一种用于治疗类风湿关节炎注射用多肽制剂

1.本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种用于治疗类风湿关节炎注射用多肽制剂。


背景技术：

2.类风湿性关节炎(ra)导致的关节病变和骨侵蚀由炎性细胞(如巨噬细胞)浸润及其释放的炎性介质分子(如tnf-α，il-1β，il-6和inf-γ等)导致。ra目前无法治愈，但是早诊断早治疗对于病人的ra康复和达标治疗效果影响重大。关节处的炎性巨噬细胞浸润程度与ra的治疗进程紧密相关。尽早抑制巨噬细胞的炎症因子的产生及其破坏作用，能有效阻止或缓解关节滑膜及软骨的病变，因此在ra的早期诊断与规范治疗中，靶向巨噬细胞的示踪和炎症细胞因子分泌的抑制能起到关键的诊疗效果。与此同时，不规律使用改善病情的抗风湿药(disease-modifying antirheumatic drugs,dmards)是ra患者功能受限的独立危险因素之一[doi:10.3760/cma.j.issn.1007-7480.2013.08.006.]。通过针对性设计靶向巨噬细胞的给药治疗方案，可以有效达到ra缓解或者低活动度(即达标治疗)，最终可以控制病情进展，减少致残率，改善患者生存质量，保证患者的正常社会参与度，降低对其家庭和社会的负担。
[0003]
ra临床治疗中的药物除了改善症状的非甾体抗炎药(nonsteroidal antiinflammatory drugs，nsaids)之外，dmards可以显著改善病患处的破坏性免疫作用，因此最新的ra诊疗指南中推荐在确诊后立即使用。甲氨蝶呤、来氟米特或柳氮磺吡啶是目前ra治疗一线用药，治疗不达标者，指南建议联合生物制剂dmards，比如tnf-α抑制剂(humira)，il-6受体抗体(actemra)，jak抑制剂(xeljanz)等。
[0004]
丝裂原活化蛋白激酶(mapk)是介导细胞反应的重要信号系统，其参与了细胞的生长、分化以及细胞间相互作用，普遍存在于多种生物，包括酵母和哺乳动物细胞。自从1991年sturgill及其同事在哺乳动物细胞鉴定出细胞外信号调节激酶(erk)，mapk信号转导通路的研究取得了迅猛发展。mapk不同成员具有明显的序列同源性，都是通过“t-x-y”双位点磷酸化达到最大激活。如今，已经有五种p38mapk异构体分离出来，p38家族根据对刺激的反应性分为两类：p38α/β/β2和p38γ/δ。p38家族成员的合成和活化不是普遍存在的，但是在不同的细胞系和组织中的p38mapk可被不同的介质活化，产生不同的生物学效应，同时也受不同炎症介质的调节。已有的研究表明，p38激酶作为真核细胞的丝裂原活化蛋白激酶(mapk)超家族的一员，可将各种胞外刺激信号传递至胞核、从而调控基因表达，是多种免疫相关疾病中重要的信号中枢。p38 mark参与了炎症、应急、发育、细胞生长与凋亡、细胞周期调控、缺血/再灌损伤及心肌肥厚等生理、病理过程中的信号传导。抑制p38 mark活性，可有效阻断其介导的病理信号转导，从而减轻、甚至消除病理现象。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的是提供一种用于治疗类风湿关节炎注射用多肽制剂。
[0006]
第一方面，本发明要求保护一种用于治疗类风湿关节炎注射用多肽制剂。
[0007]
本发明要求保护的用于治疗类风湿关节炎注射用多肽制剂为针剂，其活性成分为seq id no.1所示多肽。
[0008]
在本发明的具体实施方式中，所述多肽制剂具体为将seq id no.1所示多肽溶于生理盐水中后形成。其中，seq id no.1所示多肽的浓度为1毫克/毫升。
[0009]
第二方面，本发明要求保护seq id no.1所示多肽在制备用于治疗类风湿关节炎的药物中的应用。
[0010]
第三方面，本发明要求保护seq id no.1所示多肽和生理盐水在制备用于治疗类风湿关节炎的药物中的应用。
[0011]
在第二方面和第三方面中，所述药物的剂型为针剂。
[0012]
第四方面，本发明要求保护前文第一方面中所述多肽制剂在制备用于治疗类风湿关节炎的药物中的应用。
[0013]
第五方面，本发明要求保护如下p1-p3中任一所述物质在如下(a1)-(a2)任一中的应用：
[0014]
p1、seq id no.1所示多肽；
[0015]
p2、seq id no.1所示多肽和生理盐水；
[0016]
p3、前文第一方面中所述多肽制剂。
[0017]
(a1)制备用于改善类风湿关节炎患者关节肿胀程度和/或变形程度的药物；
[0018]
(a2)制备用于抑制类风湿关节炎患者关节处炎性细胞侵润、滑膜增生和/或软骨破坏的药物。
[0019]
进一步地，所述药物的剂型为针剂。
[0020]
在本发明的具体实施方式中，以类风湿性关节炎小鼠模型进行实验。所述多肽制剂的给药途径为静脉注射。所述多肽制剂的给药频次为隔天给药，单次给药剂量为7.5mg/kg体重(以多肽质量计)，治疗周期为3周。
[0021]
