用于皮肤美白或改善皮肤皱纹的化妆料组合物及其制造方法与流程

用于皮肤美白或改善皮肤皱纹的化妆料组合物及其制造方法
1.技术领域
2.本发明涉及一种用于皮肤美白或改善皮肤皱纹的化妆料组合物及其制造方法。


背景技术：

3.皱纹形成的原因大致可分为自然老化产生的皱纹和紫外线暴露（光老化）产生的皱纹，两种原因引起的皱纹形成机制目前还没有完全阐明。
4.与自然老化和光老化引起的皮肤变化相关的共同现象是真皮内主要组成蛋白胶原蛋白和弹性蛋白的减少和变形，这直接参与皱纹的生成和皮肤弹性的下降。
5.另外，人的肤色是由黑色素生成的黑色素细胞决定的。在这个黑色素细胞上，由酪氨酸酶等多种酶作用生成的黑色素，会受到遗传因素、荷尔蒙分泌及压力等相关的生理因素以及紫外线照射等环境因素的影响。
6.虽然黑色素存在于皮肤中，具有保护身体免受紫外线照射的重要功能，但是由于黑色素的过度生产，不仅会形成黑痣或雀斑等，还会促进皮肤老化，对皮肤癌的诱发也有重要作用。
7.黑色素的主要功能是清除这些有害的激光，保护皮肤免受由此造成的损伤。因此，大量的黑色素意味着拥有有效的对应体系，可以保护皮肤免受物理或化学毒性物质的伤害。
8.因此，为了治疗或减轻由皮肤色素异常沉着症状（如黑痣雀斑或色素沉着等）和紫外线照射等引起的过度黑色素沉着，从以前开始，人们就在化妆品或医药品中搭配使用具有抑制活性的物质，如抗坏血酸（ascorbic acid）,曲酸（kojic acid）、熊果苷、氢醌( hydroquinone)、谷胱甘肽、或其衍生物酪氨酸酶，这些物质因不充分的美白效果、对皮肤的安全性问题、与化妆品搭配时的剂型及稳定性问题等而被限制使用。
9.因此，开发对人体无害的同时美白效果最大化和改善皮肤皱纹效果的新的化妆料组合物是非常必要的。


技术实现要素：

10.本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种在提高皮肤美白功能的同时，还具有改善皮肤皱纹功效的化妆料组合物及其制造方法。
11.本发明的用于美白皮肤或改善皮肤皱纹的化妆料组合物的特征是，含有序列号为1的具有碱基序列的鲑鱼由来dna片段作为有效成分。更值得期待的是，以包含更多的蛋白质为特征，上述鲑鱼的dna片段和上述蛋白质组成的1:2~10重量比。
12.或者，以含有更多的蛋白质、日本薯蓣提取物和大蒜提取物为特征，更可取的是，上述鲑鱼的dna片段、蛋白质、日本薯蓣提取物以及大蒜提取物由1:2~10:0.5~1:0.5~1重量比组成。
13.另一种本发明：皮肤美白用或改善皮肤皱纹用化妆料组合物的制造方法，将鲑鱼精子或精巢放入溶液中溶解，离心后将所得沉淀物1放入上述溶液中溶解，然后将所得沉淀物1离心分离，然后将所得沉淀物2溶解于纯净水中，制造出溶液1的第一阶段，在上述溶液1中加入乙酸混合制造混合物1的第二阶段。在上述混合物1中加入氯化钠溶液混合制造混合物2的第3阶段，将上述混合物2离心分离后，除去上层液，将剩下的沉淀物3放入乙醇中溶解，制造出混合物2的第4阶段，将上述混合物2离心分离后。其特点包括去除上层液体，将剩下的沉淀物4放入纯净水中溶解，制造含有序列号为1的碱基序列dna片段的复合物的第5阶段，以及制造包含上述第5阶段dna片段的复合物的皮肤美白用或改善皮肤皱纹用化妆料组合物的第6阶段。上述第6阶段的组合物的特点是，将蛋白聚糖粉末放入纯净水中，再加入混合制造的蛋白聚糖水溶液，或者再加入蛋白聚糖水溶液、日本薯蓣提取物和大蒜提取物混合制造。
14.本发明所达到的有益效果是：在提高皮肤美白功能的同时，还提供了具有改善皮肤皱纹功效的化妆料组合物及其制造方法。
附图说明
15.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：图1是根据本发明实验例1所示的化妆料组合物的制造工艺图。
16.图2是根据本发明实验例2所示的化妆料组合物的制造工艺图。
