外，所述试剂盒可进一步包括解释如何使用试剂盒的一组书面说明。该性质的试剂盒可用于本文描述或另外考虑的任何方法。
61.本公开的某些非限制性实施方案涉及微流体装置，其含有本文描述或以其他方式考虑的任何血清学测定试剂。例如(但非限制性地)，本公开的某些额外非限制性实施方案涉及微流体装置，其包括上文所述的任何试剂盒的组分。
62.具体地，某些非限制性实施方案包括经由本文描述或以其他方式考虑的血清学测定来检测生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的微流体装置。所述微流体装置包括：(i)通过其施加生物样品的入口通道；和(ii)至少一个能够与所述入口通道流体连通的第一隔室。(ii)的隔室含有单独或与本文描述或以其他方式考虑的一种或多种其他试剂(诸如但不限于一种或多种用于血清学测定中的试剂)组合的本文描述或以其他方式考虑的任何试剂。例如(但非限制性地)，所述一种或多种试剂包括抗人免疫球蛋白抗体和第一和/或第二组合物，所述组合物含有如上文所述或本文以其他方式考虑的抗微生物抗原。
63.在某些非限制性实施方案中，(ii)的所有试剂(以及如上文所述的任何额外要素)存在于同一隔室中。在替代非限制性实施方案中，所述试剂在两个或更多个隔室之间分开。
64.所述微流体装置可以提供有隔室的任何排列以及各种组分在其之间的分布，其允许所述装置根据本公开发挥功能。
65.可以密封微流体装置的任何隔室，以便将其中设置的试剂保持于基本上气密的环境中，直至使用它们；例如，可以密封含有冻干试剂的隔室以防止试剂的任何无意重构。入口通道和一个隔室，以及两个隔室可以被描述为“能够与彼此流体连通”；该短语指示所述隔室各自仍可以被密封，但在刺穿在其中或在其之间形成的密封物后，两个隔室能够在其之间具有流体流动。
66.本公开的微流体装置可以提供有本领域中已知的或本文另外考虑的任何其他期望特征。例如但非限制性地，本公开的微流体装置可以进一步包括读取室；所述读取室可以是含有上文所述的试剂的任何隔室，或者所述读取室可以与所述隔室流体连通。
67.所述微流体装置可以进一步包括一个或多个额外的隔室，其含有其他溶液，诸如(但不限于)洗涤溶液、校准溶液、质量控制溶液、稀释溶液、赋形剂、干扰溶液、阳性对照、阴性对照等。这些额外隔室可以与其他隔室中的一个或多个流体连通。例如，所述微流体装置可以进一步包括一个或多个含有洗涤溶液的隔室，并且这些隔室能够与所述装置的任何其他隔室流体连通。在另一个实例中，所述微流体装置可以进一步包括一个或多个含有用于溶解一种或多种干燥试剂的赋形剂的隔室，并且所述隔室可能够与所述装置的任何其他隔室流体连通。在又一个进一步实例中，所述微流体装置可以包括一个或多个含有稀释溶液的隔室，并且所述隔室能够与所述装置的任何其他隔室流体连通。
68.本公开的某些非限制性实施方案涉及检测人生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的方法。在一个非限制性实施方案中，所述方法包括以下步骤：(1)同时或全部或部分依次组合：(a)怀疑含有针对所述微生物的抗体的人生物样品，(b)本文公开或以其他方式考虑的包含标记物和与其直接或间接结合的至少一种微生物抗原的任何组合物，和(c)本文公开或以其他方式考虑的任何抗人免疫球蛋白抗体中的至少一种；(2)使(b)和(c)与(a)中存在的针对所述微生物的抗体结合，其中(b)与针对所述微生物的抗体的结合导致复合物的形成，且其中(c)与针对所述微生物的抗体的结合导致形成一种或多种复合物的聚集体，其含有(a)中的至少两种；和(3)检测复合物/聚集体以确定所述样品中存在的针对所述微生物的抗体的存在和/或浓度。
