：
1.本发明涉及去除蓝布正提取物中叶绿素和肝毒性成分的方法。
背景技术：
2.根据研究蓝布正提取物，用以治疗心脑血管病，包括慢性冠心病、急性心肌梗塞、心力衰竭(包括左右心室心力衰竭)，心律失常，心房纤颤，心脏的退行性功能减退，脑中风，老年痴呆等方面，都有广泛的应用前景。而现有方式获得的蓝布正提取物有脂溶性的肝毒性的化合物，因此如何去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性成为急需解决的问题。
技术实现要素：
3.针对现有技术存在的不足，本发明实施例的目的在于提供去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性方法，可以更安全的应用蓝布正乙醇水提取物在治疗人类疾病的方法。提供的去除肝毒性的提取物可配制为可用于所公开的方法的药物组合物和药物。
4.这个药物组合，在用通过本发明的方法去除了叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高疗效成为可能。
5.用本发明方法去除了蓝布正醇水提取物中的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高蓝布正提取物相应的疗效成为可能。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性方法，包括以下步骤：
8.将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片，对碎片用石油醚或三氯甲烷回流提取；
9.将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用乙醇回流提取，将上述提取液浓缩并喷雾干燥成固体粉末，得到乙醇水提取物；
10.将上述乙醇水提取物用等容积的乙酸乙酯进行萃取，去除残余的叶绿素和肝毒性化合物；
11.将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液浓缩，减压干燥得到去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合。
12.作为本发明进一步的方案，具体包括以下步骤：
13.s1：将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片；
14.s2：将碎片用石油醚或三氯甲烷中回流提取；
15.s3：将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用乙醇回流提取，将上述提取液浓缩并喷雾干燥成固体粉末，得到乙醇水提取物；
16.s4：将上述提取物溶混悬于水中，用乙酸乙酯进行萃取，去除残余的叶绿素和肝毒性化合物；
17.s5：将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液浓缩，减压干燥得到去除
了肝毒性蓝布正活性化合物组合。
18.作为本发明进一步的方案，包括从蓝布正乙醇水提取物中去除了叶绿素，以及脂溶性的具有肝毒性的化合物。
19.作为本发明进一步的方案，去除了肝毒性化合物的蓝布正活性提取物，用于作为口服制剂或注射制剂。
20.作为本发明进一步的方案，步骤s2、s3中在70摄氏度下回流提取，步骤s4中在70摄氏度下进行萃取，步骤s2中将碎片用6倍的石油醚或三氯甲烷中回流提取3小时。
21.作为本发明进一步的方案，步骤s3中将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用10倍浓度为80％的乙醇中回流提取10h。
22.作为本发明进一步的方案，步骤s4中将上述提取物溶混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进行萃取。
23.本发明具有以下有益效果：
24.1、用本发明方法去除了蓝布正中的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高疗效成为可能。
25.2、本发明去除了蓝布正中潜在肝毒性部分，并且显著增加活性部位中有效成分含量的药物组合可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、舌下含服、胃肠外、静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠或局部。在一些实施方案中，组合物通过静脉内给药。在其它实施方案中，组合物通过口服给药。
具体实施方式：
26.下面将结合有关知识对本发明作出进一步的说明，进行清楚、完整地描述，显然，所描述的应用仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
27.为了提供对本发明的实质性理解，以不同详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方案、变化和特征。
