人参固本口服液在防治感染性疾病中的新用途的制作方法

1.本发明属于医药领域，涉及人参固本口服液的新用途，具体涉及人参固本口服液在防治感染性疾病中的新用途。


背景技术：

2.感染性疾病是由病原微生物引起的疾病的统称，其主要包括细菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生虫感染等，其中尤以细菌感染和病毒感染最为常见。感染性疾病在临床上很普遍，也是各科医生经常面临的问题。如病人在治病期间由于体质和抵抗病菌能力较差，而被感染其它疾病。像刚做过手术的人，不注意对刀口消毒和保护，容易被感染而不易愈合。还有的病人由于动了大手术，在愈合期间，引起肺炎。随着微生物耐药性的增强和新的微生物的出现，感染性疾病的诊治与预防正不断面临新的变化，但是，目前对感染性疾病的诊治也较普遍地存在着误区，使得临床中的感染问题变得愈发复杂和严重。近70年来，抗感染药物临床的应用为人类防治感染性疾病作出了巨大贡献，但同时存在的病原微生物耐药性、引发严重毒副作用和过敏反应等一系列问题,仍是临床医学、药学及药物流行病学工作者面临的共同课题。
3.人参固本口服液由人参、地黄、茯苓、牡丹皮、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、天冬、麦冬制备而成。具有滋阴益气，固本培元的功效。用于阴虚气弱，虚劳咳嗽，心悸气短，骨蒸潮热，腰酸耳鸣，遗精盗汗，大便干燥。人参固本口服液为鲁南厚普制药有限公司的独家产品，批准文号为“国药准字z10940013”。


