一种采用电刺激对华南虎的采精方法

1.本发明涉及华南虎人工采精领域，具体为一种采用电刺激对华南虎的采精方法。


背景技术：

2.华南虎是我国特有的虎种，过去主要生活在华南、华东、华中三个地区，属我国一级保护动物，被国际自然保护组织列为世界十大濒危物种之一。
3.华南虎无固定的繁殖季节，孕期在103天，幼虎会跟随母虎2年左右，此时母虎一般不会发情，2-3年后幼虎开始独立生活，3-5年后性成熟，华南虎的寿命在自然环境中可达10-20年。
4.60多年前，中国还存在超过4000只华南虎。但是由于上世纪五十年代虎患严重，危害人和动物的生命，政府颁布了悬赏令，重金悬赏打虎，还成立了剿虎联合指挥部，全国各地掀起了一股打虎的热潮。1994年最后一只野生华南虎被射杀，之后再没有确凿证据证明华南虎野生种群的存在。因此很多专家都认为，华南虎的自然种群已经灭绝。现有的189头华南虎都是动物园圈养的，分布于杭州野生动物世界，上海动物园，洛阳王城动物园等国内几个有限的动物园内。其中洛阳王城动物园饲养量最多，达到30多头。现今华南虎饲养种群的来源是40多年前的6只野生华南虎(4只雌体和2只雄体)，近亲繁殖严重。
5.物种的繁衍需要自然种群的存在，自然种群还必须维持一定的个体数目、保持基因达到足够的杂合水平，种群才不会因为近亲繁殖而发生近交衰退。华南虎属于珍稀保护动物，种群扩繁是保护该物种的关键。但是近亲繁殖导致华南虎后代基因杂合水平低下，雌虎发情不明显或雌、雄虎发情不同步，交配不能有效发生；即使雌虎侥幸怀孕，也经常出现早期流产，或产下死胎、弱胎等现象，导致雄虎精子严重浪费。因此，加强华南虎繁育，增加华南虎产子量和成活率，对于保护华南虎种群的延续，显得十分迫切。为了促进华南虎的繁殖工作，我们拟开展华南虎的人工繁育，但要进行人工繁育，首先必须获得华南虎精液。要获得精液，对华南虎不能使用针对家畜的经阴道常规采精方法，必须首先对华南虎施行麻醉，再采用电刺激法采精。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种采用电刺激对华南虎的采精方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
7.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种采用电刺激对华南虎的采精方法，包括以下步骤：
8.打开电刺激采精仪开关，调节其输出电压，从3v开始，通电5s，再间隔5s依次提升电压；
9.控制电压达到4-8v，直至虎射精。
10.优选的，在采精之前，还包括如下步骤：s1.将华南虎禁食一天，并对其进行麻醉；
11.s2.在7-8l温水中加入半瓶(250ml)轻质液体石蜡后，对虎进行灌肠，使粪便排出，
再用生理盐水清洗肛门四周；
12.s3.对华南虎进行尾静脉采血，再剪去阴茎包皮周围的被毛，再用生理盐水进行清洗，准备采精；
13.s4.将涂抹了石蜡油的电刺激棒从肛门缓慢插入直肠，电极棒的金属部位要贴紧直肠壁。
14.优选的，所述电刺激仪输出电压优选为4-6v。
15.优选的，所述电极棒的电极朝向虎的背侧，电极棒深度为30cm。
16.优选的，所述电极棒直径为5cm。
17.麻醉包括如下步骤：
18.s1.将作为实验对象的虎事先禁食一天；
19.s2.先使用远距离注射器对华南虎远距离肌肉注射阿托品1-2ml；
20.s3.间隔10-25min后，用同样的方法对其肌肉注射氯胺酮来诱导麻醉；
21.s4.直到其自行卧倒，无挣扎现象后，将华南虎抬上采精台，将其侧卧保定；
22.s5.打开呼吸麻醉机，将吸入麻醉浓度调节至4％-5％，通过异氟烷对其进行维持麻醉，用毛巾遮住虎的眼睛，同时包裹住虎的上下颌，再为虎套上麻醉面罩。
