一种乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法与流程

技术特征：
1.一种乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，其特征在于，通过加热法后离心的方法得供试液，包括：步骤a. 取乳制品样品，加入 1-10 倍体积的超纯水混匀，加热至 80-100℃热处理10-30 min 后，降至室温，在0-10℃范围内，离心，收集清液作为供试液。2.如权利要求1所述乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，其特征在于，还包括步骤b：向步骤a所得供试液中，加入有机溶剂，振荡或涡旋混匀，于 0-10℃范围内离心，收集清液作为供试液，所述有机溶剂与水互溶；优选的，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈中的一种或多种；优选的，所述有机溶剂的加入量为步骤a超纯水体积的0.5-1倍。3.如权利要求1或2所述乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，其特征在于，还包括步骤c. 向所述供试液中，加入有机溶剂，振荡或涡旋混匀，于 0-10℃范围内离心，收集水相作为供试液；所述有机溶剂选自丁醇、二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯中的一种或多种；优选的，所述有机溶剂的加入量为步骤a超纯水体积的0.7-1.5倍。4.如权利要求1-3任一项所述的预处理方法，其特征在于，满足以下条件之一项或多项：i. 步骤a加入超纯水后，加热至85-100℃热处理20-30 min；ii. 步骤a加入超纯水后，加热至90-100℃热处理20-30min；iii.. 步骤b所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈中的一种或多种；iv. 步骤a和步骤b所述离心条件为0-5℃，5000-15000
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g 离心5-30 min；v. 步骤a和步骤b所述离心条件为4℃，10000-15000
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g 离心10-20 min；vi. 步骤c所述有机溶剂选自丁醇、二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯中的一种或多种；vii.所述人乳寡糖包括乳糖-n-四糖和/或乳糖-n-三糖。5.一种乳制品中人乳寡糖的定性和/或定量检测方法，其特征在于，包括权利要求1和/或权利要求2和/或权利要求3和/或权利要求4所述预处理方法，还包括如下步骤：步骤d.通过高效液相色谱法对供试液中的人乳寡糖进行定性和/或定量分析。6.如权利要求5所述乳制品中人乳寡糖的定性和/或定量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法，色谱柱选自亲水性色谱柱或疏水性色谱柱；所述亲水性色谱柱填料选自硅胶、极性基团键合相硅胶或葡聚糖；所述极性基团键合相硅胶中的极性基团选自酰胺基、脲基、氰基、氨基、羧基、糖基和两性离子中的一种或多种；所述色谱柱填料选自氨丙基键合硅胶。7.如权利要求5或6所述乳制品中人乳寡糖的定性和/或定量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法所用色谱柱选自氨丙基键合硅胶色谱柱，是指硅胶基质键合氨丙基，所述高效液相色谱法采用的检测器选自示差折光检测器、紫外检测器或二极管阵列检测器；检测波长为 180-280 nm。8.如权利要求5-7任一项所述乳制品中人乳寡糖的定性和/或定量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的流动相为水和有机溶剂，其体积比为 10/90~90/10，使用等度洗脱或梯度洗脱；所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、乙腈中的一种或多种；优选的，所述流动相为 60-75% (v/v)的乙腈水溶液；进一步优选的，所述流动为 65-70% (v/v)的乙腈水溶液。
9.如权利要求5-8任一项所述乳制品中人乳寡糖的定性和/或定量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的流动相流速为 0.2-1 ml/min，柱温为20-60℃；优选的，流动相流速为 0.4-0.8 ml/min；进一步优选的，流动相流速为 0.5-0.6 ml/min。10.如权利要求5所述乳制品中人乳寡糖的定性和/或定量检测方法，其特征在于，所述人乳寡糖为乳糖-n-四糖和/或乳糖-n-三糖。

技术总结
本发明涉及乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法。本发明通过加热法去除蛋白质，如果需要，再利用有机溶剂进一步去除干扰成分或脂质，得乳制品供试液，采用高效液相色谱法进行乳制品供试液检测，根据标准曲线对乳制品中的人乳寡糖进行定性定量分析。本发明提供了一种乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法，该方法能够准确、快速的检测乳制品中的人乳寡糖。快速的检测乳制品中的人乳寡糖。


技术研发人员：方诩 牛康乐 姜福娇 黄爱玲 宋江辉
受保护的技术使用者：山东恒鲁生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.04
技术公布日：2022/8/30