一种鼻咽癌远处转移预测模型的制作方法

1.本发明涉及鼻咽癌转移预测技术领域，具体为一种鼻咽癌远处转移预测模型。


背景技术：

2.鼻咽癌是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤。是我国高发恶性肿瘤之一，发病率为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。常见临床症状为鼻塞、涕中带血、耳闷堵感、听力下降、复视及头痛等。鼻咽癌大多对放射治疗具有中度敏感性，放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法。但是对较高分化癌，病程较晚以及放疗后复发的病例，手术切除和化学药物治疗亦属于不可缺少的手段。
3.虽然目前临床上对远端转移发生的分子生物学机制有较为深入的研究，但是目前并没有可靠的方法能够对包括远处器官转移在内的诸多预后信息进行准确判断，鼻咽癌治疗失败的主要原因之一是远处转移，近年多项放化疗综合治疗的临床研究未显示出明显的远处转移率的降低和远期生存的获益，综合治疗适宜个体及最佳模式尚未确立。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种鼻咽癌远处转移预测模型，以解决上述背景技术中提出的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种鼻咽癌远处转移预测模型，包括：
6.s1、分别在治疗前和治疗结束时采用荧光定量pcr方法对鼻咽癌患者的血浆ebvdna浓度进行检测；
7.s2、按计划随访患者，进行远期疗效及生存的评价；
8.s3、利用kaplan-meier法计算无转移生存率及总生存率；
9.s4、采用cox风险比模型进行单因素及多因素分析，对其中长期生存者，分析归纳其特征；
10.s5、cox回归模型分析显示初诊时n分期、转移部位、转移后是否化疗、是否姑息放疗、初治放疗结束到远处转移的时间间隔对于转移性鼻咽癌患者的生存具有独立的预后意义。
11.s6、治疗结束后前2年每3个月、2年后每6个月随访一次，随访内容包括询问病史详细的体格检查，鼻咽间接镜或纤维镜检﹑鼻咽ct、mri检查；胸片、腹部b超、可疑肺以及肝转移者行胸部以及腹部ct检查、临床可疑骨、脑转移者行全身骨ect扫描、颅脑ct、mri，根据以上检查结果评价远期疗效；
12.进一步的，所述s6中根据检查结果评价远期疗效：治疗结束3个月后鼻咽或颈淋巴结部位再次出现病灶为局部多发，远处器官出现病灶为远处转移，未再出现病灶为持续缓解。
13.进一步的，所述s1中在治疗开始前、治疗结束时抽患者外周血3ml，加入edta抗凝
管，16000r/min离心5min后分离上层血浆，于-80℃冻存备用，在进行ebv dna检测时用qiamp dnablood minikit试剂盒抽提血浆dna，提取的dna置于-20℃保存备用，最终用量50ull。
14.进一步的，所述单因素分析表明，t分期、治疗前ebv dna浓度、治疗后ebv dna浓度均与无转移生存有关，使用cox回归模型进行多因素分析后，仅有以20000copies/ml为界值点的治疗前ebv dna浓度，以0copies/ml为界值点的治疗后ebv dna浓度与mfs的相关有统计学意义，且后者的影响更重要。
15.进一步的，所述所述s3中kaplan-meier法又称乘积极限法，适用于小样本资料，将生存时间由小到大依次排列，在每个死亡点上，计算其期初人数、死亡人数、死亡概率、生存概率和生存率，其思想与寿命表法相同，只不过寿命表法中时间段的划分是人为的、等距的，而乘积极限法划分时间段的分割点是实际死亡发生时间，kaplan-meier法是一种非参数方法，它的原理实际上就是在说一个简单的思路；
16.即：tpx＝px*px 1*px 2*...*px t-1；
17.kaplan-meier法完全使用经验数据构造生存曲线，是一种非参数方法，既可以适用于小样本，又可以适用于大样本，基于大样本的生存曲线会更合理些，基于小样本的生存曲线的误差可能会比较大。
18.进一步的，所述cox风险比模型可同时评估多个因子对生存的影响，在特定时间点事件发生的概率就是风险概率，预测风险概率的因素被称为协变量；
19.cox模型用风险函数h(t)表示，风险函数可以解释为t时刻的死亡风险，可以用下面方程计算：
20.h(t)＝h0(t)
×
exp(b1x1 b2x2 ... b
p
x
p
)
21.t表示生存时间，h(t)是由一组协变量(x1，x2，
…
，xp)确定的风险函数，系数(b1，b2，
…