23.优选的，在注射氯胺酮15-20min前注射阿托品。
24.优选的，所述氯胺酮注射剂量为10mg/kg，可根据动物麻醉后的反应情况适当追加药物。
25.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
26.在电压为4-6v时，更容易使虎射精，当电极棒的电极朝向虎的背侧，电极棒深度在大约30cm时，虎对电刺激更加敏感，更容易射精。
27.使用的电极棒加粗至直径5cm后，很容易就能采出精液。年轻的虎比年长的虎对电刺激反应更敏感，能更容易采到精液。
具体实施方式
28.下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
29.实施对象：圈养于杭州野生动物世界的三只雄性华南虎。将其分别编号为一号、二号和三号。
30.表1华南虎信息
[0031][0032][0033]
实验药品：硫酸阿托品注射液，由三明三药兽药有限公司生产，规格：0.5mg/ml，2ml/支。盐酸氯胺酮注射液，由沈阳市兽药厂生产，规格：0.15g/ml，2ml/支。异氟烷，由河北
一品制药有限公司生产，规格：100ml/瓶，和呼吸麻醉机配合使用。轻质液体石蜡，由衡水武罗药业有限公司生产，规格：500ml
±
10％/瓶。
[0034]
实验器材：美国matrx动物麻醉呼吸机，麻醉机型号：vme2，呼吸机型号：model3000。动物电刺激采精仪，由成都华智开物科技有限公司生产，型号：mdw1型。希森美康sysmex poch-100iv diff全自动动物血液分析仪。idexx catalyst one全自动生化分析仪。
[0035]
将作为实验对象的虎事先禁食一天。先使用远距离注射器对华南虎远距离肌肉注射阿托品1-2ml，阿托品属于抗胆碱药，可用于麻醉前给药，阿托品能减少因麻醉药引起的支气管分泌增加，减少迷走神经对心脏的影响，减轻胃肠蠕动与分泌，松弛平滑肌，改善呼吸功能。间隔10-25min后，用同样的方法对其肌肉注射氯胺酮来诱导麻醉，一般注射剂量为10mg/kg，可根据动物麻醉后的反应情况适当追加药物。直到其自行卧倒，无挣扎现象后，将华南虎抬上采精台，将其侧卧保定。打开呼吸麻醉机，将吸入麻醉浓度调节至4％-5％，通过异氟烷对其进行维持麻醉，用毛巾遮住虎的眼睛，同时包裹住虎的上下颌，再为虎套上麻醉面罩，这样通过毛巾也可以增强面罩的密闭性。
[0036]
在7-8l温水中加入约半瓶(250ml)轻质液体石蜡后，对虎进行灌肠，使粪便排出，以免粪便影响电刺激效果，再用生理盐水清洗肛门四周。之后进行尾静脉采血，再剪去阴茎包皮周围的被毛，再用生理盐水进行清洗，准备采精。
[0037]
将涂抹了石蜡油的电刺激棒从肛门缓慢插入直肠，电极棒的金属部位要贴紧直肠壁。打开电刺激采精仪开关，调节其输出电压，先从3v开始，通电5s，间隔5s，根据虎的反应调节增减输出电压，精液收集人员手持离心管，管口向上略倾斜包住虎生殖器前端，时刻注意虎的生殖器反应。当电压达到4-5v，通电5s，间隔5s时，虎便有射精反应，此时用离心管收集精液。采精结束后，摘除麻醉面罩，关闭呼吸麻醉机，解除保定，将虎重新小心放回饲养笼里，并将收集到的精液迅速放入35℃恒温水浴锅中保存，以便之后进行精液品质检测。
[0038]
通过对三只华南虎进行麻醉后采精得到了以下结果(其中一号华南虎一共采精三次，每次间隔2天，二号和三号华南虎各采精一次)：
[0039]
华南虎血常规及血液生化检测结果与分析：
[0040]
表2华南虎血常规检测结果
[0041][0042][0043]