17.图3是根据本发明实验例3所示的化妆料组合物的制造工艺图。
18.图4是本发明的化妆料组合物的有效成分鲑鱼由来dna片段的图。
具体实施方式
19.以下，参照所附图纸，详细说明本发明的理想实施示例和实验示例，省略对可能不必要地模糊本发明要点的通知功能和配置的详细说明。本发明的皮肤美白用或皮肤皱纹专用化妆料组合物的特征是含有序列号为1的碱基序列的鲑鱼由来dna片段，该序列号为1的碱基序列的鲑鱼由来dna片段和蛋白聚糖。更值得一提的是，含有用序列号1表达的具有碱基序列的鲑鱼由来dna片段、蛋白聚糖、日本薯蓣提取物及大蒜提取物为有效成分。
20.鲑鱼的dna片段是从鲑鱼的精子或精巢中分离出来的，由磷酸、4种盐基、脱氧核糖等生物高分子组成，是细胞的必需组成成分，以改善皱纹和美白效果为目的，用于化妆品等多种用途。
21.但是，从这些dna片段中分离出来的方法都是包含rna的复合物质，因此存在着目的性的盐基混合存在的问题，或者由于水率低，使用有机溶剂很难产业化利用，或者使用有机溶剂反而会对皮肤产生刺激的问题。
22.为此，本发明在解决上述问题的同时，为了提取出具有抗皱和美白功效的dna片段，进行了多项研究，结果表明，采用超离心提纯技术是最合适的。由此导出的dna片段具有用序列号1表达的碱基序列，其特征是片段大小为1120bp。
23.蛋白聚糖（proteoglycan）是与蛋白质复合的酸性黏液性多糖，其中含有的糖分具有氮，每一条叫做核心蛋白（coreprotein）的多肽链上至少有一条叫做糖胺聚糖
（glycosamiglycan，gag）的糖链结合的结构。这种蛋白聚糖是从清净地区鲑鱼的鼻软骨中提取精制而成，用作美白美容材料的高分子物质，通常用作化妆材料的蛋白聚糖是用乙酸（acetic acid）提取的，这种情况下，作为化妆材料的功能现在只能是有限的了。
24.因此，本发明建议使用上述蛋白聚糖，在不经过热处理和酶处理的情况下，使核心蛋白两端（n端基、c端基）处于非变性状态（即活化状态）。这种蛋白聚糖适用于重量平均分子量在90万da以上~120万da以下的情况。
25.日本薯蓣是属于薯蓣科的野山药的根茎，也被用作甲酸性肿瘤、心脏炎及解毒、健胃、火上、冻伤、腰痛、乳肿等药材和强壮剂及止泻药。这种日本薯蓣的主要成分，即黏蛋白（mucin）和蛋白聚糖（proteoglycan）成分维持了dna片段的结构稳定性，对从dna片段中表现出来的功效表现出协同效应。因此，在本发明中，为了使用具有上述功效的日本薯蓣作为化妆材料，最好使用90~100%（v/v）乙醇溶剂提取得到的日本薯蓣提取物。
26.大蒜是一种植物分类学上属于百合木百合和石蒜科植物(allium sativum for peiinense makino, aliumscorodoprassum l.)的多年生球根植物，主要由56～68%的水分、26～30%的碳水化合物组成。大蒜独特的味道和香气是由大蒜中的有机硫化合物之一的大蒜素（allicin）引起的，它是一种对水溶解度很低的化合物，具有抗癌、抗菌、具有解毒效果，防止以dna片段成分为有效成分的化妆品中出现的副作用。尽管如此，大蒜的刺激性很强，很难照搬使用。因此，在本发明中，为了使用具有上述功效的大蒜作为化妆材料，最好使用90~100%（v/v）乙醇溶剂提取得到的大蒜提取物。
27.以下，关于上述皮肤美白用或改善皮肤皱纹用化妆料组合物的制造方法，以图1至图3的内容为基础，具体说明如下。
28.第一阶段；制造溶解物1（s10）本阶段的特点是将鲑鱼精子或精巢放入溶液中溶解后，离心分离，再将所得沉淀物1放入上述溶液中溶解，再将沉淀物2离心分离后，将所得沉淀物2溶解在纯净水中，制造出1个溶解物。
29.说明的话，上述鲑鱼精子或精巢中含有多个dna片段结构，以前从这里分离得到的dna聚合物片段用作化妆品材料。但是，目前已知的dna聚合物片段是通过一般的提取方式获得的，关于其功效的依据或有效基因片段的信息是完全没有的。