技术实现要素：

4.为寻找一种抗菌作用显著且毒副作用小的抗菌药物，本发明人提供了人参固本口服液在制备感染性疾病防治药物中的用途。
5.本发明所述的人参固本口服液主要由人参、地黄、茯苓、牡丹皮、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、天冬、麦冬制备而成。
6.本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
7.人参固本口服液对慢性尿路感染大鼠的治疗作用研究结果表明：人参固本口服液可显著降低尿路感染大鼠的血清il-6及mcp-1水平，改善炎症状态对肾组织造成的损害，从而对尿路感染起到很好的治疗作用，其对尿路感染的治疗作用与维沙欣作用相当。
8.人参固本口服液对肺炎链球菌感染的肺炎模型小鼠的治疗作用研究结果表明：人参固本口服液可显著降低肺炎链球菌感染的肺炎模型小鼠的肺部细菌数量，对肺炎链球菌感染的肺炎具有很好的治疗作用，作用与青霉素相当。
9.人参固本口服液对大鼠皮肤溃疡愈合的影响研究结果表明：人参固本口服液可明显降低烫伤模型大鼠的血清炎症因子，促进大鼠皮肤溃疡愈合，对皮肤烧烫伤细菌感染引起的溃疡具有很好的缓解和治疗作用。
10.人参固本口服液对细菌引发的感染性疾病具有很好的治疗作用，优选为革兰氏阳
性细菌引发的感染性疾病，更优选为肺炎、皮肤溃疡、尿路感染中的一种或多种。
11.所述的革兰氏阳性细菌包括肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌中的一种或多种，包括但不限于上述几种。
12.本发明还提供了人参固本口服液在制备降低炎症因子药物中的用途。
13.人参固本口服液在用于上述感染性疾病进行治疗时具有如下优势：
14.1.作用范围广
15.人参固本口服液对多种细菌引发的感染性疾病具有显著的治疗作用，包括但不限于肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌引发的感染性疾病。
16.2.效果显著
17.人参固本口服液不仅能显著降低感染性疾病患者的血清炎症因子，而且可以使因感染受损的组织恢复正常。
18.3.作用温和，无毒副作用
19.人参固本口服液中的成分均为中药成分，作用温和，对人体能起到综合调理的作用，不易产生耐药性，且无毒副作用。
具体实施例
20.为了使本领域技术人员充分了解本发明，以下通过具体的实施例进一步说明本发明，但本领域技术人员应该知晓，本发明实施例并不以任何方式限制本发明。
21.实施例1人参固本口服液对慢性尿路感染大鼠的治疗作用
22.1.模型制作与分组给药
23.将wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、人参固本治疗组、对照组。除正常组外,其余各组采用大肠杆菌经膀胱逆行感染及单侧输尿管不全梗阻的方法建立慢性尿路感染模型。造模30d后开始给药,人参固本治疗组灌胃2ml/kg体质量,每日1次；对照组灌胃维沙欣20mg/kg体质量,每日1次,每次2ml,连续4周。正常组和模型组自由进食及饮水。4周后处死大鼠,处死前1d各组大鼠分别置代谢笼收集24h尿液。腹主动脉采血,检测相关指标；同时剖取肾组织做病理检查及电镜超微结构检查。
24.2.检测指标及方法
25.2.1细胞因子
26.采用双抗体夹心abc-elisa方法检测血清il-6、mcp-1。
27.2.2肾组织病理变化
28.采用he染色,电镜观察各组大鼠肾组织的超微结构。
29.3.统计学方法
30.数据均采用spss11.5软件包统计,用表示,组间差异用单因素方差分析法。
31.4.实验结果
32.4.1人参固本口服液对大鼠血清il-6及mcp-1变化的影响
33.人参固本口服液对大鼠血清il-6及mcp-1的影响结果如表1所示，从表中结果可以看出：模型组大鼠血清il-6及mcp-1较正常组明显升高(p＜0.01)，表明造模成功；给药4周后，人参固本口服液及对照组大鼠血清il-6及mcp-1较模型组均显著降低(p＜0.01)，但仍显著高于正常组(p＜0.05)；人参固本口服液组和对照组比较无明显差异。
34.以上结果表明：人参固本口服液可显著降低尿路感染大鼠的血清il-6及mcp-1水平，从而对尿路感染起到很好的治疗作用，其对尿路感染的治疗作用与维沙欣作用相当。
35.表1人参固本口服液对大鼠血清il-6及mcp-1的影响
36.组别nil-6(ng/ml)mcp-1(ul/l)正常组1012.04
±
2.2315.15
±
3.09模型组961.12
±
8.98
##
50.27
±
9.77
##
对照组1020.26
±
4.79
#﹩﹩
25.21
±
5.77
#﹩﹩
人参固本口服液组1018.09
±
3.27
#﹩﹩
22.91
±
4.07
#﹩﹩
37.与正常组相比，
##
p《0.01，
#
p《0.05；
38.与模型组相比，
﹩﹩
p《0.01。
39.4.2人参固本口服液对大鼠肾组织形态学变化的影响
40.人参固本口服液对大鼠肾组织一般形态学变化观察可见:模型组大鼠肾脏组织he染色可见肾小管上皮细胞萎缩,管腔扩张,弥漫的单核、淋巴细胞浸润和成纤维细胞增生及胶原纤维形成；人参固本口服液组和对照组对以上病理改变均有所改善。通过电镜图片可以发现,模型组肾小球增大,基底膜重度肿胀,内有电子致密物沉积；肾小管上皮细胞重度肿胀,间质内线粒体变形、肿胀,部分微绒毛肿胀,排列紊乱,有些肾小管基底膜内有电子致密物沉积；肾间质内可见增生的成纤维细胞和单核巨噬细胞浸润,胞浆内有规则排列的胶原纤维。人参固本口服液组和对照组较模型组明显改善。
41.实施例2人参固本口服液对肺炎链球菌感染的肺炎模型小鼠的治疗作用
42.1.小鼠肺炎模型的建立
43.将肺炎链球菌于造模前1天密集划线于mh血琼脂培养基，35℃、5％co2培养箱中过夜培养，造模当天用2ml生理盐水冲洗菌苔，通过2次离心洗去色素及杂质，之后用生理盐水稀释浓度到1.5
×
10
10
cfu
·
ml-1
。采用免疫力正常的雌性昆明鼠(20-22g)，10％的水合氯醛400mg