69.利用化学发光检测系统的用于检测人生物样品中针对微生物的抗体的存在和/或浓度的方法的一个具体(但非限制性)实施方案包括以下步骤：(1)将怀疑含有针对所述微生物的抗体的人生物样品与以下同时或全部或部分依次组合：(a)组合物，其包含具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原的单线态氧可激活的化学发光化合物；(b)组合物，其包含能够在其激发状态下生成单线态氧的敏化剂和与所述敏化剂直接或间接结合的第二微生物抗原；和(c)至少一种抗人免疫球蛋白抗体；(2)使(a)、(b)和(c)与所述样品中存在的针对所述微生物的抗体结合，其中(a)和(b)与针对所述微生物的抗体的结合导致形成复合物，其中使所述敏化剂与所述化学发光化合物密切接近，且其中(c)与针对所述微生物的抗体的结合导致形成一种或多种复合物的聚集体，其含有(a)中的至少两种和/或(b)中的至少两种；(3)激活所述敏化剂以生成单线态氧，其中所述复合物中存在的敏化剂的激活引起每种复合物中存在的化学发光化合物的激活；和(4)测定由所述复合物中激活的化学发光化合物生成的化学发光量，以确定所述样品中存在的针对所述微生物的抗体的存在和/或浓度。
70.能够经由本文描述或以其他方式考虑的测定形式检测的任何抗微生物抗体都可以通过本公开的血清学测定来检测。在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述抗体是针对sars-covid2病毒的抗病毒抗原抗体。
71.在一些非限制性测定实施方案中，利用的信号产生系统(sps)成员包括敏化剂，诸如，例如，光敏剂和化学发光分子组合物，并且其各自都具有与其直接或间接附接的微生物的抗原(或能够在测定期间具有与其直接或间接附接的抗原)；在这些测定实施方案中，所述敏化剂的激活产生的产物激活化学发光组合物，由此生成可检测信号，所述可检测信号涉及所检测的结合的人抗微生物抗体的量。本公开可基于的测定平台的一个示例性(但非限制性)实施方案是发光氧通道测定(loci
®
; siemens healthcare diagnostics inc., tarrytown, ny)。loci
®
测定描述于例如美国专利号5,340,716 (ullman等人)，其全部内容明确地通过引用并入本文。
72.在一个具体(但非限制性)测定实施方案中，所述测定通过将生物样品与两种或更多种loci
®
形式的试剂一起孵育来进行。例如(但非限制性地)，可以将生物样品与单线态氧可激活的化学发光化合物(诸如(但不限于) chemibead)和包含敏化剂(诸如(但不限于) sensibead)的组合物(其各自具有与其直接或间接结合的微生物抗原)孵育。在一个具体(但非限制性)实施方案中，所述生物样品与以下同时或全部或部分依次组合：(i)组合物，其包含：具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原的单线态氧可激活的化学发光化合物；(ii)组合物，其包含能够在其激发状态下生成单线态氧的敏化剂和与其直接或间接结合的第二微生物抗原；和(iii)至少一种抗人免疫球蛋白抗体。在另一个具体(但非限制性)实施方案中，所述生物样品与以下同时或全部或部分依次组合：(i)组合物，其包含：具有与其直接或间接结合的第一微生物抗原的单线态氧可激活的化学发光化合物；(ii)组合物，其包含能够在其激发态下生成单线态氧且具有与其直接或间接结合的生物素-特异性结合配偶体的敏化剂；(iii)第二微生物抗原，其中第二抗原是生物素化的；和(iv)至少一种抗人免疫球蛋白抗体。
73.在第二步中，将所述组分一起孵育以使含有化学发光化合物的组合物、含有敏化剂的组合物和抗人免疫球蛋白抗体与生物样品中存在的人抗微生物抗体结合，由此导致形
成复合物/聚集体，其中一种或多种敏化剂与一种或多种化学发光化合物紧密接近。
74.在第三步中，敏化剂被激活以生成单线态氧，其中所述复合物/聚集体中存在的敏化剂的激活引起每种复合物/聚集体中存在的化学发光化合物的激活。
75.在第四步中，由复合物/聚集体中激活的化学发光化合物生成的化学发光量用于检测生物样品中人抗微生物抗体的量。
76.在上文中详细描述或本文中以其他方式考虑的微生物抗原、单线态氧可激活的化学发光化合物、敏化剂、荧光分子和生物素或其类似物中的任一种都可用于本公开的方法中。