30.因此，本发明的发明者们进行了多项研究，在上述dna片段中也指定了有效的片段，并对其特定碱基序列进行了功效验证，确认了总dna中特别是对细胞质内微量dna片段的功效，为了证明其高有效性，引入了利用特定超离心分离的纯提纯方法。
31.因此，本阶段首先以鲑鱼精子或精巢为对象，将其放入特定的溶液中溶解，然后进行离心分离，获得沉淀物，重复此操作2~3次，制造出最终的沉淀物1。
32.该溶液由0.05~1m蔗糖、5~20mm edta、20-35mm tris-hcl、ph7.5组成，在获得上述第1次沉淀物时，采用1000～1500rpm离心分离10～20分钟的方法。获得第二次沉淀物2时，从1000～1500rpm离心10～20分钟，上层液再从12000～15000rpm离心30～40分钟，得到剩余沉淀物2，如果偏离上述rpm条件及时间条件，沉淀物的获取就不能正常进行，很难提取出少数dna。
33.这样生成的上述沉淀物2，每21g沉淀物加入0.5～5ml的纯净水混合，完全溶解，制造出1个溶解物。
34.这时，如果每克沉淀物中的纯净水的含量不到0.5ml，就很难完全溶解，很难提取特定的dna，超过5ml的话，需要经过单独的干燥过程等，有可能发生dna变形。
35.第二阶段；制造混合物1（s20）本阶段的特点是在上述溶解物1中加入乙酸(acetic acid)混合，制造出混合物1。
36.说明的话，为了从上述溶解物1中生成dna片段，将10%～15%（v/v）的乙酸与上述溶解物1等量混合后，在4～5℃下反应4～5小时，制造出混合物1。
37.此时，如果将上述溶解物1与上述乙酸的反应条件反应在4℃以下或4小时以下，则无法正常进行反应，很难提取出本发明想要的dna片段，如果超过5℃或5小时进行反应，则有可能发生dna变形。
38.第三阶段；制造混合物2（s30）本阶段的特点是在上述混合物1中加入氯化钠(nacl)溶液混合，制造出混合物2。
39.说明的话，为了从上述混合物1中生成最终的dna片段，将10%～15%（v/v）的氯化钠加入上述混合物1中，混合后，在15～30℃下反应1～2小时，制造出混合物2。
40.此时，如果将上述混合物1与上述氯化钠的反应条件反应在15℃以下或1小时以下，则无法正常进行反应，很难提取出本发明想要的dna片段，超过30℃或2小时反应时，有可能发生dna变形。
41.第四阶段；制造溶解物2（s40）本阶段是为了去除上述制造的混合物2中的杂质，其特点是将上述混合物2离心分离后，除去上层液，将剩下的沉淀物3放入乙醇中溶解，制造出溶解物2。
42.说明的话，乙醇是一种常用的用于杀菌的溶剂，是提取纯dna片段的必经过程。
43.此时，使用的乙醇为100%（v/v），最适合去除杂质。
44.另外，上述乙醇每3 1g所含沉淀物用量为5～15ml，此时乙醇含量不足5ml时，杂质很难被完全去除，超过15ml时，很难达到超额含量的上升效果。
45.第五阶段；制造包含dna片段的复合物（s50）本阶段的特点是将上述溶解物2离心分离后，除去上层液，将剩下的沉淀物4放入纯净水中溶解，制造含有序列号为1的碱基序列的dna片段的复合物。
46.为了回收混合在上述乙醇中的dna片段，将上述溶解物2在10000~15000rpm中进行0.5~2小时，获得沉淀物1~2g，将其放入纯净水0.5~5ml中溶解，也可在图4中确认，并制造出序列号为1的具有碱基序列的鲑鱼由来dna片段复合物。
47.这些dna片段复合物的平均片段大小为100~1000bp，干燥后形成白色粉末状，是一种很好溶解于纯净水的物质。它具有很好的改善皱纹的功能，不仅有美白效果，还具有皮肤再生和抗氧化的效果，非常适合作为化妆材料使用。
