一种降低阿霉素诱导的小鼠肾损伤的方法与流程

1.本发明涉及医药技术领域，涉及一种雷公藤多苷的应用，尤其涉及一种降低阿霉素诱导的小鼠肾损伤的方法。


背景技术：

2.阿霉素又称多柔比星，其与环磷酰胺、长春新碱和泼尼松的联合应用是广泛应用于肿瘤治疗的一线化疗方案。阿霉素的抗肿瘤作用具有广谱性，在治疗恶性淋巴瘤等顽固性肿瘤方面均为首选药物。然而，阿霉素对人体细胞具有显著的细胞毒性作用。许多肿瘤患者在服用阿霉素治疗的同时还得服用大量昂贵的保护肾脏的辅助药物。尽管如此，因阿霉素药物毒性作用导致终末期肾病死亡的人数仍旧逐年升高。因此，寻找一种毒性作用小，经济实惠的辅助药物对于改善癌症患者的生理和生活质量十分重要。
3.近几年的研究发现中草药提取物对于药物所致的肾毒性具有明显的缓解作用。雷公藤多苷（tripterygium glycosides,tg）是从中药雷公藤植物根中提取的总苷，现代药理研究表明其具有抗炎、抗肿瘤和免疫调节作用，临床上用于治疗紫癜性肾炎、肾病综合征、糖尿病肾病和狼疮性肾炎等多种肾脏疾病。足细胞是许多慢性肾脏疾病的主要靶标，而多项研究表明雷公藤多苷对于多种因素诱导的足细胞损伤均具有缓解作用，但现有技术中并未有关于抑制足细胞凋亡，雷公藤多苷对阿霉素引起的肾毒性的研究。具有很好的药用价值和应用前景。


