一种γ干扰素电化学发光检测试纸条及其应用的制作方法

一种
γ
干扰素电化学发光检测试纸条及其应用
技术领域
1.本发明涉及医疗检测技术领域，尤其是涉及一种γ干扰素电化学发光检测试纸条及其应用。


背景技术：

2.结核病(tuberculosis，tb)是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核菌可侵入人体全身各种器官，但主要感染肺脏，称为肺结核病。结核病属于慢性传染病，是单一传染源的头号死因，也是全球第13大死因之一，而有效地诊断是有效降低结核病死亡的重要手段。
3.相关技术中，结核菌检测方法包括结核菌素皮肤试验法、涂片镜检法、细菌培养法、人γ干扰素诱导蛋白10测定法、酶联斑点试验法、γ-干扰素体外释放酶联免疫试验法、荧光定量和探针pcr检测法以及环介导等温扩增技术等，然而在这些方法中存在诸多问题导致无法对结核病进行准确检测，例如受卡介苗和非结核分枝杆菌干扰、判断结果主观性较高、肺外结核取样困难、阳性率低、对实验室及技术人员的要求高、肺外结核取样困难和耗时长等。而电化学发光法检测γ干扰素是弥补这些缺陷的最好方法，且利用纸基进行电化学发光γ干扰素检测方法还未见研究报道。
4.因此，本发明提出了一种γ干扰素电化学发光检测试纸条，其检测准确性和灵敏性高，且检测方法简便，对提高结核病诊出率具有深远的社会意义和广阔的经济价值。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种γ干扰素电化学发光检测试纸条及其应用，使用该检测试纸条对γ干扰素的检测，具有检测效率和灵敏性高的优点。
6.本发明还提出一种上述γ干扰素电化学发光检测试纸条在制备检测γ干扰素试剂盒中的应用。
7.本发明的第一方面，提供了一种γ干扰素电化学发光检测试纸条，包括纸基通道层和电极层；
8.所述纸基通道层包括依次搭接设置的加样垫、结合垫、检测垫和吸水垫；所述加样垫固定有样品缓冲液和异嗜性抗体阻断剂；所述结合垫包被有钌偶联标记抗体；所述检测垫包被有微球偶联捕获抗体和电化学发光共反应物缓冲液；
9.所述电极层设有若干电极，所述电极的一端与检测垫连接。
10.根据本发明实施例的γ干扰素电化学发光检测试纸条，至少具有如下有益效果：本发明通过在加样垫中添加样品缓冲液和异嗜性抗体阻断剂，能够有效提高待测样品在纸基通道层中的迁移速度并减少待测样品中其他异嗜性抗体的干扰，有助于提高检测效率和检测灵敏性。本发明的电极层用于提供检测垫上产生化学发光信号所需电压。
11.本发明提供的γ干扰素电化学发光检测试纸条具有检测特异性强、灵敏度高等优
点，对γ干扰素标准阳性品最低检出限低至4.4pg/ml；其次，本发明提供的γ干扰素电化学发光检测试纸条适用范围广，用时短，每次反应仅需5～10分钟便可以出结果。
12.此外，本发明的基于电化学发光法检测试纸条便于携带和使用，易于扩大生产。
13.根据本发明的一些实施例，所述电极层设有3个电极，分别为工作电极、对电极和参比电极。电极层用于提供检测垫上产生化学发光信号所需电压。
14.根据本发明的一些实施例，所述加样垫通过以下制备方法获得：将制备所述加样垫的基质材料用所述样品缓冲液和所述异嗜性抗体阻断剂浸泡后，再经干燥处理后即得；
15.优选的，所述加样垫的基质材料为玻璃纤维素膜。
16.根据本发明的一些实施例，所述样品缓冲液包含tris-hcl、bsa、酪蛋白钠、海藻糖、蔗糖、nacl和pbs。
17.优选的，所述tris-hcl的摩尔浓度为3mol/l～6mol/l；
18.优选的，所述tris-hcl的ph值为7.0～7.6；
19.优选的，所述pbs的ph值为7～7.6。
20.根据本发明的一些实施例，所述样品缓冲液具体由0.05m tris-hcl(ph值为7.4)、1％bsa、0.5％酪蛋白钠、0.5％海藻糖、2％蔗糖、0.9％nacl和余量pbs缓冲液(ph值为7.4)组成。
21.根据本发明的一些实施例，所述pbs缓冲液的制备方法包括：
22.分别将35.8g na2hpo4·
12h2o溶于1000ml无菌水，15.6g nah2po4·
