一类具有抗肺癌作用的化合物及其制备方法和应用

1.本发明属于医药化学技术领域，具体涉及一类具有抗肺癌作用的化合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.肺癌是全球发病高居第二的癌症，对人类健康有巨大威胁，铂类药物是非常重要的抗肺癌药物。据悉，铂类药物表现出与传统有机药物完全不同的作用机制和动力学，即顺铂在细胞分裂过程中可与细胞核内的dna形成交联或引起dna内部交联以抑制细胞分裂，以此达到抗肿瘤的目的。因此，顺铂于1978年被fda批准用于临床治疗各种癌症，该药对肺癌、膀胱癌、睾丸癌、早期卵巢癌、头颈癌和乳腺癌有很好的疗效。然而，随着铂类药物的广泛应用，该类药物的耐药性和全身毒副作用也不可忽视。而且现有的铂类药物不能很好地区分癌细胞和正常细胞，导致生物利用度低，并诱发一系列全身毒性。因此，开发新的铂类药物是当今研究的热点。
3.近年来，四价铂[pt(iv)]类前药物因其优异的抗肿瘤疗效而受到广泛关注，这种前药是在二价铂[pt(ii)]药物的基础上通过引入轴向配体形成的，四价铂前药通常比相应的二价铂类药物表现出更好的抗肿瘤潜力。另外，在过去的二十年里针对egfr和btk的不可逆抑制剂取得了前所未有的成功，这些抑制剂的核心是结构中的不饱和键(双键和三键)可以与靶蛋白的半胱氨酸发生反应，形成不可逆的共价加合物。


