一种缓解蛋鸡热应激的中药饲料添加剂及制备方法

1.本发明属于一种中药饲料添加剂，涉及一种缓解蛋鸡热应激的中药添加剂中药配方及其制备方法，属于动物热应激的中药防治领域。


背景技术：

2.热应激引起蛋鸡采食量和产蛋率下降热应激机体在高温环境下因温度过高而发生的非特异性应答的反应。热应激会对动物机体的生理状态和生产性能造成较大改变，以至于大幅降低养殖业的利润。鸡皮肤无汗腺且被覆较厚羽毛，散热性差，在夏季高温天气时，容易产生应激反应。成年蛋鸡生产的最佳环境温度在19℃到22℃之间，当温度超过23℃，就会通过加快呼吸频率散热，当温度大于28℃，蛋鸡发生热应激。热应激会引发体内自由基蓄积和炎症因子增加，造成机体损伤，特别是对蛋鸡生殖系统的损伤引起蛋鸡产蛋性能的下降。当环境温度大于30℃时，会导致蛋黄的成熟率可能会降低，会出现蛋鸡的产蛋量下降的现象。热应激会增加蛋鸡体内的反应性氧化物质(ros)，并通过诱导细胞膜的脂质过氧化来降低蛋黄质量。热应激会降低鸡的采食量，炎热和潮湿的天气，蛋鸡的采食量下降20％。长期热应激会导致蛋鸡电解质失衡和脂质过氧化活化，影响脂肪代谢，抑制卵泡生成，引起产蛋率下降。
3.热应激引起蛋鸡肠道菌群失调肠道菌群主要包括细菌、共生菌和真菌，其中大部分为细胞。肠道菌群参与脂类、糖类及蛋白质的代谢，为动物提供营养和保护。肠道微生物可以促进肠粘液层增加粘蛋白的分泌和上皮细胞的周转率，从而保持胃肠道润滑，同时防止微生物侵入宿主的肠上皮细胞。肠道免疫系统也更加发达，并分泌特异性结合细菌表位的(免疫球蛋白a)iga，有助于调节肠道中的细菌组成。鸡在热应激反应后肠道会受到显著影响，鸡的小肠绒毛区域发生水肿，绒毛断裂，绒毛高度降低，进一步导致肠绒毛表面积减少，影响营养吸收和免疫功能。这会导致肠道内菌群失衡，增加细菌易位和炎症反应的风险。此外环境温度升高后，鸡肠道内菌群结构会发生变化，例如降低盲肠细菌的种类和含量，打破以往的菌群平衡。热应激还会使空肠的致病菌加速生长，致病菌对肠道产生不良刺激。
4.热应激引起蛋鸡机体发氧化应激反应机体发生热应激时会产生大量ros，ros包括超氧阴离子(o
2-·
)、羟自由基(oh
·
)和过氧化氢(h2o2)， ros在体内逐渐蓄积，机体的抗氧化能力不足以清除大量的ros，导致内环境平衡被破坏。过多的ros 会导致dna损伤、脂质过氧化、蛋白质羰基化等损伤，影响机体正常功能。动物热应激期间会产生大量 ros可能是因为代谢速率升高，线粒体的氧化磷酸化反应速率加快，线粒体电子转移效率降低并导致电子泄露，产生大量超氧根离子(o
2-·
)。热应激还会增加h2o2和oh
·
的形成，高温会增强过渡金属离子(tmi) 的产生，氧气对电子的捕获会导致h2o2的形成。与其他ros相比，由于其体积小且反应性相对良好，h2o2可以在细胞膜上自由扩散。热应激不仅使o
2-·
生成速率加快，还会降低机体的抗氧化能力。热应激会降低超氧化物歧化酶1(sod-1)mrna水平，细胞质sod蛋白和酶活性。
5.缓解蛋鸡热应激中药饲料添加剂组方选药原则本发明的中药饲料添加剂中药组方选药依据是农业部制定发布《饲料原料目录》中列出的117种药食同源的可饲用天然植物。产品研发依据的是2019年农业农村部第226号和第227号公告，对天然植物为原料的提取物申报新饲料添加剂，适度放宽了分析检测和评价材料要求。鉴于天然植物提取物成分复杂、组分分离难度大，有效组分不能以单一化学式描述或不能被完全鉴定，农业部在新饲料添加剂申报材料要求中，明确植物提取物只需给出特征主成分或类组分及其含量即可，对于有效组分外的其他成分，只需明确组分类别，可不提供具体组分含量。同时，对于安全性和有效性评价材料，明确国内外权威机构出具的评价报告、权威刊物公开发表的文献等资料，均可作为评价产品有效性、安全性的依据，通过数据资源共享减少申请人的研发投入，缩短产品研发周期。因此，本发明的中药饲料添加剂依据生产工艺直接生产。