2h2o溶于1000ml无菌水，然后取19ml nah2po4和81ml na2hpo4混合，混合后加水稀释至1000ml即可。
23.根据本发明的一些实施例，所述异嗜性抗体阻断剂的浓度为0.3mg/ml～0.8mg/ml；
24.优选的，所述异嗜性抗体阻断剂的浓度为0.5mg/ml。
25.根据本发明的一些实施例，所述结合垫通过以下制备方法获得：将三联吡啶钌和γ干扰素特异性单克隆抗体混合后反应获得所述钌偶联标记抗体，然后将制备所述结合垫的基质材料浸泡在所述钌偶联标记抗体中，经干燥处理后即得；
26.优选的，所述结合垫的基质材料和所述加样垫的基质材料为相同材料。
27.根据本发明的一些实施例，所述结合垫的基质材料和所述加样垫的基质材料均为玻璃纤维素膜。
28.根据本发明的一些实施例，所述三联吡啶钌和所述γ干扰素特异性单克隆抗体的摩尔比为20～80：1；
29.优选的，所述三联吡啶钌和所述γ干扰素特异性单克隆抗体的摩尔比为40：1。
30.根据本发明的一些实施例，所述钌偶联标记抗体的质量浓度为0.5mg/ml～1.5mg/ml。
31.优选的，所述钌偶联标记抗体的质量浓度为1mg/ml。
32.根据本发明的一些实施例，所述检测垫通过以下制备方法获得：将制备所述检测垫的基质材料浸泡到所述微球偶联捕获抗体和电化学发光共反应物缓冲液中，经干燥处理后即得。
33.根据本发明的一些实施例，所述检测垫的基质材料选自包括滤纸和尼龙膜中的至少一种；
34.优选的，所述检测垫的基质材料为尼龙膜。
35.本发明通过对纸基通道层的基质材料进行改进，采用尼龙膜作为本发明的检测垫的基质材料能够进一步提高对发光信号的检出率，同时兼顾了待测样品在纸基通道层中的流动性，对提高了γ干扰素检测效率具有重要作用。
36.根据本发明的一些实施例，所述微球偶联捕获抗体的制备方法包括：将塑料微球活化，按照塑料微球：捕获抗体质量浓度比为1:1～2.5的比例加入所述捕获抗体，反应后即得。
37.根据本发明的一些实施例，所述塑料微球：捕获抗体质量浓度比为1:2。
38.优选的，所述塑料微球选自红色塑料微球、黄色塑料微球和透明塑料微球中的任一种。
39.根据本发明的一些实施例，所述捕获抗体具体为γ干扰素特异性单克隆抗体b07。
40.根据本发明的一些实施例，所述电化学发光共反应物缓冲液包含磷酸缓冲液、三丙胺、去垢剂和防腐剂。
41.根据本发明的一些实施例，所述钌偶联标记抗体与所述微球偶联捕获抗体的质量浓度比为1：0.5～2.5；
42.优选的，所述钌偶联标记抗体与所述微球偶联捕获抗体的质量浓度比为1：1～2；
43.更优选的，所述钌偶联标记抗体与所述微球偶联捕获抗体的质量浓度比为1：2。
44.根据本发明的一些实施例，所述检测试纸条还包括密封膜层，所述密封膜层包括第一密封膜层和第二密封膜层；
45.所述第一密封膜层对应所述加样垫位置设有加样孔。
46.第一密封膜层和第二密封膜层用于保护检测试纸条中固定的试剂不被蒸发，进而提高试纸条的储存稳定性，此外，密封膜层还能够有效减少环境因素的干扰，对提高检测的灵敏度具有一定的促进作用。
47.根据本发明的一些实施例，所述加样垫的长度为20mm～30mm。
48.优选的，所述加样垫的长度为25mm。
49.根据本发明的一些实施例，所述结合垫的长度为5mm～15mm；
50.优选的，所述结合垫的长度为10mm。
51.根据本发明的一些实施例，所述检测垫的长度为10mm～20mm；
52.优选的，所述检测垫的长度为15mm。
53.根据本发明的一些实施例，所述吸水垫的长度为15mm～25mm；
54.优选的，所述吸水垫的长度为20mm。
55.根据本发明的一些实施例，所述加样垫、所述结合垫、所述检测垫和所述吸水垫的宽度为4mm～10mm。
56.优选的，所述加样垫、所述结合垫、所述检测垫和所述吸水垫的宽度为4mm～8mm。
57.更优选的，所述加样垫、所述结合垫、所述检测垫和所述吸水垫的宽度为6mm。
58.根据本发明的一些实施例，所述加样垫、所述结合垫、所述检测垫和所述吸水垫的搭接长度为1mm～3mm；
59.优选的，所述加样垫、所述结合垫、所述检测垫和所述吸水垫的搭接长度为2mm。