技术实现要素：

[0004]
针对上述现有技术，本发明提供一类具有抗肺癌作用的化合物及其制备方法和应用，以解决现有铂类药物存在的耐药性、全身毒副作用等问题。
[0005]
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：一类具有抗肺癌作用的化合物，化合物的结构式为
[0006][0007]
其中，r1和r2均为吸电子基团。
[0008]
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0009]
进一步，r1和r2分别独立的为
[0010]
进一步，r1和r2相同。
[0011]
本发明还提供了上述具有抗肺癌作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0012]
(1)将如式i所示化合物溶于有机溶剂中，再加入碱，于室温下搅拌反应0.4～0.6h，再逐滴加入1-溴-2-丁炔或3-溴丙烯并于室温下搅拌过夜，其后依次进行萃取、洗涤、干燥、纯化处理，得如式ii所示化合物；
[0013][0014]
其中，r3为
[0015]
(2)将如式ii所示化合物溶于有机溶剂中，再加入三氟乙酸，室温下搅拌反应3～5h，其后依次进行浓缩、碱化、分液、洗涤、纯化处理，得如式iii所示化合物；
[0016][0017]
(3)将如式iii所示化合物溶于有机溶剂中，再加入环戊二酸酐，室温下搅拌过夜，其后依次进行浓缩、过滤、洗涤、干燥处理，得如式iv所示化合物；
[0018][0019]
(4)将如式iv所示化合物溶于有机溶剂中，再加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐和三乙胺，室温下搅拌反应0.4～0.6h，其后加入二羟基二氯二氨铂，再于避光、室温下搅拌反应两天，其后浓缩、纯化，即得。
[0020]
进一步，步骤(1)中如式i所示化合物、碱、1-溴-2-丁炔或3-溴丙烯的摩尔比为9～11：12～14：11～13；步骤(1)中纯化为柱层析，所用试剂为体积比为1：6～20的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液。
[0021]
进一步，步骤(2)中如式ii所示化合物与三氟乙酸的用量比为8mmol：3～5ml；步骤(2)中纯化为柱层析，所用试剂为体积比为1：4～9的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液。
[0022]
进一步，步骤(2)中如式ii所示化合物与三氟乙酸的用量比为8mmol：3～5ml；步骤(2)中纯化为柱层析，所用试剂为体积比为1：4～9的乙酸乙酯和正己烷的混合溶液。
[0023]
进一步，步骤(3)中如式iii所示化合物和环戊二酸酐的摩尔比为2～4：3。
[0024]
进一步，步骤(4)中如式iv所示化合物、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐、三乙胺和二羟基二氯二氨铂的摩尔比为0.7～0.8：0.7～0.8：0.7～0.8：0.2～0.4；步骤(4)中纯化为柱层析，所用试剂为体积比为1：9～99的甲醇和二氯甲烷的混合溶液。
[0025]
进一步，二羟基二氯二氨铂由以下步骤制得：二羟基二氯二氨铂由以下步骤制得：在室温下，向顺铂的水溶液中滴加h2o2，再于50～70℃搅拌3～5h，其后过滤，滤液于0～4℃
重结晶、过滤，再洗涤、干燥，即得。
[0026]
本发明还提供了上述具有抗肺癌作用的化合物在制备抗肺癌药物中的应用。
[0027]
本发明的有益效果是：
[0028]
1、本发明将含有多重键(双键或三键)的配体引入顺铂形成前药，改善顺铂的药物吸收，同时发挥顺铂和多重键配体的协同作用，增强药物治疗肺癌的效果，部分化合物对顺铂耐药a549细胞的抑制能力明显高于药物顺铂。
[0029]
2、产生顺铂耐药的原因与含半胱氨酸的谷胱甘肽的解毒作用密切相关，引入多重键配体作为pt(iv)前药的轴向配体，有助于增强药物对靶蛋白的作用，增加吸收并减少副作用，增强铂类药物对实体瘤特别是肺癌的治疗效果。
附图说明
[0030]
图1为化合物16、28抑制肺癌细胞克隆形成的结果图；
[0031]
图2为化合物16、28促进细胞凋亡的结果图；
[0032]
图3为化合物16、28促进凋亡蛋白表达的结果图；
[0033]
图4、5为化合物16、28抑制肺癌a549细胞皮下肿瘤生长的结果图
[0034]
图6为本发明的合成流程图；
[0035]
图7、8为本发明制备的化合物15的氢谱、碳谱图；
[0036]
图9、10为本发明制备的化合物16的氢谱、碳谱图；
[0037]
图11、12为本发明制备的化合物17的氢谱、碳谱图；
[0038]
图13、14为本发明制备的化合物27的氢谱、碳谱图；
[0039]
图15、16为本发明制备的化合物28的氢谱、碳谱图；
[0040]
图17、18为本发明制备的化合物29的氢谱、碳谱图。
具体实施方式
[0041]
下面结合实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
[0042]
实施例1
[0043]
一种具有抗肺癌作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0044]
(1)在室温下，向10.0mmol 2-(boc-氨甲基)苯酚的无水n,n-二甲基甲酰胺溶液(15ml)中加入13.0mmol cs2co3并搅拌0.5h，再逐滴加入12.0mmol 1-溴-2-丁炔并于室温下搅拌过夜，通过lc-ms监测反应，其后用30ml水淬灭，再用30ml乙酸乙酯萃取2次，其后合并有机相并用40ml水洗涤2次、40ml盐水洗涤1次，再用6g无水硫酸钠干燥，其后通过柱层析(乙酸乙酯/正己烷(体积比：1：12，1.2l))纯化，得白色固体化合物6(图6中化合物6)；
[0045]
化合物6(2-(丁-2-炔-1-基氧)苯基)碳酸叔丁酯)，91.6％；ms(esi,m/z):262[m h]

.
[0046]
(2)室温下，将8.0mmol化合物6溶于12ml干燥的二氯甲烷中，再向其中加入4ml三氟乙酸并于室温下搅拌反应4h，通过lc-ms监测反应，其后浓缩反应所得混合物并除去二氯甲烷和三氟乙酸，再用30ml水和40ml二氯甲烷稀释，其后用1mol/l的氢氧化钠溶液将混合液的ph值调节至8.5，接着进行分液，再对所得有机相用30ml水洗涤和30ml盐水洗涤，其后通过柱层析(乙酸乙酯/正己烷(体积比：1：6，1.2l))纯化，得浅棕色油状产物(图6中化合物
9)；
[0047]
化合物9(2-(丁-2-炔-1-基氧)苯胺)，78.4％；ms(esi,m/z):162[m h]