28.本发明中，试剂或药物对个体的“给药”包括将化合物引入或递送至个体以行使中药蓝布正的去除潜在肝毒性部分的有机提取物/活性部位预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、胃肠外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)、直肠或局部给药。还应当理解，治疗/或预防疾病状态的各种模式意图表示“实质性的”，其不仅包括完全的治疗或预防，还包括未达到完全的治疗或预防，但实现了一些生物学或医学相关的改善。
29.本发明所用的术语组合物的“有效量”或“药学有效量”或“治疗有效量”是足以实现所需治疗和/或预防效果的量，例如，实现了与待治疗疾病相关的症状的预防或减少的量。有效量的一个实例包括产生可接受的毒性和治疗(药学)用途的生物利用度水平的量或剂量，所述治疗(药学)用途包括但不限于治疗或预防包括缺血性心脏病在内的心脏病和诱导由缺血性心脏病引起的心肌梗死或缺血心肌中的血管再生和心肌再生。有效量的另一实例包括能上调血管生成因子和其它和心肌再生相关的生长因子(包括vegf、vegfr、bfgf、egf、bmp2、bmp4、wnt2、wnt4、tgfβ，和fgf等)表达的量。
30.给予个体的本发明组合物的量取决于疾病的类型和严重程度以及个体的特征，例
如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。其还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些因素以及其它因素能确定合适的剂量。本发明的药物组合也可以与一种或多种其它治疗药物联合给药。本领域技术人员可容易地确定对于本发明的具体药物和组合物合适的给药时机、顺序和剂量。
31.本发明所用的术语“疾病”或“医学疾病状态”可交换使用，并且包括但不限于表现为一种或多种需要治疗和/或预防的身体和/或心理症状的任何疾病状态或疾病，并且包括之前鉴定出的和新近鉴定出的疾病和其它病症。例如，医学疾病状态可以是缺血性心脏病。
32.本发明所用的术语“个体”或“患者”是哺乳动物。通常，所述个体是人，但也可以是动物，例如，家畜(例如狗，猫等)、农畜(例如牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)。
33.本发明所用的术语治疗或缓解是指治疗性处理措施，其目的是治疗或延缓(减轻)所针对的病理疾病状态或病症。如果个体按照本发明的方法接受了本发明的药物或方法的治疗后，该个体表现出具体疾病或疾病状态的一种或多种指征和症状的可观察到的和/或可测定的减少或缺失，则认为该个体被有效“治疗”了病症。
34.本发明所用的术语“药学可接受的载体”或“药学可接受的赋形剂”意图包括与药学给药相容的任何和所有溶剂、分散介质、包被、抗细菌和抗真菌化合物、等渗和延迟吸收化合物等。这类载体或稀释剂的实例包括但不限于水、盐溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用脂质体和非水性介质，例如不挥发性油。用于药学活性物质的这些介质和化合物是本领域公知的。在组合物中考虑使用任何常规的介质或化合物，除了它们与试剂不相容。也可以将补充性活性化合物合并入所述药物组合中。
35.本发明公开了一种去除新鲜植物蓝布正(geum japonicum thunb.var.chinense p.bolle)乙醇水提取物肝毒性部分的技术。因此可以更安全的应用蓝布正乙醇水提取物在治疗人类疾病的方法。本发明提供的去除肝毒性的提取物可配制为可用于所公开的方法的药物组合物和药物。
36.这个药物组合，在用本技术方法去除了其的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高疗效成为可能。
37.本发明提供了去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性方法，包括从蓝布正80％乙醇水提取物中，去除了潜在肝毒性化合物。
38.具体实施方法如下：
39.s1，将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片；
40.s2，在70摄氏度下，将碎片用6倍的石油醚或三氯甲烷中回流提取3小时；
41.s3，在70摄氏度下，将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用10倍浓度为80％的乙醇中回流提取10h，将上述提取液浓缩并喷雾干燥成固体粉末，得到乙醇水提取物；
42.s4，在70摄氏度下，将上述提取物溶混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进一步萃取，去除残余的叶绿素和肝毒性化合物；
43.s5，将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液浓缩，减压干燥得到所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合。
44.在本发明一优选的实施例中，去除了肝毒性是从蓝布正乙醇水提取物中去除了包