48.第六阶段；制造用于美白皮肤或改善皮肤皱纹的化妆料组合物（s60）本阶段的特点是制造含有上述第五阶段dna片段的复合物的皮肤美白用或改善皮肤皱纹用的化妆料组合物。
49.如果说明，上述dna片段复合物也可以单独用作化妆料组合物的有效成分。此时，上述dna片段复合物由5～10重量%组成，剩余的由纯净水组成，也可制造本发明的皮肤美白用或改善皮肤皱纹用的化妆料组合物，如果上述dna片段复合物的含量不到5%重量，则本发明旨在改善皮肤美白效果或改善皮肤皱纹的效果稍显不足，不适合。如果超过10%，就很难
期待超含量的上升效果，反而会提高dna片段复合物的副作用mpp酶活性，反而会降低皮肤弹性。
50.另外，本阶段还包括额外的蛋白聚糖(proteoglycan)。此时，上述蛋白聚糖将经过洗涤、脱脂、脱臭处理的鲑鱼鼻软骨提取为碱性溶剂，得到同时具有核蛋白n端基和c端基活性的丙蛋白聚糖粉末，然后将其放入水中混合制造蛋白聚糖水溶液。值得期待的是，上述核心蛋白的两端基活性化的蛋白聚糖具有90万da以上~120万da以下的分子量的特征。
51.说明的话，蛋白聚糖(proteoglycan)是以通常的方法乙酸(acetic acid)为溶剂，在提取过程中，由于核心蛋白n端基发生了蛋白聚糖的变性，导致核心蛋白一侧失活，产生结构缺陷，与其他材料结合不好。在此阶段，为了使上述蛋白聚糖的组成成分核心蛋白的两端基活性化，将其提取为与现有蛋白聚糖不同的碱成分的溶剂，此时会生成分子量在90万da以上~120万da以下的蛋白聚糖。因此，上述蛋白聚糖的n端基可以结合多种物质。
52.这样生成的上述蛋白聚糖通常是粉末状的，为了能和其他材料很好地混合，最好是以水溶液的状态制造使用。本阶段是将上述蛋白聚糖粉末溶于水，制造蛋白聚糖水溶液。上述蛋白聚糖以水溶液总重量为基准，以1～10 %重量为特征，如果其含量低于1%，则上述蛋白聚糖的功效很弱，很难达到本发明的目的。超过百分之十时，有可能导致蛋白聚糖的溶解不完全。
53.这样制造的蛋白聚糖水溶液与含有上述鲑鱼由来dna片段的复合物混合后，如果适用于上述组合物的有效成分，可以表现出比上述组合物更具有提升效果的化妆料组合物。
54.此时，含有上述鲑鱼来源的dna片段的复合物与上述蛋白聚糖水溶液以1:2~10重量比为特征。当上述蛋白聚糖水溶液的含量低于二重比时，很难获得提高的美白效果或改善皱纹，超过十重比时，与其他材料的结合力下降，无法获得更高的效果，或皮肤吸收率下降，反而无法达到本发明的目的效果。
55.另外，本阶段除了上述蛋白聚糖水溶液外，还添加了日本薯蓣提取物和大蒜提取物为特征，更可取的是上述鲑鱼的dna片段、蛋白聚糖、日本薯蓣提取物以及大蒜提取物的1:2~10:0.5~1:0.5~1重量比组成。
56.在这里，日本薯蓣提取物是含有大量黏蛋白（mucin）的提取物，上述大蒜提取物是含有大量蒜氨酸（alliin）的提取物，与之一起使用的话，会产生更大的效果。
57.这时，上述日本薯蓣提取物以上述鲑鱼来源的dna片段重量为基准，如果不到0.5重量比，就很难防止上述dna抑制现象，很难使dna片段的效果最大化，如果超过1重量比，由于含量过高，黏滞性强，会降低涂抹性，难以用作化妆材料。
58.另外，上述大蒜提取物以上述鲑鱼来源的dna片段重量为基准，如果含有小于0.5重量比的话，很难降低上述dna片段处理所产生的mpp酶活性，超过1重量比的话，由于含量过高反而会刺激皮肤，使其难以用作化妆材料。
59.上述最终本发明的化妆料组合物除上述有效成分外，还包括通常的化妆品所配的成分，如油脂类、碳氢化合物、蜡类、脂肪酸、合成酯类等，醇类、粉体、表面活性剂、增粘剂、高分子化合物、凝胶剂、紫外线吸收剂、紫外线吸收剂、防氧化剂、色素、颜料、防腐剂、香料、药剂或水等可在不损害本发明效果的范围内适当选择使用。
60.作为油脂类，可以举出荷荷巴油、蓖麻油、橄榄油、大头油、棕榈油、棕榈油、可可
油、貂皮油、海龟油等。
61.作为碳氢化合物，可以举出流动石蜡、凡士林、微晶脱蜡、白蜡等。