.
[0048]
(3)室温下，将3.0mmol浅棕色油状产物溶于15ml干燥的二氯甲烷中，再向其中加入3.0mmol环戊二酸酐并于室温下搅拌过夜，通过lc-ms监测反应，其后浓缩反应所得混合物并除去二氯甲烷，然后加入二氯甲烷(5ml)和正己烷(15ml)形成悬浊液，其后过滤，再用2ml正己烷洗涤滤饼2次，接着进行真空干燥，得白色固体化合物12(图6中化合物12)；
[0049]
化合物12(5-((2-(丁-2-炔-1-基氧)苯基)氨基)-5-氧戊酸)，808mg,97.8％，纯度:98.7％；1h nmr(400mhz,dmso)δ12.05(s,1h),9.05(s,1h),7.88(d,j＝7.7hz,1h),7.10-7.04(m,2h),6.91(t,j＝7.5hz,1h),4.79(s,2h),2.40(t,j＝7.1hz,2h),2.27(t,j＝7.4hz,2h),1.83-1.75(m,5h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ174.21,170.91,147.99,127.70,124.20,122.71,120.77,112.81,83.83,74.74,56.49,35.17,33.02,20.64,3.20ppm.ms(esi,m/z):276[m h]

.
[0050]
(4)室温下，将0.75mmol化合物12溶于2.0ml干燥的n,n-二甲基甲酰胺中，再依次向其中加入0.75mmol 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)、0.75mmol三乙胺并搅拌0.5h，其后加入0.3mmol二羟基二氯二氨铂，再锡箔纸包裹反应瓶避光、于室温下搅拌反应两天，通过lc-ms监测反应，其后通过蒸发除去n,n-二甲基甲酰胺，再将残余物经柱层析(甲醇/二氯甲烷(体积比：1：45，1.0l)纯化，得白色固体化合物15(图6中化合物15)。
[0051]
化合物15，295mg,46.3％,纯度:97.6％.1h nmr(400mhz,dmso)δ8.94(s,2h),7.93(d,j＝7.3hz,2h),7.10-7.03(m,4h),6.91(t,j＝7.3hz,2h),6.54(s,6h),4.80(s,4h),2.41(t,j＝6.3hz,4h),2.29(t,j＝7.1hz,4h),1.83-1.75(m,10h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ180.40,171.19,147.71,127.74,124.04,122.33,120.75,112.73,83.88,74.74,56.47,35.45,35.05,21.73,3.23ppm.ms(esi,m/z):848[m h]

.
[0052]
其中，二羟基二氯二氨铂由以下步骤制得：在室温下，将6.7mmol顺铂加入60ml蒸馏水中，再向其中滴加100ml 30％的h2o2，再于60℃搅拌4h，其后过滤，滤液于2℃重结晶、过滤，再用3ml h2o洗涤2次，其后于60℃真空干燥，即可。(获得二羟基二氯二氨铂1.69g，其得率为76％)
[0053]
实施例2
[0054]
一种具有抗肺癌作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0055]
(1)在室温下，向10.0mmol 3-(boc-氨基)苯酚的无水n,n-二甲基甲酰胺溶液(15ml)中加入13.0mmol cs2co3并搅拌0.4h，再逐滴加入12.0mmol 1-溴-2-丁炔并于室温下搅拌过夜，通过lc-ms监测反应，其后用30ml水淬灭，再用30ml乙酸乙酯萃取2次，其后合并有机相并用40ml水洗涤2次、40ml盐水洗涤1次，再用6g无水硫酸钠干燥，其后通过柱层析(乙酸乙酯/正己烷(体积比：1：6，1.2l))纯化，得白色固体化合物7(图6中化合物7)；
[0056]
化合物7(3-(丁-2-炔-1-基氧)苯基)碳酸叔丁酯7，92.8％；ms(esi,m/z):262[m h]