括叶绿素，以及脂溶性的具有肝毒性的化合物。
45.在本发明一优选的实施例中，都是去除了肝毒性化合物的蓝布正活性提取物，可用来作为口服制剂或注射制剂。
46.本发明涉及去除蓝布正提取物中叶绿素和肝毒性成分的方法和技术。用本技术和方法去除了蓝布正醇水提取物中的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高蓝布正提取物相应的疗效成为可能。因此对开发蓝布正提取物，用以治疗心脑血管病，包括慢性冠心病、急性心肌梗塞、心力衰竭(包括左右心室心力衰竭)，心律失常，心房纤颤，心脏的退行性功能减退，脑中风，老年痴呆等方面，都有广泛的应用前景。
47.据文献报道，蓝布正乙醇水提取物有治疗缺血性心脑血管病的功效，然而由于其的肝毒性作用，严重阻碍了其作为治疗上述疾病药物的开发和利用。
48.通过本发明的技术或方法，把用于治疗心脑血管病的蓝布正醇水提取物去除潜在肝毒性部分，并且显著增加药物组合中的有效成分的含量。
49.以下提供具体的实施例
50.实施例1，提供了去除蓝布正提取物所含有的肝毒性化合物和叶绿素的方法，包括用级联方式的萃取，包括：
51.a)将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片。
52.b)将蓝布正碎片在70摄氏度下，用6倍的石油醚中回流提取3小时；
53.c)在70摄氏度下，将用6倍石油醚提取过的蓝布正碎片用10倍浓度为80％的乙醇中回流提取10h。
54.d)在60摄氏度下，将上述80％的乙醇提取液减压浓缩，到含固物料达到15-20％时，用电喷雾干燥成固体粉末中间体。
55.e)在70摄氏度下，将上述粉末中间体混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进一步萃取，以达到去除残余的叶绿素和肝毒性化合物的目的。
56.f)将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液减压干燥浓缩，加入适当比例的辅料(如β-环糊精)进一步制粒，得到所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合，并极大地改善了化合物组合的吸湿性。
57.给予有需要的个体有效量的以上药物组合，可用于开发治疗相关的心脑血管疾病，包括给予个体有效量的去除潜在肝毒性部分，并且显著增加活性部位中有效成分含量的药物组合。
58.在一些实施方案中，个体可以是需要再生血管治疗的任何哺乳动物，例如人、狗、猫、牛、羊、猪、马、猴、大鼠、小鼠、兔和豚鼠。在一些实施方案中，哺乳动物个体是人。
59.在本实施例中，去除潜在肝毒性部分，并且显著增加活性部位中有效成分含量的药物组合可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、舌下含服、胃肠外、静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠或局部。在一些实施方案中，组合物通过静脉内给药。在其它实施方案中，组合物通过口服给药。
60.所给予的药物组合的量能产生所需的效果。在一些实施方案中，有效量包括能在哺乳动物个体中预防或治疗ihd、促进梗死或受损心脏组织中有功能的血管再生和心肌再生，或上调血管生成因子或者心肌再生相关因子表达的量。在一些实施方案中，所给予的组
合物的量为0.002-5g/kg/天。在一些实施方案中，所述有效量的药物组合是包含所述组合物和药学可接受的载体的药物制剂的形式。
61.实施例2，应用新鲜植物蓝布正(geum japonicum thunb.var.chinense p.bolle)的去除了有肝毒性部分的萃取分离的活性化合物组合，用于预防或治疗相关心脑血管病的药物组合和方法。本发明提供的去除了肝毒性化合物的药物组合可以配制为可用于公开方法的药物组合物和药物。还提供了所述药物组合在制备药物制剂和药物中的用途。
62.去除肝毒性蓝布正植物药物组合的制备；
63.本发明的简要步骤如下:
64.i.采集贵州丹寨海拔1000-1200米的蓝布正全草，洗净、阴干。将上述自然阴干的植物原材料剪成碎块,然后首先用石油醚对植物碎块进行脱脂、脱叶绿素和去除肝毒性化合物。回收有机溶剂，将油性的提出物弃之。或者用二氧化碳超临界萃取的方法去除脂溶性叶绿素和肝毒性化合物。
65.ii.将上述提取过的植物碎块用10倍容量的80％的醇水在摄氏70度和真空条件下回流提取10个小时。
66.iii.在60摄氏度下，将上述80％的乙醇提取液减压浓缩，到含固物料达到15-20％时，用电喷雾干燥成固体粉末中间体。
67.iv.在70摄氏度下，将上述粉末中间体混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进一步萃取，以达到去除残余的叶绿素和肝毒性化合物的目的。回收乙酸乙酯溶剂，将油性的萃出物弃之。
68.v.将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液减压干燥浓缩，加入适当比例的辅料(如β-环糊精)进一步制粒，得到所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合，并极大地改善了化合物组合的吸湿性。