技术实现要素：

6.本发明目的之一是提供一种缓解蛋鸡热应激的中药饲料添加剂，可解决因热应激引起蛋鸡产蛋率下降的问题。
7.本发明目的之二是研制的中药饲料添加剂符合食品安全，所选的中药均在《饲料原料目录》中列出的117种药食同源可饲用天然植物中筛选。
8.中药饲料添加剂组方及方药配比组方：刺五加、当归、枳壳、焦山楂、菊花、茯苓；方药配比依次为1:1:2:2:1:1。
9.中药饲料添加剂加工方法加工方法包括粉碎、水浸提、离心、除杂、制粉等工艺流程。
10.中药活性成分的提取本发明的创新点有别于传统中药活性成分提取工艺，传统提取中药活性成分采用水煎煮，乙醇除杂质的方法，工艺复杂，费用较高。而本发明的中药饲料添加剂采用温水提取，不仅活性成分含量高，而且节能环保，无废物产生。
11.中药提取物制粉中药提取物加入粘稠剂干燥喷粉方法与工艺
12.中药饲料添加使用方法当产蛋鸡出现热应激时，按0.5
‰
添加的蛋鸡日粮中，可是蛋鸡在暑热天气平稳度过热应激期。
具体实施方式
13.产蛋鸡出现热应激辨证论治热应激是一种环境性致病因素，主要致病因素为热证和湿证。产蛋鸡出现体温升高，呼吸和脉搏加快，采食量和产蛋率下降。热应激主要影响脾胃运化和小肠分别清浊功能，也就是影响蛋鸡的采食量和消化吸收。依据蛋鸡热应激的中兽医辨证，应以发表透热，理气活血，利湿健脾，宽肠通便为组方原则。
14.中药饲料添加剂实验室制备取刺五加、当归、枳壳、焦山楂、菊花、茯苓六味中药饮片，按1:1:2:2:1:1比例进行
配比。先进行中药粗粉(粒度80目)，用中药粗粉加工微粉(粒度300目)。取配比好的中药微粉2kg，加入到5000ml 蒸馏水中，水温控制在45℃，浸提2小时。3000转离心10分钟，取上清液，置4℃冰箱过夜，次日3000 转，离心10分钟，再浓缩至生药含量为1g/ml。取2000ml上述浓缩液，加入的可溶性淀粉25g，阿拉伯胶15g，壳聚糖10g，充分混匀，置60℃鼓风干燥箱烘干获得实验室制备的中药饲料添加剂。
15.中药饲料添加剂康热应激功效评价蛋鸡发生热应激时，主要影响其采食量和生产性能的下降。利用中药饲料添加剂干预热应激，以产蛋率、采食量、消化功能、抗热休克蛋白hsp70、抗氧化作用、抗炎作用、肠道益生菌群丰度等指标影响，评价中药饲料添加剂抗产蛋鸡热应激的功效。
16.最佳添加剂量的筛选实验利用雏鸡实验，检测中药饲料添加剂对雏鸡的消化功能影响。实验选取64羽雏鸡，随机平分为空白组、中药饲料添加剂低量组(0.25kg/t)、中剂量组(0.5kg/t)、高剂量组(1kg/t)，实验周期为21天。结果表明，中药饲料添加剂中剂量组(0.5kg/t)在雏鸡对促进日粮的消化吸收，提高小肠消化吸收功能，调节肠道益生菌丰度方面具有显著疗效。具体实验结果如下：
17.中药饲料添加剂促进雏鸡采食量及体重增长如表1所示，与空白组比较，中剂量组雏鸡21天平均体重极显著增长(p《0.01)，低剂量组也呈显著增长(0.01《p《0.05)；中高剂量组、中剂量组以及低剂量组雏鸡平均日采食量均无显著性差异(p》0.05)；中剂量组雏鸡料重比极显著降低(p《0.01)，而高剂量、低剂量组也呈显著降低(0.01《p《0.05)。表1雏鸡采食及体重的结果
18.中药饲料添加剂促进日粮中营养物质的消化吸收与空白组相比较，各试验组雏鸡血糖、总蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇含量均有升高，其中中剂量组功效最显著，结果见表2。各组的糜蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性与空白组比较均有显著差异。其中中剂量组各种消化酶活性最高，结果见表3。在给药21d后，各组粘膜面光整，粘膜皱壁完好。腺体、隐窝、杯状细胞正常，未见炎性细胞浸润，结果见附图1a所示；其绒毛长度和隐窝深度比值测量结果显示，中剂量组与空白组比较，绒毛长度与隐窝深度的比值有显著性差异(p《0.01)。结果见附图1b。表2血清生化指标
表3肠道消化酶活性