.
[0057]
(2)室温下，将8.0mmol化合物7溶于12ml干燥的二氯甲烷中，再向其中加入4ml三氟乙酸并于室温下搅拌反应3h，通过lc-ms监测反应，其后浓缩反应所得混合物并除去二氯甲烷和三氟乙酸，再用30ml水和40ml二氯甲烷稀释，其后用1mol/l的氢氧化钠溶液将混合
液的ph值调节至8，接着进行分液，再对所得有机相用30ml水洗涤和30ml盐水洗涤，其后通过柱层析(乙酸乙酯/正己烷(体积比：1：4，1.2l))纯化，得浅棕色油状产物(图6中化合物10)；
[0058]
化合物10 3-(丁-2-炔-1-基氧)苯胺10 83.1％；ms(esi,m/z):162[m h]

.
[0059]
(3)室温下，将3.0mmol浅棕色油状产物溶于15ml干燥的二氯甲烷中，再向其中加入3.0mmol环戊二酸酐并于室温下搅拌过夜，通过lc-ms监测反应，其后浓缩反应所得混合物并除去二氯甲烷，然后加入二氯甲烷(5ml)和正己烷(15ml)形成悬浊液，其后过滤，再用2ml正己烷洗涤滤饼2次，接着进行真空干燥，得白色固体化合物13(图6中化合物13)；
[0060]
化合物13 5-((3-(丁-2-炔-1-基氧)苯基)氨基)-5-氧戊酸816mg,98.8％；纯度:96.8％.1h nmr(400mhz,dmso)δ12.08(s,1h),9.88(s,1h),7.28-7.14(m,3h),6.65-6.62(m,1h),4.68-4.67(m,2h),2.35-2.24(m,4h),1.83-1.77(m,5h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ174.19,170.81,157.68,140.42,129.42,111.90,109.09,105.86,83.46,74.81,55.76,35.44,32.98,20.40,3.20ppm.ms(esi,m/z):276[m h]

.
[0061]
(4)室温下，将0.75mmol化合物13溶于2.0ml干燥的n,n-二甲基甲酰胺中，再依次向其中加入0.75mmol 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)、0.75mmol三乙胺并搅拌0.4h，其后加入0.3mmol二羟基二氯二氨铂，再锡箔纸包裹反应瓶避光、于室温下搅拌反应两天，通过lc-ms监测反应，其后通过蒸发除去n,n-二甲基甲酰胺，再将残余物经柱层析(甲醇/二氯甲烷(体积比：1：9，1.0l)纯化，得白色固体化合物16(图6中化合物16)。
[0062]
化合物16，358mg,56.3％，纯度:97.2％.1h nmr(400mhz,dmso)δ9.82(s,2h),7.29-7.17(m,6h),6.64-6.55(m,8h),4.68(s,4h),2.35-2.27(m,8h),1.83-1.73(m,10h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ180.32,171.14,157.67,140.42,129.40,111.89,109.05,105.83,83.45,74.81,55.76,35.73,35.00,21.54,3.21ppm.ms(esi,m/z):848[m h]

.
[0063]
其中，二羟基二氯二氨铂由以下步骤制得：在室温下，将6.7mmol顺铂加入60ml蒸馏水中，再向其中滴加100ml 30％的h2o2，再于50℃搅拌5h，其后过滤，滤液于0℃重结晶、过滤，再用3ml h2o洗涤2次，其后于50℃真空干燥，即可。
[0064]
实施例3
[0065]
一种具有抗肺癌作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0066]
(1)在室温下，向10.0mmol 4-(boc-氨基)酚的无水n,n-二甲基甲酰胺溶液(15ml)中加入13.0mmol cs2co3并搅拌0.6h，再逐滴加入12.0mmol 1-溴-2-丁炔并于室温下搅拌过夜，通过lc-ms监测反应，其后用30ml水淬灭，再用30ml乙酸乙酯萃取2次，其后合并有机相并用40ml水洗涤2次、40ml盐水洗涤1次，再用6g无水硫酸钠干燥，其后通过柱层析(乙酸乙酯/正己烷(体积比：1：6，1.2l))纯化，得白色固体化合物8(图6中化合物8)；
[0067]
化合物8(4-(丁-2-炔-1-基氧)苯基)碳酸叔丁酯8，93.5％；ms(esi,m/z):262[m h]