69.vi.所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合，可以接受进一步色谱纯化过程，制备出总多酚，或者总三萜，使活性部位的主要成分的含量大于总成分的50％或以上无肝毒性的活性成分。
70.因此，本领域技术人员能根据所需纯化的去除肝毒性的活性化合物组合的性质和需要，选择最合适的一种溶剂或多种溶剂。因此，能够使粗提取物和富集部位含有作为主要成分的，并且能去除肝毒性部位的任何方法，也在本发明的范围内。
71.在一些实施方案中，所述去除肝毒性的活性化合物组合还可以包含第二试剂，如可以包含b族维生素、抗心律失常药或其它心血管病药物。
72.另一方面，本发明的试剂是含有一种或多种赋形剂、载体或填充剂的药物组合物的一部分。在一个实施方案中，去除肝毒性的活性化合物组合以单位剂量形式进行包装。单位剂量形式当给予有需要的个体时能有效改善各种疾病或医学疾病状态。
73.可以利用制药工业技术人员已知的常规方法将所述去除肝毒性的活性化合物组合配制为合适的剂型，例如片剂、胶囊、注射剂、溶液、悬液、粉末，糖浆等，并且以合适的方式给予患有ihd或肢体缺血的哺乳动物个体。制剂技术不是本发明的一部分，并因此对本发明的范围不产生限制。
74.所给予的去除肝毒性的活性化合物组合的量应当能产生所期望的效果。在一些实施方案中，所述有效量包括能在哺乳动物个体中预防或治疗ihd或者肢体缺血、促进缺血心
肌、梗死或受损心脏组织中的血管再生和/或上调血管生成因子的表达的剂量。在一些实施方案中，所述有效量的acgj是包含活性部位和药学上合适的载体或赋形剂的药物制剂的形式。有效量的一个实例包括产生可接受的毒性和心脏病治疗中用于治疗(药学)目的的生物利用度水平的剂量。
75.通常，足以实现治疗或预防效果的本发明去除肝毒性的活性化合物组合的有效量为约0.01mg/千克体重/天至约500mg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约0.1mg/千克体重/天至约300mg/千克体重/天。对于试剂的给药，剂量范围可以为每天、每周、每两周或每四周约0.1至500mg/kg宿主体重，更通常为0.1至300mg/kg宿主体重。示例性的治疗方案为每天一次、或每两天一次、每周一次或每3-6周一次给药。在一些实施方案中，所给予的acgj的量为0.1mg/kg/天至300mg/kg/天。在一些实施方案中，所给予的acgj的量为1mg/kg/天至500mg/kg/天。通常多次给予所述试剂。单次剂量之间的间隔可以是每6个小时、每12个小时、每天、每周、每月或每6个月。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要给药的频率减少。剂量和频率根据试剂在个体中的半衰期而不同。给药的剂量和频率可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，在长期以相对低频率的间隔给予相对低的剂量。某些个体在余生中持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展降低或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善。在此之后，可以给予患者预防方案。可以根据个体的疾病状态、年龄、体重、一般健康状态、性别和饮食、以及给药间隔、给药途径、排泄率和药物组合来调整具体的剂量。含有有效量的任何上述剂型都包括在常规实验的范围内，并因此包括在本发明的范围内。
76.本发明的去除肝毒性的活性化合物组合的配制符合其预期的给药途径。本发明的去除肝毒性的活性化合物组合可以通过以下途径给药：口服、外服、局部外敷、吸入剂、胃肠外、静脉内、皮下、动脉内、真皮内、经皮、灌肠、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径。所述试剂可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用的载体。可以将口服组合物封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗给药，结合剂可以与赋形剂合并，并用于片剂、锭剂或胶囊的形式。还可以使用用于漱口水的流体载体来制备口服组合物，其中流体载体中化合物是经口施用、漱口和吐出或吞下。药学相容的结合化合物和/或辅助材料可以作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任何下述成分或具有相似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或sterotes；助流剂，例如胶态二氧化硅；甜味剂化合物，例如蔗糖或糖精；或调味剂化合物，例如薄荷油、水杨酸甲酯或桔子香精。