血常规检测结果(见表2)显示：二号和三号华南虎的plt值(血小板总数)稍微低于参考范围，一号华南虎的plt值也接近参考范围下限，plt值降低提示可能存在感染、出血、脾脏肿大、骨髓发育不良等疾病，根据韩志强等对圈养东北虎的血液生理参数检测结果显示，雄性虎plt值的范围为163-420，平均值
±
标准差为227.77
±
79.62。由于华南虎的plt值要略低于东北虎，因此，上表中所检测的三只华南虎的plt值基本处于正常范围。同时上表中显示，三只虎的lym值及lym％低于参考范围，lym值偏低提示可能存在炎症、淋巴组织受到破坏、类固醇性原因等疾病。由于，雄性华南虎lym％范围为6-40，平均值
±
标准差为15.33
±
8.73，因此上表中所检测的三只虎基本处于正常范围。同时上表中还显示三只虎eo值高于参考范围，eo值偏高提示可能存在过敏、寄生虫、肉芽肿性炎症、肿瘤等疾病，根据现有资料测定结果显示，所测东北虎eo值范围为0.192-0.408，平均值为0.296，有研究表明华南虎的eo值略高于东北虎，因此上表中所检测的三只华南虎eo值基本处于正常范围。上表中有几个数值轻微超出参考范围，可能是因为虎受到惊吓或者刺激出现的轻微波动。
[0044]
表3华南虎血液生化检测结果
[0045][0046][0047]
血液生化检测结果(见表3)显示：
[0048]
一号华南虎在三次血液生化检测中alkp值略微低于参考值，二号和三号也处于参考值下限，由于alkp值在升高时才提示可能存在疾病，故该指标偏低无意义。三只虎的amyl值显著高于参考范围，amyl值的升高指示可能存在胰腺疾病，根据对东北虎和孟加拉白虎的血液生化指标的研究显示雄性东北虎的amyl值的平均值
±
标准差为619.4
±
42.78，雄性孟加拉白虎的amyl值的平均值
±
标准差为675.0
±
43.84，与上表中的结果仍有较大差异，由于三只虎的精神状况、食欲、粪便等均正常，所以是否是由于麻醉的影响或者是仪器，血液保存，虎受到惊吓等原因导致的还需要进一步研究。三只虎的crea值也高于参考范围，crea值升高可能指示存在肾病或尿道阻塞，根据凌铭德等对华南虎的血液及生化某些指标的测定结果显示，所测的雄性华南虎crea范围为125.53-271.25，平均值
±
标准差为194.05
±
40.27，仍略低于上表中的所测结果，可能是由于麻醉的影响或者虎受到惊吓或血液的保存等原因引起的。
[0049]
异氟烷配合氯胺酮对华南虎的麻醉情况及结果分析：
[0050]
表4华南虎麻醉情况
[0051][0052]
从上表中数据可以得知，一般使用10ml左右氯胺酮就可对虎进行诱导麻醉，年轻虎可能对该麻醉药物敏感性较差，所以在过程中追加了一些剂量。一号虎在第二次麻醉时，肌肉注射氯胺酮初始剂量8ml后，又在28min后再次追加氯胺酮2ml，因此一号虎第二次的诱导麻醉时间要长于另外两次。二号虎在肌肉注射氯胺酮初始剂量10ml后，又分别在初次注射氯胺酮30min后追加一次氯胺酮，初次注射52min后再次追加氯胺酮，共追加两次，每次使用氯胺酮剂量2ml，因此二号虎的诱导麻醉时间较长。从表中也可看出使用氯胺酮配合异氟烷麻醉不仅可以减少氯胺酮用量，还能延长麻醉时间，配合呼吸麻醉机可以使麻醉时间安全可控。
[0053]
整个麻醉过程中，在肌肉注射麻醉药物后，虎能自行卧倒，无抽搐及呕吐，无明显挣扎现象，对其进行搬运及保定时没有反应，接上呼吸麻醉机后，眼睑反射消失，肌肉松弛，刺激耳鼻无反应，对灌肠及血液采集也均无反应，舌拉出不能回缩，呼吸平稳通畅，心率在每分钟125-149之间，达到外科麻醉水平。检测虎的血常规和生化指标后，也发现无较大异常，并且在进行电刺激采精时，虎对电刺激反应较为敏感，能感受到不同强度和频率的电刺激，并能在电刺激时出现肌肉收缩，发生射精反应。上午麻醉结束后，三只虎在下午均苏醒，能抬头，晚上已经能站立，第二天能正常行走，苏醒过程均平稳顺利，且之后无其他并发症及不良反应出现，故该麻醉方法有良好的麻醉效果。