.
[0068]
(2)室温下，将8.0mmol化合物8溶于12ml干燥的二氯甲烷中，再向其中加入4ml三氟乙酸并于室温下搅拌反应5h，通过lc-ms监测反应，其后浓缩反应所得混合物并除去二氯甲烷和三氟乙酸，再用30ml水和40ml二氯甲烷稀释，其后用1mol/l的氢氧化钠溶液将混合液的ph值调节至9，接着进行分液，再对所得有机相用30ml水洗涤和30ml盐水洗涤，其后通
过柱层析(乙酸乙酯/正己烷(体积比：1：4，1.2l))纯化，得浅棕色油状产物(图6中化合物11)；
[0069]
化合物11 4-(丁-2-炔-1-基氧)苯胺11，92.4％；ms(esi,m/z):162[m h]

.
[0070]
(3)室温下，将3.0mmol浅棕色油状产物溶于15ml干燥的二氯甲烷中，再向其中加入3.0mmol环戊二酸酐并于室温下搅拌过夜，通过lc-ms监测反应，其后浓缩反应所得混合物并除去二氯甲烷，然后加入二氯甲烷(5ml)和正己烷(15ml)形成悬浊液，其后过滤，再用2ml正己烷洗涤滤饼2次，接着进行真空干燥，得白色固体化合物14(图6中化合物14)；
[0071]
化合物14 5-((4-(丁-2-炔-1-基氧)苯基)氨基)-5-氧戊酸14，802mg，97.1％，纯度:99.1％.1h nmr(400mhz,dmso)δ12.07(s,1h),9.76(s,1h),7.49-7.47(m,2h),6.90-6.87(m,2h),4.67(d,j＝2.3hz,2h),2.32-2.24(m,4h),1.82-1.75(m,5h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ174.21,170.27,153.14,132.92,120.55,114.82,83.37,74.93,55.99,35.27,33.02,20.54,3.17ppm.ms(esi,m/z):276[m h]

.
[0072]
(4)室温下，将0.75mmol化合物14溶于2.0ml干燥的n,n-二甲基甲酰胺中，再依次向其中加入0.75mmol 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)、0.75mmol三乙胺并搅拌0.6h，其后加入0.3mmol二羟基二氯二氨铂，再锡箔纸包裹反应瓶避光、于室温下搅拌反应两天，通过lc-ms监测反应，其后通过蒸发除去n,n-二甲基甲酰胺，再将残余物经柱层析(甲醇/二氯甲烷(体积比：1：9，1.0l)纯化，得白色固体化合物17(图6中化合物17)。
[0073]
化合物17，377mg，59.2％，纯度:98.5％.1h nmr(400mhz,dmso)δ9.68(s,2h),7.49(d,j＝9.0hz,4h),6.88(d,j＝9.0hz,4h),6.54(s,6h),4.67(d,j＝2.3hz,4h),2.29(q,j＝7.4hz,8h),1.82-1.73(m,10h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ180.34,170.58,153.11,132.91,120.53,114.79,83.35,74.92,55.97,35.56,35.04,21.66,3.16ppm.ms(esi,m/z):848[m h]

.
[0074]
其中，二羟基二氯二氨铂由以下步骤制得：在室温下，将6.7mmol顺铂加入60ml蒸馏水中，再向其中滴加100ml 30％的h2o2，再于70℃搅拌3h，其后过滤，滤液于4℃重结晶、过滤，再用3ml h2o洗涤2次，其后于70℃真空干燥，即可。
[0075]
实施例4
[0076]
一种具有抗肺癌作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0077]
(1)将实施例1中步骤(1)中的1-溴-2-丁炔改为3-溴丙烯，其余与实施例1步骤(1)相同，得图6中化合物18；
[0078]
化合物18(2-(烯丙氧)苯基)碳酸叔丁酯，92.9％；ms(esi,m/z):250[m h]

