具有降低三酸甘油脂功能的组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及一种组合物及其制备方法，特别涉及一种具有降低三 酸甘油脂功能的组合物及其制备方法。


背景技术：

2.橙皮苷为柑橘类水果中的一种黄酮类化合物，其主要储存于柑橘 类水果的果皮中。
3.近年来有不少研究指出——服用橙皮苷萃取物对于人体具有降 低三酸甘油脂和预防动脉硬化的效果，但却未见有人采用发酵的方式 使柑橘类水果中的橙皮苷含量增加，并使其功效不亚于橙皮苷萃取 物。


技术实现要素：

4.发明目的：为了解决上述现有技术的不足，本发明的主要目的在 于提供一种具有降低三酸甘油脂功能的组合物及其制备方法。
5.技术方案：具有降低三酸甘油脂功能的组合物，包含橙皮苷和柚 皮苷，其中：
6.橙皮苷的含量为386～580μg/ml
7.柚皮苷的含量为以及250～360μg/ml。
8.具有降低三酸甘油脂功能的组合物的制备方法，包括：
9.(1)将柠檬压榨(裂解)成柠檬汁；
10.(2)、再将步骤(1)得到的柠檬汁进行发酵，即得到具有降低 三酸甘油脂功能的组合物。
11.进一步地，步骤(1)中柠檬的压榨将整颗柠檬连同果皮和种子 压榨成柠檬汁。
12.进一步地，步骤(2)中直接将益生菌加入步骤(1)得到的柠檬 汁内进行发酵，且发酵的过程中需将温度控制在25℃～35℃之间并 持续搅拌14到22天，而在搅拌的过程中会不间断的通过搅拌设备将 空气打入柠檬汁内，使柠檬汁、益生菌以及空气三者能充分的混合。
13.进一步地，该益生菌包括胚芽乳酸杆菌以及季也蒙有孢汉逊酵母 菌，所述胚芽乳酸杆菌、所述季也蒙有孢汉逊酵母菌的混合比例为 (1～6):(1～8)。
14.进一步地，该柠檬汁和该益生菌的混合比例介于(1～2):(0.05～ 0.5)之间。
附图说明
15.图1：本发明的橙皮苷检测图谱；
16.图2：柚皮苷的标准图谱；
17.图3：本发明稀释10倍后的柚皮苷检测图谱。
具体实施方式：
18.为了让本发明的目的、功效、特征及结构能够有更为详尽的了解， 下面借助较佳实施例并配合附图说明如后。
19.具有降低三酸甘油脂功能的组合物，其含有386～580μg/ml的 橙皮苷以及250～360μg/ml的柚皮苷。
20.一个实施例中，具有降低三酸甘油脂功能的组合物，其含有橙皮 苷以及柚皮苷，其中：
21.橙皮苷的含量为386μg/ml；
22.柚皮苷的含量为250μg/ml。
23.另一个实施例中，具有降低三酸甘油脂功能的组合物，其含有橙 皮苷以及柚皮苷，其中：
24.橙皮苷的含量为580μg/ml；
25.柚皮苷的含量为360μg/ml。
26.另一个实施例中，具有降低三酸甘油脂功能的组合物，其含有橙 皮苷以及柚皮苷，其中：
27.橙皮苷的含量为410μg/ml；
28.柚皮苷的含量为280μg/ml。
29.具有降低三酸甘油脂功能的组合物的制备方法，包括以下步骤：
30.(1)、先将柠檬压榨(裂解)成柠檬汁；
31.(2)、将步骤(1)得到的柠檬汁进行发酵，完成后即得到具有 降低三酸甘油脂功能的组合物。
32.进一步地，步骤(1)中该柠檬的压榨(裂解)是将整颗柠檬连 同果皮和种子压榨(裂解)成柠檬汁。
33.一个实施例中，步骤(2)中直接将益生菌加入步骤(1)得到的 柠檬汁内进行发酵，且发酵的过程中需将温度控制在20℃并持续搅 拌20天，而在搅拌的过程中会不间断的透过搅拌设备将空气打入柠 檬汁内，使柠檬汁、益生菌以及空气三者能充分的混合。
34.另一个实施例中，步骤(2)中直接将益生菌加入步骤(1)得到 的柠檬汁内进行发酵，且发酵的过程中需将温度控制在30℃并持续 搅拌10天，而在搅拌的过程中会不间断的透过搅拌设备将空气打入 柠檬汁内，使柠檬汁、益生菌以及空气三者能充分的混合。