62.蜡类可以包括蜜蜡、羊毛脂、巴西棕榈蜡、小烛树蜡等。
63.脂肪酸包括肉豆蔻酸、氨基甲酸、硬脂酸、油酸、异硬脂酸、月桂酸等。
64.合成酯类可包括：甲酸异丙酯、甲酸异丙酯、油酸丁酯、偏磷酸三丁酯、偏磷酸二甲酯、偏磷酸丙二醇、偏磷酸三丁酯、甲酸异丙酯、苹果酸异丙酯、偏磷酸三丁酯、氯化二甲基铵等。
65.油脂类、碳氢化合物、蜡类、脂肪酸、合成酯类通常加在一起，每种化妆料组合物的配比为0～30w/w%。
66.酒精类可包括乙醇、1,3-丁二醇、丙二醇、月桂醇、乙醇、甾醇、油醇等。酒精类通常可以以每种化妆品成分0～25w/w%的比例搭配。
67.表面活性剂有：聚甘油脂肪酸酯类、sorbitan脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯sorbitan脂肪酸酯类、聚氧乙烯烷基醚类、棕榈油脂肪酸单胺、聚氧乙烯硬化蓖麻油、乳酸钠、焦甘氨酸异辛酸聚氧乙烯酯，烷基苯磺酸钠，聚氧乙烯酯，二烷基磺酸，溴化三甲基吡啶，氯化-n-羟乙基铵，单烷基磷酸，n-乙酰氨基丁酸，n-氨基水杨酸，n-氨基水杨酸，n-氨基水杨酸，蔗糖脂肪酸酯，可以制造聚氧乙烯基非碳单酯、聚氧乙烯烷基醚硫酸钠、聚氧乙烯还原羊毛脂、蔗糖酯等。表面活性剂通常可以按每种化妆品成分0～10w/w%的比例配制。
68.增稠剂可以是羧甲基乙烯聚合物、甲基聚羧酸、葡聚糖、羧甲基纤维素、卡拉胶、羟丙基甲基纤维素等。增稠剂通常可按每种化妆品成分0～5w/w%的比例配制。
69.额外保湿剂包括甘油、丙二醇、1,3-丁二醇、焦甘氨酸、丙二酸、丙二酸等。保湿剂通常可以按每种化妆品成分0～25w/w%的比例配制。
70.作为防腐剂，可以混用1种以上的苯甲酸、水杨酸、二羟基乙酸或它们的盐类、对羟基苯甲酸酯类的酚类、三氯甲烷、1,2-己二醇、乙氧基甘油、甲基丙烯酸、羟色胺等。防腐剂通常可以按每种化妆品成分0～2.0w/w%的比例配制。
71.香精通常用于化妆品的话，可以使用任何香精。
72.色料可以是氧化铁、二氧化钛、氧化锌、碳精、滑石等。色料通常可以按每种化妆品组成物0~5w/w%的比例调配。
73.药剂有小麦胚芽油、维生素a、维生素a、维生素b 2、维生素e、阿司匹林-2-磷酸镁或钠、d-半乳糖醇、甘草酸（glycyrrhizinate）二钾、谷胱甘肽（glutathione）、uv吸收剂、杀手剂、植物提取物、微生物代谢物/提取物等。药剂通常可以按每种化妆品成分0～5w/w%的比例配制。
74.水可以是自来水、矿泉水、盐水(salt water)、海水、海洋深层水、超纯水、极地冰水、含矿物质水(mineral-containing water)、纯净水等。水可以以任意比例配制。
75.上述这些构成的化妆料组合物可以有多种剂型，具体可能是护肤水、乳液、面霜、精华、精华、防晒霜、妆前乳、粉底、粉底、遮瑕膏、bb霜、或cc（color correction）霜、粉底、粉底、粉底、粉底、喷雾和化妆修复产品中的任何一种。
76.以下将以实施例及实验例对本发明作更详细的说明，但这些实施例及实验例仅是为了说明的目的，并不是为了限制本发明的保护范围。
77.实施例1》制造美白用或改善皮肤皱纹用化妆料组合物1在溶液1（0.25m蔗糖，10mm edta，30mm tris-hcl，ph7.5）中加入提取dna的样品（鲑鱼精子）20%溶解。上述溶解试样在1000rpm离心15分钟后除去上层液，制造出沉淀物1。
78.然后将上述沉淀物1重新放入上述溶液1中溶解后，溶解的试样在1000rpm下离心10分钟除去沉淀物，剩下的上层液在12000rpm离心30分钟后除去上层液，制造出剩余沉淀物2。
79.然后将上述沉淀物2容量1g放入1ml纯净水中溶解，制造出1种溶解物。
80.然后，溶解在上述纯净水中的溶解物1将10%（v/v）的乙酸与上述溶解的沉淀物混合成体积（v:v=1:1），在4℃下反应4小时，制造出混合物1。
