含有脂肪微片段的药物及其在治疗关节炎中的应用

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及含有脂肪微片段的药物及其在治疗关节炎中的应用。


背景技术：

2.脂肪组织是我们人体储存物质的重要场所，不仅储存了巨大的能量，其中还含有丰富的多功能和多潜能的重要元件。脂肪微片段结构(niche)主要三维生物支架和群集细胞组成，三维生物支架由胶原、结缔组织网、微血管网，群集细胞包括周细胞(pericytes)、脂肪细胞、前脂肪细胞、间充质干细胞(msc)、内皮祖细胞、造血干细胞(hsc)、淋巴细胞和巨噬细胞等，群集细胞、细胞因子、外泌体嵌入三维生物支架中，能够最大程度的还原细胞生长的微环境。
3.梁津喜等(“利百健自体脂肪微片段治疗膝关节骨性关节炎的临床效果观察.”海峡药学30.8(2018):2)针对膝关节骨性关节炎患者应用利百健自体脂肪微片段进行治疗,并探究分析其疗效。方法选择60例患者作为本次研究对象,均为2015年8月至2017年8月在本院进行治疗的膝关节骨性关节炎患者,按照随机数字表法分成两组,其中30例对照组患者应用玻璃酸钠注射治疗,另外30例观察组患者应用利百健自体脂肪微片段进行治疗,对比分析两组患者治疗前后的疼痛程度及膝关节功能情况。结果：治疗后观察组的hss评分(89.16
±
6.35)分与vas评分(1.03
±
0.26)分显著优于对照组的(71.59
±
9.84)分与(3.12
±
0.52)分,其差别具有统计学意义(p0.05)。结论显示膝关节骨性关节炎患者应用利百健自体脂肪微片段治疗效果明显。
4.此外，刘训志等(“自体脂肪及滑膜间充质干细胞联合治疗膝骨关节炎的临床效果.”中国当代医药27.20(2020):4)探讨了自体脂肪及滑膜间充质干细胞联合治疗膝骨关节炎的临床效果。方法选取我院2018年1～11月收治的30例膝骨关节炎患者作为研究对象，依据治疗方式不同分为脂肪来源间充质干细胞(admscs)组(10例)、滑膜来源间充质干细胞(sdmscs)组(10例)及联合组(10例)，admscs组采用自体admscs进行关节腔注射，sdmscs组采用自体sdmscs进行关节腔注射，联合组采用上述两种间充质干细胞联合的治疗方式。比较三组治疗前后的视觉模拟疼痛量表(vas)评分、膝关节评分、骨关节炎指数(womac)评分、治疗效果以及治疗后并发症发生情况。结果：治疗前三组vas评分及膝关节评分比较，差异无统计学意义(p》0.05)；治疗后三组vas评分均低于治疗前，膝关节评分均高于治疗前，差异有统计学意义(p0.05)。三组注射前的womac评分比较，差异无统计学意义(p》0.05)；三组注射后6、12个月的womac评分低于注射前，差异均有统计学意义(p0.05)。联合组患者并发症总发生率均低于admscs组及sdmscs组，差异有统计学意义(p0.05)。联合组优良率高于admscs组及sdmscs组，差异均有统计学意义(p0.05)。结论显示采用自体admscs联合sdmscs治疗，能够促使膝骨关节炎患者膝关节功能改善，缓解疼痛，提高疗效。
5.虽然含有脂肪微片段的药物在关节炎的治疗中进行了广泛的应用，但是，如何进一步提高其在治疗关节炎中的治疗效果，仍然是本领域技术人员亟待解决的技术问题。