77.以上结合具体实施例描述了本发明的技术原理，仅是本发明的优选实施方式。本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。本领域的技术人员不需要付出创造性的劳动即可联想到本发明的其它具体实施方式，这些方式都将落入本发明的保护范围之内。
1.本发明涉及去除蓝布正提取物中叶绿素和肝毒性成分的方法。
背景技术：
2.根据研究蓝布正提取物，用以治疗心脑血管病，包括慢性冠心病、急性心肌梗塞、心力衰竭(包括左右心室心力衰竭)，心律失常，心房纤颤，心脏的退行性功能减退，脑中风，老年痴呆等方面，都有广泛的应用前景。而现有方式获得的蓝布正提取物有脂溶性的肝毒性的化合物，因此如何去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性成为急需解决的问题。
技术实现要素：
3.针对现有技术存在的不足，本发明实施例的目的在于提供去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性方法，可以更安全的应用蓝布正乙醇水提取物在治疗人类疾病的方法。提供的去除肝毒性的提取物可配制为可用于所公开的方法的药物组合物和药物。
4.这个药物组合，在用通过本发明的方法去除了叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高疗效成为可能。
5.用本发明方法去除了蓝布正醇水提取物中的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高蓝布正提取物相应的疗效成为可能。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性方法，包括以下步骤：
8.将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片，对碎片用石油醚或三氯甲烷回流提取；
9.将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用乙醇回流提取，将上述提取液浓缩并喷雾干燥成固体粉末，得到乙醇水提取物；
10.将上述乙醇水提取物用等容积的乙酸乙酯进行萃取，去除残余的叶绿素和肝毒性化合物；
11.将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液浓缩，减压干燥得到去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合。
12.作为本发明进一步的方案，具体包括以下步骤：
13.s1：将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片；
14.s2：将碎片用石油醚或三氯甲烷中回流提取；
15.s3：将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用乙醇回流提取，将上述提取液浓缩并喷雾干燥成固体粉末，得到乙醇水提取物；
16.s4：将上述提取物溶混悬于水中，用乙酸乙酯进行萃取，去除残余的叶绿素和肝毒性化合物；
17.s5：将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液浓缩，减压干燥得到去除
了肝毒性蓝布正活性化合物组合。
18.作为本发明进一步的方案，包括从蓝布正乙醇水提取物中去除了叶绿素，以及脂溶性的具有肝毒性的化合物。
19.作为本发明进一步的方案，去除了肝毒性化合物的蓝布正活性提取物，用于作为口服制剂或注射制剂。
20.作为本发明进一步的方案，步骤s2、s3中在70摄氏度下回流提取，步骤s4中在70摄氏度下进行萃取，步骤s2中将碎片用6倍的石油醚或三氯甲烷中回流提取3小时。
21.作为本发明进一步的方案，步骤s3中将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用10倍浓度为80％的乙醇中回流提取10h。
22.作为本发明进一步的方案，步骤s4中将上述提取物溶混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进行萃取。
23.本发明具有以下有益效果：
24.1、用本发明方法去除了蓝布正中的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高疗效成为可能。
25.2、本发明去除了蓝布正中潜在肝毒性部分，并且显著增加活性部位中有效成分含量的药物组合可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、舌下含服、胃肠外、静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠或局部。在一些实施方案中，组合物通过静脉内给药。在其它实施方案中，组合物通过口服给药。
具体实施方式：
26.下面将结合有关知识对本发明作出进一步的说明，进行清楚、完整地描述，显然，所描述的应用仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
27.为了提供对本发明的实质性理解，以不同详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方案、变化和特征。