[0054]
华南虎电刺激采精方法及结果：
[0055]
表5一号华南虎采精情况
[0056][0057]
一号华南虎第一次采精情况见上表所示，第一次共采出约0.5ml精液，但均未发现精子。间隔2天后对其进行第二次采精，采了5管精液，总共约有3ml精液，只有第2管有精子，
且存在少量活的精子，其余4管均无精子。第二次采精后间隔2天进行第三次采精，共采出约4ml精液，存在精子，经过计数后发现精子密度为17.0
×
106个/ml。
[0058]
表6二号华南虎采精情况
[0059][0060]
二号华南虎采精情况见上表所示，一共采出约1.5ml精液，发现少量精子但均死亡。
[0061]
表7三号华南虎采精情况
[0062][0063]
三号华南虎采精情况见上表所示，一共采出约0.5ml精液，未发现精子。
[0064]
华南虎电刺激采精结果分析：
[0065]
观察表5、表6、表7数据可发现，一般华南虎在电刺激采精仪输出电压为4-6v时就会射精。根据虎之间的个体差异，数据会略有不同。同时在本试验中出现了好几次精液中无精子的现象。10月和11月是对虎采精效果最差的时候，无精率占到了全年的44.4％。而本次实验正值11月份，因此可能是季节原因影响了精液品质。
[0066]
在本次试验中，氯胺酮的使用量在10ml左右，氯胺酮的使用剂量一般为10mg/kg。由于华南虎之间存在个体差异，故使用量可根据具体情况酌情追加。同时要注意氯胺酮会增加唾液与气管支气管分泌，所以在注射氯胺酮15-20min前必须按所需剂量注射阿托品。使用异氟烷进行吸入麻醉时需要配合呼吸麻醉机使用，在本次试验中，麻醉机的异氟烷浓度调节至4％-5％，麻醉效果良好，且能通过电刺激使虎射精，采到的精液中也发现了活的精子，且精子密度尚可。检测虎的血液生理生化指标后，发现无较大异常，麻醉过程平稳无不良反应出现，苏醒时间能提前，且苏醒后无并发症，表明该麻醉方法有良好的安全性。并且在麻醉采精过程中，动物没有出现排尿现象，有相关研究显示一些动物在麻醉采精的过程中，由于麻醉的影响会引起尿道肌肉的放松，发生排尿现象，易污染精液。进一步说明了此麻醉方法对华南虎采精有较好的适用性。
[0067]
通过使用异氟烷配合氯胺酮的麻醉方法，不仅能减少氯胺酮的使用量，而且还能延长麻醉时间，使麻醉时间变得安全可控，同时减少了虎的应激，对虎造成的伤害较小。杭州野生动物世界过去使用的法国进口的速眠新价格为6、700元一支，每次用量在10ml左右，而本次试验中使用的异氟烷价格为600元一瓶，共有100ml，并且每次使用量很少，能使用较
长时间。因此，该麻醉方法不仅麻醉效果好，而且更加经济。值得一提的是，使用异氟烷进行麻醉时需要配合适合的呼吸麻醉机使用。
[0068]
电刺激仪输出电压最高不超过8v。本次试验发现，在电压为4-6v时，更容易使虎射精，当电极棒的电极朝向虎的背侧，电极棒深度在大约30cm时，虎对电刺激更加敏感，更容易射精。电极棒不能太细，采用细的电极棒，没有采出精液，将使用的电极棒加粗至直径5cm后，很容易就能采出精液。年轻的虎比年长的虎对电刺激反应更敏感，能更容易采到精液。对同一只虎多次采集精液，因为长时间没有进行射精精子可能会死亡，反复采集更易采出有活力的精子。
[0069]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。