35.另一个实施例中，步骤(2)中直接将益生菌加入步骤(1)得到 的柠檬汁内进行发酵，且发酵的过程中需将温度控制在25℃并持续 搅拌15天，而在搅拌的过程中会不间断的透过搅拌设备将空气打入 柠檬汁内，使柠檬汁、益生菌以及空气三者能充分的混合。
36.一个实施例中，该益生菌系由胚芽乳酸杆菌(lactobacillusplantarum)以及季也蒙有孢汉逊酵母菌(hanseniasporaguilliermondii)组成，二者混合比例为1:5。
37.另一个实施例中，该益生菌系由胚芽乳酸杆菌(lactobacillusplantarum)以及季也蒙有孢汉逊酵母菌(hanseniasporaguilliermondii)组成，二者混合比例位4:2。
38.另一个实施例中，该益生菌系由胚芽乳酸杆菌(lactobacillus plantarum)以及季也蒙有孢汉逊酵母菌(hanseniaspora guilliermondii)组成，二者混合比例2:3。
39.一个实施例中，该柠檬汁和益生菌的混合比例为1:0.3之间。该 胚芽乳酸杆菌
(lactobacillus plantarum)寄存于德国菌种中心，寄 存编号为dsm 32004，该季蒙也有孢汉逊酵母菌(hanseniasporaguilliermondii)寄存于德国菌种中心，寄存编号为dsm 32005。
40.另一个实施例中，该柠檬汁和益生菌的混合比例为2:0.05。
41.另一个实施例中，该柠檬汁和益生菌的混合比例为1.5:0.2。
42.下面以动物实验作验证，借此来证实服用本发明的组合物确实具 有调整三酸甘油脂的功效，有关动物实验的相关方法以及检测结果如 下所示。
43.试验动物：选用来自某实验动物中心的八周龄雄性仓鼠(syrianhamster)。
44.饲育管理：实验用的仓鼠饲养于麦德凯生科动物中心room e中， 饲育环境控制在22
±
3℃，湿度在50
±
20％，并控制光照期为早上六 点到晚上六点，黑暗期则为晚上六点到翌日早上六点，光照期与黑暗 期各十二小时，且需每日监测环境温度及湿度。
45.饲料配方：正常组饲料采用实验室饮食(labdiet)的实验室高 压灭鼠饲料5010(laboratory autoclavable rodent diet 5010)， 而对照组饲料则采用研究饮食(research diets)的rd西方饮食(修 改自d12079b)(rd western diet(modify from d12079b))高油脂 高胆固醇饲料，正常组和对照组的仓鼠均采自由摄食方式喂食。
46.饮水：将自来水经逆渗透处理机处理后装入已灭菌的塑料瓶后供 仓鼠自由饮用。
47.试验组别设计：详细的投喂量如下表(一)所示，剂量推算系根据 2005年美国食品药物管理局所公告的实验出其估算方法，以60公斤 的成人为基准，使用高等实验动物进行试验时，剂量的换算原则为人 体每日每公斤体重的建议摄取量的7.4倍为仓鼠1倍剂量。
[0048][0049]
表(一)
[0050]
试验剂量的配制：将本发明以冷冻浓缩的方式制备成3.7倍浓缩 液，以灭菌水直接配制浓缩液至投喂体积，以50ml的本发明为例， 其经浓缩处理后的体积为13.5ml，以人体与仓鼠的剂量换算如下：
[0051]
低剂量仓鼠投喂剂量为13.5/60
×
7.4＝1.7ml/kg/day；
[0052]
中剂量仓鼠投喂剂量为13.5/60
×
7.4
×
2＝3.3ml/kg/day；
[0053]
高剂量仓鼠投喂剂量为13.5/60
×
7.4
×
6＝10.0ml/kg/day。
[0054]