19.中药饲料添加剂可调高雏鸡肠道益生菌菌群丰度otu分析结果：图片中不同颜色的花瓣代表不同的分组及其特有otu个数，花瓣重叠部分的数字代表所有分组所共有的otu个数。其中低剂量组有606个otu、中剂量组有510个otu、高剂量组有588 个otu、空白组有465个otu。与空白组相比。低剂量独有191个otu、中剂量独有45个otu、高剂量独有123个otu，见附图2所示。alpha多样性分析结果：在一定范围内，群落中有大量物种被发现时曲线表现为急剧上升；物种不随测序数量的增加而增多时，曲线趋于平缓。由图可知多样性由多到少为：中剂量组、低剂量组、高剂量组、空白组，见附图3a所示。横轴上的长度来反映物种的丰富度，曲线越宽物种的组成越丰富；曲线的形状来反映物种组成的均匀度，曲线越平坦物种组成的均匀度越高，各组丰富度由大到小为：中剂量组、低剂量组、空白组、高剂量组，见附图3b所示。基于门水平差异性分析结果：前十种分别为：硝化螺旋菌门(nitrospirae)、脱铁杆菌纲 (deferribacteres)、绿弯菌门(chloroflexi)、放线菌(actinobacteria)、变形菌门(epsilonbacteraeota)、柔膜菌门(tenericutes)、酸杆菌门(acidobacteria)、变形菌门(proteobacteria)、拟杆菌门(bacteroidetes)、厚壁菌门(firmicutes)。其中占比例最多的三种为：变形菌门(proteobacteria)、拟杆菌门(bacteroidetes)、厚壁菌门(firmicutes)；与空白组相比较，厚壁菌门占比均升高，其中中剂量组增幅最大；拟杆菌门均降低，其中中剂量组降低最明显；变形菌门中剂量组占比降低，低、高剂量组占比升高，见附图4所示。
20.最近添加剂量的确定通过中药饲料添加剂对胃肠功能和肠道菌群的评价，最佳添加剂量为0.5kg/t(即每吨蛋鸡日粮添加剂量为0.5kg)
21.所发明的中药饲料添加剂加工方法
22.中药活性成分的提取分离先进行常规粉碎，获粗粉(80目)。45℃温水浸提，3000转，离心10分钟，取液体。将液体在4℃冰箱过夜，次日，3000转，离心10分钟，取上清液。
23.中药饲料添加剂的制备采用喷雾干燥的方法，制备粉末性中药饲料添加剂。取上述方法获得的一定量中药提取物，加入一定量的可溶性淀粉、壳聚糖、阿拉伯胶，采用喷雾干燥，制成中药饲料添加剂粉末，其中药含量为65％左右。
24.本发明的中药饲料添加剂在缓解蛋鸡热应激应用在蛋鸡热应激发生时，中药饲料添加剂在蛋鸡日粮中按0.8kg/t添加，从蛋鸡的采食、消化吸收、肠道益生菌菌群丰度变化等指标，评价中药饲料添加剂在缓解蛋鸡热应激效
果。通过以下实验实现：
25.中药饲料添加剂可以缓解热应激引起的蛋鸡采食量的下降，实验结果见表4。表4复方中药对蛋鸡日均采食量的影响检测结果注：同一列中，不同小写字母表示差异显著(p《0.05)；不同大写字母表示差异极显著(p《0.01)。下同。
26.中药饲料添加剂可以缓解因热应激引起的产蛋率下降，实验结果见表5。表5复方中药对蛋鸡产蛋率影响检测结果
27.中药饲料添加剂可以抵抗热应激引起的蛋鸡氧化应激损伤，实验结果见表6。表6复方中药对蛋鸡血清中gsh-px活力、t-sod活力、mda含量影响检测结果
28.中药饲料添加剂可以抵抗热应激引起的蛋鸡炎性损伤，实验结果见表7。表7复方中药对蛋鸡血清中il-6、tnf-α含量影响检测结果
29.中药饲料添加剂调高hsp70抵抗热应激引起的损伤，实验结果见表8。表8复方中药对蛋鸡血清中hsp70含量影响检测结果
30.中药饲料添加剂可以缓解因热应激引起的肠道菌群失调，降低热应激对肠道消化吸收的影响。蛋鸡肠道菌群alpha多样性分析结果显示，序深度较小时，out数目变化斜率较大，
当深度达到 40000reads时out数目变化斜率较小，曲线趋于平缓，见附图5所示。蛋鸡肠道菌群组成及丰度检测结果显示，门水平上显示拟杆菌门(bacteroides)、厚壁菌门(firmicutes)和变形菌门(proteobacteria)为占比最高三个优势菌。中药饲料添加剂组与正常对照组相对丰度差异较小。见附图6a所示。在属水平上，拟杆菌属(bacteroides)、理研菌科rc9肠道群(rikenellaceae_rc9_gut_group)占比较高为优势菌群，中药饲料添加剂组与正常对照组相对丰度差异较小。见附图6b。
31.中药饲料添加剂缓解蛋鸡热应激的评价在蛋鸡热应激发生时，中药饲料添加剂在蛋鸡日粮中按0.8kg/t添加，可以促进消化采食和消化吸收，维持肠道益生菌菌群丰度，可缓解蛋鸡因热应激引起的生产性能下降。
附图说明
图1雏鸡小肠绒毛和隐窝深度注:a雏鸡小肠黏膜组织切片(400x):a)低剂量组、b)中剂量组、c)高剂量组、d)空白组；b雏鸡小肠绒毛长度和隐窝深度比值图2各组雏鸡肠道菌群otu韦恩图图3alpha多样性分析结果注:a各组雏鸡肠道菌群稀释性曲线，b各组雏鸡肠道菌群等级丰度曲线。图4各组雏鸡肠道菌群基于门水平差异性分析图5稀释性曲线图6图肠道菌群相对丰度测定结果。