28.本发明中，试剂或药物对个体的“给药”包括将化合物引入或递送至个体以行使中药蓝布正的去除潜在肝毒性部分的有机提取物/活性部位预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、胃肠外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)、直肠或局部给药。还应当理解，治疗/或预防疾病状态的各种模式意图表示“实质性的”，其不仅包括完全的治疗或预防，还包括未达到完全的治疗或预防，但实现了一些生物学或医学相关的改善。
29.本发明所用的术语组合物的“有效量”或“药学有效量”或“治疗有效量”是足以实现所需治疗和/或预防效果的量，例如，实现了与待治疗疾病相关的症状的预防或减少的量。有效量的一个实例包括产生可接受的毒性和治疗(药学)用途的生物利用度水平的量或剂量，所述治疗(药学)用途包括但不限于治疗或预防包括缺血性心脏病在内的心脏病和诱导由缺血性心脏病引起的心肌梗死或缺血心肌中的血管再生和心肌再生。有效量的另一实例包括能上调血管生成因子和其它和心肌再生相关的生长因子(包括vegf、vegfr、bfgf、egf、bmp2、bmp4、wnt2、wnt4、tgfβ，和fgf等)表达的量。
30.给予个体的本发明组合物的量取决于疾病的类型和严重程度以及个体的特征，例
如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。其还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些因素以及其它因素能确定合适的剂量。本发明的药物组合也可以与一种或多种其它治疗药物联合给药。本领域技术人员可容易地确定对于本发明的具体药物和组合物合适的给药时机、顺序和剂量。
31.本发明所用的术语“疾病”或“医学疾病状态”可交换使用，并且包括但不限于表现为一种或多种需要治疗和/或预防的身体和/或心理症状的任何疾病状态或疾病，并且包括之前鉴定出的和新近鉴定出的疾病和其它病症。例如，医学疾病状态可以是缺血性心脏病。
32.本发明所用的术语“个体”或“患者”是哺乳动物。通常，所述个体是人，但也可以是动物，例如，家畜(例如狗，猫等)、农畜(例如牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)。
33.本发明所用的术语治疗或缓解是指治疗性处理措施，其目的是治疗或延缓(减轻)所针对的病理疾病状态或病症。如果个体按照本发明的方法接受了本发明的药物或方法的治疗后，该个体表现出具体疾病或疾病状态的一种或多种指征和症状的可观察到的和/或可测定的减少或缺失，则认为该个体被有效“治疗”了病症。
34.本发明所用的术语“药学可接受的载体”或“药学可接受的赋形剂”意图包括与药学给药相容的任何和所有溶剂、分散介质、包被、抗细菌和抗真菌化合物、等渗和延迟吸收化合物等。这类载体或稀释剂的实例包括但不限于水、盐溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。还可以使用脂质体和非水性介质，例如不挥发性油。用于药学活性物质的这些介质和化合物是本领域公知的。在组合物中考虑使用任何常规的介质或化合物，除了它们与试剂不相容。也可以将补充性活性化合物合并入所述药物组合中。
35.本发明公开了一种去除新鲜植物蓝布正(geum japonicum thunb.var.chinense p.bolle)乙醇水提取物肝毒性部分的技术。因此可以更安全的应用蓝布正乙醇水提取物在治疗人类疾病的方法。本发明提供的去除肝毒性的提取物可配制为可用于所公开的方法的药物组合物和药物。
36.这个药物组合，在用本技术方法去除了其的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高疗效成为可能。
37.本发明提供了去除蓝布正乙醇水提取物中的肝毒性方法，包括从蓝布正80％乙醇水提取物中，去除了潜在肝毒性化合物。
38.具体实施方法如下：
39.s1，将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片；
40.s2，在70摄氏度下，将碎片用6倍的石油醚或三氯甲烷中回流提取3小时；
41.s3，在70摄氏度下，将用石油醚或三氯甲烷提取过的植物原料用10倍浓度为80％的乙醇中回流提取10h，将上述提取液浓缩并喷雾干燥成固体粉末，得到乙醇水提取物；
42.s4，在70摄氏度下，将上述提取物溶混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进一步萃取，去除残余的叶绿素和肝毒性化合物；
43.s5，将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液浓缩，减压干燥得到所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合。
44.在本发明一优选的实施例中，去除了肝毒性是从蓝布正乙醇水提取物中去除了包