.
[0079]
(2)与实施例1中步骤(2)相同，得图6中化合物21；
[0080]
化合物21 2-(烯丙氧基)苯胺，75.8％；ms(esi,m/z):150[m h]

.
[0081]
(3)与实施例1中步骤(3)相同，得图6中化合物24；
[0082]
化合物24 5-((2-(烯丙氧基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸，779mg,98.1％，purity:99.3％.1h nmr(400mhz,dmso)δ12.05(s,1h),8.99(s,1h),7.85(d,j＝7.5hz,1h),7.06
–
6.87(m,3h),6.11-6.02(m,1h),5.44
–
5.24(m,2h),4.62(d,j＝4.3hz,2h),2.41(t,j＝6.9hz,2h),2.27(t,j＝7.3hz,2h),1.83-1.76(m,2h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ174.17,170.80,148.90,133.69,127.51,124.42,122.80,120.37,117.35,112.66,68.87,35.19,
32.98,20.64ppm.ms(esi,m/z):264[m h]

.
[0083]
(4)与实施例1中步骤(4)相同，得图6中化合物27。
[0084]
化合物27，238mg,38.5％，纯度:97.2％.1h nmr(400mhz,dmso)δ8.88(s,2h),7.90(d,j＝7.5hz,2h),7.05-7.01(m,4h),6.88(t,j＝7.0hz,2h),6.53(s,6h),6.10-6.04(m,2h),5.44-5.25(m,4h),4.62(d,j＝4.6hz,4h),2.41(t,j＝6.8hz,4h),2.29(t,j＝7.3hz,4h),1.80-1.75(m,4h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ180.41,171.11,148.63,133.69,127.57,124.26,122.39,120.37,117.51,112.60,68.91,35.49,35.06,21.74ppm.ms(esi,m/z):824[m h]

.
[0085]
其中，二羟基二氯二氨铂制备方法与实施例1中制备方法相同。
[0086]
实施例5
[0087]
一种具有抗肺癌作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0088]
(1)将实施例1中步骤(1)中的1-溴-2-丁炔改为3-溴丙烯、2-(boc-氨甲基)苯酚改为3-(boc-氨基)苯酚，其余与实施例1步骤(1)相同，得图6中化合物19；
[0089]
化合物19(3-(烯丙氧)苯基)碳酸叔丁酯，96.1％；ms(esi,m/z):250[m h]

.hrms(esi,m/z):[m na]

理论值c
14h19
nnao
3
272.1257,实测值272.1254.
[0090]
(2)与实施例1中步骤(2)相同，得图6中化合物22；
[0091]
化合物22 3-(烯丙氧基)苯胺22，88.2％；ms(esi,m/z):150[m h]

.hrms(esi,m/z):[m h]

理论值c9h
12
no

150.0913,实测值150.0915.
[0092]
(3)与实施例1中步骤(3)相同，得图6中化合物25；
[0093]
化合物25 5-((3-(烯丙氧基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸，761mg,96.3％，purity:97.2％.1h nmr(400mhz,dmso)δ12.08(s,1h),9.86(s,1h),7.32(s,1h),7.19-7.08(m,2h),6.62-6.60(m,1h),6.07-5.98(m,1h),5.40-5.23(m,2h),4.51-4.50(m,2h),2.35-2.24(m,4h),1.82-1.75(m,2h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ174.19,170.81,158.42,140.45,133.72,129.44,117.38,111.50,109.11,105.66,68.07,35.45,32.98,20.40ppm.ms(esi,m/z):264[m h]