60.根据本发明的一些实施例，所述吸水垫的基质材料为滤纸。滤纸能够有效提高待
测样品在纸基通道层的迁移速度，进而提高检测效率。
61.本发明的第二方面，提供了一种上述的基于电化学发光法检测试纸条在制备检测γ干扰素试剂盒中的应用。
62.根据本发明实施例的应用，至少具有如下有益效果：
63.(1)采用本发明制得的电化学发光法检测试纸条对γ干扰素进行检测，能够有效提高γ干扰素的检出率，且检测方法简单，无需对操作人员进行培训。
64.(2)本发明的试纸条具有独特的电化学发光物质，其发光信号强，杂光干扰小，为检测信号弱提供了解决途径，且由于是在纸基上进行反应，极大地减低了检测成本。
65.(3)本发明的试纸条的检出限低，对γ干扰素的最低检出限低至4.4pg/ml。
66.根据本发明的一些实施例，所述基于电化学发光法检测试纸条检测γ干扰素的具体步骤包括：
67.步骤s1：采集外周血，经干扰素释放试验后获得含γ干扰素的外周血，并添加电化学发光共反应物缓冲液和pbs缓冲液，获得待测样品；
68.步骤s2：将所述待测样本加入所述基于电化学发光法检测试纸条的加样孔中，反应后，将所述试纸条置于电化学发光检测仪中进行检测，得到相应的γ干扰素响应曲线；
69.步骤s3：根据γ干扰素响应曲线和预先建立的γ干扰素标准曲线计算待测样品中γ干扰素的浓度。
70.根据本发明的一些实施例，所述含γ干扰素的外周血与所述电化学发光共反应物缓冲液的体积比为2:1。
71.根据本发明实施例的应用，所述检测γ干扰素用于非诊断目的。
72.本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
附图说明
73.下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
74.图1为本发明实施例γ干扰素电化学发光法检测试纸条各层分解示意图。
75.图2为本发明实施例γ干扰素电化学发光法检测试纸条示意图。
76.图3为本发明实施例不同双抗比例的电化学发光强度测定结果。
77.图4为本发明实施例γ干扰素纸基电化学发光检测试纸条的标准曲线图。
78.图5为本发明实施例γ干扰素纸基电化学发光检测试纸条检测γ干扰素阳性样本示意图。
79.附图标记：
80.纸基通道层100，加样垫110，结合垫120，检测垫130，吸水垫140；
81.电极层200；
82.第一密封膜层310；
83.第二密封膜层320。
具体实施方式
84.以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以
充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
85.在本发明的描述中，如果有描述到第一、第二等只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。
86.在本发明的描述中，需要理解的是，涉及到方位描述，例如上、下等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
87.本发明的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。在本发明实施例的描述中，若干指的是两个以上。
88.实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
89.实施例1：一种γ干扰素电化学发光检测试纸条
90.本实施例为一种γ干扰素电化学发光检测试纸条，具体如图1所示，其包括：密封膜层、纸基通道层100和电极层200，其中纸基通道层100是由加样垫110、结合垫120、检测垫130和吸水垫140组成的“直线”型纸基微通道，具体如图2所示，加样垫110、结合垫120、检测垫130和吸水垫140依次搭接，重叠距离约2mm，其中加样垫110固定有样品缓冲液和异嗜性抗体阻断剂(购买于江苏帆博生物制品有限公司，货号为hbr-5)；结合垫120包被有钌偶联标记抗体，标记抗体具体为γ干扰素特异性单克隆抗体a20(购买于雷德生物科技有限公司，批号20200909)，检测垫130包被有微球偶联捕获抗体和电化学发光共反应物缓冲液，捕获抗体具体为γ干扰素特异性单克隆抗体b07(购买于雷德生物科技有限公司，批号20201105)。电极层200设有3个电极，分别为工作电极、对电极和参比电极，3个电极的一端与检测垫130的底部连接，用于提供检测垫130上产生化学发光信号所需电压。
