一种利用紫外分光光度计快速检测麦角硫因的方法与流程

1.本发明涉及一种利用紫外分光光度计快速检测麦角硫因的方法，属于检测技术领域。


背景技术：

2.麦角硫因是一种天然抗氧化剂，在人体内可以对细胞起到保护作用，是机体内的重要活性物质，无毒，已经成为研究的热点。
3.麦角硫因的制备方法有三种：化学合成法、提取法以及生物发酵合成法。化学方法合成左旋的麦角硫因十分困难，几种合成方法都因局部或全部外消旋化而没有达到预期的产量。天然生物提取法是从食用菌的子实体、猪血、动物组织、麦角和谷物中提取麦角硫因，但上述原料中麦角硫因的含量仍然很低，且存在原料的杂质多，药物残留，提取成本高等问题，限制了麦角硫因的应用，不宜产业化。利用野生菌或经过基因工程改造的微生物(如大肠杆菌或谷氨酸棒杆菌)全细胞催化底物合成麦角硫因，是低成本规模化生产麦角硫因的主流方向，可以通过代谢调控等发酵过程控制手段有效地提高麦角硫因的产率，降低生产成本。
4.生物合成法相比较来说是一种既安全、又低成本的方法，但在产业化生物合成中，麦角硫因含量的检测是指导优化底物转化条件、提供产物得率的关键，需要快速检测麦角硫因的方法。


技术实现要素：

5.[技术问题]
[0006]
本发明要解决的技术问题是，为产业化生物合成麦角硫因提供快速检测麦角硫因的方法。
[0007]
[技术方案]
[0008]
本发明提供利用紫外分光光度计快速检测麦角硫因的方法，包括以下步骤：
[0009]
步骤(1)：建立麦角硫因浓度与a
254
吸光值的标准曲线，
[0010]
具体地，
[0011]
配置一系列不同浓度的麦角硫因标准品溶液，在紫外可见分光光度计的254nm波长处，测定吸光值，用水调零；记录不同浓度的麦角硫因标准品的a
254
值；制作麦角硫因浓度与a
254
值关系的标准曲线，y为麦角硫因含量(mg/l)，x为a
254
吸光值。
[0012]
步骤(2)：测定样品的麦角硫因含量，
[0013]
具体地，
[0014]
取麦角硫因发酵液，离心后取上清并用纯水稀释，并在紫外可见分光光度计的254nm波长处，测定发酵上清液的吸光值，将发酵上清液的a
254
值代入标准曲线，计算得到发酵液中的麦角硫因含量。
[0015]
所述麦角硫因发酵液是以重组菌或野生菌作为菌种发酵得到的，例如表达麦角硫
因合成基因簇egtabcde与麦角硫因合成途径酶egt1基因的重组大肠杆菌。
[0016]
[有益效果]
[0017]
本发明通过全波长扫描，发现egt在254nm、210nm有特征吸收峰，但是考虑到很多含c＝o的化合物在210nm有较强的吸收峰，因此以254nm作为麦角硫因的检测波长。对麦角硫因的标准品进行适当稀释后，使其吸光值(a
254
)在0.1-1.0之间，建立麦角硫因浓度与吸光值的相关性曲线，通过测定a
254
的值，即可算出发酵液中的麦角硫因的含量。
附图说明
[0018]
图1麦角硫因浓度与a
254
吸光值的标准曲线。
[0019]
图2hplc检测发酵液的含量。
具体实施方式
[0020]
实施例1
[0021]
步骤(1)：建立麦角硫因浓度与a
254
吸光值的标准曲线。
[0022]
(1)取15*150mm的试管若干，分别加入用纯水稀释且终浓度分别为2.5、3.0、4.0、5.0、10.0mg/l的麦角硫因标准品，每个浓度设三个平行样。
[0023]
(2)打开紫外可见分光光度计，充分预热后，将波长调至254nm处，在光程为1cm的石英比色皿中，用水调零。
[0024]
(3)检测并记录不同浓度的麦角硫因标准品的a
254
值，取平均值后绘图。
[0025]
表1麦角硫因含量与a
254
吸光值
[0026]
麦角硫因含量a
254
吸光平均值2.50.24230.30340.34850.466100.831
[0027]
(4)制作麦角硫因含量与a
254
值关系标准曲线。
[0028]
如图1所示，麦角硫因浓度与a
254
吸光值的线性关系是y＝x*11.487*稀释倍数，y为麦角硫因含量(mg/l)，x为a
254
吸光值，r2＝0.9823。
[0029]
步骤(2)：测定样品的麦角硫因含量。
[0030]
(1)取发酵液(重组大肠杆菌发酵液)，离心后取上清，用纯水稀释，每个浓度设三个平行样。
[0031]
(2)打开紫外可见分光光度计，充分预热后，将波长调至254nm处，在光程为1cm的石英比色皿中，用水调零。
[0032]
(3)检测并记录稀释后的发酵上清液的a
254
值(读数在0.1～1.0范围，超过此范围需要重新稀释)，取平均值后，用公式计算发酵液中的麦角硫因含量。
[0033]
分别用a
254
和hplc方法(图2)，对发酵液的麦角硫因含量进行检测，通过计算，hplc检测出的结果为3.034g/l，a
254
检测结果为3.199g/l，误差为5.4％。麦角硫因紫外分光光度计快速检测法具有灵敏度高、准确度高、分析成本低、操作简便、快速等优点，值得推广。
[0034]
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。


技术特征：
1.利用紫外分光光度计检测麦角硫因含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：建立麦角硫因溶液的浓度与麦角硫因溶液a
254
吸光值的标准曲线，步骤(2)：测定样品的a
254
吸光值，代入标准曲线计算得到麦角硫因含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)，配置一系列不同浓度的麦角硫因标准品溶液，在紫外可见分光光度计的254nm波长处，测定吸光值，用水调零；记录不同浓度的麦角硫因标准品的a
254
值；制作麦角硫因浓度与a
254
值关系的标准曲线，y为麦角硫因含量(mg/l)，x为a
254
吸光值。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)，取麦角硫因发酵液，离心后取上清并用纯水稀释，并在紫外可见分光光度计的254nm波长处，测定发酵上清液的吸光值，将发酵上清液的a
254
值代入标准曲线，计算得到发酵液中的麦角硫因含量。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，一系列不同浓度的麦角硫因标准品溶液是2.5、3.0、4.0、5.0、10.0mg/l的麦角硫因水溶液。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述麦角硫因发酵液是以重组大肠杆菌或重组谷氨酸棒杆菌作为菌种发酵得到的。

技术总结
本发明公开了一种利用紫外分光光度计快速检测麦角硫因的方法，属于检测技术领域。本发明首先建立麦角硫因溶液的浓度与麦角硫因溶液A


技术研发人员：张山 宁健飞 董亮
受保护的技术使用者：无锡晶扬生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.17
技术公布日：2022/8/30