.
[0094]
(4)与实施例1中步骤(4)相同，得图6中化合物28。
[0095]
化合物28，268mg,43.4％，纯度:97.0％.1h nmr(400mhz,dmso)δ9.80(s,2h),7.34(s,2h),7.19-7.10(m,4h),6.62-6.55(m,8h),6.08-5.99(m,2h),5.38(d,j＝17.3hz,2h),5.25(d,j＝9.7hz,2h),4.52(s,4h),2.32-2.29(m,8h),1.78-1.75(m,4h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ180.33,171.14,158.41,140.45,133.71,129.43,117.38,111.50,109.11,105.62,68.07,35.74,35.00,21.54ppm.ms(esi,m/z):824[m h]

.
[0096]
其中，二羟基二氯二氨铂制备方法与实施例1中制备方法相同。
[0097]
实施例6
[0098]
一种具有抗肺癌作用的化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0099]
(1)将实施例1中步骤(1)中的1-溴-2-丁炔改为3-溴丙烯、2-(boc-氨甲基)苯酚改为4-(boc-氨基)酚，其余与实施例1步骤(1)相同，得图6中化合物20；
[0100]
化合物20(4-(烯丙氧)苯基)碳酸叔丁酯，93.5％；ms(esi,m/z):250[m h]

.
[0101]
(2)与实施例1中步骤(2)相同，得图6中化合物23；
[0102]
化合物23 4-(烯丙氧基)苯胺23，91.6％；ms(esi,m/z):150[m h]

.
[0103]
(3)与实施例1中步骤(3)相同，得图6中化合物26；
[0104]
化合物26 5-((4-(烯丙氧基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸，769mg,97.3％，purity:99.8％.1h nmr(400mhz,dmso)δ12.07(s,1h),9.74(s,1h),7.47(d,j＝9.0hz,2h),6.87(d,j＝9.0hz,2h),6.07-5.97(m,1h),5.40-5.22(m,2h),4.51(d,j＝5.2hz,2h),2.32-2.24(m,4h),1.83-1.75(m,2h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ174.20,170.21,153.93,133.90,132.61,120.58,117.31,114.63,68.32,35.28,33.02,20.54ppm.ms(esi,m/z):264[m h]

.
[0105]
(4)与实施例1中步骤(4)相同，得图6中化合物29。
[0106]
化合物29，393mg,63.5％，纯度:99.1％.1h nmr(400mhz,dmso)δ9.67(s,2h),7.48(d,j＝8.9hz,4h),6.87(d,j＝9.0hz,4h),6.54(s,6h),6.07-5.97(m,2h),5.40-5.22(m,4h),4.50(d,j＝5.2hz,4h),2.31-2.26(m,8h),1.80-1.73(m,4h)ppm.
13
c nmr(101mhz,dmso)δ180.36,170.55,153.91,133.90,132.61,120.58,117.32,114.62,68.32,35.58,35.05,21.68ppm.ms(esi,m/z):824[m h]