91.在本实施例的γ干扰素电化学发光检测试纸条中，加样垫110和结合垫120是由玻璃纤维素膜制得，检测垫130由尼龙膜制得，吸水垫140由滤纸制得；其中加样垫110的长度为25mm，结合垫120的长度为10mm，检测垫130的长度为15mm，吸水垫140的长度为20mm；加样垫110、结合垫120、所检测垫130和吸水垫140的宽度均为6mm。采用上述基质材料作为纸基通道层100的材料能够进一步提高对发光信号的检出率，同时兼顾待测样品在纸基通道层100中的流动性。
92.在实施例的γ干扰素电化学发光检测试纸条中，γ干扰素电化学发光检测试纸条的密封膜层包括第一密封膜层310和第二密封膜层320，其中第一密封膜层310位于纸基通道层100远离电极层200一侧，并且第一密封膜层310对应加样垫110位置设有加样孔，用于添加待测样品进入加样垫110；第二密封膜层320位于电极层200远离纸基通道层100一侧，
第一密封膜层310与第二密封膜层320盖合后，可用于保护纸基通道层100和电极层200不受外界因素影响，有利于提高试纸条的灵敏性。此外第一密封膜层310与第二密封膜层320还能够有效避免纸基通道层100中固定的试剂蒸发，提高试纸条的储存稳定性。
93.本实施例γ干扰素电化学发光检测试纸条的加样区内固定有样品缓冲液和异嗜性抗体阻断剂，其中样品缓冲液具体由0.05m tris-hcl(ph值为7.4)、1％bsa、0.5％酪蛋白钠、0.5％海藻糖、2％蔗糖、0.9％nacl和余量pbs缓冲液(ph值为7.4)组成，样品缓冲液有助于稀释待测样品，促进待测样品快速迁移。异嗜性抗体阻断剂能够有效消除待测样品中异嗜性抗体的干扰，进而降低假阳性。
94.本实施例γ干扰素电化学发光检测试纸条的结合垫120包被有钌偶联标记抗体，其中钌偶联标记抗体具体为三联吡啶钌偶联标记抗体。检测垫130包被有微球偶联捕获抗体和电化学发光共反应物缓冲液。其中微球偶联捕获抗体为塑料微球偶联捕获抗体，电化学发光共反应物缓冲液由磷酸盐缓冲液、三丙胺、去垢剂和防腐剂组成。钌偶联标记抗体与微球偶联捕获抗体的浓度比为1：2，两种抗体可进一步降低非特异性结合，提高检测灵敏度。
95.实施例2：一种γ干扰素电化学发光检测试纸条的制备方法
96.本实施例γ干扰素电化学发光检测试纸条的具体制作方法如下：
97.1、加样垫的制备
98.本实施例中采用玻璃纤维素膜作为加样垫110基质材料，将玻璃纤维素膜浸入样品缓冲液和异嗜性抗体阻断剂(质量浓度为0.5mg/ml，购自江苏帆博生物制品有限公司)后，干燥，裁剪成长度为25mm，宽度为6mm的大小，即得加样垫110。
99.其中样品缓冲液具体由0.05m tris-hcl(ph值为7.4)、1％bsa、0.5％酪蛋白钠、0.5％海藻糖、2％蔗糖、0.9％nacl和余量pbs缓冲液(ph值为7.4)组成，样品缓冲液用于稀释待测样品，能够促进待测样品快速迁移。
100.2、结合垫的制备
101.在避光条件下，将三联吡啶钌平衡至室温(25
±
2℃)，用dmso溶解，溶解后振荡混匀；标记抗体取出溶解后振荡混匀，用pbs稀释，按照摩尔比40:1的比例将三联吡啶钌和γ干扰素特异性单克隆抗体a20(购买于雷德生物科技有限公司)混合在一起，然后在室温下放置到转盘上以10转/分钟反应12小时。反应完成后放入脱盐柱对未结合的钌进行洗脱，即得钌偶联标记抗体，洗脱完成后测od值，结果如表1所示。
102.表1：钌偶联标记抗体摩尔比
103.三联吡啶钌：γ干扰素特异性单克隆抗体(摩尔比)20:140:180:1γ干扰素特异性单克隆抗体(od
277
)0.6320.9290.947三联吡啶钌(od
455
)0.0510.10440.1199