投喂期间、方法：仓鼠于试验开始第一天经口管喂食试验物质或 对照物质连续6周，投喂剂量的计算系根据当日投喂前量测的体重为 基准，投喂的剂量如上所述，投喂的体积为10ml/kg。
[0055]
临床症状观察：试验期间每日进行临床观察，并记录仓鼠是否有 异常临床症状或死亡，并每周定时量测仓鼠体重变化及其饲料摄取 量。
[0056]
血清收集与血清制备：第6周以牺牲采血方式收集血液样本，采 取的血液放入生化管中室温静置2小时后，以2000
×
g离心15分钟 后收集上层血清样本，检测血清中的三酸甘油脂(triglyceride, tg)。
[0057]
粪便收集：第6周牺牲前3天收集仓鼠粪便，并去除沾黏于粪便 的毛发等杂物，以热风干燥后磨成粉状再进行三酸甘油脂(tg)含量检 测分析。
[0058]
脏器采集：试验结束后以异氟醚(isoflurane)将仓鼠麻醉牺牲 后，采集肝脏秤重
以及检查是否有脂肪肝，并取其中最大叶于-70℃ 冰箱保存后进行三酸甘油脂(tg)含量检测分析。
[0059]
血清生化指标测定：采用血清生化分析仪检测血清中的三酸甘油 脂(tg)。
[0060]
粪便三酸甘油脂的含量检测：依照福尔奇(folch)法，将粉状 的粪便粉末以筛子滤除较大颗粒，再取一定量的粪便粉末后加入20 倍重量的氯仿/甲醇混合溶液(混合比例为2：1)，以组织均质机均质 后，接着以3000
×
g离心10分钟后取出澄清液，接续依照卡尔森和 戈德福德(carlson&goldford)法，将离心后的粪便脂质均质液中 加入0.2倍体积的0.9％生理食盐水(saline)均匀混合，于室温下以 1200
×
g离心5分钟后去除上层液体，保留脂相层后置于95℃烘箱中 待有机溶剂挥发后，以生化分析仪分析粪便中三酸甘油脂(tg)。
[0061]
肝脏三酸甘油脂的含量检测：依照福尔奇(folch)法，取一定 量的肝脏加入20倍重量的氯仿/甲醇混合溶液(混合比例为2：1)， 接续依照卡尔森和戈德福德(carlson&goldford)法，并以组织均 质机均质后，接着以3000
×
g离心10分钟后取出澄清液，将离心后 的肝脏组织脂质均质液加入0.2倍体积的0.9％生理食盐水(saline) 混合均匀，于室温下以1200
×
g离心5分钟，去除上层液体并保留脂 相层后置于95℃烘箱中待有机溶剂挥发后，以脂溶液(tert-butylalcohol：triton x-100：methanol＝2：1：1)溶解均匀混合，以 生化分析仪分析粪便中三酸甘油脂(tg)。
[0062]
在本次动物试验中，主要系探讨本发明对于降低三酸甘油脂的功 效，并将试验分为正常组(给予正常饲料以及灭菌水)、负对照组(给 予高油脂高胆固醇饲料以及灭菌水)、低剂量对照组(给予高油脂高胆 固醇饲料以及1倍相对人体剂量的本发明)、中剂量对照组(给予高油 脂高胆固醇饲料以及2倍相对人体剂量的本发明)、高剂量对照组(给 予高油脂高胆固醇饲料以及6倍相对人体剂量的本发明)，且每组均 为10只试验动物，经口服投喂6周后进行血液、粪便、肝脏的三酸 甘油脂相关检测，而检测结果以平均值正负标准差表示，而检测数据 以单因子变异数分析(one-way anova)进行分析，并以邓肯多重差距 检定(duncan's multiple range test)进行事后检定，其结果如下列 所示：
[0063]
首先，就各组仓鼠的每周平均摄食量的记录如下表(二)所示。
[0064][0065][0066][0067]
表(二)
[0068]
由上表(二)可看出除了正常组之外，喂食高油脂高胆固醇饲料的 各个对照组的平均摄食量皆无明显差别。
[0069]
接着，就各组仓鼠的每周平均体重变化以及平均肝脏重量如下表 (三)所示。
[0070][0071][0072][0073]
表(三)
[0074]