77.例如，在某些具体(但非限制性)实施方案中，单线态氧可激活的化学发光化合物是这样的物质，其经历与单线态氧的化学反应以形成亚稳态中间物质，所述亚稳态中间物质可分解，并同时或随后发射光。
78.在具体(但非限制性)实施方案中，所述敏化剂是光敏剂，且步骤(3)中敏化剂的激活包括用光照射(诸如但不限于在约680 nm处照射)。
79.根据本公开的方法，期望测定针对微生物的抗体的存在的任何样品都可以用作样品。样品的非限制性实例包括生物样品，诸如但不限于全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(csf)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液及其组合。具体非限制性实例包括裂解的全血细胞和裂解的红血细胞。在具体(但非限制性)实例中，所述样品来自人。
80.如上所提及，组合(同时或依次)提供所述方法的各种组分。当依次添加所述方法的各种组分时，可以改变组分的添加次序；本领域普通技术人员可确定向测定添加不同组分的具体期望次序。最简单的添加次序当然是同时添加所有物质，并测定由其产生的信号。或者，可以依次组合每种组分，或组分的组。在某些实施方案中，可以包括在一次或多次添加之后的一个或多个步骤(诸如，但不限于，一个或多个孵育步骤和/或一个或多个洗涤步骤)。
81.在一个替代(但非限制性)实施方案中，利用化学发光检测系统的方法的步骤(1)包括：首先将样品与生物素化的靶标分析物-特异性结合配偶体和包含敏化剂的组合物组合并将其孵育，然后添加包含单线态氧可激活的化学发光化合物的组合物。或者，所述方法的步骤(1)包括：首先将样品与包含单线态氧可激活的化学发光化合物的组合物组合并将其孵育，然后添加包含敏化剂的组合物。在该后者实施方案中，可以在孵育步骤之前或之后添加生物素化的靶标分析物-特异性结合配偶体。
82.尽管上述实施方案已关于检测人样品中的抗体进行描述，但应理解，本公开的范围不限于与人样品一起使用。相反，上文所述的任何实施方案都可以适用于检测来自其他哺乳动物的生物样品中的针对微生物的抗体。因此，本公开还包括用于通过用抗哺乳动物免疫球蛋白(其对应于由其取生物样品的物种)代替上述所有实施方案中利用的抗人免疫球蛋白抗体来检测非人哺乳动物生物样品中的抗微生物抗体的组合物、试剂盒、装置和方法。
83.实施例下文提供了实施例。然而，应理解本公开，其应用不限于本文公开的具体实验、结果和实验室程序。反而，该实施例仅作为各个实施方案之一提供，并且意在是示例性的，而
非穷举性的。
84.实施例1在2020年6月，美国食品药品监督管理局(fda)为siemens healthineers (malvern, pa)开发的基于实验室的总抗体测试颁发了紧急使用授权(eua)，用于检测血液中的sars-cov-2抗体(包括igm和igg)的存在。sars-cov-2病毒表面上的刺突蛋白使得病毒能够穿透并感染多个器官和血管中发现的人细胞。siemens healthineers的总抗体cov2t测定显示在图1中，并且被设计用于检测针对刺突蛋白的抗体。这些抗体中的一些据信中和sars-cov-2病毒，且因此预防感染。为sars-cov-2开发的多种潜在疫苗将刺突蛋白纳入其关注。
85.在本实施例中，比较了两种loci
®
测定形式。第一种形式如图1中所示并利用用荧光素标记的sars-cov-2刺突蛋白的s1亚基的受体结合结构域(s1的rbd)预先形成的抗fitc chemibeads，和与生物素-s1的rbd结合的链霉抗生物素蛋白包被的sensibeads。用这种测定形式获得的结果显示于表1中标记为“0μg/ml 4h5"的列中。
86.第二种loci
®
形式如图2中所示且包括根据本公开，将抗人免疫球蛋白抗体添加至图1的测定形式。具体而言，利用的抗人ig抗体被命名为4h5并且含有抗igg抗体。将4h5抗体以0.5、1和2μg/ml的浓度添加至测定形式中，如表1的第三至第五列中所示。