104.由表1可知，按照公式，当三联吡啶钌：γ干扰素特异性单克隆抗体为的摩尔比为40:1时偶联效率最高(钌偶联标记效率＝钌标记抗体溶液中钌摩尔浓度/抗体摩尔浓度)，因此选择该摩尔比制备得到钌偶联标记抗体作为结合垫120包被材料。
105.将制备结合垫120的基质材料(玻璃纤维素膜)浸泡在上述所得的钌偶联标记抗体中，钌偶联标记抗体的质量浓度为1mg/ml，经干燥后裁剪成长度为10mm，宽度为6mm的大小，即得结合垫120。
106.3、检测垫的制备
107.将相同含量的上述制得的钌偶联标记抗体滴加到不同的检测用纸张上，进行电化学发光强度测试，选出适用纸张，结果见表2所示。
108.表2：检测用纸张
109.纸张类型滤纸尼龙膜硝酸纤维素膜发光强度163116374无
110.测试结果显示，在滤纸和尼龙膜均能检测到较强的发光信号，但基于滤纸无法满足实验抗体流动需求，因此选择尼龙膜作为检测垫130的材料。
111.检测垫130中包被的塑料微球偶联捕获抗体采用以下方法获得：
112.步骤s1：用ph值为6.0的0.05mol/l mes稀释塑料微球，稀释后再分别加入10mg/ml的nhs和edc各10μl对塑料微球进行活化处理，混合反应20min后，20000
×
g离心20min；
113.步骤s2：离心后用mes复溶，然后以相同条件再次离心对塑料微球进行清洗。
114.步骤s3：清洗完成后，按质量浓度比1:2(塑料微球：捕获抗体)的比例加入捕获抗体(具体为γ干扰素特异性单克隆抗体b07，购买于雷德生物科技有限公司)，加入后放置到转盘上反应1h，反应完成后上述相同条件进行离心；
115.步骤s4：离心后，弃上清液，加入由0.05m tris-hcl溶液和0.5％的酪蛋白纳组成的封闭液，再以20000
×
g离心20min，离心完后，弃上清，加入由pbs(ph为7.4)和1％的bsa组成的重悬液，获得塑料微球偶联捕获抗体。
116.为了进一步获得钌偶联标记抗体与塑料微球偶联捕获抗体的最佳反应浓度，在相同条件下，设置钌偶联标记抗体浓度为1mg/ml，然后分别0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml和2mg/ml的的塑料微球偶联的捕获抗体进行反应，并进行电化学发光强度测定。测定结果如图3所示，测试结果表明，钌偶联标记抗体与塑料微球偶联捕获抗体的最佳反应浓度比为1：2。
117.以钌偶联标记抗体与塑料微球偶联捕获抗体反应浓度比为1：2为参考反应浓度，将塑料微球偶联捕获抗体和电化学发光共反应物缓冲液固定到尼龙膜，经干燥后，裁剪成长度为15mm，宽度为6mm的大小，即得检测垫130。
118.其中电化学发光共反应物缓冲液由磷酸盐缓冲液、三丙胺、去垢剂和防腐剂组成。
119.4、吸水垫的制备
120.本实施例的吸水垫140采用滤纸制得，其长度为20mm，宽度为6mm。滤纸的吸水性好，有利于待测样品的快速迁移，减低检测时间。
121.5、试纸条的组装
122.将上述制得的加样垫110、结合垫120、检测垫130和吸水垫140依次搭接，获得纸基通道层100，再将电极层200与纸基通道层100组装，其电极与检测垫130位置对应连接，用于提供检测垫130上产生化学发光信号所需电压，最后再将第一密封膜层310和第二密封膜层320组装，其中第一密封膜层310对应加样垫110位置设置有加样孔，组装完成后即获得γ干扰素电化学发光检测试纸条。
123.检测例1：准确性
124.1、实验材料
125.(1)待测样本为结核病患者外周血(待测样本中γ干扰素的实际浓度为1000pg/
ml)，阴性样本为pbs。
126.(2)γ干扰素标准品，质量浓度设置分别为1pg/ml、8pg/ml、40pg/ml、200pg/ml、1000pg/ml和5000pg/ml。
127.(3)电化学发光共反应物缓冲液：磷酸缓冲液、三丙胺、去垢剂和防腐剂。
128.(4)pbs：分别取35.8g na2hpo4·
12h2o溶于1000ml无菌水，15.6g nah2po4·
2h2o溶于1000ml无菌水，取19ml nah2po4和81ml na2hpo4混合，混合后加水稀释至1000ml备用。
129.2、实验方法
