提高乌菜子叶形胚形成率及一步成苗率的方法与流程

技术特征：
1.一种提高乌菜子叶形胚形成率及一步成苗率的方法，其特征在于，该方法包括：步骤一、于抽薹开花期，挑选处于单核靠边期的乌菜花蕾样本，并获取其纯化小孢子；步骤二、向nln培养基内加入0～2.0mg/l茶多酚(tp)并重悬步骤一所得纯化小孢子；步骤三、将步骤二所得产物置于33℃下热激处理24h后转入25℃下暗培养，待出现肉眼可见的胚状体，统计出胚情况，并将其置于25℃摇床上振荡培养5～10天，转移至固体ms培养基中培养，25天后统计成苗情况。2.根据权利要求1所述的一种提高乌菜子叶形胚形成率及一步成苗率的方法，其特征在于，步骤三中摇床的震荡速度为50rnp/min。3.根据权利要求1或2所述的一种提高乌菜子叶形胚形成率及一步成苗率的方法，其特征在于，步骤1具体为：于抽薹开花期，采集乌菜花蕾样本，并置于4℃环境下预冷处理1d，之后选取处于单核靠边期的花蕾于烧杯中，并依次进行70％酒精消毒30s、0.1％的hgcl2摇晃消毒6min，最后再采用无菌水冲洗3次，每次5min；接着用玻璃棒在b5培养基中研磨花蕾，释放小孢子；依次用300目钢丝网筛和40μm细胞网筛过滤，收集的滤液于1000r/min转速下离心处理；最后，用b5培养基重悬离心沉淀，并再次离心，离心转速1000r/min，最终获得纯化小孢子。4.根据权利要求3所述的一种提高乌菜子叶形胚形成率及一步成苗率的方法，其特征在于，步骤二中nln培养基重悬纯化小孢子后，用细胞计数器调整小孢子的密度为1
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105～5
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105个/ml。

技术总结
本发明公开了一种提高乌菜子叶形胚形成率及一步成苗率的方法，涉及遗传育种技术领域，于抽薹开花期，获取处于单核靠边期的乌菜花蕾样本，并获取其纯化小孢子；向NLN培养基中加入0～2.0mg/L的茶多酚，并重悬所得纯化小孢子；步骤三、将步骤二所得产物置于33℃下热激处理24h后转入25℃下暗培养；待出现肉眼可见的胚状体后，置于25℃摇床上振荡培养5～10天，然后转移至固体MS培养基中培养，25天后统计成苗情况。在添加0～2.0mg/L的茶多酚的NLN诱导培养基中，子叶形胚的形成率提高了1.14～1.54倍，子叶形胚的成苗率提高了1.10～1.44倍，一步成苗率提高了1.19～1.80倍。本发明能够有效提高乌菜的子叶形胚的形成率以及一步成苗率，缩短育种周期，进而提高乌菜小孢子培养技术创制育种资源的效率。制育种资源的效率。


技术研发人员：唐小燕 张冰雨 张珮玉 梅林伦 汪承刚 黄兴学
受保护的技术使用者：安徽省皖江蔬菜产业技术研究院有限责任公司
技术研发日：2022.09.16
技术公布日：2022/11/11