技术实现要素：

4.鉴于背景技术存在的不足，本发明涉及一种降低阿霉素诱导的小鼠肾损伤的方法，雷公藤多苷对阿霉素引起的肾毒性具有很好的药用价值和应用前景。
5.本发明涉及一种降低阿霉素诱导的小鼠肾损伤的方法，所述方法具体为通过雷公藤多苷降低阿霉素诱导的小鼠肾损伤。
6.本发明还提供了雷公藤多苷在制备降低阿霉素诱导的肾毒性药物中的用途。
7.进一步的，所述降低阿霉素诱导的肾毒性药物含有药学上有效量的雷公藤多苷的含量小于137.5μg/kg。
8.进一步的，所述降低阿霉素诱导的肾毒性药物可以被制成任何一种药学上可接受的剂型。
9.进一步的，所述剂型包括但不限于混悬剂、乳剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂。
10.本发明还提供了雷公藤多苷关于抑制肾毒性的治疗应用。
11.本发明的主要有益效果：1、本发明提供了传统中草药提取物雷公藤多苷新的临床用途。
12.2、雷公藤多苷可显著抑制阿霉素诱导的肾损伤，是改善阿霉素肾毒性的有力辅助剂。
13.3、雷公藤多苷易于从植物中获取，价格低廉，并且具有良好的安全性，可以广泛生产应用。
附图说明
14.图1、雷公藤多苷对足细胞和阿霉素诱导的足细胞活力的影响；图2、雷公藤多苷对阿霉素诱导的足细胞细胞周期的影响；图3、雷公藤多苷对阿霉素诱导的足细胞细胞凋亡的影响。
具体实施方式
15.以下将结合本发明的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述和讨论，显然，这里所描述的仅仅是本发明的一部分实例，并不是全部的实例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
16.下面结合附图和具体实施案例对本发明作进一步详细说明。其中，雷公藤多苷的获取方式可选但不限于：化学分离或合成或从商业途径购买。
17.1.实验细胞及主要试剂：体外培养的永生型小鼠足细胞mpc5购于ximbio公司。雷公藤多苷购于浙江迪恩药业。阿霉素购于德国默克公司。
18.2.实验分组实验分成四组：对照组，模型组，模型 低剂量雷公藤多苷组，模型 高剂量雷公藤多苷组。对照组细胞正常培养。模型组细胞需要与100 nmol/l阿霉素共同孵育24小时。模型 低剂量雷公藤多苷组细胞先与0.63 μg/ml雷公藤多苷孵育1小时随后再与100 nmol/l阿霉素共同孵育24小时。模型 高剂量雷公藤多苷组细胞先与1.25 μg/ml雷公藤多苷孵育1小时随后再与100 nmol/l阿霉素共同孵育24小时。
19.本发明的实施例1，涉及采用cck8检测不同浓度雷公藤多苷对足细胞活力的影响以及雷公藤多苷对阿霉素诱导的足细胞细胞活力的影响，具体实验方法如下：1、收集对数期细胞， 调整细胞悬液浓度并于5％co2， 温度37℃孵育。加入雷公藤多苷，使其最终浓度达到0.63 μg/ml，1.25 μg/ml，2.5 μg/ml，5 μg/ml，每组设置4个复孔，并设置空白对照组，在5％ co2， 温度 37℃， 共同培育24小时，每孔加入10μl cck8溶液，避光继续孵育1小时后，在450 nm处观察每组的吸光度，实验重复3次。
20.2、将mpc5细胞以2
×
103细胞/孔的密度接种在96孔板中。 在按照实验分组进行不同的药物处理后，将10μl cck-8溶液添加到每孔中。 在37℃温育1小时后，通过酶标仪测量每孔在450nm的吸光度。结果见图1。
21.结论：如图1a所示，0.63 μg/ml和1.25 μg/ml这两种浓度的雷公藤多苷对足细胞的细胞活力没有显著影响，而2.5 μg/ml和5 μg/ml这两种浓度的雷公藤多苷能明显抑制足细胞的活力。因此后续实验选择0.63 μg/ml和1.25 μg/ml这两个浓度，以排除雷公藤多苷对细胞的毒性作用。如图1b所示，与对照组相比，模型组足细胞的活力受到明显抑制，而雷公藤多苷以浓度依赖的方式提升了阿霉素诱导的足细胞的活力。
22.本发明的实施例2，涉及采用流式细胞仪检测雷公藤多苷对阿霉素诱导的足细胞
细胞周期阻滞的作用，具体实验方法如下：收集药物处理后的细胞于流式管；pbs洗涤细胞1次；将细胞加入1毫升冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃固定12小时。离心、pbs洗涤细胞，收集细胞后每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。染色完成后在24小时内完成流式检测。结果见图2。
23.结论：如图2所示，与对照组相比，模型组细胞在g0/g1期的占比更多，而在s期和g2/m期的占比更少，说明阿霉素能诱导足细胞周期阻滞在g0/g1期。而雷公藤多苷能以浓度依赖的方式减少阿霉度诱导的足细胞在g0/g1期的细胞比例，增加在s和g2/m期的比例。
24.本发明的实施例3，涉及采用流式细胞仪检测雷公藤多苷对阿霉素诱导的足细胞细胞凋亡的作用，具体实验方法如下：收集药物处理后的细胞于流式管；pbs洗涤细胞1次；在冰上，配置1
×
annexin-binding buffer并用其重悬细胞。重悬后的细胞加入5μl annexin v和10μl pi，室温下避光孵育5分钟。流式细胞仪上机检测细胞凋亡。结果见图3。
25.结论：如图3所示，与对照组相比，模型组细胞的凋亡率明显升高，说明阿霉素能诱导足细胞凋亡。而使用低、高浓度的雷公藤多苷预处理后，阿霉素诱导的足细胞的凋亡率得到了明显缓解，说明雷公藤多苷能逆转阿霉素对足细胞的凋亡作用。
26.最后应说明的是：以上所述实施例，仅为本发明的具体实施方式，用以说明本发明技术方案，而非对其限制，本发明的保护范围并不局限于此，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改或可轻易想到变化，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改、变化或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。