130.本检测例采用实施例2制得的γ干扰素电化学发光检测试纸条进行检测。其检测过程为：
131.首先利用结核病特异性抗原刺激待检人员外周血，使活化的t淋巴细胞、nk细胞、单核细胞、树突状细胞和少量的造血干细胞等分泌产生γ干扰素，然后往检测试纸条的加样孔中加入γ干扰素，γ干扰素在结合区先与钌偶联标记抗体结合，再流动到检测区与塑料微球标记的捕获抗体形成双抗体夹心结构，其余未结合捕获抗体的则随液体流到吸水区，在检测区电流的刺激下，钌发生显色反应，再用电化学发光分析仪检测发光强度，获得γ干扰素的检测曲线，最后根据标准曲线计算样品浓度。
132.具体检测方法如下：
133.(1)取样：采集结核病患者外周血，经过干扰素释放试验(igras)后，得到含有γ干扰素的外周血，按照含有γ干扰素的外周血：电化学发光共反应物缓冲液体积比为2:1的比例混合，然后加入pbs定容到150μl，获得待测样品；
134.(2)加样：将150μl待测样品和不同溶度的标准品分别加入加样孔；
135.(3)反应：反应10～15min，使γ干扰素在试纸条上与钌偶联标记抗体和塑料微球偶联的捕获抗体结合；
136.(4)检测：将试纸条插入电化学发光分析仪，进行检测，具体待测样品浓度计算过程如下：以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，发光强度为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据检测的待测样品发光强度值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与光强度值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的光强度值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
137.3、实验结果
138.γ干扰素电化学发光检测试纸条的标准曲线如图4所示。其中标准曲线的直线回归方程式为：y＝1322x 187.3，r2＝0.9905。
139.阴性样本pbs和待测样本检测结果如图5所示，从图中可以看出：待测样本发光强度值4156，根据标准曲线计算得出其检测浓度为1004.6pg/ml；阴性样本未检测到明显的发光信号，可见，采用本技术方案的γ干扰素电化学发光检测试纸条进行微量检测具有较好的准确性。
140.检测例2重复性和最低检出限
141.本检测例采用检测例1的方法对实施例2制得的γ干扰素电化学发光检测试纸条进行重复性试验(重复次数为10次，即用10个不同γ干扰素电化学发光检测试纸条检测相同浓度样本)，其检测结果如表3所示：
142.表3：γ干扰素电化学发光检测试纸条重复性测试
143.检测次数发光强度第1次3723第2次4156第3次4160第4次3961第5次3493第6次4610第7次3919第8次3370第9次4226第10次3849平均值(m)3946.7标准差(sd)347.3cv8.7％
144.从表3中可以看出：采用本发明的γ干扰素电化学发光检测试纸条对同一样本进行检测，其cv值为8.7％(低于同批次标准10％)，可见，本发明的γ干扰素电化学发光检测试纸条具有重复性好的特点。
145.进一步的，对实施例2制得的γ干扰素电化学发光检测试纸条进行灵敏性检测，用10个不同γ干扰素电化学发光检测试纸条检测γ干扰素浓度为0的样本。测试结果如表4所示：
146.表4：γ干扰素纸基电化学发光检测试纸条的最低检出限
147.[0148][0149]
从表4中可以看出：采用本发明的γ干扰素电化学发光检测试纸条的拟合浓度为4.4pg/ml。
[0150]
综上所述，本发明试纸条构建了纸基电化学发光检测γ干扰素，其采用双抗体夹心法对γ干扰素进行检测，并最大限度的降低了试纸条的制作成本，且具有优异的检测效率，其作为γ干扰素的一种新的检测方法，为γ干扰素的快速筛查提供了一种有效的手段。
[0151]
上面对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。