由上表(三)可看出除了负对照组以外，其余的组别在体重方面差 异性并不大，而在肝脏相对重量方面，由于负对照组喂养高油脂高胆 固醇饲料造成过多的脂肪在肝脏堆积，使负对照组的肝脏相对重量明 显大于正常组(p﹤0.05)，且服用不同剂量对照组的肝脏相对重量明 显小于负对照组(p﹤0.05)，由此可看出服用本发明是能降低脂肪在 肝脏堆积的情况。
[0075]
接续，就各组仓鼠的第6周血清中三酸甘油脂含量如下表(四) 所示。
[0076]
组别本发明剂量(ml/kg)三酸甘油脂(mg/dl)正常组无177.7
±
40.3负对照组无435.5
±
91.6低剂量对照组6.2308.7
±
52.7中剂量对照组12.3324.2
±
70.4高剂量对照组37.0279.2
±
80.6
[0077]
表(四)
[0078]
由上表(四)可知在6周试验结束后，各剂量对照组的血清中的三 酸甘油脂含量与负对照组相比皆有显著降低(p﹤0.05)，且又以高剂 量组对降低三酸甘油脂的效果最为明显。
[0079]
再来，就各组仓鼠的第6周试验结束前粪便中三酸甘油脂含量如 下表(五)所示。
[0080]
组别本发明剂量(ml/kg)三酸甘油脂(mg/dl)正常组无2.478
±
0.441负对照组无3.188
±
0.378低剂量对照组6.24.063
±
0.384中剂量对照组12.33.901
±
0.256高剂量对照组37.03.675
±
0.279
[0081]
表(五)
[0082]
由上表(五)可看出各剂量对照组粪便中的平均三酸甘油脂含量 均明显高于负对照组(p﹤0.05)。
[0083]
最后，就各组仓鼠的第6周肝脏中三酸甘油脂含量如下表(六) 所示。
[0084]
组别本发明剂量(ml/kg)三酸甘油脂(mg/dl)正常组无3.587
±
0.457负对照组无9.705
±
1.500低剂量对照组6.28.424
±
0.889中剂量对照组12.38.437
±
1.573高剂量对照组37.07.843
±
1.306
[0085]
表(六)
[0086]
由上表(六)可看出各剂量对照组肝脏中的三酸甘油脂含量是明 显低于负对照组(p﹤0.05)，且又以高剂量对照组降低的幅度最为显 著。
[0087]
综合上述表格可知仓鼠在服用了本发明之后，是有助于降低其血 清和肝脏中的三酸甘油脂含量。
[0088]
请参阅表(七)以及图1，表(七)为本发明的橙皮苷含量检测 结果，图1为本发明的橙皮苷检测图谱。
[0089]
橙皮苷含量检测结果
[0090][0091]
表(七)
[0092]
再来，本发明更进一步的将组合物的成分进行分析，并以此来检 测本发明中的橙皮苷以及柚皮苷含量和其图谱分析。
[0093]
接着，将取任意三组利用相同配比和制程所制造出的本发明进行 橙皮苷含量检测，而其结果如表(七)所示，由表(七)中可看出橙 皮苷含量分别为491.39
±
2.89、485.96
±
2.23、489.01
±
2.25μg/ml。
[0094]
再来，如图1所示，图1由上而下分别为标准的橙皮苷图谱以及 三组本发明的图谱，且从图谱中可看出三组送验的本发明在显示橙皮 苷的区段有产生峰值，且该峰值与标准的橙皮苷峰值有所重叠，因此 本发明中确实是含有橙皮苷。
[0095]
请继续参阅图2以及图3，图2为柚皮苷的标准图谱，图3为本 发明稀释10倍后的柚皮苷检测图谱。
[0096]
接着，将图3所示的图谱与图2所示的图谱相比，可发现本发明 在显示柚皮苷的区段有产生峰值，且该峰值与标准的柚皮苷峰值有所 重叠，因此本发明中确实是含有柚皮苷。
[0097]
以上所述技术方案，仅系本发明的较佳实施例，凡是应用本发明 说明书及申请专利范围所为的其它等效结构变化的技术方案，理应包 含在本发明的申请专利范围内。