过表达DLL4基因的内皮细胞系及其构建方法和应用与流程

技术特征：
1.一种构建细胞系的方法、促进内皮细胞增殖的方法或降低内皮细胞成管能力的方法，其特征在于，包括：将内皮细胞的dll4基因进行过表达。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内皮细胞选自sk-hep-1、huvec或原代内皮细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述构建细胞系的方法包括：1)将构建有dll4基因过表达的质粒进行扩增；2)将上步所得的质粒进行慢病毒包装，获得dll4基因过表达慢病毒；3)使用所述dll4基因过表达慢病毒感染内皮细胞，得到dll4基因过表达的细胞系。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述质粒选自plv-dll4-gfpspark；所述慢病毒选自hek-293t或hek-293ft，所述慢病毒包装采用的质粒选自pspax2和pmd2.g；任选地，所述构建细胞系的方法进一步包括：4)将所得dll4基因过表达的细胞系进行流式细胞分选。5.一种细胞系，其特征在于，所述细胞系中dll4基因过表达。6.根据权利要求5所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系是通过权利要求1～4任一项所述构建细胞系的方法获得的；所述细胞系于2021年10月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no：23037。7.权利要求5或6所述细胞系的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述细胞系用于构建疾病模型，所述疾病模型用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤、肿瘤疾病的机制研究、靶向药物的研发和/或筛选；任选地，所述细胞系用于使肝祖细胞向胆管方向分化；任选地，所述细胞系用于使肝祖细胞的bsep基因、hes1基因、ck19基因、mrp1-6基因表达上调。9.一种培养基，其特征在于，含有权利要求1～4任一项所述构建细胞系的方法获得的细胞系或权利要求7或8所述细胞系所分泌的代谢物。10.一种使肝祖细胞胆管向胆管方向分化的方法、使肝祖细胞的bsep基因、hes1基因、ck19基因和/或mrp1-6基因表达上调的方法，其特征在于，包括：将权利要求5或6所述细胞系与肝祖细胞进行共培养；或者将肝祖细胞培养于权利要求9所述培养基中。

技术总结
本发明提出了过表达DLL4基因的内皮细胞系及其构建方法和应用，所述构建细胞系的方法包括：将内皮细胞的DLL4基因进行过表达。本发明的细胞系过表达DLL4基因，能够促进内皮细胞的增殖、减少内皮细胞血管化、促进肝祖细胞向胆管细胞分化等，有助于构建血管发育、肝再生和肿瘤血管生成等模型，可应用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤和肿瘤等疾病的机制研究以及临床前靶向药物的研发和筛选等，具有广阔的应用前景。前景。


技术研发人员：王韫芳 柳娟 陈虹宇
受保护的技术使用者：北京清华长庚医院
技术研发日：2022.01.14
技术公布日：2022/7/21