技术实现要素：

6.基于上述原因，本发明提出含有脂肪微片段的药物及其在治疗关节炎中的应用。具体而言，为了实现本发明的目的，本发明拟采用如下的技术方案：
7.本发明一方面涉及含有脂肪微片段的药物，所述药物含有脂肪微片段和透明质酸或其盐。
8.在本发明的一个优选实施方式中，所述脂肪微片段和透明质酸或其盐的重量比例是4-6：1。
9.在本发明的一个优选实施方式中，所述脂肪微片段通过如下步骤制备得到：
10.(1)抽取脂肪组织；
11.(2)剔除杂质；
12.(3)乳化脂肪组织：用组织剪将脂肪组织剪成小块，加入pbs缓冲溶液，所述pbs缓冲溶液中含有大豆卵磷脂，搅拌乳化；
13.(4)离心分离：离心至可以观察到脂肪组织分为3层，取中间层为脂肪微片段。
14.需要说明的是，上述有关脂肪微片段的制备工艺已经记载在在先的中国专利申请cn202210580988.8(发明名称“含有脂肪微片段的药物及其在慢性难愈合创面治疗中的应用”)中，根据该申请文件的记载，采用上述工艺，有助于提高脂肪微片段的抑菌能力。该在先的中国专利申请的全文都被并入到本技术的说明书中，申请人有权基于该在先的中国专利申请全文记载的内容对本技术进行修改和/或意见陈述。
15.在本发明的一个优选实施方式中，所述步骤(2)是指剔除脂肪中肉眼可见的血管和纤维部分。
16.在本发明的另一个优选实施方式中，所述步骤(3)是指：用组织剪将脂肪组织剪成约1mm3的小块，加入1-3倍质量的ph 7.0-7.6的pbs缓冲溶液，所述pbs缓冲溶液中含有1-3wt％的大豆卵磷脂，500-3000rpm条件下搅拌5-30分钟进行乳化。
17.在本发明的另一个优选实施方式中，所述步骤(3)是指：使用1000-3000g/分的转速离心1-5分钟。
18.在本发明的一个优选实施方式中，所述脂肪组织为自体脂肪组织。通过采用自体脂肪组织，有助于避免免疫反应。
19.在本发明的一个优选实施方式中，所述药物为凝胶注射剂。
20.本发明另一方面还涉及上述药物在制备治疗关节炎的药物中的应用，所述关节炎包括慢性或退行性骨关节炎。
21.有益效果
22.本发明通过将脂肪微片段和透明质酸或其盐进行组合，有效提高了含有脂肪微片段的药物在治疗关节炎时的效果。
附图说明
23.图1：典型病例术前影像学检测结果。
24.图2：典型病例术后影像学检测结果。
具体实施方式
25.为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
26.如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
27.实施例1：
28.(1)抽取自体脂肪组织：提取腹部和臀部的100-150毫升自体脂肪组织，将自体脂肪组织迅速放到含有庆大霉素的0.01m，ph 7.2pbs缓冲液保存。
29.(2)剔除杂质：在gmp制备车间中，取部分自体脂肪组织放入50毫升离心管中，剔除脂肪中肉眼可见的血管和纤维部分。
30.(3)乳化自体脂肪组织：用组织剪将脂肪组织剪成约1mm3的小块，加入2倍质量的ph7.2的pbs缓冲溶液，所述pbs缓冲溶液中含有2wt％的大豆卵磷脂，1000rpm条件下搅拌10分钟进行乳化。
31.(4)离心分离：使用2000g/分的转速离心3分钟，可以观察到脂肪组织分为3层，取中间层为脂肪微片段，其电镜照片如图1所示；
32.(5)将上述脂肪微片段0.2倍重量的透明质酸钠加入加上述脂肪微片段2倍重量的ph值为7.2的pbs缓冲溶液中，搅拌均匀，然后再加入上述脂肪微片段，混合均匀之后置于4℃冷藏，即得凝胶化的可注射制剂。
33.比较例1：
34.其制备方法与实施例1相同，区别在于不加入透明质酸钠，而是加入同等重量的硫酸软骨素钠。
35.实施例3：
36.采用实施例1和比较例1所制备的药物进行临床治疗，说明如下：
37.1、病例选择和分组
38.所有病例均选自2018年1月至2018年6月在本院进行治疗的膝关节骨性关节炎患者，患者与家属对本次治疗方法与目的均知情同意，并签署相应的知情同意书，且本次试验经过伦理审查委员会认可。患者共计40例，随机分成治疗组和对照组各20例。两组间在年龄、性别、病情方面分别左卡方检验，差异无显著性意义(p﹥0.05)，两组间具有可比性。
39.患者术前检查：采用体检套餐的方式
40.·
血化验：血常规 crp、尿常规、肝肾功、凝血常规、术前常规
41.·
心电图
42.·
肺ct
43.·
腹部b超
44.·
vas疼痛评分、koos功能评分
45.·
双膝正侧位影像学检查(mri或x光)
46.入选标准：经过体格检查、x线等影像学检查确诊，排除风湿性疾病者，患有感染性疾病者，慢性疾病者，以及心、肾等其他重要器官功能障碍者。
47.2.治疗方法：
48.30例治疗组患者应用实施例1所制备的凝胶制剂进行注射治疗，取患者平卧位，患侧膝关节伸直，若患者关节腔内积液较多时应用注射器抽出，穿刺部位为髌骨的内外侧，向关节腔内注射，注射量为6-10ml，关节两侧注射，1周1次，连续注射5次。
49.30例对照组应用比较例1所制备的制剂进行注射治疗，治疗方法同治疗组。
50.3疗效评定标准
51.对比分析两组患者治疗前后膝关节功能评分与疼痛评分，膝关节功能采用hss评分，主要包括患者关节稳定性、疼痛、肌力、屈曲畸形、功能与活动范围六方面内容，分值范围为0～100分，其中低于59分为膝关节功能差；同时为患者进行疼痛评分，采用vas视觉量表，0分为无痛，10分为剧烈疼痛，需要止痛药物，分值与疼痛成正比。
52.4.治疗效果：两组患者治疗后疗效比较见表1
53.表1：两组患者治疗后疗效比较
[0054][0055]
注：与对照组相比p﹤0.05
[0056]
两组疗效比较，治疗组痊愈率、总有效率明显优于对照组，具有可比性，p﹤0.05。
[0057]
5.典型病例
[0058]
患者，男，65岁，以“双膝关节疼痛3年”为主诉收住。患者三年来内服药物及玻璃酸钠关节腔注射治疗效果均不佳，入院时两膝关节未及红肿，肤温正常，压痛明显，研磨试验阳性，浮髌试验阴性，关节活动受限。各项化验大致正常。vas评分6分，hss评分48分。
[0059]
术后2月门诊随访，疼痛完全消失，关节活动改善，vas评分0分，hss评分89分，其中，术前的影像学结果如图1所示，术后的影像学结果如图2所示。
[0060]
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。