括叶绿素，以及脂溶性的具有肝毒性的化合物。
45.在本发明一优选的实施例中，都是去除了肝毒性化合物的蓝布正活性提取物，可用来作为口服制剂或注射制剂。
46.本发明涉及去除蓝布正提取物中叶绿素和肝毒性成分的方法和技术。用本技术和方法去除了蓝布正醇水提取物中的叶绿素、肝毒性和明显无效部分后，就相对显著增加活性化合物的有效含量。由于去除了毒性成分，使应用更高的有效剂量来提高蓝布正提取物相应的疗效成为可能。因此对开发蓝布正提取物，用以治疗心脑血管病，包括慢性冠心病、急性心肌梗塞、心力衰竭(包括左右心室心力衰竭)，心律失常，心房纤颤，心脏的退行性功能减退，脑中风，老年痴呆等方面，都有广泛的应用前景。
47.据文献报道，蓝布正乙醇水提取物有治疗缺血性心脑血管病的功效，然而由于其的肝毒性作用，严重阻碍了其作为治疗上述疾病药物的开发和利用。
48.通过本发明的技术或方法，把用于治疗心脑血管病的蓝布正醇水提取物去除潜在肝毒性部分，并且显著增加药物组合中的有效成分的含量。
49.以下提供具体的实施例
50.实施例1，提供了去除蓝布正提取物所含有的肝毒性化合物和叶绿素的方法，包括用级联方式的萃取，包括：
51.a)将蓝布正全草洗净、阴干、切成碎片。
52.b)将蓝布正碎片在70摄氏度下，用6倍的石油醚中回流提取3小时；
53.c)在70摄氏度下，将用6倍石油醚提取过的蓝布正碎片用10倍浓度为80％的乙醇中回流提取10h。
54.d)在60摄氏度下，将上述80％的乙醇提取液减压浓缩，到含固物料达到15-20％时，用电喷雾干燥成固体粉末中间体。
55.e)在70摄氏度下，将上述粉末中间体混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进一步萃取，以达到去除残余的叶绿素和肝毒性化合物的目的。
56.f)将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液减压干燥浓缩，加入适当比例的辅料(如β-环糊精)进一步制粒，得到所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合，并极大地改善了化合物组合的吸湿性。
57.给予有需要的个体有效量的以上药物组合，可用于开发治疗相关的心脑血管疾病，包括给予个体有效量的去除潜在肝毒性部分，并且显著增加活性部位中有效成分含量的药物组合。
58.在一些实施方案中，个体可以是需要再生血管治疗的任何哺乳动物，例如人、狗、猫、牛、羊、猪、马、猴、大鼠、小鼠、兔和豚鼠。在一些实施方案中，哺乳动物个体是人。
59.在本实施例中，去除潜在肝毒性部分，并且显著增加活性部位中有效成分含量的药物组合可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、舌下含服、胃肠外、静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠或局部。在一些实施方案中，组合物通过静脉内给药。在其它实施方案中，组合物通过口服给药。
60.所给予的药物组合的量能产生所需的效果。在一些实施方案中，有效量包括能在哺乳动物个体中预防或治疗ihd、促进梗死或受损心脏组织中有功能的血管再生和心肌再生，或上调血管生成因子或者心肌再生相关因子表达的量。在一些实施方案中，所给予的组
合物的量为0.002-5g/kg/天。在一些实施方案中，所述有效量的药物组合是包含所述组合物和药学可接受的载体的药物制剂的形式。
61.实施例2，应用新鲜植物蓝布正(geum japonicum thunb.var.chinense p.bolle)的去除了有肝毒性部分的萃取分离的活性化合物组合，用于预防或治疗相关心脑血管病的药物组合和方法。本发明提供的去除了肝毒性化合物的药物组合可以配制为可用于公开方法的药物组合物和药物。还提供了所述药物组合在制备药物制剂和药物中的用途。
62.去除肝毒性蓝布正植物药物组合的制备；
63.本发明的简要步骤如下:
64.i.采集贵州丹寨海拔1000-1200米的蓝布正全草，洗净、阴干。将上述自然阴干的植物原材料剪成碎块,然后首先用石油醚对植物碎块进行脱脂、脱叶绿素和去除肝毒性化合物。回收有机溶剂，将油性的提出物弃之。或者用二氧化碳超临界萃取的方法去除脂溶性叶绿素和肝毒性化合物。
65.ii.将上述提取过的植物碎块用10倍容量的80％的醇水在摄氏70度和真空条件下回流提取10个小时。
66.iii.在60摄氏度下，将上述80％的乙醇提取液减压浓缩，到含固物料达到15-20％时，用电喷雾干燥成固体粉末中间体。
67.iv.在70摄氏度下，将上述粉末中间体混悬于10倍的水中，用等容积的乙酸乙酯进一步萃取，以达到去除残余的叶绿素和肝毒性化合物的目的。回收乙酸乙酯溶剂，将油性的萃出物弃之。
68.v.将用乙酸乙酯提取过的，去除肝毒性化合物的混悬液减压干燥浓缩，加入适当比例的辅料(如β-环糊精)进一步制粒，得到所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合，并极大地改善了化合物组合的吸湿性。