·
kg-1
腹腔麻醉后，仰面固定，酒精消毒后自颈部正中切开皮肤，钝性分离肌肉暴露气管。用微量注射器取30μl菌液直接气管内注射，然后直立位摇晃3min，使细菌尽量均匀分布于两肺。接种细菌后6h随机选取小鼠，取双肺，10％甲醛固定，石蜡包埋后切片，经h-e染色后行病理检查，可见肺泡膈增宽，炎性细胞浸润，肺泡内多量红细胞，小血管扩张、充血。
44.2.分组、给药方法及标本采集
45.将造模成功的小鼠随机分为3组，对照组：12只，接种细菌后，不给予药物治疗；青霉素组：24只，接种细菌后即刻腹腔注射青霉素0.6mg
·
kg-1
，以后以相同剂量1h给药1次；人参固本口服液组：24只，接种细菌后按4ml/kg的量灌胃给予人参固本口服液；对照组分别在接种细菌后即刻0h及接种后6h采集肺组织，每个时间点取6只小鼠；青霉素组、人参固本口服液组分别在接种细菌后即刻0h及接种后2，4，6h采集肺组织。
46.3.样本采集
47.将小鼠麻醉固定后，开胸取出双侧肺组织，每个标本均加入等量的1ml生理盐水，置于玻璃匀浆器中研磨15min，制成肺组织匀浆，用于细菌计数。将研磨好的肺组织匀浆立即用生理盐水10倍比稀释，选取不同浓度的匀浆100μl均匀涂布于m-h血琼脂培养基，35℃、5％co2培养箱中过夜培养，选取菌落数在30-300之间的平板进行菌落计数。每一个实验组
均在接种细菌后即刻0h及之后2，4，6h取出肺组织标本制成匀浆测定细菌浓度，计算细菌浓度对数。
48.4.统计与计算
49.采用spss11.5统计软件包进行统计描述，细菌浓度的对数等统计量用表示。各组间差异的比较采用t检验。
50.5.实验结果
51.人参固本口服液对小鼠肺炎链球菌肺炎模型的治疗作用如表2所示，由表2结果可知：与对照组比较，给药组的细菌浓度对数均有明显降低(p《0.01)。并且青霉素组和人参固本口服液组对细菌浓度的降低作用相当，二者之间无显著性差异。结果表明，青霉素及人参固本口服液均能对肺炎链球菌感染的肺炎起到显著的治疗作用，二者作用相当。
52.表2人参固本口服液对小鼠肺炎链球菌肺炎模型的治疗作用
[0053][0054]
与对照组相比，
##
p《0.01。
[0055]
实施例3人参固本口服液对大鼠皮肤溃疡愈合的影响
[0056]
1.实验方法
[0057]
1.1金黄色葡萄球菌菌液制备
[0058]
将标准金黄色葡萄球菌复苏后，采用标准划线法将细菌接种在血平皿中，倒置在37℃恒温培养箱中培养48h，即可得到大量金黄色葡萄球菌菌落。用无菌接种环从培养皿中挑取2-3个菌落，放入装有少量无菌生理盐水的麦氏比浊管中，连续反复稀释混匀，直至比浊仪显示为1.0麦氏比浊度。此时，麦氏比浊管中金黄色葡萄球菌菌液的浓度为3
×
108cfu/ml，所得菌液用生理盐水1：3稀释到1
×
108cfu/ml。
[0059]
1.2染菌
[0060]
超净工作台用75％酒精擦拭后，紫外灯消毒30min。将spf级大鼠从隔离器中用密闭消毒饲养盒取出，置于超净工作台内，按照50mg/kg体质量腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，用刮胡刀片将大鼠背部刮至皮肤完全暴露。用恒温恒压烫伤仪94℃作用8s，压力500g在大鼠背部造成两个直径为2.5cm的深二度烫伤伤口。随后大鼠随机分为三组，正常对照组烫伤后直接传入大鼠隔离器内饲养观察；模型组烫伤后伤口接种1
×
108cfu/ml金黄色葡萄球菌菌液后传入另一隔离器内单独饲养；人参固本口服液组在烫伤前一天按2ml/kg的量灌胃给予人参固本口服液。此后，每天按同等剂量灌胃，直至伤口完全愈合。
[0061]
1.3测定指标与方法:
[0062]
肉眼观察3组大鼠伤口结痂、脱痂及愈合时间并记录。在烫伤后48h时，眼眶取血，室温放置20min，3000r/min离心10min，收集上清，elisa试剂盒检测tnf-α和il-1α水平。
[0063]
2.统计方法
[0064]
实验数据采用spss22.0软件中的one-way anova进行组间单因素方差分析，邓肯式法进行差异显著性分析，结果用表示，以p＜0.05作为差异显著性判断标准。
[0065]
3.实验结果
[0066]
3.1大鼠伤口结痂、脱痂和愈合时间比较
[0067]
各组大鼠的伤口结痂、脱痂和愈合情况如表3所示，从表中可以看出，模型组的结痂、脱痂和愈合时间均显著长于正常对照组，差异有统计学意义(p《0.05)；人参固本口服液组的伤口结痂、脱痂和愈合时间均显著短于模型组，差异有统计学意义(p《0.05)。
[0068]
表3各组大鼠伤口结痂、脱痂和愈合时间比较
[0069]
组别结痂时间/d脱痂时间/d愈合时间/d正常对照组4.0
±
0.523.4
±
1.333.3
±
2.4模型组5.9
±
0.8
#
27.7
±
1.2
#
39.9
±
3.1
#
人参固本口服液组4.1
±
0.6
﹩
23.0
±
1.1
﹩
32.8
±
2.7
﹩
[0070]
与正常对照组相比，
#
p《0.05；
[0071]
与模型组相比，
﹩
p《0.05。
[0072]
3.2大鼠炎性因子检测结果
[0073]
人参固本口服液对烫伤模型大鼠的血清炎症因子的影响结果如表4所示，从表中可以看出模型组的炎症因子较正常对照组显著升高，差异有统计学意义(p《0.05)；人参固本口服液组的炎症因子较模型组显著降低，差异有统计学意义(p《0.05)。
[0074]
表4各组大鼠炎性因子检测结果
[0075]
组别tnf-α(ng/l)il-1α(ng/l)正常对照组51.63
±
9.8714.15
±
1.34模型组270.78
±
10.45
#
28.28
±
2.09
#
人参固本口服液组152.34
±
10.23
﹩
18.34
±
1.79
﹩
[0076]
与正常对照组相比，
#
p《0.05；
[0077]
与模型组相比，
﹩
p《0.05。
[0078]
以上结果表明：人参固本口服液可明显降低烫伤模型大鼠的血清炎症因子，促进大鼠皮肤溃疡愈合，对皮肤烧汤伤细菌感染引起的溃疡具有很好的缓解和治疗作用。