，bp)表示了协变量的影响，术语h0称为基准危险。当所有协变量xi等于0(exp(0)等于1)时风险概率，exp(bi)称为危险比(hr)，bi》0的风险比，表明随着第i个协变量的值的增加，事件风险增加，因此生存时间缩短，风险比大于1表示协变量与事件概率正相关，因此与生存时间负相关。
22.进一步的，所述影像学提示多发肺转移、多发肝转移、多发骨转移或多个器官转移者，排除原发于其它脏器后确定为鼻咽癌远处转移。
23.进一步的，所述影像学发现单个病灶肺转移、肝转移、腋窝浅表淋巴结及胸壁转移，均有病理诊断支持。
24.进一步的，所述影像学同时包括ect、mri、ct提示单个骨转移灶，排除原发于其它脏器后，判断为骨转移。
25.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
26.该鼻咽癌远处转移预测模型，血浆eb病毒dna浓度是一项能反映鼻咽癌分期、治疗反应、预后的灵敏、特异的分子生物学指标，探讨通过鼻咽癌患者血浆ebvdna浓度预测远处转移的发生，为个体化的综合治疗模式的选择提供分子学指标，cox回归分析显示治疗前ebv dna浓度、治疗后ebv dna浓度均是影响无转移生存的危险因素，进一步将患者治疗前后ebv dna浓度变化综合进行生存分析，结果表明治疗后ebv dna浓度能否降到0是影响无转移生存最重要的预后因素，由于可知，鼻咽癌患者治疗前、后血浆ebv dna浓度，尤其是治
疗后能否降到0，能预测远处转移的发生，有望为放化综合治疗筛选高危患者，指导放化结合模式的选择。
附图说明
27.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
28.图1为本发明一种鼻咽癌远处转移预测模型的整体流程图。
具体实施方式
29.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
30.请参阅图1，本发明提供一种鼻咽癌远处转移预测模型，包括：
31.s1、分别在治疗前和治疗结束时采用荧光定量pcr方法对鼻咽癌患者的血浆ebvdna浓度进行检测；
32.s2、按计划随访患者，进行远期疗效及生存的评价；
33.s3、利用kaplan-meier法计算无转移生存率及总生存率；
34.s4、采用cox风险比模型进行单因素及多因素分析，对其中长期生存者，分析归纳其特征；
35.s5、cox回归模型分析显示初诊时n分期、转移部位、转移后是否化疗、是否姑息放疗、初治放疗结束到远处转移的时间间隔对于转移性鼻咽癌患者的生存具有独立的预后意义。
36.使用spss11.0软件进行统计分析。按照临床特征(病理类型、tnm分期、t分期，n分期)及治疗后远期疗效(持续缓解、局部复发、远处转移)分别进行分组，对不同组患者ebv dna浓度比较用kruskal-wallis秩和检验，ebv dna检出率比较用卡方检验。无进展生存期为确诊至局部复发/远处转移，或末次随访的时间，无转移生存期为确诊至远处转移或末次随访的时间，总生存期为确诊至死亡或末次随访的时间，用kaplan-meier法计算生存率、绘制生存曲线，各组生存率比较用log-rank检验，单因素分析中有统计学意义的变量进入多因素cox回归模型进行生存分析，所有统计学分析均为双侧，p《0.05认为有统计学意义。
37.s6、治疗结束后前2年每3个月、2年后每6个月随访一次，随访内容包括询问病史详细的体格检查，鼻咽间接镜或纤维镜检﹑鼻咽ct、mri检查；胸片、腹部b超、可疑肺以及肝转移者行胸部以及腹部ct检查、临床可疑骨、脑转移者行全身骨ect扫描、颅脑ct、mri，根据以上检查结果评价远期疗效；
38.在本发明的一种实施方式中，所述s6中根据检查结果评价远期疗效：治疗结束3个月后鼻咽或颈淋巴结部位再次出现病灶为局部多发，远处器官出现病灶为远处转移，未再出现病灶为持续缓解。
39.在本发明的一种实施方式中，所述影像学提示多发肺转移、多发肝转移、多发骨转移或多个器官转移者，排除原发于其它脏器后确定为鼻咽癌远处转移。
40.在本发明的一种实施方式中，影像学发现单个病灶肺转移(伴或不伴纵隔淋巴结肿大)、肝转移、腋窝浅表淋巴结及胸壁转移等，均有病理诊断支持。
41.在本发明的一种实施方式中，所述影像学同时包括ect、mri、ct提示单个骨转移灶，排除原发于其它脏器后，判断为骨转移。
42.具体的，初诊时为鼻咽癌，首程治疗前有明确的鼻咽部组织病理学诊断明确诊断为鼻咽癌，并经体检、胸部
×
线片、腹腔日超及骨ect等相关辅助检查未发现远处转移；鼻咽癌患者首程治疗在本院进行且完成根治量放疗；在根治性放疗后发生远处转移时，根据体检、鼻咽纤维镜检查、鼻咽 颈部ct(或)mri扫描排除鼻咽或颈部淋巴结复发，进一步确定了检验鼻咽癌是否转移，提高了预测远处转移的发生的准确性。