69.vi.所述去除了肝毒性蓝布正活性化合物组合，可以接受进一步色谱纯化过程，制备出总多酚，或者总三萜，使活性部位的主要成分的含量大于总成分的50％或以上无肝毒性的活性成分。
70.因此，本领域技术人员能根据所需纯化的去除肝毒性的活性化合物组合的性质和需要，选择最合适的一种溶剂或多种溶剂。因此，能够使粗提取物和富集部位含有作为主要成分的，并且能去除肝毒性部位的任何方法，也在本发明的范围内。
71.在一些实施方案中，所述去除肝毒性的活性化合物组合还可以包含第二试剂，如可以包含b族维生素、抗心律失常药或其它心血管病药物。
72.另一方面，本发明的试剂是含有一种或多种赋形剂、载体或填充剂的药物组合物的一部分。在一个实施方案中，去除肝毒性的活性化合物组合以单位剂量形式进行包装。单位剂量形式当给予有需要的个体时能有效改善各种疾病或医学疾病状态。
73.可以利用制药工业技术人员已知的常规方法将所述去除肝毒性的活性化合物组合配制为合适的剂型，例如片剂、胶囊、注射剂、溶液、悬液、粉末，糖浆等，并且以合适的方式给予患有ihd或肢体缺血的哺乳动物个体。制剂技术不是本发明的一部分，并因此对本发明的范围不产生限制。
74.所给予的去除肝毒性的活性化合物组合的量应当能产生所期望的效果。在一些实施方案中，所述有效量包括能在哺乳动物个体中预防或治疗ihd或者肢体缺血、促进缺血心
肌、梗死或受损心脏组织中的血管再生和/或上调血管生成因子的表达的剂量。在一些实施方案中，所述有效量的acgj是包含活性部位和药学上合适的载体或赋形剂的药物制剂的形式。有效量的一个实例包括产生可接受的毒性和心脏病治疗中用于治疗(药学)目的的生物利用度水平的剂量。
75.通常，足以实现治疗或预防效果的本发明去除肝毒性的活性化合物组合的有效量为约0.01mg/千克体重/天至约500mg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约0.1mg/千克体重/天至约300mg/千克体重/天。对于试剂的给药，剂量范围可以为每天、每周、每两周或每四周约0.1至500mg/kg宿主体重，更通常为0.1至300mg/kg宿主体重。示例性的治疗方案为每天一次、或每两天一次、每周一次或每3-6周一次给药。在一些实施方案中，所给予的acgj的量为0.1mg/kg/天至300mg/kg/天。在一些实施方案中，所给予的acgj的量为1mg/kg/天至500mg/kg/天。通常多次给予所述试剂。单次剂量之间的间隔可以是每6个小时、每12个小时、每天、每周、每月或每6个月。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要给药的频率减少。剂量和频率根据试剂在个体中的半衰期而不同。给药的剂量和频率可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，在长期以相对低频率的间隔给予相对低的剂量。某些个体在余生中持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展降低或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善。在此之后，可以给予患者预防方案。可以根据个体的疾病状态、年龄、体重、一般健康状态、性别和饮食、以及给药间隔、给药途径、排泄率和药物组合来调整具体的剂量。含有有效量的任何上述剂型都包括在常规实验的范围内，并因此包括在本发明的范围内。
76.本发明的去除肝毒性的活性化合物组合的配制符合其预期的给药途径。本发明的去除肝毒性的活性化合物组合可以通过以下途径给药：口服、外服、局部外敷、吸入剂、胃肠外、静脉内、皮下、动脉内、真皮内、经皮、灌肠、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径。所述试剂可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用的载体。可以将口服组合物封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗给药，结合剂可以与赋形剂合并，并用于片剂、锭剂或胶囊的形式。还可以使用用于漱口水的流体载体来制备口服组合物，其中流体载体中化合物是经口施用、漱口和吐出或吞下。药学相容的结合化合物和/或辅助材料可以作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任何下述成分或具有相似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或sterotes；助流剂，例如胶态二氧化硅；甜味剂化合物，例如蔗糖或糖精；或调味剂化合物，例如薄荷油、水杨酸甲酯或桔子香精。
77.以上结合具体实施例描述了本发明的技术原理，仅是本发明的优选实施方式。本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。本领域的技术人员不需要付出创造性的劳动即可联想到本发明的其它具体实施方式，这些方式都将落入本发明的保护范围之内。
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