87.使用的材料：cov2t lot5散装试剂(siemens healthineers, tarrytown, ny)；4h5抗体，6.38mg/ml，无nan3；来自genscript (piscataway, nj)的sars-cov-2 s1 rbd抗体，l mg/ml；bsa；和nhs。
88.在实验设计中，将已知量的抗rbd抗体掺入bsa和nhs，同时使用表1中所示量的4h5抗体掺入cv2t生物素-rbd试剂。然后，如图1或2中所示进行测定(取决于是否存在4h5抗体)，并在dimension exl 300001系统(siemens)上用10 μl ss与20 μl生物素-rbd测量作为千计数的信号。
89.表1
6%bsa,ph7.4pbs缓冲液中的抗rbdab0
µ
g/ml4h50.5
µ
g/ml4h51
µ
g/ml4h52
µ
g/ml4h50
µ
g/ml22220.1
µ
g/ml35540.5
µ
g/ml67567361
µ
g/ml72262611615
µ
g/ml17219534975
90.如所见，当与cov2t测定试剂组合时，将抗人ig抗体添加至测定形式中具有协同效应，并且将由测定产生的信号大大增加多个数量级。在反应混合物中，含有病毒抗原包被的chemibead、病毒抗原包被的sensibead和患者样品中的抗病毒抗体的复合物的形成，生成初始的化学发光信号。通过添加抗人igg抗体(4h5克隆)，更高量级的chemibead和sensibead复合物(其具有抗人ig抗体与抗病毒抗体的fc片段的二级结合)的形成导致对测定信号的协同作用，其在没有抗人ig抗体的情况下生成的初始信号之上。
91.尽管实施例1-2涉及检测cov2t抗体，但应理解该技术适用于检测针对任何微生物的抗体。因此，在这两个实施例中使用cov2t测定法仅仅为了实例的目的，而不是限制本公开的范围。
92.实施例2
尽管实施例1涉及将抗人ig抗体添加至基于loci
®
测定形式的血清学测定中，但抗人ig抗体的添加可以与其他血清学测定形式一起使用以减少所需的样品量并增加生成的信号。例如(但非限制性地)，可以受益于添加抗人ig抗体的其他血清学测定形式是颗粒凝集测定。这些测定基于均质颗粒标记的血清学测定形式，其利用病毒/细菌抗原包被的乳胶颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。
93.颗粒凝集测定形式的一个具体(但非限制性)实例是颗粒增强的比浊抑制免疫测定(“petinia”)。petinia测定形式的非限制性实例公开于美国专利号7,186,518；5,147,529；5,128,103；5,158,871；4,661,408；5,151,348；5,302,532；5,422,284；5,447,870；和5,434,051；其公开内容以其整体并入本文。
94.图3描绘了抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式的一个实例，其利用病毒/细菌抗原包被的乳胶颗粒作为单一试剂，其在患者样品中存在抗病毒/细菌抗原抗体的情况下聚集。
95.相比之下，图4描绘根据本公开构建且通过包含抗人免疫球蛋白抗体而增强的抗病毒抗体petinia颗粒凝集血清学测定形式。这些抗人ig抗体结合待检测的抗微生物抗体，并发挥功能以增强颗粒凝集测定中的凝集作用。与上述loci
®
测定一样，使用抗人免疫球蛋白抗体增强由颗粒凝集测定生成的信号，同时减少每次测定所需的样品量。
96.因此，根据本公开，已经提供了完全满足上文所述的目的和优点的组合物、试剂盒和装置以及其生产和使用方法。尽管已经结合上文阐述的具体附图、实验、结果和语言描述了本公开，但显然，许多替代、修改和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，意欲涵盖落入本公开的精神和广泛范围内的所有此类替代、修改和变化。
再多了解一些
本文用于创业者技术爱好者查询，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。