43.在本发明的一种实施方式中，所述s1中在治疗开始前、治疗结束时抽患者外周血3ml，加入edta抗凝管，16000r/min离心5min后分离上层血浆，于-80℃冻存备用，在进行ebv dna检测时用qiamp dnablood minikit试剂盒抽提血浆dna，提取的dna置于-20℃保存备用，最终用量50ull。
44.在本发明的一种实施方式中，所述单因素分析表明，t分期、治疗前ebv dna浓度、治疗后ebvdna浓度均与无转移生存有关，使用cox回归模型进行多因素分析后，仅有以20000copies/ml为界值点的治疗前ebv dna浓度，以0copies/ml为界值点的治疗后ebv dna浓度与mfs的相关有统计学意义，且后者的影响更重要。
45.血浆ebvdna浓度的计算公式为：
46.c＝q
×
(v
dna
/v
pcr
)
×
(1/v
ext
)
47.其中，c代表待测血浆中ebv dna的浓度(copies/ml)，q代表pcr反应体系中检测到的ebv dna含量，voua代表抽提得到的dna最终量，vr代表加入反应体系中的dna体积，vxr代表抽提dna所用的血求体积。
48.在对ebv dna浓度与鼻咽癌患者远处转移关系的进一步分析中，治疗前(rr＝3.95，p＝0.050)、治疗后的ebvdna浓度(rr＝11.74，p＝0.001)均是影响mfs的独立预后因素，但后者的影响更重要，综合患者治疗前后的ebvdna浓度进一步进行生存分析，结果证实了上述结论。
49.在本发明的一种实施方式中，所述s3中kaplan-meier法又称乘积极限法，适用于小样本资料，将生存时间由小到大依次排列，在每个死亡点上，计算其期初人数、死亡人数、死亡概率、生存概率和生存率，其思想与寿命表法相同，只不过寿命表法中时间段的划分是人为的、等距的，而乘积极限法划分时间段的分割点是实际死亡发生时间，kaplan-meier法是一种非参数方法，它的原理实际上就是在说一个简单的思路；
50.即：tpx＝px*px 1*px 2*...*px t-1；
51.kaplan-meier法完全使用经验数据构造生存曲线，是一种非参数方法，既可以适用于小样本，又可以适用于大样本，基于大样本的生存曲线会更合理些，基于小样本的生存曲线的误差可能会比较大。
52.在本发明的一种实施方式中，所述cox风险比模型可同时评估多个因子对生存的影响，在特定时间点事件发生的概率就是风险概率，预测风险概率的因素被称为协变量；
53.cox模型用风险函数h(t)表示，风险函数可以解释为t时刻的死亡风险，可以用下面方程计算：
54.h(t)＝h0(t)
×
exp(b1x1 b2x2 ... b
p
x
p
)
55.t表示生存时间，h(t)是由一组协变量(x1，x2，
…
，xp)确定的风险函数，系数(b1，b2，
…
，bp)表示了协变量的影响，术语h0称为基准危险。当所有协变量xi等于0(exp(0)等于1)时风险概率，exp(bi)称为危险比(hr)，bi》0的风险比，表明随着第i个协变量的值的增加，事件风险增加，因此生存时间缩短，风险比大于1表示协变量与事件概率正相关，因此与生存时间负相关。
56.血浆eb病毒dna浓度是一项能反映鼻咽癌分期、治疗反应、预后的灵敏、特异的分子生物学指标，探讨通过鼻咽癌患者血浆ebvdna浓度预测远处转移的发生，为个体化的综合治疗模式的选择提供分子学指标，cox回归分析显示治疗前ebv dna浓度、治疗后ebv dna浓度均是影响无转移生存的危险因素，进一步将患者治疗前后ebv dna浓度变化综合进行生存分析，结果表明治疗后ebv dna浓度能否降到0是影响无转移生存最重要的预后因素，由于可知，鼻咽癌患者治疗前、后血浆ebv dna浓度，尤其是治疗后能否降到0，能预测远处转移的发生，有望为放化综合治疗筛选高危患者，指导放化结合模式的选择。
57.此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征，在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
58.在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
59.在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
60.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”，“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
61.尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。