81.然后，上述混合物1与10%（v/v）nacl溶液（v:v=1:1）混合，在25℃常温下反应1小时，制造出混合物2。
82.然后将上述混合物2在12000rpm下进行1小时，除去上层液，制造出剩余沉淀物3。
83.然后将上述的沉淀物3容量1g中加入100%（v/v）乙醇10ml溶解，制造出去除杂质的溶解物2然后将上述溶解物2在12000rpm条件下进行1小时离心，获得沉淀物4。
84.然后将4容量1g沉淀物放入1ml纯净水中溶解，在4中确认，制造了具有由序列号1表达的碱基序列的鲑鱼dna片段复合物。
85.然后将10g dna片段复合物与90g纯净水混合，制造出本发明的用于皮肤美白或改善皮肤皱纹的化妆料组合物1。
86.实施例2》制造用于美白皮肤或改善皮肤皱纹的化妆料组合物2从经过洗涤、脱脂、脱臭处理的鲑鱼鼻软骨中，以氢氧化钠为溶剂，经碱提取、中和、过滤和浓缩工序，采用低温喷雾干燥的方式，在前处理工序中采用不热处理的冷加工方式，制造出蛋白聚糖粉末。然后将1g蛋白聚糖粉末放入99g水中混合，制造了蛋白聚糖水溶液（重量平均分子量在90万da以上～120万da以下）。
87.然后将上述实施例1中的序列号1所表达的具有碱基序列的鲑鱼由来dna片段复合物5g、上述蛋白聚糖水溶液15g、纯净水80g混合，制造出本发明的皮肤美白用或改善皮肤皱纹用的化妆料组合物2。
88.实施例3》制造用于美白皮肤或改善皮肤皱纹的化妆料组合物3将100g山药放入98%（v/v）乙醇溶剂1l中，在75℃下提取3小时，制造了日本薯蓣提取物。
89.将100g大蒜放入98%（v/v）乙醇溶剂1l中，在75℃下提取3小时，制造大蒜提取物。
90.然后，将实施例1中的序列号1表示的具有碱基序列的鲑鱼由来dna片段复合物2.5g、上述实施例2中制造的蛋白聚糖水溶液10g、上述日本薯蓣提取物2.5g、上述大蒜提取物2.5g、纯净水82.5g混合，制造出本发明的用于皮肤美白或改善皮肤皱纹的化妆料组合物3。
91.比较例1》制造化妆料组合物4在含有10%（v/v）dna精制实验sds的变性解决方案中，加入20%用于提取dna的样品（鲑鱼精子）溶解，制造了溶液。
92.在12000rpm条件下进行离心分离，除去沉淀物，得到剩余的上层液。
93.然后在上述上层液中加入10%的氯化钠（v/v），反应1小时后，在12000rpm条件下进行离心分离，得到沉淀物。
94.然后将上述沉淀物干燥后，将其放入纯净水中溶解。
95.在纯净水中溶解的沉淀物以10%（v/v）的丙酮为溶剂，与体积比（v:v=1:1:1）混合，在4℃下反应4小时。
96.反应后的溶液在10%（v/v）nacl溶液中混合（v:v=1:1），在25度常温下反应1小时。
97.然后，最终反应物在12000rpm条件下进行15分钟的离心分离，除去上层液，剩下的沉淀物放入100%（v/v）乙醇中溶解，除去杂质。
98.然后，为了回收乙醇中混合的dna片段，在12000rpm条件下进行15分钟的离心分离，获得1g沉淀物，放入1ml纯净水中溶解，制造了在图4中确认的鲑鱼来源的dna片段复合物。
99.然后，将10g dna片段复合物与90g纯净水混合，制造了化妆料组合物4。
100.比较例2》制造化妆料组合物5用与上述实施例2相同的方法制造，用上述比较例1所获得的dna片段复合物代替上述实施例1的序列号1所表达的具有碱基序列的鲑鱼由来dna片段复合物，制造了化妆料组合物5。
101.比较例3》制造化妆料组合物6用与上述实施例3相同的方法制造，用上述比较例1所获得的dna片段复合物5g代替上述实施例1的序列号1所表达的具有碱基序列的鲑鱼由来dna片段复合物，上述实施示例2所制造的蛋白聚糖水溶液10g，上述日本薯蓣提取物2.5g，上述大蒜提取物2.5g，纯净水80g混合，制造了化妆料组合物6。