.
[0107]
其中，二羟基二氯二氨铂制备方法与实施例1中制备方法相同。
[0108]
实验例1
[0109]
图6中化合物15、16、17和化合物27、28、29抑制肺癌a549、a549r和hcc827细胞增殖作用：
[0110]
将肺癌细胞a549、a549r(顺铂耐药细胞)和hcc827按3000个/孔接种于96孔板中，将细胞置于co2培养箱中(37℃、5％co2)培养过夜。实验组分别加入化合物15、16、17和化合物27、28、29使其终浓度为0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.5、25、50μm，对照组加入相应体积的dmso。继续培养48小时后每孔加入20μl mtt溶液继续孵育4小时，吸弃培养基并加入200μldmso试剂，摇床(300rpm振摇10min)；使用酶标仪(biotek cytation5)读取570nm处od值，细胞生长抑制率＝(1-od实验/od对照)
×
100％，并利用graphpad prism 8计算ic50值，结果如表1所示。
[0111]
表1.化合物对肺癌细胞的ic50值(μm)
[0112]
化合物a549a549rhcc82715＞50＞50＞50163.17
±
0.072.01
±
0.281.06
±
0.04171.98
±
0.053.23
±
0.912.76
±
0.1227＞50＞50＞50282.36
±
0.191.52
±
0.041.37
±
0.05292.03
±
0.192.67
±
0.381.72
±
0.12
[0113]
实验例2
[0114]
图6中化合物16、28抑制肺癌细胞a549和a549r克隆形成：
[0115]
将a549和a549r细胞计数，按1000个细胞每孔接入6孔板中，接种24h后分别加入2μm化合物1(顺铂)、13、25、16或28，，置于37℃、5％co2培养箱中培养约14d；弃掉上清，细胞用4％多聚甲醛固定，结晶紫染色30min，pbs洗涤3次，每次2min。扫描仪扫描实验结果，并进行统计分析。结果如图1所示，化合物16、28与顺铂和dmso组相比，该化合物具有显著抑制肺癌细胞克隆形成的能力(**p＜0.01)，配体化合物13、化合物25对肺癌细胞克隆形成没有显著抑制活性。
[0116]
实验例3
[0117]
流式细胞术分析图6中化合物16、28促进细胞凋亡：
[0118]
取对数生长期的a549和a549r细胞，消化、计数，以2
×
106个/孔接种于6孔板中，co2培养箱培养24h；加入化合物16、28使其终浓度分别为2μm，设3个复孔，继续培养24h；收集含药物的培养基，并收集细胞至同一ep管中，1000r/min离心5min，弃上清液，用binding buffer调整细胞浓度为106个/ml；取100μl 106个/ml浓度的细胞悬液，加入5μl的annexinv-fitc和5μl的pi，室温避光放置15min；避光染色30min后上机检测细胞凋亡，每个样本检测10000个细胞。结果如图2所示，化合物16、28引起的细胞凋亡数量明显高于顺铂组和对照组。
[0119]
实验例4
[0120]
化合物16、28影响细胞凋亡相关蛋白表达：
[0121]
将a549细胞铺于6cm培养皿中，co2培养箱培养过夜；加入化合物16、28、顺铂使其终浓度分别为2μm，继续培养48h后，收集细胞。加入ripa裂解液(含蛋白酶抑制剂)破碎细胞，15000rpm离心30min，取上清；蛋白上清采用bca法定量，上样30μg总蛋白进行sds-page电泳；采用湿转方法将page胶上的蛋白转印至pvdf膜上，然后5％脱脂牛奶室温封闭2h，tbst洗涤5次，每次2min；bax、cleaved-parp抗体(1:1000)4℃孵育过夜，tbst洗涤5次，每次2min；二抗稀释比例为1:20000，室温孵育1h，tbst洗涤5次，每次2min；用li-cor odyessey激光扫描仪检测目的条带，保存图片。结果如图3所示，化合物16、28处理细胞后，引起凋亡蛋白bax、cleaved-parp表达上调，促进细胞凋亡。
[0122]
实验例5
[0123]
化合物16、28抑制肺癌a549细胞皮下肿瘤生长：
[0124]
将4周龄大的balb/c-nu雌性小鼠饲养于spf级动物房内，并在小鼠左上前肢皮下接种107个a549细胞，待肿瘤大小约100mm3时，将小鼠分为：对照组、顺铂5mg/kg、化合物16 5mg/kg组和化合物28 5mg/kg组，并进行给药。给药方式：腹腔给药；给药体积：100μl；给药频率：2天/次；给药次数：4次。并在给药同时，记录小鼠体重。在第一次给药后第21天处死小鼠，取出肿瘤进行拍照，并称重。实验结果如图4、5所示，化合物16、28能抑制a549皮下肿瘤的生长，具有显著的抗肿瘤活性，通过体重显示，化合物16、28无明显毒副作用。
[0125]
虽然结合实施例对本发明的具体实施方式进行了详细地描述，但不应理解为对本专利的保护范围的限定。在权利要求书所描述的范围内，本领域技术人员不经创造性劳动即可作出的各种修改和变形仍属本专利的保护范围。