实验证明，利用本发明所提供的注射用多肽制剂能够改善类风湿性关节炎小鼠模型的关节肿胀程度、变形程度，同时抑制关节处炎性细胞侵润、滑膜增生和软骨破坏。本发明所提供的注射用多肽制剂在治疗类风湿性关节炎方面具有重要应用前景。
附图说明
[0022]
图1为对照组和给药组足肿胀体积变化。d20l表示第20天时左脚肿胀程度；d20r表示第20天时右脚肿胀程度；d41l表示第41天时左脚肿胀程度；d41r表示第41天时右脚肿胀程度。
[0023]
图2为对照组和给药组后对足形态。
[0024]
图3为对照组和给药组关节的x-ray图片。
具体实施方式
[0025]
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
[0026]
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0027]
实施例1、用于治疗类风湿关节炎注射用多肽制剂的制备
[0028]
本实施例所涉及的用于治疗类风湿关节炎注射用多肽制剂针剂，其活性成分为seq id no.1所示多肽。
[0029]
所述多肽制剂具体为将seq id no.1所示多肽溶于生理盐水中后形成。其中，seq id no.1所示多肽的浓度为1毫克/毫升。
[0030]
实施例2、实施例1制备的多肽制剂在对类风湿关节炎小鼠进行治疗中的应用一、实验方法
[0031]
40只雄性wistar大鼠随机分为5组，每组8只：正常组、模型组、融合多肽(tat-mkk3b，各结果图中简称为“pep”)高剂量组(7.5mg/kg体重)、融合多肽低剂量组(2.5mg/kg体重)和雷公藤多苷片tpt(50mg/kg体重)组。上述各药物用量均为单次给药剂量。
[0032]
按chondrex公司的protocol制作类风湿关节炎小鼠模型(采用的是chondrex公司免疫级别的ii型胶原)。正常组注射生理盐水。分别在第0天(致炎前)、致炎后第20天和第41天通过排水法测量不同处理后对足的肿胀程度，并称量体重。在致炎后20天到研究结束(约3周)，隔天1次进行不同给药治疗，融合多肽组尾静脉皮内注射给多肽药、正常组和模型组注射等体积生理盐水，阳性药物对照组用灌胃法给等体积tpt。
[0033]
在第41天，先用canon照相机拍不同处理后对足的肿胀程度，并拍不同处理的后右足x-光片。
[0034]
二、结果与分析
[0035]
从第一次免疫后的次日至第4天，致炎处理的大鼠后左脚开始出现红肿的，这种急性反应持续了约9天左右，红肿开始消退。在第14天进行二次免疫后，70％的致炎处理大鼠后左脚肿胀厉害，后右脚出现不同程度的肿胀。至第18天，所有致炎处理大鼠的后对脚都有不同程度的炎症症状：肿胀和关节变形。通过第20天的后对足肿胀体积变化可以看出：模型组和药物处理组的大鼠后对足肿胀程度与正常组达到极显著，而模型组和各药物处理组之间没有差异(图1)。
[0036]
随着不同的给药治疗，在第41天，各药物治疗组大鼠后左脚的肿胀程度得到了一定的控制，与模型组大鼠后左脚的肿胀程度相比，差异得到了极显著；而后右脚的肿胀程度在各治疗组间有一定的差异，与模型组相比，tpt治疗组和tat-mkk3b高剂量组(7.5mg/kg)的抑制效应达到了极显著差异，但各药物处理组之间没有差异(图1)。
[0037]
从照片可以看出，模型组的后对足肿胀厉害，关节变形，无法完全展开。tat-mkk3b低剂量组(2.5mg/kg)关节可以展开，但是肿胀程度也较为严重，也有一定的变形。tpt治疗组和tat-mkk3b高剂量组(7.5mg/kg)后左脚肿胀仍然较为厉害，但是可以展开，且后右脚的症状明显减轻，给药治疗抑制了炎症从后左脚向后右脚蔓延的这一过程(图2)。
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x-光片(图3)进一步证实了模型组后对足的踝关节和指关节的内软骨和骨已经完全破坏成骨碎片，关节肿胀、组织疏松、滑膜组织的不规则增厚，大量炎性细胞侵润；而滑膜增生和软骨破坏，细胞排列不规则，可见有淋巴细胞侵润。tat-mkk3b低剂量组(2.5mg/kg)踝关节内的内软骨和骨已基本破坏成碎片，指关节的软骨面被破坏，软骨帽消失，大量炎性
细胞已侵蚀到软骨中，肌肉中炎症很严重。tpt治疗组和tat-mkk3b高剂量组(7.5mg/kg)后右脚的症状较轻，软骨面没有严重被破坏，但是滑膜仍有一定的增生，有炎性细胞浸润。正常组关节没有肿胀，后右脚指关节切片未见炎性细胞侵润、滑膜增生和软骨破坏等异常改变。
[0039]
上述结果表明，利用本发明所提供的注射用多肽制剂能够改善类风湿性关节炎小鼠模型的关节肿胀程度、变形程度，同时抑制关节处炎性细胞侵润、滑膜增生和软骨破坏。本发明所提供的注射用多肽制剂在治疗类风湿性关节炎方面具有重要应用前景。
[0040]
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本技术欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本技术中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。