102.（剂型1,2制造）本发明的用于皮肤美白或改善皮肤皱纹的精华或面霜制造在应用上述实验例2,3的组合物的同时，按照下表1的组合物比例，将附加材料混合，制造出精华液型或面霜型化妆品。为了顺利混合，使用搅拌机，搅拌速度为500~1500rpm，20~45℃，30分钟~1小时左右，制造了本发明的化妆品。
103.【表1】
《实验例1》dna片段分析1.实验方法为了确定实施例1和比较例2中的atgc的含量，将实施例1或比较例1中的溶解物分别以0.8%（v/v）的琼脂糖凝胶电泳，从琼脂糖凝胶中回收各自的dna带，制造出相同浓度的样品，委托进行基因碱基序列分析。作为碱基序列的结果，确定了a/t/g/c含量2.实验结果如图4所示，对实施例2的方法获得的dna片段进行同样的乙酸处理时，获得的dna片段大小为100到1000bp。从比较例1中获得的dna片段大小为700~1000bp，如图3所示，在比较例1中没有确认的dna片段在实施例2的dna片段中可以得到。
104.对此，分析结果表明，实施例1的dna片段是由a47440bp／t4388bp／g2703bp／c4834bp组合而成的基因片段，与比较例1比较，确认为不具有同源性的基因碱基序列。（序列号1）《实验例2》美白效果确认1.实验方法为验证美白效果，检测了酪氨酸酶的抑制活性，测定的是67mm磷酸钠缓冲液（ph6.8）80μl中融化10mm l-dopa（sigma，usa）的基质液40μl和试样溶液40μl的混合液中加入200u/ml蘑菇酪氨酸酶40μl，在37℃反应10分钟，在492nm处测定了反应液中生成的dopa铬。酪氨酸酶的抑制活性以制造的样品溶液的吸光度衰减率表示。
105.抑制率(inhibition ratio)(%)＝(1－试样添加群的吸光度)
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1002.实验结果
【表 2】如上表2所示，确认了相比序列不同的dna片段包括比较例1的化妆料组合物，序列号为1的包含碱基序列的dna片段的实施例1的化妆料组合物tyrosinase的含量较高。也就是说，在本发明的实施例1中，采用了利用超离心的提纯方法，可以有效地获得只存在0.2%活体的基因组dna外少数dna，由此得到的dna片段结构具有很高的美白效果。
106.另外，在实施例2或比较例2的情况下，随着添加更多的蛋白聚糖，确认生成了具有更高美白效果的化妆料组合物。
107.另外，在比较例3中，美白效果虽然比比较例2有所提高，但其效果不如实施例3，而在实施例3中，美白效果最好。这可能会降低大蒜提取物中的蒜素，即dna片段可能产生的mpp酶的活性。日本薯蓣提取物中含有的一种叫黏蛋白（mucin）的成分，与蛋白聚糖结合，防止了本发明序列号1所表达的具有碱基序列的dna片段下降（degrade）现象，反而使其效果最大化，使组合物稳定化，美白功效最大限度地上升。
108.实验例3》抗皱效果确认1. 实验方法ellastase是分解蛋白质弹性蛋白的酶。ellastase是一种能分解胶原蛋白和弹性蛋白的水解酶。
109.在皮肤的真皮组织中，胶原蛋白和与皮肤弹性相关的弹性蛋白形成网状结构，弹性蛋白被弹性蛋白酶分解，导致皮肤网状结构结合断裂，弹性蛋白酶是皱纹生成的主要酶。
110.对此，为了确认抗皱效果，确认了ellastase的抑制活性，ellastase的抑制活性测定以n-succinyl-(l-ala)3-p-nitroanilide为基质，在37度下反应30分钟，在445nm处测定了反应后基质生成的p-nitroanilide的生成量，将上述实施例和比较例制造的样品溶液配制成一定浓度各40μ分放于96well plate。
111.将2.5u/ml porcine pancreas elastase溶液40μ分别添加溶解在每个准备好的well后，在50mm tris-hcl buffer（ph8.6）中加入溶解的n-succinyl-(l-ala)3-p1 nitroanilide (0.5 mg/ml)作为基质使用，反应时间为30分钟，测定了其生成物。
112.抑制活性以如下方式计算了各实施例和比较例添加区和无添加区的吸光度衰减率，以确认其活性。
113.酶活性抑制率（%）=（1-试样添加群吸光度/无添加群吸光度）
✖
1002. 实验结果【表 3】
如上表3所示，确认了相比序列不同的dna片段包括比较例1的化妆料组合物，序列号为1的包含碱基序列的dna片段的实施例1的化妆料组合物的elastase的含量较高。
114.另外，实施例2或比较例2的情况，确认了随着添加更多的蛋白聚糖，生成了具有更高抗皱效果的化妆料组合物。
115.另外，比较例3的情况，抗皱效果虽然比比较例2有所上升，但其效果比实施例3有所下降，而实施例3的情况，抗皱效果比视黄醇成分上升的更高，确认了表现得最为优秀。
116.实验例4》抗氧化效果确认1.实验方法为了确认抗氧化效果，测定了dpph自由基清除能力。dpph清除自由基的实验是每种样品溶液（实施例和比较例）100μ中加入0.2mm的dpph溶液50μ，搅拌后放置10分钟，在517nm处测定吸光度，试样溶液的添加区与无添加区之间吸光度的差异通过荷气计算式以百分比表示。
117.供电子能力（electron donating ability）（%）=（1-试样添加群吸光度/无添加群吸光度）
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1002.实验结果【表 4】如上表4所示，包含序列不同的dna片段的比较例1的化妆料组合物的抗氧化能力为30%，而包含序列号1所表达的具有碱基序列的dna片段的实施例1的化妆料组合物的抗氧化能力则高达58%。
118.另外，比较例3的情况，抗氧化效果虽然比比较例2有所上升，但其效果比实施例3明显下降，而实施例3的情况，抗氧化效果与维生素c类似，证明抗氧化效果非常优秀。
119.实验例5》使用感确认1.实验方法为了评价使用感，以20~30岁的30名成年女性为对象进行了使用感问卷调查。将剂型1、2及比较剂型1、2的化妆料组合物在皮肤使用爽肤水后依次使用，剂型1、2或比较剂型
1、2在早上使用后，在问卷中以5分尺度（分数越高越好）回答的方式进行评价，结果显示在表5中。在这里，比较剂型1,2是在上述剂型1,2的成分中，代替实施例2,3的组合物，分别应用了比较例2,3的组合物。
120.实验结果上述实验结果，如下表5所示。
121.【表 5】如上表5所示，比较剂型1,2的化妆品涂抹性差，粘性强，整体使用感较低，而剂型1,2的化妆品的涂抹性和持久性得到了很好的评价，粘性也很小。可以看出本发明的有效成分适合用作化妆材料。
122.像这样，通过实施示例1获得的dna片段可以无损地包含在组合物中，通过添加蛋白聚糖和日本薯蓣提取物、大蒜提取物，可以改善皱纹、抗氧化、在进行美白实验的时候，效果最好的是大蒜的主要成分alliin提前防止了dna片段处理带来的副作用，同时，日本薯蓣的主要成分mucin和proteoglycan维持了dna片段的结构稳定性，作为协同效应，表现出了低浓度的最大效果。判断。因此，根据本发明，在提高皮肤美白功能的同时，还具有改善皮肤皱纹的功效，可以提供使用感很好的化妆品。
123.对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其它的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
124.以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同替换和改进，均应包含在本发明技术方案的保护范围之内。